表皮生长因子和雌激素对肝脏DNA合成的影响初步研究

目的 通过比较EGF,EGF－雌激素以及雌激素对原代培养肝细胞DNA合成的影响,探讨用EGF治疗肝细胞损伤的可能性。方法 用大鼠获得单个肝细胞悬液,随机分成EGF组、雌激素组、EGF－雌激素组及对照组进行细胞培养,3天后测量每组Tdk掺入量。结果 EGF组及EGF－雌激素的^3H-Tdk掺入量分别为对照组的2．1倍及3．4倍（P＜0．01）,雌激素亦有轻度促进DNA合成作用（P＜0．05）。结论EGF在雌激素协同下能成倍地增加肝细胞DNA合成。     

表皮生长因子和雌激素对肝脏DNA合成的影响初步研究

目的　通过比较EGF ,EGF -雌激素以及雌激素对原代培养肝细胞DNA合成的影响 ,探讨用EGF治疗肝细胞损伤的可能性。方法　用大鼠获得单个肝细胞悬液 ,随机分成EGF组、雌激素组、EGF -雌激素组及对照组进行细胞培养 ,3天后测量每组Tdk掺入量。结果　EGF组及EGF -雌激素的3H -Tdk掺入量分别为对照组的 2 .1倍及 3.4倍 (P <0 .0 1) ,雌激素亦有轻度促进DNA合成作用 (P <0 .0 5 )。结论　EGF在雌激素协同下能成倍地增加肝细胞DNA合成     

肝再生刺激因子、表皮生长因子对肝细胞的作用

目的：观察肝再生刺激因子(HSS）及表皮生长因子（EGF)对肝细胞增殖再生作用合适剂量及其联合效应，并推测HSS作用时相。方法：以~3HTdR掺入法检测细胞DNA增殖；体外原代大鼠肝细胞培养不同时间加入HSS,MTT法检测细胞生长状况。结果与结论：1.HSS（≤100μg／ml)和EGF（≤100ng／ml）对肝衍生细胞均有显著刺激作用（P＜0.01）,并存在剂量关系，但剂量过大，刺激作用反而下降。2.HSS、EGF存在协同作用，原代肝细胞、肝癌细胞株（SMMC-7721、BEL-7402）体外培养48h后，经(~3H）TdR掺入法检测cpm值分别为各自对照组的5.94、2.98和3.36倍。3.体外培养原代大鼠肝细胞，于贴壁后Oh.20h加入HSS其刺激作用较40h组显著.提示HSS可能主要作用于肝细胞再生G1/S期。     

表皮生长因子对肝损害动物的保护作用

本实验通过建立急性肝损害动物模型,探讨表皮生长因子(EGF)和雌激素的协同作用.结果表明,单用EGF和雌激素能改善肝脏功能,促进病损肝细胞的修复,但其作用较弱,而EGF在雌激素的协同下,能显著提高动物存活率(P＜0.01),减轻肝组织病理损伤程度.     

粉防己碱对瘢痕成纤维细胞DNA和胶原合成的影响

目的探讨粉防己碱对瘢痕成纤维细胞DNA和胶原合成的影响.方法以体外培养的人瘢痕成纤维细胞为实验模型,将粉防己碱(5～80mg/L)加入细胞培养液中进行干预并与对照组比较,用3H-TdR掺入法和3H-脯氨酸掺入法分别测定各组瘢痕成纤维细胞3H-TdR掺入值与3H-脯氨酸掺入值,以反映其DNA和胶原合成水平的变化.结果粉防己碱预处理浓度由5mg/L升至80mg/L时(1)瘢痕成纤维细胞3H-TdR掺入值(min-1)由对照组的1740±165分别降至1162±226、412±82,抑制率达76.32%,组间差异有非常显著意义(P＜0.01);(2)瘢痕成纤维细胞3H-脯氨酸掺入值(min-1)由对照组的1126±193分别降至535±141、341±89,抑制率达69.71%,组间差异有非常显著意义(P＜0.01).结论粉防己碱对体外培养的瘢痕成纤维细胞DNA和胶原合成具有抑制作用,呈剂量依赖关系,具有防治增生性瘢痕的应用前景.     

肝再生刺激因子、表皮生长因子对肝细胞的作用

目的：观察肝再生刺激因子(HSS)及表皮生长因子（EGF）对肝细胞增殖再生作用合适剂量及其联合效应。并推测HSS作用时相。方法：以^3HTdR掺入法检测细胞DNA增殖；体外原代大鼠肝细胞培养不同时间加入HSS，MTT法检测细胞生长状况。结果与结论：1．HSS(≤100μg／ml)和EGF(≤100ng／ml)对肝衍生细胞均有显著刺激作用(P<0．01)，并存在剂量关系，但剂量过大，刺激作用反而下降。2．HSS、EGF存在协同作用，原代肝细胞、肝癌细胞株(SMMC．7721、BEL．7402)体外培养48h后，经(^3H)TdR掺入法检测cpm值分别为各自对照组的5．94，298和3．36倍。3．体外培养原代大鼠肝细胞，于贴壁后0h，20h加入HSS其刺激作用较40h组显著，提示HSS可能主要作用于肝细胞再生G1／S期。     

内皮素对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成作用的实验研究

目的：探讨内皮素（ET）在瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成中的作用及一氧化氮（NO）、粉防已碱（Tet）的拮抗效应。方法：体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，以^3H-TdR掺入法测定细胞增殖；以^3H-脯氨酸掺入量判断细胞胶原合成。结果：ET呈浓度依赖性促进瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成，随着ET浓度（2．5－100ng/ml）的增加，^3H-TdR掺入值较对照组分别增加了1．8、4．0和4．9倍；^3H－脯氨酸掺入值较对照组分别增加了1．1、3．1和3．8倍（P＜0．01）。用NO供体亚硝基乙酰青霉胺（S-nitroso-N-acetyl penicillamine,SNAP)50μg/ml单独处理成纤维细胞，对^3H-TdR掺入值无明显影响（与对照组相比，P＞0．05），但对^3H-脯氨酸掺入值有下调作用；SNAP可拮抗ET－1（25ng/ml）刺激细胞增殖作用（抑制率为22．89％，P＜0．05）；对ET－1的促胶原合成作用无明显影响（P＞0．05）。Tet在不抑制细胞DNA合成的药物浓度（3μg/ml）即可明显减少瘢痕成纤维细胞^3H-脯氨酸掺入值，并能显著降低由ET介导的瘢痕成纤维细胞^3H-TdR掺入值（抑制率为33．21％，P＜0．01）。结论：ET对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成具有显著促进作用，此效应可部分被SNAP、Tet所阻抗。     

人甲状旁腺素(1-34)对新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:研究外源性人甲状旁腺素(1-34)[hPTH(1-34)]对原代培养新生Wistar鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖及胶原合成的影响.方法:分离、培养Wistar乳鼠心肌成纤维细胞, 加入不同浓度的hPTH(1-34)共培养,四氮唑盐比色法(MTT)、3H-TdR 掺入法检测细胞增殖;3H-Proline掺入法测定胶原合成.结果:随着一定浓度hPTH(1-34)的升高,CFs MTT法A490值及3H-TdR的掺入量、3H-脯氨酸掺入率呈明显的递增趋势(P＜0.01);维拉帕米预处理组与单独应用组10-8mol/L hPTH相比,以上指标均显著降低(P＜0.01).结论:PTH可显著刺激成纤维细胞增殖及胶原合成,L型钙通道开放引起的细胞外钙内流增加为其重要机制之一.     

雌激素对人胆管上皮细胞增殖作用的体外研究

目的 研究雌激素对体外培养的人胆管上皮细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 体外培养人胆管上皮细胞株,加入雌激素17β-雌二醇作用于人胆管上皮细胞,用CCK8方法检测17β-雌二醇对人胆管上皮细胞生长的影响；Western blot法检测胆管上皮细胞的雌激素受体(ER-a、ER-β)表达水平；并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上述两种培养条件下胆管上皮细胞培养上清中表皮细胞生长因子(EGF)的分泌水平.将雌激素组与无雌激素组(对照组)结果进行比较.结果 雌激素可以促进人胆管上皮细胞增殖,雌激素组的人胆管上皮细胞ER-α受体表达水平明显高于对照组(P＜0.05),两组上清中的EGF水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 雌激素17β雌二醇可以诱导人胆管上皮细胞增殖,为其作用于胆管上皮细胞的雌激素受体而发生生物学效应提供了进一步证据,此外,我们的研究提示雌激素17β-雌二醇可以诱导人胆管上皮细胞增殖与表皮细胞生长因子通路没有相关性.     

表皮生长因子对ER阴性乳腺癌细胞株细胞周期的影响

目的　研究表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)对雌激素受体 (ER)阴性乳腺癌细胞株MDA MB 4 35S细胞周期的影响。方法　采用Westernblot检测MDA MB 4 35S细胞周期蛋白D1(cyclinD1 )的表达 ,用流式细胞技术检测细胞周期的变化。结果　EGF促cyclinD1 表达作用显著 ,蛋白激酶C抑制剂Go6 .976能抑制核转录因子κB(NF κB)的激活 ,并能抑制EGF的促cyclinD1 表达作用 ;EGF组G0/ G1 期 6 9 .36 %,S期 2 2 . 77%,细胞增殖指数 (PI) 0 . 31 ,与对照组比较差异有统计学意义 (P <0. 0 5 ) ,加用Go6 976后 ,G0 /G1 期明显上升达 91. 5 4 %,S期比例降至 7. 81 %,PI0. 0 9,与EGF组比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论　EGF促进MDA MB 4 35S的cyclinD1 表达 ,使肿瘤细胞进入DNA合成期。Go6 976可以抑制NF κB的活性。     

IL-6在猪肝细胞与骨髓间充质干细胞共培养中的作用

目的 探索IL-6在猪肝细胞与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外共培养中的作用.方法 自中华实验猪髂前上棘抽取骨髓(3只),采用密度梯度离心法分离单个核细胞,贴壁传代培养至第3代;原位两步胶原酶法分离猪肝细胞后与MSCs按照2:1比例使用Millicell小室培养,检测共培养中肝细胞功能,观察IL-6、TNF-α、TGF-α的分泌水平变化.结果 肝细胞活率＞95%.共培养组肝细胞白蛋白分泌水平和尿素合成能力均显著高于单纯肝细胞组(P＜0.05).共培养组IL-6浓度显著高于对照组(P＜0.01).中和IL-6后共培养体系白蛋白、尿素合成水平明显下降(P＜0.01).结论 MSCs通过分泌IL-6改善共培养体系中肝细胞功能.     

表皮生长因子对肝损害动物的保护作用

本实验通过建立急性肝损害动物模型 ,探讨表皮生长因子 (EGF)和雌激素的协同作用。结果表明 ,单用EGF和雌激素能改善肝脏功能 ,促进病损肝细胞的修复 ,但其作用较弱 ,而EGF在雌激素的协同下 ,能显著提高动物存活率 (P <0 .0 1) ,减轻肝组织病理损伤程度。     

纤维结合蛋白诱导下成纤维细胞增殖与成骨活性表达的研究

[背景]探讨纤维结合蛋白(fibronectin,FN)诱导下的成纤维细胞(fibroblast,FB)增殖与成骨活性,以及它们之间可能存在的剂量依赖关系.[方法]以组织块粘附法获得FB,经不同浓度FN(10,20,40,60,80μg/ml)诱导培养14 d.设立空白对照组(FN 0 μg/ml),以3H胸腺嘧啶脱氧核苷掺入试验、3H脯氨酸掺入试验分别检测细胞DNA、胶原合成含量,以四环素标记矿化结节,以123Ⅰ标记竞争免疫分析法检测细胞上清液中骨钙素合成量.[结果]FN诱导下,FB DNA与胶原合成含量显著增加,具有统计学意义(P＜0.05),其中以FN40μg/ml组最为明显(P＜0.05).与其他各组比较,FN 40 μg/ml组骨钙素含量显著增加,具有统计学意义(P＜0.05).经四环素标记,诱导培养的FB形成矿化结节,在荧光显微镜下呈现金黄色的小梁样结构.[结论]FN诱导下,FB具有显著的增殖与成骨活性,而且与FN剂量相关.FB可能具有原位多能干细胞潜能,有望成为组织工程学研究中的种子细胞.     

大块肝切除后急性肝损伤治疗的研究

将６０只大鼠随机分为２组，一组腹腔内注射肝细胞生长因子（ＨＧＦ）和１，６二磷酸果糖（ＦＤＰ），另一组代之以生理盐水做为对照，分别于术后３、７、１４天检测血清酶学变化、胃泌素含量和体外肝细胞培养蛋白质合成及ＤＮＡ合成。结果发现：治疗组大鼠术后３天ＡＬＴ较对照组迅速降低（Ｐ＜０．０１）；血浆脯肽酶（ＰＬＤ）在术后７天、１４天低于对照组（Ｐ＜０．０５）；血清胃泌素测定在术后３天、７天治疗组高于对照组（Ｐ＜０．０１）；肝细胞体外原代培养￣３Ｈ－亮氨酸掺入法显示治疗组术后３天蛋白质合成明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入肝细胞ＤＮＡ合成，治疗组术后各期均非常显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）。结果证实大鼠大块肝切除后应用ＨＧＦ和ＦＤＰ，对急性肝损伤有重要的治疗作用。     

胰岛素样生长因子结合蛋白2水平与肝癌关系的研究

目的 探讨血清胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP-2)水平与肝细胞癌的关系及其在肝癌的诊断、治疗中潜在使用价值. 方法 采用酶联免疫吸附试验ELISA法测定的肝细胞癌组(54例)血清IGFBP-2/3、AFP、IGF-1、IGF-2、GH水平与肝硬化组(20例)和健康对照组(32例)结果进行比较.结果 肝细胞癌组血清IGFBP-2水平明显高于肝硬化组和健康对照组(t=4.63,P＜0.05;t=3.73,P＜0.01),肝硬化组与健康对照组比较差异无统计学意义.肝癌切除术后4周IGFBP-2水平明显下降,与术前相比差异有统计学意义(t=3.52,P＜0.05).肝细胞癌组GH、IGF-1/2、IGFBP-3水平与肝硬化组对比差异无统计学意义.相关性分析显示肝细胞癌组IGFBP-2与AFP水平呈正相关(r=0.51,P＜0.05),与GH、IGF-1/2、IGFBP-3无相关性. 结论肝细胞癌患者血清IGFBP-2水平的异常增高可能与肝癌细胞合成释放增加有关.与AFP结合使用血清IGFBP-2检测可成为肝癌筛查、动态观察的有效手段.     

血管瘤中血管内皮生长因子表达的定量研究

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)在血管瘤中的表达,并探讨VEGF在血管瘤中的表达水平与DNA倍体、细胞增殖活性及血管瘤侵袭的关系.方法应用流式细胞仪及免疫荧光技术检测几种类型的血管瘤组织中VEGF表达量荧光指数FI、DNA含量(DNA指数,DI)及细胞增殖活性(增殖指数,PI).结果在血管瘤中多数为DNA异倍体、各类血管瘤FI、DI、PI值之间差异无显著性意义(P＞0.05);包膜完整组与无包膜或包膜不完整组之间FI值差异有显著性意义(P＜0.01);异倍体与二倍体之间FI值差异有显著性意义(P＜0.01);VEGF表达阳性组与VEGF表达阴性组之间PI值差异有显著性意义(P＜0.01).结论VEGF表达水平与血管瘤的侵袭性、DNA倍体及细胞增殖活性密切相关.提示阻止VEGF表达能作为治疗血管瘤的方法.     

反义寡核苷酸对人增生性瘢痕成纤维细胞FAK和胶原合成的作用

目的 研究黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)在人增生性瘢痕发病机制中的作用.方法 体外分离、培养人增生性瘢痕成纤维细胞(hyperthrophic scar fibroblasts,HSFB).在脂质体介导下将FAK反义寡核苷酸转染至HSFB中设为FAK反义寡核苷酸治疗组(AT组),仅加入脂质体为脂质体对照组(LPC组),不加脂质体和反义寡核苷酸为空白对照组(LC组).通过荧光定量PCR方法 检测HSFB细胞中FAK mRNA指数,采用3H-脯氨酸掺入法测定HSFB细胞的胶原合成量.结果 转染48 h后,AT组FAKmRNA值为0.043±0.030,明显低于LC组(0.124±0.070)及LPC组(0.127±0.0195,P＜0.05).AT组的3H-脯氨酸掺入率为257.0±15.14,低于LC组(962.2±300.5)及LPC组(930.8±28.97,P＜0.01).结论 FAK反义寡核苷酸能抑制体外培养的HSFB中FAK基因的表达和胶原合成,FAK在人增生性瘢痕的发病中发挥了一定作用.     

原发性肝癌中RUNX3的表达及其临床意义

目的 探讨RUNX3在原发性肝细胞癌巾的表达及其临床意义.方法 提取肝组织样本的总RNA(包括65例手术切除的肝癌组织及其对应的癌旁组织,6株肝癌细胞株及1株正常肝细胞株),应用实时荧光定量RT-PCR方法 检测标本中RUNX3 mRNA的表达水平,并经Western blot法验证.结果 (1)对照组(癌旁组织)RUNX3 mRNA表达量为肝癌组(癌组织)的4.2倍.41例(63.08%)肝癌组织中的RUNX3 mRNA表达水平比对照组织显著下调:下调8倍以上者17例,下调4倍以上者21例,下调2倍以上者3例.(2)66.67%(4/6)肝癌细胞株RUNX3 mRNA表达水平较正常肝细胞株明显下调.(3)RUNX3在蛋白水平和mRNA水平变化趋势基本一致.(4)在肝癌组织中 RUNX3的表达与患者肝硬化(P=0.028)及组织分型(P＜0.001)相关.结论 RUNX3基因的缺失或低表达可能在肝细胞癌发生、发展过程中起一定作用.     

hGH对肝部分切除术后促进肝再生的动物实验研究

目的 寻求促进肝细胞再生的有效药物。方法 采用形态计量技术,^3H-TdR活体掺入实验以及动脉血酮体比率的变化来观察重组生长激素（hGH)对肝再生的作用。结果 实验组肝切除术后肝细胞核分裂指数、肝细胞核体积密度、新生肝细胞数目密度、动脉血酮体比率及^3H-TdR活体掺入实验结果均显著高于对照组（P＜0．05或P＜0．01）。结论 hGH以大鼠肝部分切除术后残肝有促进其再生的作用。     

外源性表皮生长因子促进鼠坐骨神经再生的实验研究

目的 评价外源性表皮生长因子（exogenous epidemal growth factor,EGF）对神经再生的影响。方法 雄性SD大鼠48只,建立成鼠坐骨神经挤压伤模型。按术后注射药物的不同成分2组,每组24只鼠。损伤对照组：在神经损伤处注射生理盐水5μl;EGF组：注射EGF／生理盐水液（10μg/5μl）。于术后2、4、6周3个时间点测定坐骨神经功能指数、CMAP的潜伏期、最大语诱发电位的恢复率、组织学检测、电镜超微结构观察。结果 坐骨神经功能指数恢复率在各时间点,EGF组无明显优于对照组（P＜0．01）。CMAP潜伏期的延迟率,EGF组明显小于对照组（P＜0．01）;诱发电位恢复率EGF组明显好于对照组（P＜0．01）。组织学检查：有髓神经纤维数在术后2、4周时EGF组明显多于对照组（P＜0．01）;各时间点有髓神经纤维直径及截面积,EGF组明显优于对照组（P＜0．01）。超微结构观察：EGF组再生神经的有髓纤维数,髓鞘厚度,髓鞘的成熟度明显好于对照组。结论 外源性EGF对神经的再生和功能恢复有一定的作用。