利用中国仓鼠肺细胞体外微核 试验评价三七提取液的遗传毒性

目的：评价传统中药三七提取液的遗传毒性。方法：采用体外胞质分裂阻断微核法检测三七提取液在加与不加代谢活化系统S9的两种条件下对中国仓鼠肺细胞微核率的影响,三七提取液的制备采用乙醇反复浸提法。根据中性红摄取法细胞毒性测定试验的结果,微核试验设3个三七染毒浓度组（0.625、1.250、2.500 mg/mL）、阳性对照组（+S9条件下为20 μg/mL环磷酰胺,-S9条件下为1 μg/mL丝裂霉素C）和阴性对照组（MEM培养基）。结果：三七提取液2.500 mg/mL浓度组,中性红摄取法细胞毒性测定试验中,吸光度值较阴性对照组显著降低（P < 0.05）,细胞存活率为80.3%;三七提取液0.625、1.250、2.500 mg/mL浓度组CHL细胞的微核率,在+S9条件下分别为17‰、16‰、16‰,在-S9条件下分别为17‰、15‰、16‰。与阴性对照组（+S9 16‰、-S9 15‰）比较,差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论：在本研究条件下,体外微核试验结果表明,三七提取液不具有遗传毒性。     

甲基丙烯酸环氧丙酯的遗传毒性评价

目的：观察甲基丙烯酸环氧丙酯（GMA）诱发体外培养的中国仓鼠肺细胞（V79）微核发生变化情况,对其遗传毒性进行评价。方法：分别采用不同浓度（2.25、4.5、9.0、18.0、36.0 μg/mL）的GMA染毒V79细胞,设置空白对照组和DMSO溶剂对照组,其中染毒3 h处理组分别在加和不加体外活化系统（S9）条件下进行,染毒24 h处理组在不加S9条件下进行。分别计算细胞复制指数和微核细胞率。结果：GMA的浓度在2.25~36.0 μg/mL范围内,无S9的条件下,与空白对照组和DMSO溶剂对照组相比,GMA染毒3和24 h组的V79细胞复制指数均无明显变化,但微核细胞率明显升高,并呈浓度-效应关系;在有S9的条件下染毒3 h,各剂量组的GMA诱发微核细胞率的差异均无统计学意义。结论：在2.25~36.0 μg/mL浓度范围,GMA可致V79细胞的微核率升高,表明GMA可诱发遗传物质损伤,具有遗传毒性。     

汞、砷、甲醛单一及复合污染对蚕豆根尖细胞微核的影响及污染评价

目的：探讨水环境中汞、砷、甲醛及其复合污染对蚕豆根尖细胞微核的影响及污染评价。方法：以蒸馏水作为阴性对照组,50 mg/L重铬酸钾作为阳性对照组,使用不同浓度的汞（0.001~0.03 mg/L）、砷（0.01~0.3 mg/L）、甲醛（0.9~7.2 mg/L）及其组合对蚕豆进行染毒（设MIX I、MIX Ⅱ、MIX Ⅲ3组,各含4种组合）,测定蚕豆根尖细胞的微核千分率并计算污染指数。结果：单一染毒时,当水溶液中汞浓度≥0.009 mg/L、砷浓度≥0.3 mg/L、甲醛浓度≥3.6 mg/L时蚕豆根尖细胞微核千分率均高于阴性对照组,且差异均具有统计学意义（P<0.05）。复合污染中,MIX I组砷-汞、砷-甲醛组合蚕豆根尖细胞微核千分率与阴性对照组相比显著升高,而且较砷、汞、甲醛单一染毒时明显增加,差异均具有统计学意义（P<0.05）。MIX Ⅱ组和MIX Ⅲ组中4种组合的蚕豆根尖细胞微核千分率与阴性对照组相比均显著升高,并且均明显高于单一染毒时的微核千分率,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论：汞（≥0.009 mg/L）、砷（≥0.3 mg/L）、甲醛（≥3.6 mg/L）可诱导蚕豆根尖细胞形成微核,复合染毒诱发的微核千分率较相同剂量单一溶液染毒呈不同程度的升高,并且存在一定的量效关系。     

采用蚕豆根尖微核试验检测自来水厂水体的遗传毒性

目的：利用蚕豆根尖细胞微核试验对北方3个城市自来水厂水样进行致突变性检测。方法：分别采集A、B、C 3个城市自来水厂的水源水、出厂水及末梢水,以采集的水样直接处理蚕豆根尖,测定各采样点水样的蚕豆根尖细胞微核千分率以及污染指数,并进行统计分析。结果：A市4个水厂水样中,3厂出厂水诱导的蚕豆根尖细胞微核千分率显著高于阴性对照组,且呈中度污染,其余水样所致微核千分率与阴性对照组相比差异均无统计学意义,属于基本无污染。B市出厂水诱导的蚕豆根尖细胞微核千分率显著高于阴性对照组,属于轻度污染。其余水样所致微核千分率与阴性对照组相比差异均无统计学意义,但末梢水属于轻度污染,水源水为基本无污染。C市3个水样所致蚕豆根尖细胞微核千分率与阴性对照组相比差异均无统计学意义,但均属于轻度污染,污染程度比较为：出厂水 > 末梢水 > 水源水。结论：根据A、B、C 3个城市自来水厂水样对蚕豆根尖微核千分率的影响,并据污染指数判断,认为出厂水潜在致突变性最强。其中,A市的整体水质要优于B市和C市。     

实时动态监测纳米氧化铜作用于CHL细胞的毒性效应

目的:探讨纳米氧化铜连续作用于CHL细胞的毒性效应。方法:应用实时细胞分析仪(RTCA)对不同接种密度(1×10⁵、5×10⁴、2.5×10⁴、1.25×10⁴/mL)的CHL细胞进行140 h连续测定,绘制不同密度CHL细胞的生长曲线。继而对不同剂量(0、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313 mg/mL)的纳米氧化铜作用于CHL细胞所产生的毒性效应进行实时监测,得到不同作用时间的IC₅₀值,绘制连续时间点IC₅₀变化的曲线,以判定纳米氧化铜作用于CHL细胞所产生的毒性效应。结果:4种不同密度CHL细胞接种后,细胞达到对数生长期的时间有所不同,其中5×10⁴/mL密度最适合进行毒性效应试验。不同剂量纳米氧化铜染毒后,毒性作用起始时间为4~5 h,加入受试物后,前6 h的IC₅₀值较高,且波动较大。从6 h以后,IC₅₀值呈现明显下降,作用12、24、36、48 h的IC₅₀值分别为0.1570、0.0511、0.0429和0.0168 mg/mL。结论:使用RTCA实时动态监测系统测定纳米材料的细胞毒性具有实用性。在纳米氧化铜对CHL细胞所产生毒性作用的进一步研究工作中,对染毒后4~18 h所产生的毒性作用进行研究更有意义。     

中国仓鼠肺细胞细胞周期阻滞微核试验与常规微核试验的对照研究

本研究测试了细胞松弛素B诱发中国仓鼠肺细胞(CHL)双核细胞的最佳时间的浓度；比较研究了丝裂霉素C，甲基磺酸甲酯，水合氯醛和秋水仙碱4种诱变剂在细胞周期阻滞法中诱发双核细胞微核率及常规微核试验中诱发单核细胞微核率的大小，结果表明：细胞松弛素B诱发CHL双核细胞的最佳时间为16h，     

二溴乙腈对L5178Y细胞的遗传毒性及促凋亡作用

目的:研究饮用水中消毒副产物二溴乙腈对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞的遗传毒性及促凋亡作用。方法:以L5178Y细胞为靶细胞,采用胞质分裂阻滞微核组学法(CBMN-cyt)和流式细胞术(FCM)分别检测不同浓度(0.1、1、5和10μmol/L)二溴乙腈对L5178Y细胞的遗传毒性及凋亡诱导作用。结果:与阴性对照比较,1和5μmol/L二溴乙腈染毒L5178Y细胞的微核率显著升高(P<0.05);1和10μmol/L二溴乙腈染毒L5178Y细胞的核质桥率显著升高(P<0.05);10μmol/L二溴乙腈染毒L5178Y细胞的核芽率升高(P<0.05);5和10μmol/L二溴乙腈染毒L5178Y细胞的核分裂指数率显著下降(P<0.05)。二溴乙腈各剂量组L5178Y细胞凋亡率均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论:二溴乙腈可致L5178Y细胞遗传毒性并诱导其凋亡。     

普洱茶水提取物对丝裂霉素C诱发人成淋巴细胞株遗传损伤的影响

目的：探讨普洱茶水提取物对丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）诱发的人成淋巴细胞株遗传损伤的影响。方法：以正常人成淋巴细胞株GM12593为实验材料,设计对照组、MMC作用组和普洱茶组不同条件培养细胞株。对照组用RPMI-1640正常培养,MMC作用组培养基中MMC的终浓度为0.1μg/ml,普洱茶组培养基中除含有0.1μg/ml的MMC外,还分别加入浓度为0.125、0.25、0.5和1 mg/ml的普洱熟茶和生茶水提取物。培养24 h后加入细胞松弛素B,作用28 h后制片,计数不同培养条件下的双核细胞微核率。结果：普洱熟茶在0.125和0.25 mg/ml,普洱生茶在0.125 mg/ml时,均明显降低由MMC引起的细胞微核率（P〈0.05）;普洱熟茶降低MMC诱发的细胞微核率的作用略优于普洱生茶,但两者间的差异无统计学意义。结论：一定浓度的普洱茶能降低由MMC诱发的人成淋巴细胞株的遗传损伤。     

PBDE-47对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞致突变作用

背景与目的:探讨2,2',4,4'-四溴联苯醚(2,2',4,4'-tetrabromodiphenyl ethers,PBDE-47)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的致突变作用.材料与方法:设空白对照组、溶剂对照组、3个不同BDE-47剂量的试验组(1 μg、2 μg、4 μg/ml)和阳性对照组(MMC),共6组.SH-SY5Y细胞分别暴露于各组不同受试物24 h后,采用胞质分裂阻断法测定微核率、核浆桥率. 结果:PBDE-47可诱导SH-SY5Y细胞核分裂指数呈剂量依赖性下降,微核细胞率和核浆桥率呈剂量依赖性增加;2 μg/ml和4 μg/ml的染毒剂量可引起SH-SY5Y细胞核分裂指数明显降低(P＜0.05)以及微核细胞率和核浆桥率的明显增加(P＜0.05),而仅在4 μg/ml PBDE-47染毒组发现微核率明显增加(P＜0.05).结论:PBDE-47可诱导SH-SY5Y细胞微核和核浆桥的形成,具有致突变作用.     

年龄和性别对正常人外周血淋巴细胞核质桥自发率的影响

目的： 探索年龄、性别因素对我国健康人群外周血淋巴细胞核质桥自发率的影响,为核质桥的影响因素研究提供科学依据。方法： 选取98例健康成人,其中男性52例,女性46例,年龄范围为20~68岁,平均年龄为（40.7±12.6）岁。按年龄分为20~29岁组（22人）、30~39岁组（23人）、40~49岁组（25人）和50岁以上组（28人）。抽取研究对象外周血2 mL,采用胞质分裂阻滞法培养细胞40 h后,加入松胞素B （终浓度为10 μg/mL）,继续培养至68 h收获细胞。每个受试者观察1 000个双核细胞,分析核质桥、微核及核芽的数量。结果： 核质桥总体自发率为每个细胞0.56‰,男性略高于女性,但差异无统计学意义（P > 0.05）。男性在不同年龄组间,核质桥自发率差异无统计学意义（P > 0.05）。女性40~49岁年龄组核质桥自发率最高,显著高于20~29岁组（U=2.31,P < 0.05）。微核自发率女性高于男性（U=4.40,P < 0.05）,男性和女性受试者40~49岁组微核自发率均为最高。核芽自发率在不同性别间的差异无统计学意义（P > 0.05）,在不同年龄组间无明显变化规律。结论： 健康人群中的核质桥自发率较低,不受性别因素影响,在20~49岁范围内具有随年龄增加而升高的趋势。     

盐酸苯海拉明咖啡因复方的遗传毒性评价

目的：研究盐酸苯海拉明咖啡因复方(盐酸苯海拉明/咖啡因质量比为1/2.4)是否具有遗传毒性。方法：采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验),体外培养中国仓鼠肺(CHL)细胞染色体畸变试验和ICR小鼠骨髓微核试验检测盐酸苯海拉明咖啡因复方的遗传毒性。Ames试验选用TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535为指示菌株,设0.5、5、50、500、5 000 mg/皿共5个受试剂量组;CHL细胞染色体畸变试验设低、中、高(分别为8.45、16.9、33.8 mg/mL)3个剂量组;小鼠骨髓微核试验采用ICR小鼠经口灌胃的方式一次给予盐酸苯海拉明咖啡因复方,设低、中、高3个剂量组,分别为21.59、43.17和86.35 mg/kg。结果：与对照组相比,Ames试验结果提示在0.5、5、50、500、5 000 mg/皿剂量下,在加和不加代谢活化系统S9时对鼠伤寒沙门氏菌均无致突变性(P>0.05)。CHL细胞染色体畸变试验结果提示在终浓度8.45、16.9和33.8 mg/mL剂量组,在加与不加S9代谢活化系统培养CHL细胞24 h和4 h的条件下均未诱发染色体畸...     

铅暴露工人外周血淋巴细胞遗传损伤与端粒长度的改变

目的:探讨铅暴露工人外周血淋巴细胞遗传损伤情况与端粒长度改变之间的关系。方法:以珠三角某蓄电池厂的21名铅暴露工人为铅暴露组,26名无铅接触史的工人作为对照组。针对工人开展问卷调查并采集肝素抗凝外周血。检测工人外周血中血铅浓度、淋巴细胞的彗星试验指标、胞质分裂阻滞微核试验指标以及相对端粒长度改变情况。结果:铅暴露工人的血铅浓度为(3.08±1.86) mg/mL,与对照人群(0.26±0.25) mg/mL相比明显升高(P<0.05)。彗星试验中,铅暴露组工人的慧星尾长高于对照组(P<0.05);胞质分裂阻滞微核试验中,暴露组工人双核微核率和微核细胞率均高于对照组(P<0.05);铅暴露工人的外周血相对端粒长度较对照人群缩短(P<0.05)。相关分析结果显示,胞质阻滞微核试验的指标中双核微核率、微核细胞率、核桥率与工龄呈正相关(r_s分别为0.447、0.432、0.351,P均<0.05)。外周血相对端粒长度与工人工龄、血铅水平均呈负相关(r_s分别为-0.306、-0.394,P均<0.05)。结论:铅暴露可致工人外周血淋巴细胞的遗传损伤以及相对端粒长度的缩短。     

N-乙酰半胱氨酸对纳米二氧化钛诱发细胞遗传损伤的保护作用

目的：探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对纳米二氧化钛(TiO₂-NPs)诱发人正常肝细胞L-02和肺细胞HBE遗传损伤的保护作用。方法：分别将对数生长期的L-02和HBE细胞分为3组,即正常培养的对照组、TiO₂-NPs(80μg/mL)暴露组、TiO₂-NPs(80μg/mL)与NAC(20μmol/L)联合暴露组;各组细胞处理72 h后,采用H₂O₂试剂盒检测细胞内H₂O₂浓度;实时荧光定量(qPCR)法检测L-02、HBE细胞端粒长度(TL)的改变;胞质分裂阻断微核细胞组试验(CBMN-Cyt)评估受试细胞的染色体不稳定性(CIN)及细胞死亡率。结果：与对照组相比,TiO₂-NPs暴露72 h后,可诱导L-02和HBE细胞内H₂O₂浓度显著升高(P<0.05),致使L-02和HBE细胞TL缩短、CIN增加、细胞死亡率增加(P<0.05);当TiO...     

两种荧光波长CdSeS/ZnS-COOH合金量子点微核组学效应特征的比较研究

目的:比较两种荧光波长CdSeS/ZnS-COOH合金量子点对细胞微核组效应遗传毒作用的特征。方法:采用L5178Y细胞胞质分裂阻滞微核细胞组学试验,490和540 nm两种荧光波长的合金量子点CdSeS/ZnS-COOH受试浓度均为0.062 5、0.125、0.25、0.5和0.1 mg/mL,观察其微核组效应、剂量-效应和时间-效应关系。结果:与阴性对照组相比,两种波长的CdSeS/ZnS-COOH合金量子点在0.062 5 mg/mL剂量时均可诱导微核率增加(P<0.05);两者都能诱导Ⅰ型微核、Ⅱ型微核和核芽效应,但490 nm合金量子点不能诱导核质桥效应,而540 nm合金量子点能诱导核质桥效应。490 nm合金量子点在0.062 5 mg/mL可诱导产生总微核、Ⅰ型微核和核芽,而540 nm合金量子点在此浓度仅可诱导产生Ⅰ型微核;两者均随着剂量进一步增加诱导产生其他效应;各种微核组效应有明显的剂量-效应关系(P<0.05)。490 nm量子点在9 h首先出现核质桥,540 nm量子点在9 h首先出现总微核和Ⅱ型微核数增加;随时间延长进一步出现其他效应,27 h各效应值达到峰值,此后下降。结论:两种荧光波长CdSeS/ZnS-COOH合金量子点均可诱导微核组学效应,但在相同剂量的效应谱、剂量-效应和时间-效应方面均有差异,表明两者的遗传毒作用特点有差异。     

高脂诱导BRL-3A细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的: 采用棕榈酸(PA)诱导BRL-3A细胞,建立肝细胞胰岛素抵抗体外模型。方法: 分别用不同浓度(0、50、100、200、300、400 μmol/L)棕榈酸处理BRL-3A细胞不同时间(6、12、24 h)后,检测细胞生存率、基础葡萄糖消耗及胰岛素刺激葡萄糖消耗的变化。结果: 高浓度PA(200、300、400 μmol/L)使细胞生存率显著降低(P<0.05);低浓度PA(50、100 μmol/L)短时间(6和12 h)作用对细胞生存率无明显影响(P>0.05);不同浓度PA短时间(6 h)作用于细胞,其基础葡萄糖消耗及胰岛素刺激葡萄糖消耗与正常组相比无显著变化(P>0.05),作用24 h后细胞葡萄糖消耗量均明显下降(P<0.05),100 μmol/L的PA处理12 h可降低细胞基础葡萄糖消耗及胰岛素刺激的葡萄糖消耗量(P<0.05),且在继续培养至72 h摄糖能力无明显改变。结论: 100 μmol/L的PA作用12 h可诱导BRL-3A细胞产生胰岛素抵抗。     

抗肿瘤血清胸腺因子9肽的急性毒性和遗传毒性

目的： 观察抗肿瘤创新药血清胸腺因子9肽是否存在急性毒性和遗传毒性,为临床用药提供安全性依据。方法： 小鼠、大鼠和Beagle犬一次性注射给予70.0 mg/kg血清胸腺因子9肽进行急性毒性试验,采用Ames试验、中国仓鼠肺成纤维细胞（CHL）染色体畸变试验和小鼠骨髓细胞微核试验组合进行血清胸腺因子9肽的遗传毒性试验。结果： 一次性注射给药后3种动物精神好、行为正常,均未出现兴奋或抑制体征,均未发现动物急性毒性表现;Ames试验在1~5 000 μg/皿浓度各菌株的平均回变菌落数均与溶剂对照组相似,未见明显增加（P>0.05）;CHL染色体畸变试验在1 400~5 600 μg/mL剂量范围内染色体畸变率均≤3%,与溶剂对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;微核试验在17.5~70.0 mg/kg剂量组的微核细胞率均<2.0‰,与溶剂对照组（1.2‰）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论： 小鼠、大鼠和Beagle犬对血清胸腺因子9肽的最大耐受剂量>70.0 mg/kg,按体质量计算相当于临床人拟用量的930倍;在本试验剂量范围内未见血清胸腺因子9肽的急性毒性和遗传毒性作用。     

体内碱性彗星试验与微核试验联合测定甲磺酸乙酯遗传毒性方法的建立

目的：建立彗星试验与微核试验结合的检测方法,应用其评价甲磺酸乙酯（EMS）对大鼠的遗传毒性。方法：试验设置阴性对照组（0.9%的生理盐水）及EMS低（50 mg/kg）、中（100 mg/kg）、高（200 mg/kg）剂量组,共4组,每组5只雄性SD大鼠,分别在0、24、48和69 h经口灌胃1次性给予受试物,在末次给药后3 h进行外周血采样,外周血经固定、洗脱、荧光染色后进行微核试验采用流式细胞术测定网织红细胞微核率;然后处死动物进行肝脏、肾脏和胃组织的取样,样品经单细胞悬液制备、制片、裂解、解旋电泳及染色后,应用Comet Assay IV软件进行彗星试验数据的收集。结果：彗星试验中,50、100和200 mg/kg EMS染毒组肝脏、肾脏和胃的尾DNA百分含量与阴性对照组相比均显著增加,且呈剂量反应关系（r=0.93,P<0.05）;微核试验中,EMS高剂量组骨髓毒性太大未收集到足够的细胞用于检测,仅EMS中剂量组外周血网织红细胞微核率较对照组显著增加（P<0.01）。结论：初步建立了大鼠多靶器官彗星试验方法;在同一试验中彗星试验和微核试验联合可节省动物数量,提高试验效率。