NGF诱导PC12细胞分化的神经细胞行为观察

目的 :观察PC12细胞分化的神经细胞的分裂、突起延伸、迁徙和分化等细胞行为。方法 :采用Giemsa、甲绿 派郎宁染色和增殖细胞核抗原 (PCNA)免疫组织化学染色方法观察培养的PC12细胞。结果 :培养分化的神经细胞呈现横裂、纵裂等不同方式的无丝分裂像 ;分裂中的神经细胞可呈现形态及化学不对称性 ;分化的神经细胞有明显的细胞迁徙运动和突起延伸。结论 :NGF诱导PC12细胞分化的神经细胞能以无丝分裂方式增殖 ;分化神经元可以通过细胞迁徙、突起延伸及共同胞质桥等方式相连接。     

传代培养PC12细胞无丝分裂与细胞分化的观察

目的：观察传代培养的PC12细胞的无丝分裂和不对称分裂,探讨其在肿瘤发生、肿瘤细胞多形性和细胞分化中的意义。方法：传代培养的PC12细胞以Giemsa染色、甲绿、派郎宁的细胞化学和增殖细胞核抗原（PCNA）的免疫组织化学染色,光镜下分别观察。结果：PC12细胞呈现横缢型和侧凹型等无丝分裂像,并且观察到其形态、大小和化学性质的不对称性分裂及细胞脱颖现象。结论：无丝分裂和不对称分裂是PC12细胞多形性形成的主要大小和化学性质的不对称性分裂及细胞脱颖现象。结论：无丝分裂和不对称分裂是PC12细胞多形性形成的主要原因,肿瘤细胞无丝分裂及其不对称性对肿瘤发生及肿瘤细胞的分化具有重要意义。     

传代培养PC12细胞无丝分裂与细胞分化的观察

目的 :观察传代培养的PC12细胞的无丝分裂和不对称分裂 ,探讨其在肿瘤发生、肿瘤细胞多形性和细胞分化中的意义。方法 :传代培养的PC12细胞以Giemsa染色、甲绿 派郎宁的细胞化学和增殖细胞核抗原 (PCNA)的免疫组织化学染色 ,光镜下分别观察。结果 :PC12细胞呈现横缢型和侧凹型等无丝分裂像 ,并且观察到其形态、大小和化学性质的不对称性分裂及细胞脱颖现象。结论 :无丝分裂和不对称分裂是PC12细胞多形性形成的主要原因 ,肿瘤细胞无丝分裂及其不对称性对肿瘤发生及肿瘤细胞的分化具有重要意义。     

传代培养PC12细胞的早期细胞分裂过程观察

目的 :观察早期培养的PC12细胞以了解肿瘤细胞演化过程。方法 :RPMI 16 40传代培养的PC12细胞 ,以Giemsa和增殖细胞核抗原免疫组化进行染色观察。结果 :PC12细胞呈现包括全能原生质体、核内多倍体、多核体、核 内质多聚体、合胞体和多细胞裂殖球的一系列演化阶段。结论 :细胞裂殖是早期培养PC12细胞的主要无丝分裂方式。这种肿瘤演化早期的细胞裂殖方式对肿瘤发生具有基础的细胞生物学意义     

Cx43形成的GJIC在NGF诱导PC12细胞神经元样分化中作用的研究

【立论依据】 在神经系统的发育和修复过程中,神经元间的细胞通讯在细胞的静息、增殖、分化和凋亡过程的发生发展中发挥着重要作用。细胞间通讯有缝隙连接、膜表面分子接触通讯和化学通讯三种方式,而缝隙连接(GJ)是细胞间直接通讯的唯一方式。缝隙连接蛋白(connexin)是GJ结构和功能的基础,在缝隙连接蛋白家族中,Cx43在中枢神经系统的发育过程中发挥重要作用。功能性缝隙连接(GJIC)是通过缝隙连接在相邻细胞间传递氨基酸、离子、小分子等的一种通讯方式。研究表明,神经生长因子(NGF)可以促进Cx43磷酸化,同时可以诱导嗜铬细胞瘤PC12细胞分化而产生与交感神经元相似的神经元。但是Cx43形成的功能性缝隙连接(GJIC)在NGF诱导PC12细胞分化中的作用尚不清楚。因此,本研究拟阐述Cx43形成的GJIC在NGF诱导PC12细胞分化中的作用。 【设计思路】 本实验拟构建Cx43稳定转染的PC12细胞系,并检测Cx43形成的GJIC的功能。 NGF诱导PC12细胞和Cx43稳定转染的PC12细胞,分析Cx43形成的GJIC在NGF诱导PC12细胞神经元样分化过程中的作用,为神经损伤和修复提供新的研究靶点。 【实验内容】 (1)构建Cx43稳定转染的PC12细胞系;(2)实验分组:NGF诱导PC12细胞组,NGF诱导Cx43稳定转染的PC12细胞组,NGF诱导PC12细胞组+缝隙连接抑制剂(CBX),NGF诱导Cx43稳定转染的PC12细胞组+CBX;(3)形态学观察和NES免疫荧光细胞化学染色检测细胞分化率;(4)Dye Coupling检测Cx43形成的GJIC。 【材料】 PC12细胞;NGF;Cx43真核表达质粒;Cx43引物和抗体;CBX;NES单克隆抗体;FITC-IgG。 【可行性】 本研究前期研究工作通过形态学观察及Image软件测量显示在一定范围内,NGF量的增加可以有效提高PC12细胞的分化水平,课题组成员熟练掌握相关实验的方法和技术;研究室能提供相关的仪器和材料。实验思路清晰,实验过程明确。 【创新性】 本研究应用NGF诱导PC12细胞分化模型,探究Cx43形成的GJIC在NGF诱导PC12细胞分化过程中的作用,从而为神经损伤和修复提供新的研究依据和调控靶点。     

PC12细胞诱导分化成神经元样细胞的培养机制研究

目的：研究适宜PC12细胞的培养方法及其在神经生长因子（NGF）作用下的分化效果.方法：PC12细胞培养于F12K培养基中,传代时直接将细胞吹打下来,并用注射器吹散成单细胞悬液;PC12细胞接种于6孔培养板中,并用含NGF 50μg/L的无血清培养基进行诱导分化5d,倒置显微镜下观察细胞的形态特征,Image J软件进行图像分析.结果：PC12细胞生长状态良好,且经NGF作用5d后,细胞体积显著增大,突起增多增长,细胞分化率达（72.60±3.61）％.结论：本实验中对PC12细胞培养的方法简单易行,适用于PC12细胞的培养;NGF能够诱导PC12细胞分化成神经元样细胞,可为神经退行性疾病的研究奠定基础.     

PC12细胞凋亡进程中NGF诱导BimEL表达

目的 调查神经生长因子(NGF)缺乏诱导的PCI2细胞凋亡中Bim EL表达的变化情况.方法 分别用含有NGF或NGF抗体的培养基培养PC12细胞,RT-PCR方法检测BimEL在PC12细胞中的表达变化.结果 拮抗NGF处理的PC12细胞中Bim EL的表达明显大于NGF处理组(P<0.05),而拈抗NGF一段时间后再加入NGF培养的处理组,细胞中Bim EL的表达量少于NGF拮抗组(P<0.05),但却大于NGF处理组(P<0.05).结论 提示NGF可能通过调节Bim EL参与PC12细胞凋亡.     

神经细胞生长因子诱导的神经元化对PC12细胞紫外线耐受量的影响

目的 评估神经细胞生长因子(NGF)诱导的神经元化对PC12细胞紫外线耐受量的影响.方法 采用10、30、60、80、100、200 mJ/cm2紫外线分别照射经NGF诱导的PC12细胞(研究组)和未经NGF诱导的正常PC12细胞(对照组),照射后继续培养24 h,MTT测定细胞存活率.结果 对照组细胞在辐射强度30 mJ/cm2时开始出现明显的细胞凋亡,研究组细胞在辐射剂量100 mJ/cm2时才出现明显凋亡.结论 NGF诱导的神经化可提高PC12细胞的紫外线耐受量.     

MAPK、PI3K途径在蛇毒神经生长因子诱导PC12细胞分化的作用

目的 研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt途径在蛇毒神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化中的作用.方法 应用蛋白免疫印迹法分析p44/p42MAPK和Akt的磷酸化水平,并利用MAPK抑制剂PD98059和PI3K抑制剂LY294002,观察其对NGF诱导的PC12细胞形态学改变的影响.结果 眼镜蛇毒NGF在10ng/mL即可诱导PC12细胞长出突起,100,1000ng/mL作用明显,呈剂量效应关系;NGF能有效刺激p44/p42MAPK、Akt的磷酸化;分别用特异抑制剂PD98059抑制MAPK活性,LY294002抑制PI3K活性后,NGF诱导的细胞分化均受抑制.结论 蛇毒神经生长因子诱导PC12细胞的分化作用与p44/p42MAPK和PI3K/Akt途径相关.     

Nogo-C对PC12细胞分化和突起生长的影响

目的:利用PC12细胞研究Nogo-C和神经元细胞分化及突起生长的关系. 方法: NGF诱导PC12细胞,利用RT-PCR及免疫荧光技术检测细胞内Nogo-C的表达,并在PC12细胞中过表达Nogo-C,通过细胞计数检测Nogo-C对突起生长的影响. 结果: ① RT-PCR检测到NGF诱导的PC12细胞中有少量Nogo-C的mRNA分子表达;②免疫荧光染色观察到NGF诱导的PC12细胞中有少量Nogo-C的表达;③细胞计数观察到转染Nogo-C后的PC12细胞在NGF诱导后突起增长百分数相对于EGFP组明显增高. 结论: NGF诱导的PC12细胞中有Nogo-C的表达,同时过表达Nogo-C可促进NGF诱导下的PC12细胞的分化以及影响细胞的突起生长.     

梭曼中毒诱导PC12细胞STATs表达

目的 研究梭曼中毒PC12细胞中STATs基因mRNA和蛋白表达的变化。方法 采用半定量RT-PCR技术和Western blot法检测梭曼中毒2、6、12及24h的PC12细胞的STAT1、3、5基因mRNA和蛋白质的表达水平，并对PCR产物进行测序。结果 梭曼中毒后2h组PC12细胞中STAT1、3、5mRNA和蛋白质表达水平升高，在中毒后12h组达最高，中毒后24h组的表达量低于12h组，与对照组比较均有明显差别。RT-PCR产物直接测序证实扩增产物片断与GenBank中相应序列相同。结论 梭曼中毒增强PC12细胞中STATs基因的表达，在梭曼中毒所致的脑损伤中可能发挥重要作用。     

梭曼中毒诱导PC12细胞JAKs表达

目的 研究梭曼中毒PC12细胞中JAK1、JAK2、JAK3基因mRNA和蛋白表达的变化。方法 采用半定量RT-PCR和Western blotting法检测梭曼中毒2、6、12、24h的PC12细胞的JAK1、JAK2、JAE3基因mRNA和蛋白质的表达水平，并对PCR产物进行测序。结果 梭曼中毒后2h组PC12细胞中JAK1、JAK2、JAK3 mRNA和蛋白质表达水平升高，在中毒后12h组达最高，中毒后24h组的表达量低于12h组，与对照组比较均有明显差别。RT-PCR产物直接测序证实扩增产物片断与GenBank中相应序列相同。结论 梭曼中毒增强PC12细胞中JAKs基因的表达，在梭曼中毒所致的脑损伤中可能发挥重要作用。     

神经节苷脂GM1对神经生长因子诱导PC12细胞分化的影响

目的 研究神经节苷脂GM1是否介导神经生长因子（NGF）诱导的PC12细胞的分化。方法 采用MTT法、葡萄神经酰胺合成抑制剂（D－PDMP）分析神经节苷脂GM1对NGF诱导的PC12细胞分化的影响。结果 神经节苷脂GM1对PC12细胞的生长无明显的影响，而能够促进NGF对PC12细胞的生长抑制作用；NGF能诱导PC12细胞分化，但NGF无法诱导神经节苷脂缺乏型PC12细胞的分化；在神经节苷脂缺乏型PC12细胞中添加神经节苷脂GM1后，细胞恢复对NGF的反应性。结论 神经节苷脂GM1在NGF诱导的PC12细胞分化过程中发挥重要作用。     

波形蛋白影响PC12细胞神经分化的研究

目的 探究波形蛋白分子在PC12细胞神经分化中的作用。方法 用免疫印迹方法检测PC12H和PC12L细胞中波形蛋白的表达情况。用免疫印迹方法检测PC12H细胞和PC12L细胞在NGF处理前后波形蛋白的表达情况。构建波形蛋白干扰质粒,用免疫印迹方法检测该质粒的干扰效果。分别将对照质粒、波形蛋白干扰质粒瞬时转染PC12H细胞,培养0、1、2、3天观察与记录细胞的分化情况,用Image-pro plus软件定量分析这两组细胞的平均神经突长度和含分化神经突细胞的百分比例。结果 PC12H细胞中波形蛋白的表达明显高于PC12L细胞（P=0.000）。NGF处理后PC12H和PC12L细胞中波形蛋白的表达量均增加,且在PC12L细胞中更明显（P=0.000）。波形蛋白干扰质粒能有效地抑制PC12H细胞中波形蛋白的表达（P=0.000）。瞬时转染波形蛋白干扰质粒能有效地抑制PC12H细胞的神经分化,定量分析结果显示干扰组细胞的平均神经突长度和含分化神经突细胞的百分比均明显小于对照组,差异均有统计学意义（P=0.000）。结论 波形蛋白分子可以促进PC12细胞的神经分化。     

多巴胺诱导PC12细胞凋亡的机制

目的　探讨多巴胺 (DA)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞株 (PC12 )细胞凋亡的机制。　方法　采用 PC12细胞为模型 ,以 0 .45 mmol/ L的 DA来诱导细胞凋亡的发生 ,用流式细胞仪检测 PC12细胞的亚二倍体峰 ,按 Griess法测定 NO代谢产物 NO2 -的浓度 ,用 Ac- DEVD- AMC为酶作用底物 ,在荧光分光光度计下检测 CPP32活力。　结果　 DA处理组的凋亡率为 5 4.49%± 1.6 0 % ,与阴性对照组 (1.6 1%± 0 .18% )比较差异有显著性 (P<0 .0 1) ;NO2 -浓度的升高和 CPP32活化程度与阴性对照组比较差异亦有显著性 (P<0 .0 1)。　结论　 CPP32的激活是 DA诱导 PC12细胞凋亡的重要通路 ,而合成增多的 NO可能是 DA激活 CPP32的信号传递分子。     

多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

目的 研究外源性多巴胺对多巴胺能神经元的毒性作用,方法 采用体外培养的PC12细胞为模型,以终浓度0.45mmol/L的多巴胺对细胞进行诱导。结果 在透射电镜下可见培养的PC12细胞核染色质明显固缩、断裂,原位末端标记技术显示胞核内散在分布断裂DNA片段,流式细胞仪检测到DNA周期中G0-G1期前出现明显的亚二倍体峰,琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“梯状”带等细胞凋亡的特征性改变。结论 外源性DA可诱导PC12细胞凋亡。     

人参总皂苷对PC12细胞分化的影响

目的:研究人参总皂苷(Total saponin ofpanax ginseng,TSPG)诱导PC12细胞神经元性分化的作用.方法:体外培养PC12细胞,观察PC12细胞在TSPG的影响下细胞发生的形态学改变.诱导48 h透射电镜观察突触连接形成情况,72 h利用免疫细胞化学技术,观察TSPG作用后PC12细胞向MA...     

谷氨酸毒性对培养PC12细胞钙内流与游离钙的影响

Ｃａ2 + 作为细胞内一种重要的第二信使 ,参与神经细胞的一系列活动 ,对神经细胞的代谢和功能产生广泛的影响 ,细胞内钙超载被称为细胞损伤的“最后共同通路”。谷氨酸是中枢神经系统内含量最多的兴奋性氨基酸 ,有神经兴奋毒性 ,它作用于ＮＭＤＡ受体 ,引起钙内流 ,在神经细胞的继发性损害中谷氨酸释放占重要地位[1 ,2 ] 。ＰＣ12细胞是一种从鼠嗜铬细胞瘤分离的克隆细胞 ,因其在神经生长因子 (Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ,ＮＧＦ)存在下 ,细胞形态、结构和功能皆类似于交感神经细胞 ,因而成为近年来神经科学工作者研究神经细胞递…     

MCI-186对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的:研究MCI-86对PC12细胞凋亡的影响.方法:以过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析,荧光染色及荧光显微镜形态学观察,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡.结果:MCI-186可有效地改善凋亡引起的PC12细胞形态学变化,提高细胞存活率,1×10-5 mol/L MCI-186可减小亚二倍体峰的峰面积,使凋亡细胞比率(1.99)小于损伤对照组细胞(6.45).结论:MCI-186可能作用于细胞凋亡过程,通过清除活性氧,对神经细胞凋亡具有抑制作用.