氧化低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(Oxidizedlowdensitylipoprotein,oxLDL)对人血管平滑肌细胞(Smoothmusclecell,SMC)凋亡的影响。方法:利用密度梯度超速离心分离纯化人血浆LDL,体外和CuS04共孵育氧化生成oxLDL。不同浓度的oxLDL对SMC作用不同的时间,观察其对SMC凋亡状况的影响。结果:oxLDL对SMC的作用具有时间浓度依赖性,较低浓度的oxLDL促SMC增生和泡沫细胞化,高浓度时则诱导SMC凋亡发生。结论:适当浓度的oxLDL促SMC增生及表型转换而高浓度时则对SMC促凋亡作用。     

氧化型低密度脂蛋白对人主动脉平滑肌细胞生长的影响

【摘要】目的 探讨氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）作用不同时间对人主动脉平滑肌细胞（HA-VSMC）生长的影响,分析其诱导HA VSMC形成泡沫细胞的最适诱导浓度和时间,为开展动脉粥样硬化（AS）及相关疾病研究建立体外细胞模型提供依据。方法 使用不同浓度的ox LDL（15 μg/mL和20 μg/mL）分别处理HA VSMC不同时间（36、48、60、72、84、96 h）,通过测定细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量以及使用油红O染色观察细胞内脂质空泡来检测泡沫细胞形成的情况;用噻唑蓝比色实验（MTT法）检测细胞活力变化的情况。结果 细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量、胆固醇酯/总胆固醇的比值以及脂质空泡随着ox LDL浓度和处理时间的增加而增加。15 μg/mL ox LDL作用60 h细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值超过50%且脂质空泡形成,表明泡沫细胞形成;同时,与对照组相比,15 μg/mL ox LDL作用36、48 h对细胞增殖有促进作用,细胞活力显著增加（P＜005）;处理60、72和84 h细胞活力未发生显著性变化;处理96 h对细胞增殖有抑制作用,细胞活力显著下降（P＜005）。表明15 μg/mL ox LDL处理细胞建模不成功。20 μg/mL ox LDL作用48 h细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值超过50%且脂质空泡形成,表明泡沫细胞形成;同时,与15 μg/mL ox LDL处理的HA VSMC相比,20 μg/mL ox LDL处理细胞36 h细胞活力显著降低（P＜001）,处理48、60、72和84h细胞活力显著增加（P＜005）,处理96 h细胞活力无显著变化。20 μg/mL ox LDL处理细胞48、60、72和84 h建模成功。结论 浓度为20 μg/mL的 ox LDL处理HA VSMC细胞48 h细胞活力增加最为显著,其可作为建立AS体外细胞模型的最佳诱导时间和浓度。     

氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞凋亡及其分子学机制 …

目的 研究氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）诱导血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）凋亡的机制。方法 采用电镜观察、Ｈｏｅｃｈｅｔ３３３４２染色、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ印迹分析法观察Ｏｘ－ＬＤＬ诱导ＶＳＭＣｓ调亡的效应及其分子学机制。结果Ｏｘ－ＬＤＬ作用ＶＳＭＣｓ２４ｈ后,电镜下ＶＳＭＣｓ出现凋亡的形态学特征：细胞核固缩、凋亡小体形成;Ｈｏｅｃｈｅｓｔ３３３４２染色可见,凋亡的细胞核或细胞质内出     

氧化低密度脂蛋白诱导人载脂蛋白AI转基因小鼠血管平滑肌细胞差异表达基因的研究

目的 为研究人载脂蛋白AI(h-ApoA-I)抗氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所导致的平滑肌细胞增生及脂质浸润的分子机制,克隆并分析可明显抑制动脉内膜脂质沉积和粥样斑块形成的h-apoA-I转基因小鼠血管平滑肌细胞(vSMC)抗ox-LDL所致AS过程中表达的相关基因。方法以ox-LDL为刺激物作用于培养的转基因小鼠vSMC,应用抑制性差减杂交方法构建减除文库,筛选、克隆差异表达基因,并进行序列测定及同源性比较。同时用SMART技术构建了ox-LDL诱导的转基因小鼠vSMC全长噬菌体文库。结果从57个差异克隆中随机选取15个克隆测序并分析,得到3个表达序列标签(EST),均为与免疫系统有关的功能基因片段,即：补体C1-抑制物(C1-INH)、植物凝集素及T细胞受体B(TCRB)。有明显抗内膜脂质沉积能力的h-apoA-I转基因小鼠的vSMC在被ox-LDL诱导后,筛选出的3个EST均与免疫系统有关,其中C1-INH及植物凝集素与补体系统密切相关。结论ox-LDL致AS及h-ApoA-I抗AS可能有免疫机制参与,且与补体活化及其调控密切相关。其中C1-INH作为抗AS的潜在靶点值得关注。     

氧化型低密度脂蛋白对平滑肌细胞核因子-kB激活的影响

目的：观察氧化型低密度脂蛋白对人平滑肌细胞核因子-kB激活的影响，探讨氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化机制。方法：以体外培养的人脐动脉平滑肌细胞为对象，采用免疫细胞化学法测定氧化型低密度脂蛋白与核因子-kB亚单位p65核移位的时间效应与浓度效应关系。结果：在氧化型低密度脂蛋白刺激下，平滑肌细胞中0．5h即出现核因子-kB核移位，2h达高峰，4h仍持续可见。不同浓度(12．5，25，50及100mg/L)氧化型低密度脂蛋白均可诱导平滑肌细胞中核因子-kB核移位，在一定剂量范围内，氧化型低密度脂蛋白的浓度越大，核因子-kB核移位越明显，尤以50mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用最明显。结论：氧化型低密度脂蛋白可刺激平滑肌细胞中核因子-kB的激活，进一步提示氧化型低密度脂蛋白／核因子-kB信号途径在促进动脉粥样硬化发病机制中起重要作用。     

氧化低密度脂蛋白对人血管平滑肌细胞间质胶原酶及其组织抑制因子基因表达的影响

目的研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)与维生素C(vitaminC,Vc)对人动脉血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的影响。方法采用Northern印迹分析检测人血管平滑肌细胞MMP-1及TIMP-1mRNA的表达。结果ox-LDL可明显增加平滑肌细胞MMP-1基因的表达,Vc可削弱ox-LDL对MMP-1表达的诱导作用。未经修饰的低密度脂蛋白(n-LDL)及Vc单独作用,对MMP-1基因的表达无明显影响。n-LDL、ox-LDL及Vc对TIMP-1基因表达亦无明显影响。结论上述结果为深入探讨导致斑块中MMP-1表达的机制提供有益的资料。     

氧化修饰的低密度脂蛋白促进平滑肌细胞表达VCAM-1

目的 探讨氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)是否诱导培养的平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1(VCAM-1)。方法 采用原位杂交和免疫组化的方法检测。ox-LDL刺激后,原代培养小鼠主动脉中膜平滑肌细胞表达VCAM-1 mRNA和蛋白的情况。结果 ox-LDL作用后,平滑肌细胞VCAM-1 mRNA经原位杂交显色,细胞平均吸光度(A)值为0.2005±0.0190,与对照组(0.1446±0.0055)相比差异有极显著性意义(F=137.12,P<0.01)。平滑肌细胞VCAM-1蛋白表达经免疫组化显色后,细胞平均吸光度值为0.1295±0.0240,较对照组(0.0687±0.0085)亦有所增加,方差分析显示差异有极显著性意义(F=94.58,P<0.01)。结论 ox-LDL能够诱导动脉中膜平滑肌细胞表达高水平的VCAM-1 mRNA和蛋白,从而在动脉粥样硬化斑块形成过程中起重要作用。     

丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

本实验采用噻唑蓝比色法观察氧化型低密度脂蛋白对体外培养的牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响是抗氧化剂丙丁酚的作用。结果表明ＯＬＤＬ能降低一氧化氮含量和刺激血管平滑肌细胞增殖，丙丁酚能拮抗ＯＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖作用，同时增加ＮＯ含量。ＮＯ合成酶抑制剂硝基－Ｌ－精氨酸增强ＯＬＤＬ刺激血管平滑肌细胞增殖作用，且部分抵消丙丁酚的拮抗作用。     

Influence of Oxidized Low Density Lipoprotein on the Proliferation of Human Artery Smooth Muscle Cells in vitro

The effects of oxidized low density lipoprotein (ox-LDL) on the proliferation of cultured human vascular smooth muscle cells (vSMC) were investigated in vitro. By using NaBr density gra-dient centrifugation, LDL was isolated and purified from human plasma. Ox-LDL was produced from LDL by being incubated with CuSO4. ox-LDL was then added to the culture medium at different concentrations (35, 60, 85, 110, 135 and 160 μg/mL) for 7 days. The influence of ox-LDL on vSMC proliferation was observed in growth curve, mitosis index, and in situ determination of apoptosis. The data were analyzed with SPSS 10.0 software. The results showed that the ox-LDL produced in vitro had a good purity and optimal oxidative degree, which was similar to the intrinsic ox-LDL in athero-sclerotic plaque. ox-LDL at a concentration of 35 μg/mL demonstrated the strongest proliferation in-ducement, and at a concentration of 135 μg/mL, ox-LDL could inhibit the growth of vSMC. ox-LDL at concentrations of 35 and 50 μg/mL presented powerful mitotic trigger, and with the increase of ox-LDL concentration, the mitotic index of vSMC was decreased gradually. ox-LDL at higher con-centrations promoted more apoptotic vSMCs. ox-LDL at lower concentrations triggered proliferation of vSMCs, and at higher concentrations induced apoptosis in vSMCs. ox-LDL played a promotional role in the pathogenesis and development of atherosclerosis by affecting vSMC proliferation and apoptosis.     

Effects of oxidized low density lipoprotein on the growth of human artery smooth muscle cells

Atherosclerosis(AS)isacommonandbasicpathologicalchangeofmanycardiovasculardiseases.1Amongtheriskfactorscontributingtohuman AS,oxidizedlowdensitylipoprotein(ox LDL)is consideredtostimulateASdirectlyandplaysanovelrole inthepathogenesisanddevelopmentofAS.2,3Despite proliferation,migrationandphenotypealterationof vascularsmoothmusclecells(vSMCs)arecritical changesinAS,4,5itisstillpoorlyunderstoodwhether ox LDLparticipatesinthepathologicalprocessof vSMCs.6WeisolatedandpurifiedhumanLDL,pro…     

亲环素A在ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞泡沫化过程中的作用

目的观察亲环素A在ox-LDL（氧化低密度脂蛋白）诱导血管的平滑肌细胞中的作用。方法不同浓度（0、20、40、80、160 mg/L）ox-LDL与大鼠血管平滑肌细胞共同孵育,进而选择80 mg/L ox-LDL与细胞共同孵育不同的时间（0、24、48、72、96 h）,用免疫印迹（Western blot）检测亲环素A蛋白质的表达改变。高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内胆固醇含量。结果随ox-LDL浓度增加和孵育时间延长,亲环素A蛋白质的表达均逐渐减弱。HPLC显示80 mg/L ox-LDL孵育细胞72 h组细胞胆固醇酯/总胆固醇比值为57.9%（〉50%）,符合泡沫细胞特征。结论ox-LDL可降低血管平滑肌细胞中亲环素A的蛋白表达并诱导泡沫细胞形成。     

银杏黄酮苷元对氧化低密度脂蛋白所致内皮细胞功能的影响

目的探讨银杏黄酮苷元(GA)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导脐静脉内皮细胞株ECV304单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和植物血凝素样低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的调节作用。方法应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附反应(ELISA)、SP免疫组化法等,探讨ox-LDL诱导下内皮细胞表达MCP-1、LOX-1及银杏黄酮苷元的干预作用。结果6.25～25 mg/L银杏黄酮苷元与脐静脉内皮细胞株ECV304共同培养6～48 h可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞MCP-1、LOX-1 mRNA和蛋白表达(P0.05),具有浓度、时间效应关系(P0.05)。LOX-1拮抗剂PIA可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1、MCP-1 mRNA和蛋白表达(P0.05)。结论银杏黄酮苷元可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞黏附因子MCP-1表达,该作用可能通过抑制LOX-1的表达来实现。     

氧化低密度脂蛋白对人肾小球系膜细胞增殖周期的影响

目的　研究氧化低密度脂蛋白 (Oxidizedlowdensityliporotein ,Ox LDL)对培养的人肾小球系膜细胞 (Humanme sangialcell ,HMC)增殖周期的影响。方法　将与不同浓度Ox LDL共培养后的HMC制成单细胞悬液 ,经流式细胞仪检测后 ,计算出细胞周期中的G0 G1 期、S期、G2 +M期各时期的百分比及S期抑制百分比、细胞增殖指数。结果　低浓度 ( <10 0 μg ml)的Ox LDL明显刺激HMC增殖 ,表现为G0 G1 期细胞百分比减少及S期细胞增加 ;细胞的S期抑制百分比明显下降 ,而细胞的增殖指数则显著增高 (P <0 .0 1) ;高浓度 ( >15 0 μg ml)的Ox LDL明显抑制HMC增殖 ,表现为G0 G1 期细胞百分比增加及S期细胞减少 ,细胞的S期抑制百分比明显增加 ,而细胞的增殖指数则显著降低 (P <0 .0 1)。结论　不同浓度的Ox LDL可能通过对MC增殖周期的不同影响 ,参与肾小球硬化过程中从MC过多状态到MC过少状态的一系列病理过程     

低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素的影响

目的探讨低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素(ADM)的影响.方法利用培养的内皮细胞株ECV-304细胞,分别与不同浓度的低密度(50 100mg/L)、氧化低密度脂蛋白(50 100mg/L)及低密度脂蛋白(50 mg/L) 氧化低密度脂蛋白(50 mg/L)进行孵育,24 h后分别收集培养上清及细胞,用放免分析检测上清及细胞内肾上腺髓质素的含量.结果低密度脂蛋白对肾上腺髓质素的分泌无影响,而氧化型低密度脂蛋白能明显刺激ADM的分泌,二者合用的作用接近于100mg/L的OX-LDL.结论OX-LDL可能具有氧化LDL使其成为OX-LDL的作用,ADM的分泌可能是对细胞损伤的一种反应.     

EFFECT OF OXIDIZED-LDL ON NF-κB NUCLEAR TRANSLOCATION IN AORTIC SMOOTH MUSCLE CELLS ORIGINATED FROM RATS OF DIFFERENT AGES

Objective To investigate the molecular mechanism of atherosclerosis that related to age. Methods Immunohistochemistry staining and Western blot were adopted to determine the nuclear translocation of nuclear factor-kappa B (NF-κB) and expression of platelet-derived growth factor B (PDGF-B) in smooth muscle cells(SMCs) co-cultured with low density lipoprotein (LDL), oxidized LDL (ox-LDL), and ox-LDL high density lipoprotein(HDL) originated fi‘om rats of 2 and l0 months old respectively. Fat stain was used to identify the lipid intake in SMCs. Results The optimal stimulation time ofox-LDL to SMCs was 12 hours. NF-KB intensity increased in most nuclei of SMCs that originated fi‘om rats of either 2 or l0 months old co-cultured with ox-LDL. The intensity of NF-KB and the amount of intracellular lipid taken in SMCs were more obvious in cells fi‘om 10-month-old rats than fi‘om the younger ones.Change of PDGF-B expression in SMCs was not remarkable in each group of rats. Conclusions The 10-month-old rats are more susceptive to ox-LDL than 2-month-old rats in activating nuclear translocation of NF-KB. Maybe this is one of the important reasons contributing to the difference between the older and younger rats on the initiation and development of atherosclerosis lesion. Expression of PDGF-B is not associated with the activity of nuclear translocation of NF-κB.     

氧化低密度脂蛋白对大鼠心肌成纤维细胞胶原的影响

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响.方法 体外培养乳鼠心肌成纤维细胞,加入ox-LDL(10、20、50、100μg/ml)干预24 h,3H-胸腺嘧啶核苷掺人法观察细胞DNA合成,3H-脯氨酸掺入法观察胶原的合成,酶谱法测定基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,RT-PCR检测MMP-2、MMP-9的mRNA表达.结果 和对照组比较,ox-LDL作用于心肌成纤维细胞24 h后,呈浓度依赖性促进细胞DNA合成,同时抑制细胞胶原合成.ox-LDL显著增加MMP-2和MMP-9活性,但各组间作用无明显区别;同时MMP-2和MMP-9蛋白表达也显著性增加,以100μg/ml组作用最强.50μg/ml ox-LDL能显著增加MMP-2和MMP-9的mRNA表达,100μg/ml组作用更强.结论 ox-LDL作用于心肌成纤维细胞能减少胶原的合成并增加胶原的降解,提示其在心肌重构过程巾起一定的作用.     

丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

本实验采用噻唑蓝（MTT）比色法观察氧化型低密度脂蛋白（OLDL）对体外培养的牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响及抗氧化剂丙丁酚的作用。结果表明OLDL能降低一氧化氮（NO）含量和刺激血管平滑肌细胞（SMC）增殖（P＜0．05），丙丁酚能拮抗OLDL刺激SMC增殖作用，同时增加NO含量。NO合成酶抑制剂硝基-L-精氨酸增强OLDL刺激血管平滑肌细胞增殖作用，且部分抵消丙丁酚的桔抗作用。提示丙丁酚能抑制OLDL刺激血管平滑肌细胞增殖作用，且与其促进平滑肌细胞合成释放一氧化氮有关。