自噬相关基因Beclin1和LC3与子宫内膜异位症的研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是具有类似恶性肿瘤临床行为学特征的常见妇科良性病变,治疗较困难,复发率高。目前,EMs的发病机制尚不清楚,可能与机体自噬异常以及多种疾病的发生发展相关。自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)可对哺乳动物细胞自噬的调节发挥重要作用,EMs中存在自噬异常,异位子宫内膜可能存在自噬活性改变或特定自噬基因的减少、缺失、变异以及蛋白质表达异常,但目前关于EMs中Beclin1和LC3表达的研究较少,且研究结果尚不统一。     

自噬与凋亡分子机制在子宫内膜异位症中的研究进展

子宫内膜异位症是一种雌激素依赖性进展性疾病,该病的发生发展多与内膜细胞的自噬和凋亡机制相关.子宫内膜异位症患者通过抑制内膜细胞凋亡水平来保护细胞并促进细胞增殖,从而促进子宫内膜异位症发生.但自噬在子宫内膜异位症中是敌是友仍旧存在争议.低水平和高水平自噬在子宫内膜异位症病灶中都有观察到,并可通过不同的方式抑制凋亡...     

PTEN基因在卵巢子宫内膜异位症组织中的表达

①目的　探讨卵巢子宫内膜异位症 (内异症 )组织中PTEN基因表达及临床意义。②方法　用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,检测内异症组织和正常卵巢组织中PTEN基因外显子 1 9和 5 9mRNA的表达水平 ,同时结合病人的临床资料进行分析。③结果　内异症组织中PTENmRNA外显子 1 9、5 9相对表达水平与正常卵巢组织比较 ,差异有显著性 (t=3.12 2、2 .2 0 9,P <0 .0 1、0 .0 5 )。内异症组织中PTENmRNA表达水平与病人年龄、囊肿大小无关 (t =0 .111～ 1.4 4 7,P >0 .0 5 ) ;与临床分期有关 (t =2 .6 78、2 .2 84 ,P <0 .0 5 )。④结论PTENmRNA转录水平的异常可能是内异症恶变的早期事件。     

Cyr61在卵巢型子宫内膜异位症异位和在位内膜中的表达及意义

目的探讨富含半胱氨酸61(cysteine rich 61,Cyr61)在子宫内膜异位症发生和发展中的作用。方法应用免疫组化技术检测卵巢子宫内膜异位囊肿的异位内膜30例,在位内膜25例及正常宫内膜增生期、分泌期组织各20例Cyr61的表达情况。结果①异位内膜或在位内膜组织Cyr61的表达均较正常内膜升高(P<0.05)。②不同临床期别子宫内膜异位症的异位内膜和在位内膜Cyr61的表达无差异(P>0.05)。③异位内膜、在位内膜和正常宫内膜增生期Cyr61的表达均较分泌期升高(P<0.05)。结论Cyr61可能参与了子宫内膜异位症的发生和发展过程。     

c-fos在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的探讨c-fos在子宫内膜异位症（EMT）发生发展中的作用。方法收集正常子宫内膜标本26例,EMT在位内膜标本及异位内膜标本各27例,通过免疫组织化学染色法,检测c-fos蛋白在三组内膜中的表达情况。结果 c-fos主要表达于正常子宫内膜、异位内膜及在位内膜腺上皮细胞核中,少量表达于间质细胞浆;异位内膜及在位内膜组的c-fos蛋白表达明显升高,呈强阳性,与正常对照组比较,两组具有显著性差异（P〈0.05）;但在位内膜与异位内膜c-fos表达率未见明显差异（P〉0.05）;c-fos蛋白在正常子宫内膜组织、异位症在位内膜组织及异位内膜组织中的表达强度均呈现周期性变化,且增生期表达均明显高于分泌期,P值均〈0.05。结论 c-fos蛋白可能为EMT发生发展的重要调控蛋白之一。     

瘦素在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的 探讨瘦素在子宫内膜异住症中的作用.方法 应用免疫组织化学法检测瘦素在卵巢子宫内膜异位囊肿患者异位内膜36例、在位子宫内膜22例及正常子宫内膜20例中的表达特点.结果 腺上皮细胞中:瘦素在异位内膜和在位内膜中的表达均高于正常子宫内膜(P＜0.05);间质细胞中:瘦素在异位内膜中表达高于对照组内膜(P＜0.05),在位内膜与正常内膜之间的表达差异无显著性(P＞0.05);瘦素在异位内膜腺上皮细胞、间质细胞中的表达,Ⅲ～Ⅳ期患者高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P＜0.05).结论 瘦素可能在子宫内膜异位症的发生发展中发挥作用.     

Ezrin蛋白在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的 研究细胞骨架相关蛋白ezrin在子宫内膜异位症（endometriosis,EM）患者中的表达情况,探讨ezrin蛋白在EM发生、发展中的作用.方法 选择卵巢EM患者异位内膜标本60例作为异位内膜组,其在位内膜标本30例作为在位内膜组;正常子宫内膜20例作为正常内膜组,应用免疫组化EnvisionTM二步法检测ezrin蛋白在卵巢EM异位内膜、在位内膜和正常内膜的表达情况.结果 在位内膜组ezrin表达值高于正常内膜组,异位内膜组ezrin表达高于在位内膜组,在位内膜组及异位内膜重度组ezrin表达水平高于轻度组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 ezrin蛋白可能在EM的发病机制中起着重要作用,ezrin蛋白的表达水平和EM的临床分期密切相关,提示ezrin可能在EM的发生、发展中起重要作用.     

Survivin在子宫内膜异位症的表达及意义

目的:探讨凋亡抑制基因survivin在子宫内膜异位症中的表达及意义.方法:应用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法),检测40例子宫内膜异位症异位子宫内膜组织中survivin蛋白的表达,并与正常在位子宫内膜组织25例进行对照.结果:子宫内膜异位症异位内膜组织中survivin蛋白阳性表达率为67.5%,明显高于正常在位内膜组织的阳性表达率4.2%(P＜0.01),并且异位内膜组织中survivin蛋白表达与月经周期无相关性(P＞0.05).结论:survivin在子宫内膜异位症异位内膜中高表达;并且可能通过抑制异位内膜细胞凋亡,对子宫内膜异位症的发生、发展起作用.     

高迁移率族蛋白1在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义

【摘要】目的研究高迁移率族蛋白1（HMGBl）在卵巢子宫内膜异位症中的表达,为子宫内膜异位症的早期诊断、治疗及预后提供新的思路。方法采用RT—PCR和western—blotting检测HMGBImRNA和HMGBl蛋白在69例卵巢子宫内膜异位症患者异位子宫内膜和在位内膜及69例非子宫内膜异位症患者的在位内膜中（对照组）的表达情况。结果HMGBlmRNA在卵巢异位子宫内膜、在位内膜和非异位症的在位内膜均有表达,其表达灰度值分别为：0．5438±0．0565、0．3016±0．0614、0．1536±0．0444;HMGBl蛋白在三组内膜中表达的灰度值分别为：0．8399±0．0287、0．4010±0．0643、0．1999±0．0716。三组HMGBlmRNA、HMGBl蛋白的表达水平比较差异均有统计学意义（F=8．756,P〈0．05）。HMGBl在各组不同月经时期表达水平比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。卵巢子宫内膜异位症患者临床分期高级别异位内膜中HMGBl表达水平高于低级别者（t=10．28,P〈0．01）,与肿瘤大小、患者年龄无明显相关（P〉0．05）。结论HMGBl在卵巢子宫内膜异位、在位内膜中呈高表达,且临床分期级别越高其表达增强,其可能在卵巢子宫内膜异位症的发生、发展中起着重要的作用,可作为子宫内膜异位症的生物标记物。     

自噬相关蛋白 LC3-Ⅱ在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的：本研究检测微管轻链Ⅰ蛋白3-Ⅱ型(LC3-Ⅱ)在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与浆液性卵巢癌及粘液性卵巢癌发生、发展的相关性和意义。方法选取204例上皮性卵巢肿瘤标本,其中,卵巢浆液性囊腺瘤46例,交界性浆液性肿瘤28例,浆液性囊腺癌40例,黏液性囊腺瘤32例,交界性黏液性囊腺瘤30例,黏液性囊腺癌28例,另选取正常卵巢上皮组织28例作为对照。使用 SP 法检测正常卵巢上皮组织、上皮性卵巢肿瘤组织中 LC3-Ⅱ的表达,并结合浆液性癌、黏液性癌临床病理因素进行分析。结果①正常卵巢上皮中 LC3-Ⅱ无表达,卵巢良性浆液性囊腺瘤、交界性浆液性肿瘤及浆液性癌中 LC3-Ⅱ的阳性率分别为4．5%、71．0%、95．0%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中 LC3-Ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P <0．01)。卵巢良性黏液性囊腺瘤、交界性黏液性肿瘤及黏液性癌中 LC3-Ⅱ的阳性率分别为6．7%、66．7%、92．9%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中 LC3-Ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P <0．01);②在40例卵巢浆液性癌、28例卵巢黏液性癌中,LC3-Ⅱ表达与患者年龄、FIGO 分期及病理学分级等临床病理特征均无关。结论 LC3-Ⅱ在卵巢上皮性交界性肿瘤、癌中表达增高,自噬活性增强,可能与卵巢上皮性恶性肿瘤的进展有关。     

喉癌组织LC3转录水平的表达及其意义

目的:探讨喉癌中微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA的表达及其意义.方法:RT-PCR法检测41例喉癌组织,癌旁组织及11例声带息肉组织中LC3 mRNA的表达.结果:喉癌组织中LC3 mRNA表达量明显低于癌旁及声带息肉组织,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:LC3基因的表达水平下调与喉癌的发生密切相关,可能...     

带有CFP标签的LC3自噬表达载体的构建

目的构建带有樱桃红色荧光蛋白(cherry fluorescent protein,CFP)标签的微管相关蛋白1轻链3(LC3)自噬真核表达载体,并进行初步表达鉴定。方法采用PCR方法,从质粒载体pCMV-GFP-LC3为模板扩增LC3片段,通过T4 DNA连接酶将纯化后的PCR产物LC3与经过ApaI和BamHI双酶切的pm-cherry-c1载体连接,命名为PM-CFP-LC3。该载体经酶切及测序验证后,在fugene6转染试剂介导下转染293细胞,通过荧光显微镜观察CFP在细胞内的分布来观察LC3表达情况。结果带有CFP标签的LC3表达载体构建成功,在荧光显微镜下可观察到转染细胞中樱桃红色荧光以及细胞自噬现象。结论成功构建了带有CFP标签LC3的重组质粒并成功表达,为深入研究细胞的自噬奠定了实验基础。     

多种细胞自噬调节剂对自噬标记物LC3II及p62表达的影响

利用Western杂交检测自噬标记物LC3II和p62的表达是评价细胞自噬活性的常用方法。为了比较作用于不同靶点的细胞自噬调节剂对LC3II和p62表达的影响,分别利用以mTOR依赖或非依赖方式活化细胞自噬的雷帕霉素或海藻糖、抑制自噬起始的3-甲基腺嘌呤、抑制自噬小体与溶酶体融合的巴弗洛霉素A1以及抑制溶酶体酶活性的E64d和pepstatin A处理HEK293细胞,通过Western杂交检测LC3II和p62的表达。结果显示,雷帕霉素增强LC3I向LC3II转化,促进p62降解,而海藻糖仅引起LC3II表达的上调;阻断细胞自噬过程各个阶段均导致LC3II和p62堆积,并呈现出剂量和时间依赖性。这些结果提示尽管LC3II和p62均为自噬标记物,但不同的调节剂对其表达的调控存在差异。     

Beclin1和 LC3在胃癌组织中的表达水平和临床意义

目的：探讨胃癌相关组织中自噬相关基因 Beclin1和微管相关蛋白轻链 LC3的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化 PV 法检测61例胃癌组织及相应的癌旁组织中 Beclin1和 LC3的表达水平,分析其与胃癌多种临床病理参数的关系。结果：免疫组化染色结果示,胃癌中 Beclin1的阳性表达率为37.7%,LC3的阳性表达率为41.0%,癌旁组织的阳性表达率分别为98.4%、93.4%,癌组织明显低于癌旁组织;Beclin1和 LC3的表达水平与胃癌的淋巴结转移、浸润深度、分化程度、肿瘤 TNM分期有关,而与年龄、性别和肿瘤生长部位无相关性;胃癌组织中 Beclin1和 LC3表达成正相关。结论：胃癌组织中 Beclin1和 LC3的表达率显著低于癌旁组织,两者之间的关系呈正相关,两者均与胃癌的发生发展有重要的关系。利用自噬调节药物对胃癌的治疗也许具有可行性。     

Beclin1和LC3在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的探讨Beclin1和微管相关蛋白1轻链3( LC3)在膀胱尿路上皮癌中的表达及两者的相关性。方法通过免疫组化法检测56例膀胱尿路上皮癌和32例正常膀胱组织的Beclin1和LC3表达,对比表达的差异。结果膀胱尿路上皮组织 Beclin1阳性表达率为66.1%(37/56),显著低于正常膀胱组织的93.8%(30/32),差异有统计学意义(P<0.01),而癌组织中LC3阳性表达率为50%(28/56),亦显著低于正常膀胱组织87.5%(28/32),差异有统计学意义(P<0.01);Beclin1和 LC3表达均与患者临床分期有关( P <0.01),与患者年龄、性别及肿瘤生长方式不具有相关性(P>0.05);Beclin1和LC3在膀胱尿路上皮癌中的表达具有正相关性( P <0.01)。结论膀胱尿路上皮癌中 Beclin1和LC3阳性表达率低于正常膀胱组织,两者可能均与膀胱尿路上皮癌的发生发展有关。     

mTOR信号通路在卵巢型子宫内膜异位症中的表达及临床意义

目的：探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路蛋白在卵巢型子宫内膜异位组织中的表达及其临床意义。方法：利用RT—PCR、蛋白质免疫印迹法、免疫组织化学法检测2011年1月～2013年6月就诊我院的卵巢型子宫内膜异位症患者40例和正常增生期子宫内膜40例组织中mTOR及下游分子p70S6激酶（p70S6K）和4E—BP1的表达。结果：mTOR及下游分子p70S6K和4E—BP1在卵巢型子宫内膜异位组织中mRNA及蛋白的表达均低于正常子宫内膜组织。mTOR蛋白在卵巢型子宫内膜异位组织中为阳性表达,高于正常子宫内膜组织,且与痛经、月经异常、不孕无明显相关性,而与囊肿大小、异位内膜浸润深度及盆腔浸润情况关系显著。结论：mTOR信号通路与卵巢型子宫内膜异位症的发生、发展关系密切,mTOR蛋白失活可能是卵巢子宫内膜异位的显著标志,检测mTOR蛋白表达对卵巢子宫内膜异位的诊断具有一定意义。     

血管内皮生长因子C和受体3在子宫内膜异位症的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子C(VEGF-C)和其受体3(VEGFR-3)在子宫内膜异位症(EMs)中的表达及其在EMs发病机制中的作用。方法:收集32例EMs患者的卵巢子宫内膜异位病灶组织、32例在位内膜组织和25例正常子宫内膜组织(对照组),应用免疫组化两步法检测各标本中的VEGF-C和VEGFR-3的表达,并用组织学评分对实验结果进行半定量统计,比较其表达强度。结果:VEGF-C在EMs组在位、异位内膜和对照组均有表达,表达强度差异无统计学意义(P>0.05);VEGFR-3在EMs组在位和异位内膜的表达明显高于对照组(P<0.05),且在位内膜的表达明显高于异位内膜(P<0.05)。结论:VEGF-C与其受体VEGFR-3结合参与了EMs病程,并可能通过促淋巴管新生作用而促进了EMs的发生发展。     

自噬相关基因在慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型中的表达及意义

目的 检测慢性非细菌性前列腺炎(CNP)大鼠模型中自噬相关基因表达的水平及时序变化,探讨自噬在CNP病程中的可能作用.方法 取3月龄雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组和2、4、6周CNP模型组,每组10只.HE染色观察各组前列腺组织炎性细胞浸润情况,采用Western blot、免疫组化SABC法检测各组前列腺组织中自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1的表达.结果 HE染色结果提示成功构建大鼠CNP模型,Western blot法、免疫组化法检测显示各实验组LC3、Beclin-1蛋白的表达均高于正常对照组,并随时间的推移表达量逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 自噬相关基因可能在CNP的发病过程中发挥重要作用.     

HLA-G在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:研究人类白细胞抗原-G(HLA-G)在子宫内膜异位症患者在位和异位内膜组织中的表达,探讨HLA-G分子在内异症发生发展中的作用.方法:采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)法检测子宫内膜异位症患者19例在位子宫内膜和30例异位内膜中HLA-G分子的表达水平,以30例非子宫内膜异位症患者的子宫内膜作为对照.结果:内异症在位子宫内膜和异位内膜HLA-G的阳性表达率(42%,53%)均显著性高于对照组正常子宫内膜(P＜0.01),但在内异症在位内膜和异位内膜之间HLA-G的阳性表达率无显著性差异(P＞0.05).结论:异常表达的HLA-G分子可能在内异症的发生发展过程中发挥着作用.     

肝癌中TLR3信号分子与自噬相关基因表达的相关性及临床意义

目的:研究肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)及信号分子含TIR结构域的转接蛋白(TIR-domain-containing adaptor protein including IFN-β,TRIF)表达与细胞自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达的相关性及临床意义,并探讨相关机制?方法:收集与随访101例HCC病例,构建肝组织芯片?HE染色判断HCC的组织分化,免疫组化染色检测HCC组织中Ki-67?TLR3?TRIF? LC3 和Beclin l的表达,应用TUNEL方法检测肿瘤细胞凋亡信号?统计学分析其临床病理因素和预后?结果:本组HCC中TLR3和TRIF表达呈正相关(ρ=0.640,P < 0.001),其高表达分别与肿瘤HbsAg感染?硬化背景?细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)及患者5年总生存率呈正相关,与肿瘤细胞增殖?血管浸润?Edmondson分级和TNM分期呈负相关?Beclin1和LC3表达呈显著正相关(ρ=0.587,P < 0.001),两者高表达分别与肿瘤脉管浸润?Edmondson分级?TNM分期?肿瘤细胞增殖呈正相关,与AI和预后呈负相关?并且TLR3?TRIF分别与LC3 和Beclin1的表达呈负相关(P均<0.001)?结论:HCC中TLR3及其信号分子TRIF表达,细胞自噬相关基因Beclin1和LC3的表达分别通过调控细胞增殖?凋亡和自噬来影响肿瘤的生物学行为和预后?HCC组织中Beclin1介导的自噬途径与TLR3信号凋亡通路存在交叉,两条通路异常可能是HCC发生?进展的机制之一?