缺氧时肝癌HepG2细胞HIF-1α对GLUT-1表达的影响及机制探讨

目的探讨缺氧状态下肝癌HepG2细胞中HIF-1α表达对GLUT-1的影响。方法 HepG2人肝癌细胞株,以DMEM培养基加胎牛血清培养,分为常氧对照组(21%O2),缺氧组(1%O2),常氧加吲哚美辛组,缺氧加吲哚美辛组。收获细胞后,分别行免疫荧光法检测细胞内HIF-1α的表达和核转位;Western blot检测各组的HIF-1α、GLUT-1蛋白表达;RT-PCR检测各组的GLUT-1mRNA含量。结果缺氧时HIF-1α(蛋白:68.25±11.72)和GLUT-1(mRNA:0.7424±0.1127;蛋白:70.33±12.83)在肝癌HepG2细胞中的表达增高(P<0.05);缺氧时以吲哚美辛抑制HIF-1α蛋白(36.34±9.50)稳定和积聚后,GLUT-1 mRNA(0.3710±0.1016)及蛋白(38.46±12.20)表达受到抑制(P<0.05)。结论缺氧可以上调HIF-1α和GLUT-1在肝癌HepG2细胞中的表达;HIF-1α可以调控其下游靶基因GLUT-1的转录和表达,影响糖酵解和细胞能量的产生。     

低氧条件下血红素加氧酶1过表达对人肝癌细胞的保护作用

目的 探讨低氧条件下人肝癌细胞(HepG2)中血红素加氧酶1(HO-1)过表达对细胞的保护作用,及其与低氧诱导因子1α(HIF-1α)的关系.方法 应用低氧气体(0.5%O2、94.5%N2、5%CO2)和化学模拟低氧(250 μmol/L CoCl2)方法 刺激HepG2细胞.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,从mRNA水平上检测低氧条件下HO-1和HIF-1α的表达.采用Western bolt方法 ,从蛋白水平上检测低氧条件下HO-1和HIF-1α的表达及其相关性.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法 ,分析低氧刺激后细胞的存活率,以及低氧刺激同时抑制HO-1蛋白表达后细胞的存活率.采用超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒,检测低氧刺激细胞后总SOD的活性,以及抑制HO-1蛋白表达后细胞中总SOD的活性.结果 低氧诱导的HepG2细胞中,HO-1 mRNA和蛋白过表达.用锌原卟啉IX(ZnPPIX)抑制低氧条件下HO-1蛋白过表达,可导致HepG2细胞在低氧应激条件下存活率明显降低(P<0.01).低氧条件下,HepG2细胞中总SOD的活性显著升高(P<0.05);而在抑制低氧条件下HO-1蛋白过表达后,HepG2细胞中总SOD活性明显降低(P<0.01).低氧条件下,HIF-1α蛋白表达显著升高,抑制HIF-1α蛋白表达后,HO-1蛋白表达明显降低;而抑制低氧条件下HO-1的过表达后,HIF-1α蛋白表达没有明显改变.结论 低氧诱导HepG2细胞中HO-1蛋白的过表达依赖或部分依赖HIF-1α;HO-1的过表达对HepG2细胞抵抗低氧应激发挥保护作用;HO-1的过表达对处于低氧应激条件下细胞的保护作用可能源于SOD.     

羟基喜树碱对缺氧诱导的SiHa细胞HIF-1α及VEGF基因表达的影响

目的:研究羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对缺氧诱导的宫颈癌SiHa细胞HIF-1α和VEGF基因表达的影响。方法:在缺氧条件下(37℃,5%CO2,1%O2饱和度)体外培养宫颈癌SiHa细胞株,经不同浓度HCPT处理24 h后,用半定量RT-PCR法和Western印迹法分别检测细胞HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达变化,并设立药物处理常氧组和缺氧对照组进行比较。结果:HCPT对常氧组与缺氧组细胞的细胞毒性作用无明显差异。在常氧条件下,SiHa细胞内无HIF-1α蛋白表达,VEGF有低水平表达,HCPT处理对SiHa细胞HIF-1α和VEGF基因表达无影响;但缺氧可诱导细胞HIF-1α和VEGF基因表达明显上调;HCPT对缺氧细胞HIF-1α蛋白和VEGF mRNA及蛋白表达有明显抑制作用,其效应呈剂量依赖性,而对HIF-1αmRNA表达无明显抑制作用。结论:HCPT可抑制缺氧诱导的SiHa细胞内HIF-1α蛋白及其下游VEGF基因的高表达。     

缺氧对骨肉瘤SaOS-2细胞系HIF-1α和VEGF表达的影响

目的：观察缺氧条件下骨肉瘤SaOS-2细胞系缺氧诱导因子HIF-1α和血管生长因子VEGF表达的变化。方法：建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相(8、16、24h)HIF-1α和VEGF的表达。半定量RT—PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA的转录水平，免疫组化(SP法)和免疫印迹(Western blot)检测HIF-1α蛋白表达情况，免疫组化和ELISA法检测细胞和培养上清液中VEGF蛋白表达。结果：缺氧处理后，HIF-1α mRNA转录水平没有明显改变，蛋白表达随缺氧时间延长而升高。VEGF mRNA以及蛋白的表达在缺氧条件下均显著增强。结论：骨肉瘤细胞系SaOS-2在缺氧条件下．缺氧诱导因子HIF-1α和血管牛长因子VEGF蛋白表达上调。     

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002对人胶质瘤U251细胞中HIF-1α表达和细胞生长的影响

目的:探讨低氧环境下磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositide3kinase,PI3K)抑制剂LY294002对人胶质瘤U251细胞中PI3K/丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)信号通路下游缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)mRNA和蛋白的表达以及细胞生长、细胞凋亡、细胞黏附和侵袭能力的影响。方法:应用LY294002作用于低氧环境中的人胶质瘤U251细胞(低氧+LY294002组),以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照(低氧组)。CCK-8试剂盒检测U251细胞生长,FCM检测细胞凋亡百分比,黏附实验检测细胞黏附能力,侵袭实验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测p-Akt蛋白的表达,RT-PCR和蛋白质印迹法检测HIF-1αmRNA及蛋白的表达。结果:LY294002能明显抑制p-Akt蛋白以及HIF-1αmRNA和蛋白的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。LY294002能抑制低氧环境中U251细胞的增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显(P<0.05)。低氧+LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组(P<0.01),而细胞黏附和侵袭能力明显低于低氧组(P<0.01)。结论:LY294002能抑制低氧环境中PI3K/Akt信号通路下游HIF-1αmRNA及蛋白的表达,抑制人胶质瘤U251细胞的生长,促进细胞凋亡,并抑制细胞黏附和侵袭能力。     

竹节香附素A对HepG2细胞缺氧诱导因子-1α基因和蛋白表达的影响

目的:探讨竹节香附素A对缺氧条件下人肝癌细胞株(HepG2)细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)基因和蛋白表达的影响.方法:取体外低氧环境下HepG2细胞进行不同干预:特定浓度(10 μg/ml)竹节香附素A不同作用时间(0 h、6 h、12 h、24 h);不同浓度(0、5、10、20 μg/ml)竹节香附素A特定作用时间(24 h)处理,通过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测HepG2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达变化情况.结果:体外低氧环境下HepG2细胞可见HIF-1α mRNA和蛋白强表达,特定浓度(10 μg/ml)竹节香附素A可显著抑制HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平,药物作用0 h、6 h、12 h、24 h时HIF-1α mRNA 条带灰度值(A/A0)分别为0.73±0.08、0.44±0.12、0.24±0.09、0.07±0.03,差异具有统计学意义(P<0.01);HIF-1α蛋白A/A0比值分别为2.31±0.33、1.70±0.17、1.30±0.96、0.09±0.13,差异具有统计学意义(P<0.01).不同浓度竹节香附素A特定作用时间(24 h)处理可显著抑制HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平,药物浓度0、5、10、20 μg/ml处理,HIF-1α mRNA A/A0比值分别为0.65±0.07、0.43±0.08、0.19±0.03、0.08±0.02,差异具有统计学意义(P<0.01);HIF-1α蛋白A/A0比值分别为0.84±0.08、0.39±0.06、0.28±0.04、0.08±0.03,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:竹节香附素A对缺氧条件下肝癌HepG2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达具有抑制作用,并存在时间-剂量依赖性效应.     

肺癌组织中HIF-1α的表达及低氧条件下A459细胞miR-15a的表达

目的:研究肺癌组织中缺氧诱导因子-1α的表达以及A549肺癌细胞在常氧和低氧条件下miR-15a的表达。方法:取30例肺癌患者的石蜡切片组织样本(其中有肺癌的组织及其相对应正常肺组织）,进行苏木精-伊红染色和免疫组化染色来观察肺癌组织和正常肺组织HIF-1α染色的强弱程度。将A549细胞分别在培养条件为37℃、5％CO2的常氧条件下和培养条件为37℃、5％CO2、1％O2的低氧条件下培养48h 后通过实时荧光定量PCR技术来检测miR-15a的表达。结果:HIF-1α主要在肺癌细胞胞核及细胞质中表达,呈棕黄色颗粒状,有明显的异质性,肿瘤间质细胞也可见少量表达。癌旁正常的肺组织无 HIF-1α的表达。在30例肺癌组织中,有8例HIF-1α表达为（-）,7例表达为（+）,9例表达为（++）,6例表达为（+++）,阳性率为73%。miR-15a在正常氧条件下培养的A549细胞中相对表达量为1.82546±1.62784,在低氧条件下培养的A549细胞相对表达量为0.17598±0.11046。MiR-15a在低氧条件下培养的A549细胞中表达量低于在常氧条件下培养的A549细胞中的表达量。结论:肺癌组织中HIF-1α高表达,而正常肺组织中无HIF-1α的表达。表明肺癌中存在着缺氧微环境。在低氧状态下培养48h的肺癌A549细胞与常氧状态下培养48h的A549细胞比较,miR-15a的表达是明显下调的,表明在缺氧时肿瘤细胞中miR-15a的表达是下调的,也提示miR-15a可能作为一个肺癌早期筛查、早期诊断的生物学标志物,并为肺癌靶向治疗提供线索。     

人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α对survivin的表达调控

背景与目的:survivin是一种重要的抗凋亡基因,在肿瘤组织中特异性高表达,并参与调控细胞周期和细胞凋亡,其高表达与肿瘤进展、药物抵抗以及预后关系密切。但survivin在肺癌中高表达的转录调控机制研究甚少。课题组前期研究成功构建含有survivin核心启动子的荧光报告载体pGL3-SVP230-luc,并发现核心启动子区存在缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的潜在位点。本研究拟通过免疫荧光双标记法、电泳迁移率实验(EMSA)、共转染等方法探讨缺氧条件下人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α调控survivin转录的确切机制。方法:⑴运用免疫荧光双标记检测缺氧A549细胞中HIF-1α与survivin的表达;⑵HIF-1α表达质粒和HIF-1αsiRNA分别转染A549细胞,30 h后RT-PCR、Western blot和免疫荧光双标法检测survivin mRNA和蛋白表达;⑶pGL3-SVP230-luc(含有survivin核心启动子的荧光报告载体)与HIF-1α表达质粒和HIF-1αsiRNA分别共转染A549细胞,测定萤光素酶的表达活性;⑷...     

基因沉默HIF-1α在结直肠癌SW480细胞的缺氧与上皮-间质转化中的作用

目的通过基因沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),研究其对结直肠癌SW480细胞的生长增殖、侵袭迁移能力,及对锌指转录因子(Snail)与上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响和作用。方法利用氯化钴(CoCl2)化学诱导建立结直肠癌SW480细胞的缺氧模型,设计合成HIF-1α的小干扰RNA(HIF-1α-siRNA)并将其转染入细胞内。通过四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测细胞的体外生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell法)检测细胞的体外侵袭迁移力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫蛋白印迹(Western blot)检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherinmRNA与蛋白的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,缺氧条件下,基因干扰组的OD值及细胞存活率均降低(P<0.05);体外侵袭实验结果显示,基因干扰组侵袭迁移率降低(P<0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示,基因干扰组中HIF-1α和Snail mRNA和蛋白的表达明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白的表达明显增强(P<0.05),对3种因子进行相关性分析,结果显示HIF-1α和Snail的表达呈正相关,HIF-1α和Snail均与E-cadherin的表达呈负相关(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因可抑制结直肠癌SW480细胞的体外生长增殖和体外侵袭迁移能力,其机制可能是由于基因沉默HIF-1α导致细胞中Snail低表达,E-cadherin高表达,抑制了EMT发生、发展所致。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。     

恶性肿瘤肝转移假性肝硬化发生机制及诊疗的研究进展

随着对恶性肿瘤的深入研究,越来越多的肿瘤患者接受到更规范更多线的治疗.更多线的化疗及靶向治疗,使一部分恶性肿瘤肝转移患者的肝脏发生类似肝硬化的形态学及临床改变,称之为假性肝硬化.由于假性肝硬化罕见,对于它的认识多来自于个案报道.因此,本文通过综述国内外关于假性肝硬化的个案报道及相关研究,对其发生机制、影像学及临床表现和...