应用多重聚合酶链式反应鉴别布鲁杆菌

目的 探讨应用多重聚合酶链式反应(Muhiple-PCR)进行布鲁杆菌株种型的鉴别.方法 以6株布鲁杆菌标准菌株(牛种、羊种、猪种、犬种、绵羊附睾种、沙林鼠种布鲁杆菌标准菌株)作为阳性对照,以大肠埃希菌O∶157和小肠结肠炎耶尔森菌O∶9作为阴性对照,待测布鲁杆菌株29株.先用布鲁杆菌属特异性聚合酶链式反应(BCSP31-PCR)扩增上述待测布鲁杆菌株,扩增结果为阳性的菌株再用Muhiple-PCR方法进行布鲁杆菌种型鉴别.结果 29株待测布鲁杆菌株BCSP31-PCR方法扩增均为阳性,进一步Multiple-PCR方法扩增均为阳性,其中有20株鉴定为羊种菌,5株鉴定为猪种菌、3株鉴定为牛种菌、1株鉴定为犬种菌.结论 Multiple-PCR方法是一种快速、特异、简便、低风险的布鲁杆菌种型鉴定方法.     

聚合酶链反应检测HBVDNA的意义

聚合酶链反应(polymerase chainreaction,PCR)是新近建立的一种分子生物学技术,可在体外将特异DNA序列呈百万倍扩增,具有敏感、特异、简便和快速等优点。近两年来,许多学者应用PCR技术检测HBVDNA,丰富和更新了对HBV感染的认识,在HBV感染的诊断和其他研究中显示了良好的应用前景。     

产肠毒素脆弱类杆菌聚合酶链反应检测

背景:产肠毒素脆弱类杆菌(ETBF)能导致家畜、儿童和成人腹泻,已引起广泛关注,但国内尚未见相关报道。目的:通过ETBF聚合酶链反应(PCR)检测,调查不同人群粪便标本中ETBF的阳性率。方法:建立ETBFPCR检测,评估其敏感性和特异性,并检测正常对照组和腹泻组的ETBF阳性率。结果:PCR的敏感性为1×104CFU/ml,常见肠道正常菌群和致病菌均为阴性。正常对照组(475例)和腹泻组(498例)的ETBF阳性率分别为3.6%和6.4%(P=0.042)。其中成人对照组和成人腹泻组的阳性率分别为2.3%和5.7%(P=0.047),儿童对照组和儿童腹泻组的阳性率分别为5.1%和7.3%(P=0.33)。结论:ETBFPCR检测具有较好的敏感性和特异性,ETBF可能为腹泻的致病因素之一。     

聚合酶链反应检测隐孢子虫

微小隐孢子虫 (Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ ,Ｃｐ)是引起人类腹泻的重要原因之一[1 3] ,获得性免疫缺陷综合征(ＡＩＤＳ)患者也常易感染。现有微小隐孢子虫病的诊断方法中 ,粪便涂片染色查找卵囊可因粪中卵囊太少、染色剂放置过久、操作方法不熟练或因非特异性嗜酸性颗粒出现而漏诊、误诊。免疫学试验欠敏感 ,体外培养周期太长 ,且难以控制。应用核酸杂交技术检测微小隐孢子虫灵敏、特异 ,但耗时、烦琐、技术要求高和价格昂贵 ,不适宜于临床应用。近年报道聚合酶链反应 (ＰＣＲ)对检测微小隐孢子虫具有高度特异性和灵敏性…     

实时荧光定量PCR检测布鲁杆菌方法的应用

目的 探讨实时荧光定量PCR(FQ-PCR)用于布鲁杆菌检测的可行性.方法 根据布鲁杆菌BCSP31基因设计合成1对引物和TaqMan探针,以克隆有布鲁杆菌基因片段的PMD18-T质粒作为标准品DNA模板,进行FQ-PCR检测,绘制标准曲线;对所应用的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析;并对临床血液标本进行FQ-PCR,与临床诊断进行比较.结果 用标准品DNA建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.999);FQ-PCR检测的灵敏度拷贝数为5个/μl,普通PCR为5×102个/μl,FQ-PCR是普通PCR的100倍;用FQ-PCR检测6株布鲁杆菌菌株及5株非布鲁杆菌菌株,布鲁杆菌均检出较强荧光信号,非布鲁杆菌未检出;5×103个拷贝/μl标准品DNA检测后,Ct值批内变异系数(CV)为0.71%,批间CV为7.23%;用FQ-PCR检测临床确诊阳性血标本24份,检出阳性19份,符合率为79%(19/24),阴性对照血标本31份,全部阴性,阴性符合率为100%(31/31),临床症状可疑标本30份,检出阳性2份.结论 用FQ-PCR方法检测布鲁杆菌具有高度敏感性、特异性及良好的重复性,与临床阳性及阴性标本的符合率较高,可用于快速检测各种样本中的微量布鲁杆菌以及作为布鲁杆菌感染的实验室检测方法.     

聚合酶链反应检测淋病奈瑟菌

聚合酶链反应检测淋病奈瑟菌殷常红，倪语星，王祥兴淋病奈瑟菌（ＮＧ）是性传染疾病的主要病原之一。传统的涂片染色和分离培养法其敏感性和特异性还不能达到临床的要求。本文作者将ＰＣＲ技术用于检测ＮＧ，旨在为临床上诊断淋病提供新的敏感、特异和快速的方法。材料...     

聚合酶链反应在HBV感染检测中的意义

乙肝病毒(HBV)感染的诊断,以往都依据于免疫学检测血清5项指标。但由于受敏感度的限制,部分原发性肝癌(PHC )和慢性肝病的5项指标阴性,病因难明。现已证实,每毫升污染10~2个Dane颗粒的血清即能使黑猩猩发生HBV感染。较为敏感的分子杂交技术仅可检出0.1～0.3pg/ml的NBV DNA,相当于10~5～10~6个Dane颗拉,从而限制了对HBV感染的诊断。近年来发展的聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)是一种体外扩增特异性DNA的新技术,具有快速、简便、敏感度高、特异性强等优点,在HBV感染的临床与实验研究中日益受到重视,并显示出广泛的应     

定量聚合酶链反应技术研究进展

自Ｍｕｌｌｉｓ等于 1985年创建了聚合酶链反应(ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＰＣＲ)技术以来 ,该技术经过十几年的发展与完善 ,已在基础研究领域得到了广泛的应用 ,并在临床疾病的诊断方面进行了一些探索性研究。根据ＰＣＲ扩增策略和检测产物手段的不同 ,可分为定性ＰＣＲ(ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ ,以下简称ＰＣＲ)和定量ＰＣＲ(ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ ,Ｑ ＰＣＲ)。一、ＰＣＲ在结核分支杆菌检测中的研究现状1989年Ｈａｎｃｅ等[1] 将ＰＣＲ用于结核分支杆菌的检测 ,1990年我国引进该项技术 ,从而在…     

荧光定量PCR方法应用于布鲁杆菌检测研究概述

布鲁杆菌病(简称布病)是布鲁杆菌属细菌侵入机体后引起人或动物多个器官系统发生病理损伤的人兽共患传染病.根据宿主倾向性和危害性,布鲁杆菌主要分为马耳他布鲁杆菌(B.melitensis)、流产布鲁杆菌(B.abortus)、猪布鲁杆菌(B.suis)、绵羊附睾布鲁杆菌(B.ovis)、犬布鲁杆菌(B.canis)和沙林鼠布鲁杆菌(B.neotomae)6个菌种.     

实时荧光定量PCR检测布鲁杆菌方法的应用

Objective To discuss a real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR) wether if can be used to detect Brucella. Methods According to the BCSP31 gene sequences specific for Brucella, one pair of primers and one TaqMan probe were designed. A real-time PCR was developed with the BCSP31 fragments cloned into PMD18-T vector. The standard cure was established and the sensitivity, the species specificity and the stability of the assay were evaluated. The clinical blood specimens were detected by QT-PCR and compared with clinical diagnosis. Results The standard curve was established with the standard template and the relationship between the Ct and the DNA copy number was linear(r=0.999). The sensitivity of the real-time PCR was 5 copies/μl. The sensitivity of the common PCR was 5×102 copies/μl. The sensitivity was about 100 times higher than common PCR. Species specificity of this FQ-PCR assay evaluated using genomic DNA from 6 Bmcella strains and 5 non-Brucella strains and strong fluorescence was detected in all Brucella strains. The CV of intra-assay and inter-assay reproducibility were 0.71%,7.23%, reprectively. Twenty-four specimens from clinical brucellosis cases, 19 showed positive, the positive coincident rate was 79%(19/24). The negative results were obtained for all 31 negative control, and the negative coincident rate was 100%(31/31). Two were positive from all 30 specimens clinically suspected. Conclusions Highly specific, sensitive, repeatable and coincidental with clinic, this FQ-PCR is quite useful for rapid detection of tiny DNA of Brucella in various samples and laboratory diagnosis.     

应用聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌的研究

应用聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌的研究谭耀驹李一耕谭守勇我们选用分子量为３８０００片段长度为４１９ｂｐ（３８０００－４１９ｂｐ）系统，对患者的痰液、胸液、脑脊液、支气管冲洗液、淋巴分泌物等进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测，探讨其在实际应用中的可信性...     

聚合酶链反应快速诊断伤寒

聚合酶链反应快速诊断伤寒周伯平，谌取鼎，高志良，陈士竹，刘水腾，唐蔚目前对伤寒尚缺乏有效的早期诊断方法。我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）快速诊断伤寒，现将结果报告如下。材料与方法一、病例选择临床拟诊伤寒患者４ｌ例，均具有典型临床表现，为１９９３年３月～...     

应用聚合酶链反应快速检测支气管肺泡灌洗液中的结核分支杆菌

应用聚合酶链反应快速检测支气管肺泡灌洗液中的结核分支杆菌董德琼杨渝浩彭理年肖瑜申茂权凌建华采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中的结核分支杆菌ＤＮＡ，并与涂片和培养法比较，以评价ＰＣＲ检测ＢＡＬＦ中结核分支杆菌在肺结核诊断中...     

聚合酶链反应诊断军团菌感染的实验研究

目的早期诊断军团菌感染。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测嗜肺军团菌（Ｌｐ）ｍｉｐ基因的特异性片段，并应用于豚鼠米克戴德军团菌（Ｌｍ）感染后的组织标本检测。结果可以扩增出ＬｐＩ型和Ｌｍ６３０ｂｐ的特异性片段，其他临床分离株不被测得，检测灵敏度为１５０ｆｇ军团菌基因组ＤＮＡ（相当于１５～３０个军团菌）。对２２份Ｌｍ感染后不同时间获取的豚鼠组织标本，应用该法与培养法检测结果比较显示，在感染后３．５天培养法阳性率为８８．９％，ＰＣＲ法１００％，在感染后７．５天培养法阳性率为０，而ＰＣＲ法仍有２２．２％的阳性率。结论本方法敏感、特异，既能检出嗜肺军团菌，又能测得Ｌｍ，大大提高了军团病的诊断率     

聚合酶链反应检测结核分支杆菌临床标本制备方法的研究

分别检测６种结核菌ＤＮＡ提取方法的裂解效能、聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增灵敏度及其对临床标本的阳性检出率。结果显示，ＴＥ－ＴｒｉｔｏｎＸ法和Ｃｈｅｌｅｘ－１００法能裂解绝大多数的细菌并具最高的敏感性，可检测出少至１０个菌细胞，其临床标本的阳性检出率分别为９３．３％和８６．６％；而其余４种方法效果较差，ＴＥ－Ｔｒｉｔｏｎ和Ｃｈｅｌｅｘ－１００两种沸水浴法简捷、经济、高效，值得临床实验室推广使用。     

应用聚合酶链反应快速检测临床标本中的肺炎支原体

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测临床标本中的肺炎支原体（ＭＰ）。在１４０例非细菌性肺炎患者的标本中，ＰＣＲ试验阳性３０例。其中间接血凝试验阴性面ＰＣＲ试验阳性者２１例。ＰＣＲ阳性标本经ＭＰ５－４寡核苷酸探针检测验证，均为阳性结果。     

定量聚合酶链反应在检测丙型肝炎病毒感染血清中的应用

定量聚合酶链反应在检测丙型肝炎病毒感染血清中的应用李伯安马洪滨薛净乔小红程云作者单位：１０００３９北京解放军第３０２医院附表ＰＣＲ定性与ＰＣＲ定量比较项目ＨＣＶＲＮＡ定量结果（拷贝／微升）＜１０１１０１～１０５＞１０５合计巢式（＋）４７７１６９７定性...