甜瓜蒂中葫芦素提取工艺初探及其含量测定

目的 比较65％乙醇和无水乙醇回流提取法从甜瓜蒂中提取葫芦素的效率;同时比较甜瓜蒂纤维和甜瓜蒂粉末中葫芦素含量的差异.方法 分别采用65％乙醇和无水乙醇加热回流法制备甜瓜蒂粉末提取液;采用无水乙醇加热回流法制备甜瓜蒂纤维提取液.通过HPLC测定提取液中葫芦素B、E和I的浓度.结果 甜瓜蒂粉末采用无水乙醇制备的提取液中葫芦素B、E浓度均高于65％乙醇制备的提取液中葫芦素B、E浓度,差异有统计学意义(P＜0.05);但葫芦素I浓度比较,差异无统计学意义(P＞0.05).甜瓜蒂纤维采用无水乙醇制备的提取液中也含有较高浓度的葫芦素B、E、I.结论 采用乙醇加热回流法从甜瓜蒂中提取葫芦素,无水乙醇提取效率高于65％乙醇.甜瓜蒂粉末中葫芦素含量虽高于甜瓜蒂纤维,但甜瓜蒂纤维中仍有较高含量的葫芦素,不应当作废弃物处理.     

HPLC法测定葫芦素胶束药物含量测定

目的建立葫芦素胶束药物含量测定。方法采用Hypersil ODS C18柱(4.6×200 mm,5μm),流动相为乙腈-水-磷酸(45∶55∶0.1,v/v),检测波长228 nm,流速:1.0 ml/min。结果葫芦素在0.25～20.0μg/ml的浓度范围内,峰面积对浓度有良好的线性关系,回归方程为:A=26823×C+866.89(R2=0.9999,n=7),回收率分别为99.11%、99.52%、100.5%,方法的日内与日间精密度RSD均<2%。结论该方法具有简便、快速、准确的特点,可用于葫芦素胶束药物含量测定。     

薏苡仁油的质量分析

目的：建立薏苡仁油的总酯量测定和薄层色谱鉴别以及气相色谱含量测定法。方法采用容量滴定法测定薏苡仁油的总酯量;采用薄层色谱法鉴别薏苡仁油中的特征成分;采用气相色谱法,经油酸和亚油酸经衍生化处理,以水杨酸甲酯为内标物按内标法计算油酸及亚油酸含量。结果薏苡仁油中总酯量以甘油三酯计,均不低于95％;薄层色谱鉴别斑点清晰,专属性强;气相色谱法定量分析油酸甲酯在0．0544～1．0872 mg／mL范围内呈良好的线性关系,平均回收率为97．92％（RSD＝1．24％,n＝6）,亚油酸甲酯在0．0415～1．0508 mg／mL范围内呈良好的线性关系,平均回收率为100．4％（RSD＝2．23％,n＝6）,3批薏苡仁油中油酸含量分别为59．59％,58．29％和58．67％,亚油酸含量分别为25．17％,24．31％和24．77％。结论建立的薏苡仁油总酯量测定法、薄层色谱鉴别法及气相色谱（内标法）含量测定方法操作简便,结果准确,可有效用于薏苡仁油的质量控制。     

葫芦素E脂质体的制备及含量测定

目的:制备葫芦素E(cucurbitacin E,CuE)脂质体,建立HPLC测定CuE脂质体含量的方法。方法:乙醇注入法制备CuE脂质体;使用Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水-冰醋酸(66∶34∶0.01,v/v);流速:1 ml/min;检测波长:228 nm;柱温:35℃。结果:制得CuE脂质体的平均包封率为89.7%,在实验条件下所用辅料对CuE的测定无干扰,在3.5 mg/L~84 mg/L浓度范围内线性关系良好(r=0.9999,n=9);CuE平均回收率99.9%,RSD为0.4%(n=9)。结论:乙醇注入法可用于制备CuE脂质体;高效液相色谱法简便易行、结果准确,可用于CuE脂质体含量的测定。     

HPLC 法测定西伯利亚接骨木中槲皮素、芦丁的含量

目的：建立高效液相色谱法测定西伯利亚接骨木中槲皮素、芦丁含量。方法采用 HPLC 法,色谱柱：Agilent C18（4．6 mm＆#215;250 mm,5μm）,流动相：甲醇-0．1％磷酸水溶液（49∶51）,柱温25℃,流速1．0 mL/min,检测波长254 nm。结果芦丁在0．2～1 mg/mL 浓度范围内线性关系良好（r ＝0．9999）,平均回收率为100．38％,RSD＝2．04％（n ＝9）;槲皮素在0．8～8μg/mL 浓度范围内线性关系良好（r ＝0．9997）,平均回收率为99．23％,RSD＝0．96％（n ＝9）。槲皮素含量为0．0971～0．1985 mg/g,芦丁含量为7．785～13．300 mg/g。结论此方法简便、准确、可靠,可作为西伯利亚接骨木药材芦丁、槲皮素含量的测定方法,为完善西伯利亚接骨木的质量标准提供理论依据。     

“和胃饮合剂”中橙皮苷、厚朴酚的定性定量分析方法研究

目的为“和胃饮合剂”建立完整的定性定量方法。方法采用薄层色谱（TLC）和高效液相色谱（HPLC）的方法。Hypersil C18柱（200mm×4．6mm,5μm）;流动相甲醇-1％醋酸溶液,梯度洗脱（0～30min,甲醇浓度由30％递升至70％;30～40min,甲醇浓度由70％递升至80％;40～50min,甲醇浓度由80％递减至30％）;流速1．0mL／min;柱温为室温;检测波长294nm。结果测得标准品的工作曲线分别为：橙皮苷Y=139．718X＋4．511,线性相关系数为0．99994,线形范围0．5～6mg／ml;厚朴酚Y=1456．342X＋106．506,线性相关系数0．99957,线形范围0．5—6mg／ml。在上述条件下,用本方法测橙皮苷：精密度试验RSD=1．87％（n=5）,加标回收率106．2％（RSD=2．628％,／Z：6）;测厚朴酚：精密度试验RSD：0．34％（n=5）,加标回收率98．62％（RSD=3．093％,n=6）。用此法测定6批不同批号的样品,结果良好。结论本法可以作为“和胃饮合剂”中生理有效成分橙皮苷、厚朴酚的定性鉴别和定量测定方法加以推广运用。     

飞龙掌血根的质量研究

【目的】建立飞龙掌血根的质量标准。【方法】采用薄层色谱法（TLC）对飞龙掌血根中氯化两面针碱和毛两面针素进行鉴别,采用高效液相色谱法（HPLC）测定飞龙掌血根中氯化两面针碱和毛两面针素的含量,同时参照《中国药典》附录相关方法,测定其水分、灰分含量。【结果】 TLC法可对飞龙掌血根中氯化两面针碱和毛两面针素进行鉴别,且斑点清晰,与其他成分分离度好; HPLC测定结果显示：氯化两面针碱在2.84～42.6μg／mL,毛两面针素在25.6～384μg／mL线性关系良好,平均回收率分别为99．2％（相对标准偏差sR＝1．12％）和100％（sR＝0．71％）;水分含量为75．8～98．9 mg／g,总灰分含量为12．4～33．6 mg／g。【结论】本研究所建立的方法专属性和准确性良好,可为飞龙掌血根质量标准的建立提供实验依据。     

复方鱼腥草喷雾剂质量标准研究

目的建立复方鱼腥草喷雾剂质量检测标准。方法采用TLC定性鉴别菊花、甘草;采用HPLC法测定制剂中槲皮素含量：C18柱色谱柱,以Ψ(甲醇：0．4％磷酸)=1：1为流动相,流速1.0ml/min,测定波长为370nm。结果TLC鉴别菊花、甘草,斑点清晰,易于判断;槲皮素在1～100μg／mL范围内呈良好线性,r=0.9998,平均回收率96.8％(n=6),RSD=0．94％。结论本法具有良好的精密度和回收率．可作为复方鱼腥草喷雾剂质量控制标准。     

松补力口服液总多酚及总多糖的测定

目的：建立松补力口服液总多酚和总多糖测定方法,比较10批松补力口服液中总多酚和总多糖的含量。方法采用可见分光光度法测定松补力口服液中总多酚和总多糖的含量,总多酚检测波长为760 nm,总多糖检测波长为610 nm。结果以没食子酸为松补力口服液中总多酚的对照品,在浓度0．913～9．130μg/mL （r＝0．9991）范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98．2％,RSD为1．64％。以葡萄糖分别作为总多糖的对照品,在浓度0．015～0．105 mg/mL （r＝0．9994）范围内呈良好的线性关系,平均回收率为96．62％,RSD为1．0％。10批松补力口服液总多酚的含量为0．617 mg/mL,总多糖的平均含量为1．216 mg/mL。结论该方法简便、快速、重现性好,可作为松补力口服液总多酚和总多糖的检测方法。本研究结果为松补力口服液质量评价提供了参考依据。     

HPLC法同时测定柴胡中皂苷a和皂苷d含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定柴胡中皂苷a和皂苷d含量的方法。方法采用Diamonsil C18（2）柱（250 mm ×4．6 mm,5μm）;流动相为水（A）-乙腈（B）,梯度洗脱：0～30 min,25％～65％B,平衡时间为3 min,流速为1．0 mL／min,检测波长为210 nm,柱温为35℃,进样量20μL。结果柴胡皂苷a与皂苷d分别在36～192 mg／L（R＝0．9993）和36～192 mg／L（R＝0．9991）浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。结论该方法简便、快速、具有良好的重现性和稳定性,可用于柴胡药材的质量控制。     

葫芦素E诱导结肠癌细胞凋亡

目的 体外研究葫芦素E(CuE)对人结肠癌细胞株Caco-2凋亡的影响及其相关分子机制.方法 用0.001、0.01、0.1、1、10 μmol/L CuE分别处理培养的Caco-2细胞24、48、72 h,Hoechst 33258染色法观察细胞核形态变化,TUNEL染色法及Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞分析法检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测Caspase-3、cleaved Caspase-3、PARP、cleaved PARP及Bcl-2蛋白表达变化.结果 Hoechst 33258染色法和TUNEL染色法结果均显示,CuE能明显诱导Caco-2细胞凋亡(P＜0.05),并呈现出剂量及时间依赖性.Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞分析表明,随着CuE浓度升高,凋亡细胞占总细胞比例明显升高(P＜0.05).蛋白印迹分析结果显示,用CuE处理Caco-2细胞24 h后,Caspase-3及PARP蛋白表达明显降低,而cleaved Caspase-3及cleaved PARP蛋白表达明显增加,同时Bcl-2蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 CuE能明显引起人结肠癌细胞Caco-2发生凋亡,其分子机制可能与其抑制Bcl-2表达,激活Caspase-3,从而引起PARP裂解有关.     

涎腺腺癌细胞系对葫芦素BE的敏感性研究

目的 观察其有多种生物活性的葫芦素BE对涎腺腺癌细胞的杀伤作用。方法 用四唑盐显色法(MTT法)检测人腺样食性癌(ACC-M)和粘液表皮样癌(MEC-1)细胞系对葫芦素BE的敏感性实验。结果 葫芦素BE对两种腺癌细胞系均有较高的相对抗肿瘤活性(RAA值分别为345、148)。结论 实验结果为葫芦素BE治疗涎腺腺癌的进一步研究提供了重要依据。     

葫芦素B联合奥沙利铂对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的抑制作用及其机制

目的：探讨葫芦素B（CUB）联合奥沙利铂（OXA）对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法：将SW480细胞分为对照组,10、20和40μmol·L^-1CUB组,OXA组（100μmol·L^-1）及联合组（40μmol·L^-1 CUB+100 μmol·L^-1OXA）。采用MTT法检测SW480细胞增殖率,Hoechst33258染色法观察SW480细胞形态表现,流式细胞术检测SW480细胞的细胞周期及细胞凋亡率,Western blotting法检测SW480细胞中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）、活化后的caspase-3（cleavedcaspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达水平。结果：MTT实验,与对照组比较,CUB组和OXA组细胞增殖率明显降低（P<0.05）;与不同剂量CUB组和OXA组比较,联合组细胞增殖率明显降低（P<0.05）。Hoechst33258染色,与对照组比较,不同剂量CUB组和OXA组细胞蓝色荧光更亮,细胞核可见颗粒块状荧光;与不同剂量CUB组和OXA组比较,联合组细胞蓝色荧光明显变亮,颗粒状荧光明显增加。流式细胞术检测细胞周期,与对照组比较,不同剂量CUB组和联合组G₂/M期细胞百分率明显升高（P<0.05）,40 μmol·L^-1 CUB组、OXA组和联合组S期细胞百分率明显升高（P<0.05）。流式细胞术检测细胞凋亡率,与对照组比较,不同剂量CUB组和OXA组细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;与不同剂量CUB组和OXA组比较,联合组细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。Western blotting法检测,与对照组比较,不同剂量CUB组、OXA组和联合组细胞中caspase-3和Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）,cleavedcaspase-3和Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）,cleavedcaspase-3/caspase-3比值升高（P<0.05）,Bcl-2/Bax比值降低（P<0.05）;与不同剂量CUB组和OXA组比较,联合组细胞上述蛋白表达水平及cleavedcaspase-3/caspase-3和Bcl-2/Bax比值变化更明显（P<0.05）。结论：CUB联合OXA可有效抑制结肠癌SW480细胞增殖,其机制可能与细胞阻滞在S期、G₂/M期及上调cleavedcaspase-3/caspase-3比值、下调Bcl-2/Bax比值有关。     

A New Flavone C-glycoside from Citrullus colocynthis

Objective To study the chemical constituents of Citrullus colocynthis. Methods The chemical constituents were isolated and purified by column chromatography on silica gel and Sephadex LH-20 and recrystallization as well. NMR spectra and physicochemical property were characterized for structural identification. Results Eleven compounds were isolated and identified as β-sitosterol (1), α-spinasterol-3-O-β-D-glucopyranoside (2), α-spinasterone (3), bis (2-ethylhexyl) phthalate (4), p-hydroxybenzoic acid (5), 6-C-p-methylbenzoylvitexin (6), dihydrocucurbitacin E (7), cucurbitacin E (8), dihydro-epi-iso-cucurbitacin D (9), dihydroisocucurbitacin B-25-acaetate (10), and cucurbitacin E 2-O-β-D-glucopyranoside (11). Conclusion Compound 6 is a novel compound. Compounds 1－5, 7, 9, and 10 are isolated from C. colocynthis for the first time.     

葫芦素B对人MCF-7细胞生物学行为的影响

目的 探讨葫芦素B对激素受体阳性的人MCF-7乳腺癌细胞生物学行为的影响及其机制.方法培养人MCF-7细胞,随机分为对照组和20μM、50μM、100μM葫芦素B组.SRB法观测葫芦素B对人MCF-7细胞增殖活性的影响,Hoechst 33258凋亡实验观察葫芦素B对人MCF-7细胞凋亡的影响,Western Blot...     

葫芦素B靶向抑制STAT3抗吉非替尼耐药非小细胞肺癌的研究

目的探讨葫芦素B通过抑制STAT3信号活化,从而拮抗EGFR T790M突变介导的NSCLC吉非替尼耐药的机制。方法利用不同浓度的葫芦素B作用于PC-9/GR细胞的不同时期,用CCK-8法测定细胞的增殖抑制、PI染色法检测细胞的周期、Annexin-v/7-AAD双标记法检测细胞的凋亡,检测不同浓度以及作用时间的葫芦素B对PC-9/GR细胞增殖抑制、细胞周期阻滞及细胞凋亡诱导效应。结果葫芦素B能够显著抑制PC-9/GR细胞增殖以及对细胞周期的G2/M期有明显阻滞作用,而且呈浓度依赖,随着浓度增加,其增殖抑制作用和阻滞活性也增高,同时观察到PC-9/GR细胞分别加入10 nmol/L、100 nmol/L、1000 nmol/L三种浓度的葫芦素B作用后,抑制了p-Jak2、p-STAT3的表达,且这种抑制呈浓度依赖性,但不影响p-EGFR的激活以及总EGFR、Jak2、STAT3的表达。结论葫芦素B能够抑制吉非替尼耐药NSCLC中异常激活的STAT3信号途径,这种抑制具有选择性,从而诱导吉非替尼耐药NSCLC的凋亡。