南瓜蛋白对B16细胞的诱导分化作用(简报)

植物核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein，RIP)通常按分子结构不同分为两型；Ⅰ型RIP为单链蛋白，如天花粉蛋白Ⅱ型RIP是通过二硫键连接的双链蛋白，如蓖麻毒素．Ⅰ型RIP与Ⅱ型RIP的A链一样，是一类RNA N-糖苷酶或多核苷酸；腺苷糖苷酶，具有抗生育、抗病毒和抗肿瘤等多种生物学活性．南瓜蛋白(cucurmosin)是本课题组     

盐酸小檗碱对B16细胞的分化诱导作用

目的 测定盐酸小檗碱对小鼠黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用。方法 以MTT法测定盐酸小檗碱对B16细胞增殖的抑制作用,通过克隆形成实验、细胞黑色素含量的测定以及B16细胞体内成瘤能力的测定观察盐酸小檗碱对B16细胞的诱导分化作用。结果 盐酸小檗碱对B16细胞具有明显的增殖抑制作用;并使B16细胞生长缓慢,平铺不重叠,呈正常上皮样细胞分化,细胞的克隆形成能力降低,细胞内的黑色素生成能力增强,C57/BL小鼠体内成瘤能力降低。结论 盐酸小檗碱对B16细胞具有诱导分化作用。     

苯丁酸钠对人脑胶质瘤细胞的诱导分化作用

目的评价新药苯丁酸钠对胶质瘤细胞的诱导分化作用，为胶质瘤诱导分化相关基因研究作前期准备。方法 采用MTT法，软琼脂克隆形成率，形态学，流式细胞术，GFAP免疫荧光等方法鉴定分化程度，用划痕实验检测细胞运动能力的改变。结果 2mM苯丁酸钠即可明显诱导人脑胶质瘤低分化细胞株SHG-44-9的细胞分化，表现为增殖抑制，克隆形成能力丧失，细胞突起增长，G1期阻滞，GFAP表达量升高，细胞运动能力下降。结论 苯丁酸钠可以高效诱导人脑胶质瘤细胞分化，并使细胞运动能力下降，有可能发生分化相关基因表达改变。     

苦参碱对SMMC-7721细胞系的诱导分化作用

目的：研究苦参碱对人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１的诱导分化作用．方法：用细胞培养方法，观察细胞增殖、形态、功能和代谢等方面指标，研究苦参碱（Ｍａ）对人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１在体外的诱导分化作用．结果：各处理组细胞均出现细胞增殖抑制，亚细胞结构趋于正常，ＡＦＰ分泌量明显低于培养天数相同的对照组细胞，γ－ＧＴ活力逐日下降，酪氨酸－α－酮戊二酸转移酶（ＴＡＴ）活力始终高于对照组细胞．处理６ｄ后，细胞ＤＮＡ含量降低，Ｓ期细胞数增加．结论：Ｍａ可使ＳＭＭＣ－７７２１细胞聚集于Ｓ期，诱导其向正常肝细胞分化     

中药安迪对HL-60细胞分化的诱导作用

目的　探讨安迪粉针剂 (Andi)对 HL- 60细胞分化的诱导作用 .方法　采用人早幼粒白血病细胞株 (HL - 60 )为靶细胞 ,分为不加任何药物的对照组 (C组 )、安迪粉针剂 (Andi)组、阳性对照药维甲酸 (RA)组和苦参 (KS)组 ,进行体外培养和诱导分化 ,观测细胞生长曲线、细胞形态、硝基蓝四氮唑(NBT)还原和吞噬能力等指标 .结果　 2 mg· L-1 Andi可显著地抑制 HL - 60细胞增殖 ,使原始细胞分化为中幼以下的成熟细胞 ,分化后的细胞具有 NBT还原能力和吞噬功能 ;Andi为 68.0 % ,RA为 61 .5% ,KS为 59.0 % ,C组还原能力仅6.0 % (P<0 .0 1 vs C) .其形态的改变和吞噬能力与阳性对照药维甲酸 (RA)和苦参 (KS)相似 ,分别为 52 .0 % ,45.5%和56.5% (P>0 .0 5) ;均明显高于空白对照组 .C组吞噬功能仅7.5% (P <0 .0 1 vs C)其 NBT还原能力与 KS相当 (P >0 .0 5) .结论　 Andi对 HL - 60细胞具有显著的诱导分化作用     

三氧化二砷对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性的作用,探讨砷及其化合物治疗黑色素瘤的作用机制,为其治疗黑色素瘤提供新的理论和实验依据.方法:用TRAP-ELISA和TRAP-PAGE银染法检测黑色素瘤B16细胞(简称B16)端粒酶活性.结果:As2O3对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性的抑制有明显的浓度和时间依赖关系.结论:As2O3对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性表达的抑制作用随药物浓度的增加或作用时间的延长而增强.     

维甲酸诱导分化小鼠淋巴瘤SACIIB_2克隆细胞的作用和机理

研究了ＲＡ对ＳＡＣＩＩＢ２克隆细胞的促分化作用。结果表明，受ＲＡ处理后，ＳＡＣ－ＩＩＢ２克隆细胞形态的改变及生长抑制不因培养液中去除ＲＡ而立即消失，瘤细胞酸性非特异性酯酶（ＡＮＡＥ）染色阳性率明显升高，细胞内嘌呤核苷磷酸化酶（ＰＮＰ）活性明显升高，而腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）活性明显降低，末端脱氧核苷酰转移酶（ＴｄＴ）的表达有所减弱，而ＲＡ处理前后瘤细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶谱型无明显改变，提示ＲＡ对ＳＡＣＩＩＢ２克隆细胞有一定程度的诱导分化作用。对ＲＡ处理前后ＳＡＣＩＩＢ２，细胞３－ｆｏｓ基因表达情况也作了初步观察和分析。     

精氨酸酶对急非淋白血病细胞的诱导分化

本文对在精氨酸酶作用下,单核细胞白血病 U_(937)细胞及 APL 原代细胞的生长和分化进行了一些观察。在精氨酸酶500U/L 浓度下培养4天,U_(937)细胞和 APL 原代细胞活细胞密度分别为起始潘细胞密度的65%和62%,同时观察到 U_(937)细胞向成熟单核细胞分化,APL 原代细胞向分叶核粒细胞方向分化。     

人参炔醇对HL-60细胞体外诱导分化作用的研究

目的 通过细胞形态学和增殖动力学研究人参炔醇对HL—60细胞诱导分化作用。方法 采用台盼蓝染色及细胞计数器测定细胞存活量，流式细胞仪检测人参炔醇对细胞周期和分子标志表达的影响，观察信号通路阻断剂对人参炔醇诱导细胞分化的影响。结果 人参炔醇使HL—60细胞倍增时间延长，诱导HL—60向单核细胞分化，细胞集中于G1期，显著上调细胞表面CDl4分子表达，并中度上调CDllb分子表达，RpcAMPS及H7均可使人参炔醇诱导的HL—60细胞NBT阳性率降低。结论 人参炔醇诱导HL—60向单核细胞分化，与细胞内腺苷酸环化酶(cAMP)，蛋白激酶C(PKC)信号通路活化有关。     

紫外线诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡研究

目的 :研究紫外线照射对小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡率的影响。方法 :用UV照射培养的小鼠B16黑色素瘤细胞 ,于照射后不同时段分别用流式细胞仪 (FCM )及原位末端标记法 (TUNEL法 )检测B16细胞凋亡率。结果 :UV照射后 0h、12h、2 4h及 36h ,B16细胞的凋亡率分别为 (4 .13± 0 .15 ) % ;(9.2± 0 .74 ) % ;(2 1.6± 1.2 8) % ;(36 .7± 1 5 6 ) %。各时间段B16细胞的凋亡率与对照组B16细胞的 (2 .3± 0 .2 6 ) %相比均有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :紫外线照射可诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡。     

新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞凋亡的作用

目的探讨新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的影响。方法用不同浓度的GNA培养B16细胞24h,倒置显微镜下观察细胞形态;采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tet-razolium,MTT)法测定GNA对B16细胞增殖的抑制作用;荧光显微镜观察吖啶橙/溴化乙锭(acridine or-ange/ethidium bromide,AO/EB)染色后细胞凋亡;采用膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染,流式细胞仪检测B16细胞凋亡。结果 GNA作用B16细胞后,细胞的抑制率随着药物浓度的增加而升高;AO/EB染色荧光显微镜观察显示GNA处理的B16细胞出现了典型的凋亡特征;流式细胞仪检测显示GNA处理的B16细胞随着药物浓度的增大凋亡率随之上升。结论 GNA在一定的范围内,能够浓度和时间依赖性地通过诱导细胞凋亡抑制小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖。     

6种中药组方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖和黑素生成的影响

目的研究6种中药组方水提物、醇提物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响。方法以MTT法测定各组方对B16细胞的增殖活性;NaOH裂解法测定各组方对B16细胞的黑素生成量。结果组方1、2、3水提物和组方2、4、6醇提物具有明显促细胞增殖作用（P〉0．05）;水提物中细胞增殖率最高的为组方2（0．625mg／ml）,增殖率为22．60％;醇提物中细胞增殖率最高的为组方4（0．078mg／ml）,增殖率为11．60％。组方1、2、4、5、6水提物和6种组方醇提物均具有促进黑色素生成的作用（P〈0．05）。水提物中黑素增率最高的为组方1（0.313mg／ml）,增率为75．38％;醇提物中黑素生成增率最高的为组方1（1．25mg／ml）,增率为88．01％。结论各组方对鼠黑素瘤B16细胞增殖及黑素生成均有一定的促进作用,但其作用强度与组方的组成密切相关。     

赤芍总苷抑制人黑色素瘤A375细胞株增殖作用的研究

目的观察赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响及其作用机制。方法黑色素瘤A375细胞,分别加入12.5、25、50、100、200 mg/L TPG,对照组加等量0.9%氯化钠注射液,孵育48 h。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定细胞生长抑制率,用RT-PCR、Western blot法分别检测增殖细胞核抗原(PCNA)、P21、P27、P53 mRNA及其蛋白的表达水平。结果不同浓度(12.5、25、50、100、200 mg/L)TPG刺激后,对黑色素瘤细胞均具有明显的增殖抑制作用。100 mg/L TPG作用黑色素瘤细胞48 h,PCNA mRNA及其蛋白表达水平较对照组显著下降,而P21、P27、P53的mRNA及其蛋白表达水平较对照组显著上升,差异有统计学意义(P<0.01)。结论TPG抑制黑色素瘤A375细胞增殖,与下调PCNA表达及上调P21、P27、P53表达有关。     

脂质体白细胞介素Ⅱ对小鼠b16黑色素瘤肺转移反脾细胞增殖的影响

小鼠尾静脉注射B16黑色素瘤细胞,腹腔注射脂质体白细胞介素Ⅱ和未包裹白细胞介素Ⅱ(IL—2),连续10d,检测小鼠肺湿重、肺转移结节数和ConA诱导的脾细胞DNA掺入量。结果表明,IL—2可抑制小鼠B16黑色素瘤肺转移,促进ConA刺激的脾细胞增殖,并与剂量明显相关。脂质体包裹IL—2可使其生物活性提高约5倍。对免疫功能受抑小鼠作用更为明显。     

三羟异黄酮抑制黑色素瘤B16细胞增殖作用的机制研究

目的:研究三羟异黄酮抑制黑色素瘤B16细胞增殖作用的分子机制.方法:以4',5,7三羟异黄酮处理黑色素瘤B16细胞1～4天后,以生长曲线反映其增殖活力,以B16细胞形态、黑色素含量及以流式细胞仪检测细胞周期变化等观察三羟异黄酮对黑色素瘤B16细胞的抑制增殖作用.结果:用10、30、90 μmol/L的三羟异黄酮作用肿瘤细胞均有不同程度的抑瘤作用(P<0.05～P<0.01).表现为黑色素生成能力增加,细胞生长缓慢,可使B16细胞阻断在S期.结论:三羟异黄酮不同剂量对体外黑色素瘤B16细胞增殖有明显的抑制作用.     

体内直接导入转基因IL-2包装细胞的抗癌作用

利用构建分泌人IL－2的逆转录病毒的包装细胞，直接体内注射，观察了对B16小鼠黑色素瘤生长影响及转基因效果。狭缝印迹分析结果显示，B16细胞在体内获得IL－2mRNA表达。同时，肿瘤生长受到抑制，表现在小鼠成瘤与存活时间延长，免疫功能也获得增强，IFN-γ下水平升高。本结果与本室以往报道的体外基因转移的动物实验结果相符，提示直接体内注射病毒包装细胞可转移外源基因及显示抑瘤作用。     

六味地黄丸含药血清调控黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白表达的作用

[目的] 观察六味地黄丸含药血清调控小鼠黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白(Cx)表达的作用.[方法]采用SD大鼠灌胃8 d制备六味地黄丸含药血清(药物荆量为32 g·kg-1·d-1)和对照血清(灌胃等容积生理盐水);选择对B16细胞生长和形态影响不大的血清浓度 (体积分数为10%) 作为大鼠血清的工作浓度;采用Western blot技术和间接免疫荧光法及流式荧光法检测六味地黄丸含药血清对黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白(Cx26/30/32)表达的影响.[结果]Westem blot检测显示空白组 (无鼠血清) 3种Cx几乎不表达,而对照血清和六味地黄丸各浓度含药血清均能提高Cx蛋白的表达,但含药血清的作用更为明显且有显著的量效关系;间接免疫荧光法和流式荧光法检测显示类似的结果:对照血清组和中、高剂量含药血清组的Cx蛋白荧光强度均较空白组显著增加(P<0.01),但与对照血清组比较,只有高剂量含药血清组荧光强度显著增加(P<0.05),低剂量舍药血清组Cx蛋白表达反而下降(P<0.01).[结论]六味地黄丸含药血清具有调控小鼠黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白表达的作用.     

灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞产生白介素10的影响

目的 探讨灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞产生白介素10(IL-10)的影响.方法 分别将不同浓度灵芝多糖作用于B16F10黑素瘤细胞,通过RT-PCR方法和蛋白印迹(Western-blot)技术检测IL-10的表达情况.结果 在不同浓度灵芝多糖作用下,经RT-PCR方法检测发现,加入0μg/mL、0.2μg/mL、0.8μg/mL、3.2μg/mL、12.8μg/mL灵芝多糖的B16F10黑素瘤细胞释放IL-10的量分别为1.03±0.15、1.15±0.25、0.92±0.11、0.86±0.64、0.75±0.12,与0μg/mL灵芝多糖组相比较,除0.2μg/mL灵芝多糖组,其他组差异均具有统计学意义,P<0.05.经Western-blot法检测,加入0μg/mL、0.2μg/mL、0.8μg/mL、3.2μg/mL、12.8μg/mL灵芝多糖的B16F10黑素瘤细胞IL-10表达量分别为1.47±0.43、1.58±0.31、0.93±0.12、0.89±0.26、0.40±0.29,与0μg/m L灵芝多糖组相比较,12.8μg/m L灵芝多糖组差异有统计学意义,P<0.05.结论 灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞产生IL-10具有抑制作用.     

高温所致黑色素瘤细胞的生长及其表面变化的扫描电镜观察

S_(91)黑色素瘤细胞株,经42℃和44℃加温3小时,细胞数目与对照组比较,出现有意义地减少(P<0.01);两个加温组之间亦有明显差异(P<0.01)。扫描电镜显示,加温组细胞生长密度显著较对照组稀疏。42℃加温组,细胞膜上出现大小不等的水泡样结构,常见局部膜破损及突起的远端断裂现象,细胞表面微绒毛样结构显著减少。44℃加温组,细胞明显缩小,表面干固,结构模糊。