细胞周期G1/S期调控元件异常与卵巢癌关系研究进展

细胞周期调控需要有多个元件参?起关键作用的在于G1/S期调控元件,包括p21,p27,p53,p16,佑p15,Cyolin E,Cyclin D,CDK2,CDK4和CDK6等.对卵巢癌组与正常对照组的研究常发现在卵巢癌组有p53高表达且p21低表达,或p27低表达,或p16和p15缺失,或Cyclin D1过度表达,表明这些因素与卵巢癌的发生、发展有关.对卵巢癌预后指标的研究发现p53高表达且p21缺失,或p16和p15缺失,或Cyclin D1高表达,或Cyclin E高表达与患者预后差显著相关,而p16和p15缺失组或p21低表达组常表现为对铂类化疗不敏感.     

细胞周期G1/S期调控元件异常与卵巢癌关系研究进展

细胞周期调控需要有多个元件参?起关键作用的在于G1/S期调控元件,包括p21,p27,p53,p16,佑p15,Cyolin E,Cyclin D,CDK2,CDK4和CDK6等.对卵巢癌组与正常对照组的研究常发现在卵巢癌组有p53高表达且p21低表达,或p27低表达,或p16和p15缺失,或Cyclin D1过度表达,表明这些因素与卵巢癌的发生、发展有关.对卵巢癌预后指标的研究发现p53高表达且p21缺失,或p16和p15缺失,或Cyclin D1高表达,或Cyclin E高表达与患者预后差显著相关,而p16和p15缺失组或p21低表达组常表现为对铂类化疗不敏感.     

微小RNA-3619-5p通过靶向作用于p21基因对卵巢癌细胞生长的影响

目的:探讨微小RNA-3619-5p(miR-3619-5p)过表达对卵巢癌细胞系A2780和SKOV3中p21基因的上调作用及对卵巢癌细胞生长的影响。方法:使用Lipofectamine 3000分别向卵巢癌细胞系A2780和SKOV3瞬时转染miR-3619-5p(实验组)或者dsControl(对照组)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测p21、细胞周期依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA的表达情况。蛋白质印迹(Western blotting)检测p21、CDK4和Cyclin D1蛋白的表达情况。流式细胞术检测对照组和实验组细胞周期分布差异和细胞凋亡情况。EdU增殖实验和集落形成实验检测细胞增殖能力。结果:与对照组相比,转染miR-3619-5p后2种细胞系中p21 mRNA均显著升高(P0.01),而CDK4和Cyclin D1 mRNA的表达均明显降低(P0.01)。Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致。与对照组相比,转染miR-3619-5p后,位于S期和G_2/M期的细胞比例明显下降,位于G_0/G_1期的细胞比例明显增大,细胞凋亡率明显升高。EdU增殖实验和集落形成实验均显示,与对照组相比,转染miR-3619-5p的卵巢癌细胞的增殖能力明显下降(P0.05)。结论:miR-3619-5p可通过激活卵巢癌细胞中p21蛋白的表达抑制卵巢癌细胞的生长。     

丙戊酸钠协同顺铂对HO8910细胞杀伤作用机制研究

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)协同顺铂(DDP)对人卵巢癌HO8910细胞的杀伤作用及机制。方法:以1μg/m l DDP联合3mmol/L VPA处理细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;光镜下观察药物作用下各组细胞形态学的改变;流式细胞术检测细胞周期阻滞情况;RT-PCR法检测p53、p21 mRNA水平表达的改变;W estern blot法检测Ac-H3、p53、p21、Cyclin D1蛋白水平表达的改变。结果:(1)VPA能明显抑制HO8910细胞生长,且呈剂量和时间依赖性,VPA+DDP处理组抑制率高于DDP处理组,组间差异有统计学意义(P<0.05);(2)光镜下观察细胞形态,可见VPA处理组细胞体积缩小呈长梭型,胞膜皱缩,贴壁不良,VPA+DDP组改变更明显;(3)VPA阻滞卵巢癌HO8910细胞周期于G0/G1期,VPA+DDP组S期细胞明显减少;(4)VPA及VPA联合DDP均能够明显提高卵巢癌HO8910细胞组蛋白H3的乙酰化水平,上调p53、p21 mRNA及蛋白表达水平,降低CyclinD1蛋白的表达水平,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VPA能够协同DDP杀伤卵巢癌细胞HO8910;其作用机制可能与VPA提高组蛋白乙酰化水平,上调p53、p21基因表达和下调Cyclin D1表达,引发细胞周期阻滞有关。     

雌激素对人子宫内膜样癌Ishikawa细胞中p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达及形态变化影响的研究

目的:研究雌激素对人子宫内膜样癌(EC)Ishikawa细胞(高分化)中p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达及形态变化的影响。方法:分别采用含3种不同浓度雌二醇(E_2)(10~(-6)、10~(-8)、10~(-10)mol/L)的培养基培养Ishikawa细胞24、48、72h,MTT检测细胞增殖情况,光镜和电镜观察细胞形态变化,Western blot法检测p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白表达。结果:MTT结果显示,与对照组比较,低、中浓度E_2组Ishikawa细胞增殖明显(P0.05),高浓度E_2组细胞增殖不明显(P0.05)。光镜及电镜结果显示,与对照组比较,低、中浓度E2组Ishikawa细胞密度增加,部分细胞内线粒体、内质网轻微肿胀,随着作用时间延长,其肿胀程度增加;高浓度E_2组Ishikawa细胞密度减少,较多细胞内线粒体明显肿胀,可见细胞凋亡现象,随着作用时间延长,线粒体、内质网弥漫肿胀、空泡化,细胞凋亡增多。Western blot法结果显示,随着E_2作用时间延长及浓度增加,p57~(kip2)、Cyclin D1与CDK4蛋白表达均逐渐增加(P0.05),其中p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白均在高浓度E_2组表达最高,而p57~(kip2)蛋白在低浓度E_2组表达最低,Cyclin D1与CDK4蛋白在对照组表达最低。Cyclin D1和CDK4蛋白表达呈正相关(P0.05)。结论:E_2浓度较低时可能以上调Cyclin D1与CDK4蛋白表达为主,发挥正向调控细胞周期进程的作用,促进Ishikawa细胞增殖;E_2浓度较高时可能以上调p57~(kip2)蛋白表达为主,从而抑制Ishikawa细胞增殖,还可导致较强细胞损伤。     

ER拮抗剂对Ishikawa细胞中p57~(kip2)、Cyclin D1表达及形态变化的影响研究

目的:研究雌激素受体(ER)拮抗剂对人子宫内膜样癌(EC) Ishikawa细胞(高分化)形态变化及细胞中p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达情况的影响,探讨女性激素调控、细胞周期调控和EC发生、发展的影响。方法:分别用含雌二醇(E2)、他莫昔芬(TAM)、氟维司群(Faslodex,ICI182780)、E2+TAM、E2+ICI182780的培养基培养Ishikawa细胞,用不含药物的培养基作为对照。培养24、48、72、96h后,MTT法观察细胞增殖情况,培养24、48、72h后,通过光镜和电镜观察细胞的形态变化,Western blot法检测p57~(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白表达。结果:MTT结果显示,与对照组比较,E2组、ICI182780组、E2+ICI182780组Ishikawa细胞增殖活性降低,以E2+ICI182780组更甚(P0.05);与E2组比较,E2+ICI182780组的细胞增殖活性降低(P0.05);实验组及对照组细胞的增殖活性均随着药物作用时间延长而增强(P0.05)。光镜下:与对照组比较,E2组、ICI182780组、E2+ICI182780组细胞密度降低,以E2+ICI182780组更甚,TAM组则稍增加;与E2组比较,E2+ICI182780组细胞密度降低,E2+TAM组则增加;各组细胞形态变化均不明显。电镜下:与对照组比较,E2组部分细胞可见内质网、线粒体明显肿胀,其余各组内质网呈不同程度肿胀,可见凋亡现象;与E2组比较,TAM组、ICI182780组内质网肿胀较轻,E2+TAM、E2+ICI182780组肿胀明显。Western blot结果示:与对照组比较,随着药物作用时间延长,p57~(kip2)蛋白在E2组、ICI182780组、E2+ICI182780组表达逐渐增加,其中E2+ICI182780组表达最高(P 0. 05); Cyclin D1、CDK4蛋白则在E2组、ICI182780组、E2+ICI182780组表达逐渐降低,其中E2+ICI182780组表达最低(P 0. 05);与E2组比较,p57~(kip2)蛋白在E2+ICI182780组表达增加,在E2+TAM组表达降低(P0.05); Cyclin D1、CDK4蛋白在E2+ICI182780组表达降低,在E2+TAM组表达增加(P0.05)。结论:ER拮抗剂ICI182780单独或联合使用雌激素,可能通过诱导p57~(kip2)蛋白表达,下调Cyclin D1、CDK4蛋白表达,达到阻碍细胞周期进程,抑制Ishikawa细胞增殖的作用,且对细胞损伤较重; TAM单独或联合应用雌激素,可能通过上调Cyclin D1、CDK4蛋白表达,下调p57~(kip2)蛋白表达,对Ishikawa细胞产生较弱的促增殖作用,从而发挥TAM的弱雌激素样作用。ICI182780可能比TAM更适合用于EC患者的内分泌治疗,这为EC内分泌治疗药物的选择提供了一定的实验依据。     

p16基因与细胞周期素D1在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的　研究p16和细胞周期素D1在子宫内膜癌中的表达及其临床意义。方法　采用免疫组化LSAB法检测 42例子宫内膜癌中 p16、细胞周期素D1的表达。 结果　 42例子宫内膜癌中 2 0例 p16表达阳性 ,占47 6 % ,p16与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期、肌层浸润深度有关 (P <0 0 5 ) ;17例子宫内膜癌细胞周期素D1表达阳性 ,占 40 5 % ,细胞周期素D1与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期、淋巴结转移有关 (P <0 0 5 ) ;p16、细胞周期素D1协同表达 15例 ,均为晚期或低分化癌。结论　p16、细胞周期素D1作为细胞周期调节因子参与子宫内膜癌的发生、发展 ,其协同作用促进子宫内膜癌的发展、且预后不良     

细胞周期蛋白E与p27在妇科肿瘤的研究进展

细胞周期调节失控是肿瘤发生发展的重要机制.已证实,作为一种细胞周期正向调节因子的细胞周期蛋白E(CyclinE)是一种癌基因,p27是一个参与细胞周期调控的抑癌基因,在许多肿瘤中其表达缺失或下调,CyclinE的正调控与p27的负调控在肿瘤的发生发展过程中起关键作用.就两者的生物学特性、相互作用机制及与妇科肿瘤的关系做一综述.     

细胞周期蛋白E与p27在妇科肿瘤的研究进展

细胞周期调节失控是肿瘤发生发展的重要机制。已证实,作为一种细胞周期正向调节因子的细胞周期蛋白E(CyclinE)是一种癌基因,p27是一个参与细胞周期调控的抑癌基因,在许多肿瘤中其表达缺失或下调,CyclinE的正调控与p27的负调控在肿瘤的发生发展过程中起关键作用。就两者的生物学特性、相互作用机制及与妇科肿瘤的关系做一综述。     

细胞周期蛋白与子宫平滑肌肿瘤

细胞周期调控主要是通过细胞周期蛋白（cyclin）．细胞周期蛋白依赖性激酶（c．ychn-dependent kinase，CDK）和细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂（cyclin-dependent kinase inhibitor，CKI）进行网络调控实现的。Cyclin和CDK过表达和活性异常增强．CKI表达缺失和检测点异常都可能导致细胞周期紊乱使细胞增生失控进而形成肿瘤。研究发现，子宫平滑肌肿瘤（uterine smooth muscle tumors，USMTs）的发生、发展及恶变与细胞周期调节失控密切相关，阐明细胞周期调控机理及细胞周期失控与USMTs的关系．对探讨USMTs发生机制，为USMTs诊断、治疗和提示预后提供新方法有重要意义。     

p27与cyclin E蛋白在宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的研究细胞周期相关蛋白p27与cyclin E在宫颈鳞癌中的表达及其与组织学分级、临床分期及预后的关系.方法应用SP免疫组化法检测54例宫颈鳞癌中p27和cyclin E蛋白的表达,分析它们的阳性表达与肿瘤的组织学分级、临床分期及预后的关系.结果 P27蛋白在宫颈鳞癌中呈低表达,且与组织学分级和预后有关;而cyclin E蛋白在宫颈鳞癌中呈高表达,且与临床分期和预后有关.两者在肿瘤中的表达呈负相关.低p27、高cyclin E表达预示患者有一个不良的预后.结论 p27和cyclin E蛋白与宫颈鳞癌的发生、发展有关.p27与分化有关,cyclin E与病程进展有关,二者均可作为临床判定预后的指标.     

p16、Cyclin D1在增生性子宫内膜及子宫内膜癌中的表达

目的 :探讨 p16和 Cyclin D1在内膜癌发生、发展中的作用。方法 :采用免疫组化 S—P法对 12例正常子宫内膜、2 2例增生性子宫内膜及 4 1例子宫内膜癌中 p16和 Cyclin D1表达进行了研究。结果 :在单纯加复合增生、不典型增生及子宫内膜癌中 ,p16表达呈下降趋势 ,内膜癌与正常内膜及增生性内膜有显著性差异 (P<0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;而Cyclin D1表达呈上升趋势 ,增生性子宫内膜、子宫内膜癌与正常内膜有显著性差异 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。不典型增生与单纯加复合增生 Cyclin D1过表达有显著性差异 (P<0 .0 1)。子宫内膜癌中 ,p16表达随细胞分化程度下降而降低 ,而Cyclin D1则随分化程度下降而上升 ,二者呈负相关。结论 :p16、Cyclin D1异常参与子宫内膜癌的发生 ;p16低表达、Cyclin D1过表达与内膜癌的恶性生物学行为有关 ;Cyclin D1核过表达可能是一个早期分子事件     

细胞周期蛋白与子宫平滑肌肿瘤

细胞周期调控主要是通过细胞周期蛋白(cyclin),细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)和细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitor,CKI)进行网络调控实现的.Cyclin和CDK过表达和活性异常增强,CKI表达缺失和检测点异常都可能导致细胞周期紊乱使细胞增生失控进而形成肿瘤.研究发现,子宫平滑肌肿瘤(uterine smooth muscletumors,USMTs)的发生、发展及恶变与细胞周期调节失控密切相关,阐明细胞周期调控机理及细胞周期失控与USMTs的关系,对探讨USMTs发生机制,为USMTs诊断、治疗和提示预后提供新方法有重要意义.     

细胞周期调控相关蛋白P53、P16、P21和Rb 在子宫内膜癌的表达及意义

目的研究与细胞周期G→S调控点相关蛋白P53、P16、P21、Rb在子宫内膜癌中的表达,探讨其临床意义.方法采用免疫组织化学(LSAB法)对21例正常子宫内膜、19例子宫内膜增生及45例子宫内膜癌中P53、P16、P21、Rb的表达进行检测.结果P53蛋白表达率由正常内膜、子宫内膜增生至内膜癌逐渐升高,而P16、P21、Rb蛋白结果相反;在子宫内膜癌中,P53与P21呈负相关(r=-0.322),P16、P21与Rb呈正相关(r=0.361,r=0.441).P21蛋白表达与良好病理学分级有关(P＜0.05),P53蛋白表达与临床各参数均有关,与ER、PR的表达呈负相关,单因素及多因素分析P53蛋白表达均提示子宫内膜癌患者预后差(P＜0.05).结论与细胞周期G→S调控相关蛋白P53、P16、P21和Rb异常表达可能均参与子宫内膜癌发生、发展,且部分基因相互关联,P53可作为独立预后不良因素应用临床.     

P27在妇科恶性肿瘤中的研究进展

P27蛋白是一种细胞周期蛋白激酶抑制因子，通过抑制eyclin—CDK复合物活性对细胞周期进行负性调节，使细胞周期停滞在G1期。其表达异常与肿瘤的发生发展及预后有关。妇科恶性肿瘤中普遍存在P27蛋白表达减少，但与疾病的关系却不完全相同。子宫内膜癌P27蛋白表达减少与发病机制有关，但与临床、病理、预后等指标无统计学关联。卵巢癌P27蛋白表达异常不仅与疾病发生发展有关，而且是独立的预后因素。P27蛋白的胞质定位提示卵巢癌预后不良，此外，P27蛋白还参与某些药物的肿瘤抑制作用。宫颈癌P27蛋白表达模式与卵巢癌类似。随疾病恶性程度增加P27蛋白表达逐渐减少．     

宫颈腺癌的p21~(WAF_1/ClP_1)表达:一种良好预后可能的免疫组化指标

近年来的研究表明,宫颈腺癌患者的预后与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、肿瘤分级密切相关,但对肿瘤细胞雌激素受体(ER)、细胞周期调节蛋白的表达与预后的关系的研究少,且有争议。为此,选择了子宫切除术而获得的正常宫颈(10例)和Ⅰ～Ⅱ期宫颈腺癌(40例,不包括透明细胞癌)组织,采用免疫组化技术检测ER、p53、p16、p21~(WAF_1/CIP_1)、p27、细胞周期素E和细胞增殖标志指数Ki-67的表达,同时复习了40例宫颈腺癌患者的临床病理资料,然     

二氟甲基鸟氨酸对宫颈永生化细胞细胞周期的影响及调控机制

目的观察二氟甲基鸟氨酸（DFMO）对人宫颈永生化上皮细胞细胞周期的影响，并探讨其细胞周期调控机制。方法官颈永生化上皮细胞系（H8细胞）单层培养，应用磺酰罗丹明B（SRB）法，绘制细胞生长曲线，并获得抑制50％细胞生长所需药物浓度（IC50）。应用流式细胞仪分析细胞周期。应用免疫荧光分析检测细胞周期调控因子cyclinD1、CDK4、p21的蛋白表达。应用RT-PCR半定量检测cyclinD1、CDK4、p21的mRNA表达。结果DFMO对宫颈永生化上皮细胞（H8）有生长抑制作用，DFMO对H8细胞作用第5天的IC50为1mM。DFMO作用后使H8细胞阻滞于G1期。DFMO作用后降调节H8细胞cyclinD1蛋白（P〈0．01）和mRNA（P〈0.05）的表达。DFMO对H8细胞的CDK4蛋白表达无明显影响（P〉0．05），但使CDK4mRNA的水平降低（P〈O．05）。DFMO对H8细胞p21蛋白和mRNA表达均无明显影响（P〉0．05）。结论DFMO使宫颈永生化上皮细胞细胞周期阻滞于G1期，其作用机制之一主要是通过降调节cyclin D1 mRNA和蛋白的表达。DFMO可能作为一种细胞周期调控剂来治疗宫颈癌前病变。     

Skp2研究进展及其与妇科肿瘤的关系

Skp2是F-box蛋白家族中的一员，其驱动G1-S-G2期的转化及进行。主要通过泛素蛋白酶体降解途径，对细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物中的p27^kip的降解调节。在多种癌组织中，Skp2与p27^kipl呈负相关，又受病毒、激素等情况的影响，可被肿瘤转换因子、西卡前列腺素调控。在宫颈癌中，Skp2表达受人乳头状瘤病毒（HPV）影响，HPV破坏p27^kip的降解，并与E7相互作用；在子宫内膜癌和卵巢癌中，Skp2表达明显增高，对卵巢癌发生、发展有重要影响。可作为评价预后的独立因素。     

细胞周期素E与妇科肿瘤研究进展

细胞周期索E(cyclin E)是GI期重要的调控因子之一，调节细胞DNA的合成及有丝分裂。宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌中可见cyclin E高表达。cyrlin E在妇科肿瘤的发生、发展中起一定作用-cyclin E有助于诊断人乳头瘤病毒相关的宫颈癌前期病变，并可能成为妇科恶性肿瘤的一项预后指标。     

滋养细胞疾病中Cyclin E及其相关蛋白的表达

目的：探讨细胞周期蛋白E（Cyclin E）、细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK-2）、P27KIP1和P21WAF1/CIP1在正常胎盘组织、葡萄胎和滋养细胞肿瘤（gestational trophoblastic neoplasia,GTN）组织中的表达,研究上述指标表达水平的相关性以及与妊娠滋养细胞疾病（gestational trophoblastic disease,GTD）的关系。方法：采用链霉素-过氧化物酶免疫组化方法检测30例正常胎盘组织、38例葡萄胎组织和9例GTN组织（侵蚀性葡萄胎8例,绒癌1例）中Cyclin E、CDK-2、P27KIP1和P21WAF1/CIP1的表达,分析其与GTD发生发展及预后的关系。结果：①Cyclin E、CDK-2在葡萄胎和GTN组织中的表达高于正常胎盘组织（P＜0.01）;P27KIP1和P21WAF1/CIP1在GTN组织中的表达低于葡萄胎和正常胎盘组织（P＜0.05）, P27KIP1和P21WAF1/CIP1在发生恶性转变的葡萄胎组织中的表达低于未发生恶变者（P＜0.05）。②Cyclin E与P27KIP1、P21WAF1/CIP1的表达呈负相关（P＜0.05）;Cyclin E与CDK-2的表达呈正相关（P＜0.05）;P27KIP1与P21WAF1/CIP1的表达呈正相关（P＜0.05）。CDK-2表达随P27KIP1和P21WAF1/CIP1的表达降低呈增高趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：Cyclin E/CDK-2复合物及其抑制蛋白P27KIP1和P21WAF1/CIP1的异常表达参与了GTN的发生发展;P27KIP1和P21WAF1/CIP1可能成为预测葡萄胎恶变的有效标记物。