重组缺陷型试验和几种金属化合物诱变性研究

本文用重组修复阳性枯草杆菌H_(17)(Rec~+)和重组修复缺陷型枯草杆菌M_(45)(Rec~-)及其胞子,进行了胞子和生长茵的灵敏度比较,有或没有代谢活化剂的胞子重组试验。结果表明,枯草杆菌胞子比生长茵敏感7～10倍,该法能检测需要或不需要代谢活化的化学物质和金属化合物的诱变性。     

鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体试验 美国环境保护局遗传毒理规划报告

鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体试验(沙门氏菌试验)的建立,是基于以下两个前提:一是细菌试验系统,在检测能与DNA相互作用并引起突变的物质中,是一种有效的方法,而且所检出的物质对其它生物(包括人)多半也具有诱变能力;二是已知诱变性与致癌性相关,实验观察已证明,细菌试验所检出的许多诱变物,都是致癌物;致癌作用的体细胞理论假定,诱变是肿瘤发生的起因。自1971年以来,沙门氏菌试验已成为公认的筛选诱变性和致癌性化合物的方法。它之所以受到公认,在于它具有大量的基础资料以及结果的可靠性。     

STS557诱变性研究

有证据表明甾体激素可以与细胞内的大分子物质发生反应。如雌激素可与 DNA 共价结合,而孕激素在肝微粒体酶的代谢激化下可与蛋白质共价结合。作者对 STS 557(17α-Cyanomethyl-17β-hydroxy-estra-4,9-dien-3-one,即17α-氰甲基-17β-羟基-雌烷-4,9-二烯-3-酮、一种新的女用事后避孕药)的潜在诱变性研究中采用了下列测试系统:a)用变形杆菌 mirabilis PG273(野生型)和 PG713a(重组缺陷,her~-缺陷型)菌株的重组型修复试验测定 DNA 的初级损伤;     

六价铬对鼠伤寒沙门氏菌的毒性和致突变性

本文报告用鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物肝微粒体试验潮定四种六价铬化合物(重铬酸钠、铬酸钙、铬酸钾和铬酸)和两种三价铬化合物(硫酸铬钾和氯化铬)的毒性与致突变性。试验方法主要根据Ames试验法。试验菌株为鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型TA 1535,TA 1537、TA 98和TA 100。每种化合物分别用掺入法(Plateincorporation assay)和斑点试法(spot test)同时对四种试验菌株进行试验。掺入法于2 ml融化的琼脂中加入0.1ml培养过夜的营养肉汤菌液和0.1ml受试的化合物水溶液,混合后倾注在已经凝固成一层含极少葡萄糖的琼脂培养基上面。斑点试法于直径5 mm的灭     

加热肌酸酐、丙氨酸、苏氨酸和葡萄糖形成新的杂环胺诱变剂

分离和鉴定了苏氨酸、丙氨酸、葡萄糖和肌酸酐在加热反应中所形成的诱变性化合物。加热反应混合物的制备试管中含丙氨酸、苏氨酸、肌酸酐(每种均为3.6mmol/L)和葡萄糖(1.8mmol/L),用二乙烯二醇(10ml)和水(2ml)溶解,200℃加热15min,冷却后,用20倍水稀释。液样在进一步纯化前作Ames试验。     

肺炎链球菌L型对人淋巴细胞因子分泌刺激作用

目的观察细胞壁缺陷肺炎链球菌刺激人淋巴细胞分泌白细胞介素-1β(IL-1β)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的作用。方法用青霉素诱导肺炎链球菌形成L型,分离稳定L型纯培养物。将热灭活的肺炎链球菌的细菌型及稳定L型菌液分别与人淋巴细胞混合,体外37℃培养24 h,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养物上清中IL-1β和TNF-α含量。结果L型肺炎链球菌处理的人淋巴细胞培养物上清中IL-1β含量为(29.303±2.812)～(69.894±2.358)pg/mL、TNF-α含量为(38.467±2.208)～(74.329±2.283)pg/mL,明显低于其亲代细菌型肺炎链球菌处理的人淋巴细胞(P0.05),且与菌液浓度呈相关性(r分别为0.969和0.960)。结论肺炎链球菌L型仍然具有刺激人淋巴细胞分泌IL-1β和TNF-α的免疫原性,但较其亲代细菌型的免疫原性降低。     

冷培养对金属化合物枯草杆菌致变试验结果的影响

目的：研究枯草杆菌芽孢重组修得试验中增加冷培养对金属化合物和间接致变物DNA损伤试验的影响。方法：比较直接培养法与增加4℃ 24h冷培养对测试结果的作用。观察指标：最小抑菌浓度（MIC）和敏感性。结果：增加冷培养对大多数金属化合物测试结果无影响，而对K2Cr2O4、CoCl2、CoSO4及2种间接致突变物2-AF、AFB反而提高了MIC，降低了敏感性。此结果与Kada的报道不尽一致，对其原因加以探讨。结论：枯草杆菌芽孢重组修复试验增加冷培养，降低了部分金属致突变物和间接致变物敏感性。     

细胞壁缺陷幽门螺杆菌尿素酶基因活性检测

目的 了解细胞壁缺陷变异对幽门螺杆菌尿素酶活性及其基因的影响.方法 用抗生素诱导幽门螺杆菌稳定L型(HPL)并分离培养,检测幽门螺杆菌及其稳定L型的尿素酶活性,并对HPL型及其亲代细菌型进行尿素酶结构基因UreA和UreB基因的PCR检测.结果 幽门螺杆菌可在头孢曲松钠作用下发生细胞壁缺陷变异,经传代培养可获得稳定L型的纯培养物;幽门螺杆菌尿素酶试验阳性,稳定L型的尿素酶试验则为阴性;L型及亲代细菌型UreA和UreB基因的PCR检测均可见分子量分别为400和200 bp的扩增产物.结论 幽门螺杆菌在抗生素作用下可发生细胞壁缺陷变异成为L型;幽门螺杆菌L型仍然保留UreA和UreB基因.     

金属化合物致突变性的探讨

王玉芝等(沈阳市劳动卫生职业病研究所)采用枯草杆菌芽胞重组试验法,对铬、镉钴等20种金属化合物作致突变检测。结果可见:铬、镉砷、钴等已确定为致癌的金属化合物呈阳性反应;而铅和铜呈阴性反应后;尚未见致癌作用报道的铊等金属化合物呈明显的阳性反应。在本实验中,呈阳性反     

铍对小鼠骨髓红细胞微核率的影响

铍是第一个被发现有致癌作用的金属元素。自1946年以来许多学者进行了铍致癌的研究,计有十三种铍化合物用于动物实验,证明均有致癌作用。与此同时也进行了铍的诱变作用研究,发现铍可以使DNA聚合错误增加,中国田鼠细胞HGPRT基因突变发生耐8AG细胞频率增高。Kanematsu等用枯草杆菌重组缺陷测定法检测金属离子发现铍为弱阳性,而回复突变试验报告为阴性;但也有人用Ames试验检测却发现铍为阳性,病毒转化升高。可是铍对染色体诱变作用的报告甚少。     

简易敏感的致突变短期试验——徬徨试验(Fluctuation test)方法的一些因素探讨

傍徨试验可用于任何非渗漏营养缺陷型系统,包括酵母、真菌和细菌。其方法简便而敏感,对某些阳性诱变物的检出浓度比Ames试验低100倍,故适用于检测低水平及很弱的诱变剂。本文使用TA_(98)及TA_(100)菌株,对徬徨试验方法的一些因素作了探索;并用叠氮钠(NaN_3,0.001μg/ml)、二氨基芴(2-AF,0.05μg/ml)和2-乙酰氨基芴(2-AAF,0.005μg/ml)进行了试验,现将结果报道如下。     

细菌回复突变试验在聚乙烯醇栓塞微球材料评价中的应用

目的：通过细菌回复突变试验（Ames试验）评价聚乙烯醇栓塞微球潜在的遗传毒性，从而来评价该材料的潜在致突变性。方法：选择生理盐水（0.9%氯化钠水溶液）、二甲基亚砜（DMSO）和含10%血清培养基（R10）三种介质对试验样品进行浸提，采用平板掺入法计数鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型菌株TA97a、TA98、TA100及TA102在活化和非活化条件下的细菌回复突变菌落数，以检测其致突变性。结果：阴性对照组和阳性对照组的试验结果成立。聚乙烯醇栓塞微球采用生理盐水、DMSO和R10浸提后，浸提液对试验所用菌株回复突变数均未超过阴性对照的2倍。结论：在本次试验条件下，栓塞微球浸提液均对鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型菌株TA97a、TA98、TA100、TA102无诱变性。     

重组人血小板型磷脂酶A2对耐药菌的杀菌作用与耐药性诱导

目的 探讨重组人血小板型磷脂酶A2(PLA2)的对临床分离耐药菌株的杀菌作用及其细菌耐药性,为开发新型抗菌蛋白提供重要信息.方法 将不同浓度的血小板型PLA2与细菌在37℃共同孵育2 h,然后加入营养琼脂平皿中,37℃培养18～20 h,计每一琼脂板上的菌落形成数(CFU),计算出血小板型PLA2杀菌率;根据耐药性诱导试验,用PLA2诱导金黄色葡萄球菌,观察细菌耐药性.结果 血小板型PLA2对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌的标准菌株与耐药菌株均同样具有较强的杀火作用,对3种标准菌株的最低杀菌浓度(MBC)分别为0.81、0.1、0.2μg/ml,对耐药菌株的MBC为0.1～0.3μg/ml;连续三代诱导未见引起金黄色葡萄球菌耐药.结论 血小板型PLA2对耐药的革兰阳性菌有较强的杀菌作用,其不易引起金黄色葡萄球菌耐药.     

L型菌慢性泌尿系感染诊断及抗生素运用

目的 探讨L型细菌在泌尿系的感染情况及其抗生素的耐药性,为临床诊治提供科学依据.方法 用改良Kagan培养基(L型平板)对临床泌尿系感染者的尿液进行分离培养,并对所获得的L型细菌进行药物敏感试验.结果 从128例患者的尿液标本中,检出L型伴细菌型感染率为82.8％ (106/128),普通培养细菌检出率为66.4％ (85/128).其中,慢性泌尿系感染L型伴细菌型分离率93.8％ (90/96),L型细菌分离率19.8％ (19/96),共19株,细菌型分离率为74.0％ (71/96).结论 对抗生素而言,耐药性最高的是青霉素类(青霉素G),其次依次为头孢菌素类(头孢三嗪、头孢唑啉、头孢噻肟)、氨基糖苷类(庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素)和红霉素；而万古霉素、氯霉素、新生霉素呈低耐.临床对慢性泌尿系感染者应同时检测细菌及其L型,并根据药敏试验结果联合用药,以杀菌并阻止其变为L型.     

顶空气相色谱连续监测鼠伤寒沙门氏菌致突变试验研究

在密闭的液体培养体系中，以ＣＯ２为指标用气相色谱分析法连续监测致突变剂ＮａＮ３和敌克松对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型菌株ＴＡ１００、ＴＡ９８的致突变作用，研究了回复突变菌数、致突变剂的剂量与ＣＯ２产生量之间的关系，在此基础上提出了致突变性的评价指标。用本方法测得ＮａＮ３和敌克松的最低诱变剂量分别为０．０５０μｇ／瓶和０．０８０μｇ／瓶，灵敏度显著高于Ａｍｅｓ试验。     

重铬酸钾的致突变性鉴定

用敏感快速的Ames试验筛选环境致突变物及致癌物,被广泛应用。1982年我们用组氨酸营养缺陷型鼠沙门氏菌(Salmon ella Typhimurium)检测南海具沙溪大队铬渣污染水,得出阳性结果。为了解铬盐在水中的诱变性及其浓度,我们选用K_2Cr_2O_7设较宽剂量域,测其诱变性及摸索其剂量—反应关系。为制定地面水六价铬最高允许浓度提供毒理学依据。     

顶空气相色谱连续监测鼠伤寒沙门氏菌致突为试验研究

在密闭的液体培养体系中，以ＣＯ２为指标用气相色谱分析法连续监测致突变剂ＮａＮ３和敌克松对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型菌株ＴＡ１００、ＴＡ９８的致突变作用，研究了回复突变菌数、致突变剂的剂量与ＣＯ２产生量之间的关系，在此基础上提出了致突变性的评价指标，用本方法测得ＮａＮ２和敌克松的最低诱变剂量分别为０．０５０μｇ／瓶和０．０８０μｇ／瓶，灵敏度显著高于Ａｍｅｓ试验。     

巢湖源水和饮用水的诱变性研究

采用组合致突变性试验对以巢湖水为水源的合肥市四水厂的水源水、沉淀池出水和出厂水有机浓集物的诱变性进行了研究。结果表明巢湖源水及其氯化饮用水，在细菌，真核细胞以至整体动物试验中都呈现一定诱变性。混凝沉淀 工艺可除去部分诱变物。出厂水浓集物的致突变能力最强，其次为水源水，沉淀地出水最弱，多种方法联合应用，提高了饮水中诱变物检测的敏感性。研究还表明四种试验对饮水致突变性的检出敏感性顺序依次为ＳＣＥ＞微核     

福氏志贺氏菌2a,3a型变异的研究

本实验用紫外线诱变福氏志贺氏菌2a、3a型,使其发生了生化突变,耐药性突变和抗原性变异等现象。福氏2a菌对鼠李糖和蕈糖不发酵,经诱变后变为发酵株,对红霉素耐药变为敏感菌株。福氏3a菌株在各种糖培养基中可发生型抗原和群抗原丢失现象。诱变后的福氏2a-A_2菌在伊红美兰培养基上传代连续三次分化出福氏3a型菌。这种突变仅发生在极少数营养缺陷型菌株中。本实验选育出一株福氏3a-A_2 met~-(甲硫氨酸缺陷型)无毒株,免疫家免后的抗体血清效价比原始株高10倍,其免疫保护率为100％,此菌株可用于制作痢疾杆菌活菌苗。     

烟草烟雾致突变活性的研究

烟草烟雾(TS)含有3000种以上化合物,其中包括一些致突变、致癌、促癌原和启动因子,可能影响化学致癌作用。以往主要用香烟烟雾的冷凝物研究烟草烟雾产生的遗传毒性。本文报道用全烟草烟雾进行的沙门氏菌/微粒体酶诱变试验、小鼠骨髓微核试验和人外周血淋巴细胞的UDS试验。