血清和尿中hCG的一步双位快速酶联分析法及其初步应用(简报)

两种含有抗hCG不同抗原决定簇McAb的小鼠腹水分别用DEAE-52纯化,其中一种包被在聚苯乙烯小球上作为提取被测样品中hCG的固相抗体,另一种用辣根过氧化物酶标记作为检测hCG的指示剂。将固相抗体,被测标本及酶标抗体同时混合,建立了血清及尿中hCG一步双位酶联免疫分析法。 此法简单快速,可在1～2小时内用肉眼判断结果;灵敏度高,能检测含量只有25mIU/ml的hCG;特异性强,与含量高达10IU/ml的hLH未见有交叉反应,21例绝经期妇女、20例月经正常的育龄妇女及22例男     

绒毛膜促性腺激素酶联免疫吸附试验及其临床应用的初步报告

绒毛膜促性腺激素(hCG)是滋养叶细胞分泌的一种糖蛋白激素,其血清含量的测定对正常早孕的诊断,恶性滋养叶细胞肿瘤的诊治与随访以及计划生育研究都有重要的价值。本文报道用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定hCG的方法及其临床应用的结果。材料和方法一、材料 (一) 聚苯乙烯反应板(4×10孔):上海塑料三厂生产。 (二) hCG标准:由卫生部上海生物制品研究所提供。 (三) 兔抗hCG血清:瑞金医院妇产科实验室制备。 (四) 被测血清:1.正常男子3名。2.     

酶免试验中洗板和标本处理

在做酶免试验(ELISA)的过程中,常常会出现花板、板底增高、个别孔显色或整条显色的现象,使检测结果出现假象,在多年的实践中,我们探索出洗板及标本处理较为理想的方法,现报道如下。     

全自动酶联免疫系统与酶标板板型不合对结果的影响

目的：分析全自动酶联免疫系统与酶标板板型不合对结果的影响。方法：选取2014年11月至2015年4月23072份该院住院病人术前标本为研究对象进行检测。结果：英科新创 HIV 试剂检测显示，部分标本第一次检测出现阳性（或者弱阳性）反应，而第二次进行双孔复检结果呈阴性，这些出现阳性（或者弱阳性）反应的孔位和其他试剂检测具有不同的情况，主要出现在酶标板 A 孔，在滤纸上拍干酶标板后，对出现阳性（或者弱阳性）反应的孔位进行观察，可以看见1至多条划痕，由此可见，全自动酶联免疫系统与酶标板板型不合，易导致检测结果出现假阳性，从而影响检测结果。结论：在抗 HIV 检测中，全自动酶联免疫系统与酶标板板型不合，ELISA 易出现假阳性，为了提高检测质量和效率，应正确测量板高、孔直径、孔深以及孔形等数据，并将其输入到仪器中，使仪器与设备匹配。     

人绒毛膜促性腺激素血尿联合检测的意义及注意事项

目的:本文旨在研究血尿标本人绒毛膜促性腺激素(hCG)联合检测对妇科相关疾病的诊断的意义,以及尿h CG试验中将标本2倍稀释后检测的意义的研究。方法:我实验室收集了206份患者,联合检测血尿hCG测定,其中血hCG按需要做动态每3日监测,尿hCG做原浓度和2倍稀释浓度的联合检测,以观察结果。结果:血hCG应每3天监测一次,尿hCG操作时应原倍和2倍稀释同时操作,这种操作的结果更好的为临床诊疗做出依据。结论:血hCG动态指标的监测对正常妊娠与异位妊娠及流产及某些滋养细胞疾病的诊断有诊断意义。尿hCG操作时同时做原倍和2倍稀释样本意义更大。     

人绒毛膜促性腺激素血尿联合检测的意义及注意事项

目的:本文旨在研究血尿标本人绒毛膜促性腺激素(hCG)联合检测对妇科相关疾病的诊断的意义,以及尿hCG试验中将标本2倍稀释后检测的意义的研究.方法:我实验室收集了206份患者,联合检测血尿hCG测定,其中血hCG按需要做动态每3日监测,尿hCG做原浓度和2倍稀释浓度的联合检测,以观察结果.结果:血hCG应每3天监测一次,尿hCG操作时应原倍和2倍稀释同时操作,这种操作的结果更好的为临床诊疗做出依据.结论:血hCG动态指标的监测对正常妊娠与异位妊娠及流产及某些滋养细胞疾病的诊断有诊断意义.尿hCG操作时同时做原倍和2倍稀释样本意义更大.     

绒毛膜上皮癌患者β—hCG检测的酶免法与放免法对比观察

本实验对照放免，应用单克隆抗体酶免法对15例绒毛膜上皮癌患者化疗期间进行尿hCG半定量及定量测定，每例检测10－12次，同时对15例正常足月分娩啼妇产后第2－8天血及尿放免和血及尿酶免同时测定hCG浓度，进一步对比放免及酶免结果以及血，尿的hCG量的关系，结果表明：放免与酶免结构相符，且尿hCG含量高于血清，酶免定量法具有灵敏，方便，快速，准确等优点，可望能替代放免应用于滋养细胞肿瘤的诊断，疗效观察和随访。此法可在基层医院推广应用，随访病人可用酶免法作自我监护。     

绒毛膜上皮癌患者β-hCG检测的酶免法与放免法对比观察

本实验对照放免,应用单克隆抗体酶免法对15例绒毛膜上皮癌患者化疗期间进行尿hCG半定量及定量测定,每例检测10～12次。同时对15例正常足月分娩产妇产后第2～8天血及尿放免和血及尿酶免同时测定hCG 浓度,进一步对比放免及酶免结果以及血、尿的hCG 量的关系.结果表明:放免与酶免结果相符,且尿hCG 含量高于血清。酶免定量法具有灵敏、方便、快速、准确等优点,可望能替代放免应用于滋养细胞肿瘤的诊断、疗效观察和随访。此法可在基层医院推广应用,随访病人可用酶免法作自我监护。     

全自动酶联免疫系统与酶标板板型不合对结果的影响

目的:分析全自动酶联免疫系统与酶标板板型不合对结果的影响。方法:选取2014年11月至2015年4月23 072份该院住院病人术前标本为研究对象进行检测。结果:英科新创HIV试剂检测显示,部分标本第一次检测出现阳性(或者弱阳性)反应,而第二次进行双孔复检结果呈阴性,这些出现阳性(或者弱阳性)反应的孔位和其他试剂检测具有不同的情况,主要出现在酶标板A孔,在滤纸上拍干酶标板后,对出现阳性(或者弱阳性)反应的孔位进行观察,可以看见1至多条划痕,由此可见,全自动酶联免疫系统与酶标板板型不合,易导致检测结果出现假阳性,从而影响检测结果。结论:在抗HIV检测中,全自动酶联免疫系统与酶标板板型不合,ELISA易出现假阳性,为了提高检测质量和效率,应正确测量板高、孔直径、孔深以及孔形等数据,并将其输入到仪器中,使仪器与设备匹配。     

用酶联免疫吸附法测定多抗甲素含量的探讨

作者采用酶联免疫吸附测定(ELISA)夹心法及二步竞争法,测定多抗甲素的含量。经实验条件的优化,均采用微滴板上烘干包被兔抗体,结合多抗甲素后,分别加入辣根过氧化物酶标记的免抗体或该酶标记的多抗甲素,再显色测定。除包被一步外,均在4小时内完成测定,比常规补体结合法快速,包被的微滴板4℃储存3个月仍不影响使用。灵敏度:夹心法为0.64～7.4μg/孔;二步竞争法为0.6～1.2μg/孔。     

PCR-ELISA检测TB DNA方法的建立及其初步应用

目的 建立灵敏，快速，特异的PCR-ELISA检测结核菌DNA的方法。方法 用一对生物素标记的上游引物和未标记的下游引物对TBIS6110的一段DNA进行快速PCR扩增，使扩增产物的一条链上带有生物素，同时PCR反应液中存在有地高辛的标记的检测探针，随着PCR的结束，探针与生物素标记的扩增产物形成特异的杂交体，该杂交体通过链霉亲和素被固定在微孔板表面，然后用标记有过氧化物酶的地高辛抗体与杂交体上的地高辛结合，漂洗后加底物显色。测定吸光度值（A450nm)。结果 该方法灵敏，特异，快速，可以检测出10copies的模板量，对临床60例痰标本进行培养法。结论 该方法适用于临床进行快速的TB基因检测，也可用于其它病原体的检测。     

尿液中检测HIV-1抗体进行男同性恋HIV病毒感染筛查的研究

目的：用酶联免疫吸附试验(ELASA)进行男同性恋者尿液中艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)抗体检测,并与血清学检测结果进行比较,探讨采用尿液检测HIV抗体进行特殊人群HIV感染筛查的可行性。方法：平行采集受检男同性恋者的外周静脉血及尿液标本,分别用血液和尿液EUSA法检测HIV抗体,阳性血清标本采用WB法确认。结果：检测109人,血清学检测结果3人阳性,并经WB实验确认为HIV病毒感染,尿液检测3人为阳性,与血清学实验对照,准确性为100％。结论：尿液检测HIV-1抗体结果可靠,可作HIV病毒感染的筛查。     

外源性hCG在人体尿液中消除时间,半衰期与妊娠关系

采用酶联名疫法测定了注射人绒毛膜促性腺激素妇女尿液中ｈＣＧ含量。观察分析了外源性ｈＣＧ在尿中半衰期、清降时间。     

乙型肝炎血清标志物四种检测方法的对比分析

目的:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析法(GICA)、时间分辨免疫荧光法(TR-FIA)、化学发光法(CLIA)检测乙型肝炎血清标志物[乙型肝炎表面抗原(HbsAg)、乙型肝炎表面抗体(抗Hbs)、乙型肝炎e抗原(HbeAg)、乙型肝炎e抗体(抗Hbe)、乙型肝炎核心抗体(抗Hbc)],评价不同方法学检测结果之间是否具有一致性。方法:用GICA、ELISA、TRFIA、CLIA分别检测50例乙型肝炎病毒(HBV)感染者和100名正常体检者的乙型肝炎血清标志物。以CLIA作为参考方法,通过Kap-pa检验评价不同方法学检测结果之间的一致程度。结果:4种方法检测乙型肝炎血清标志物的结果具有高度以上一致性,CLIA在检测敏感性上更有优势。结论:目前广泛使用的检测乙型肝炎血清标志物的方法具有较好的一致性,为临床实验室方法学选择提供了依据。     

不同酶标反应板在人心肌特异性肌钙蛋白抗体检测中的性能分析

目的　考察不同种类的酶标反应板对酶联免疫吸附试验 (ELISA)的结果影响。方法　以 10 0 μl人心肌肌钙蛋白T(CTnT)为抗原 ,分别包被不同酶标反应板 ,运用普通酶联免疫吸附试验方法比较不同酶标反应板的性能。结果　 96孔硬脂进口反应板的CTnT抗体OD值 (P <0 .0 5 )和阴性血清OD值 (P <0 .0 1)高于国产 40孔硬板。结论　 96孔进口硬板的吸附能力最强 ,灵敏度高 ,且非特异性吸附较少     

预包被抗体结合抗原包被方式酶联免疫吸附试验共系统检测乙型肝炎病毒e抗原结果分析

目的探讨用竞争抑制法检测预包被抗体结合抗原包被方式[抗乙型肝炎病毒(HBe)EIA]商品试剂盒共系统检测乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的可行性及结果判定方法。方法用竞争抑制法检测抗HBe酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒共系统检测1000份随机血清(浆)标本抗HBe与HBeAg,并以常规ELISA双抗体夹心法检测HBeAg试剂盒检测HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测HBeAg,其阳性检测孔显色较抗HBe阴性对照孔(或HBeAg阴性参比对照孔)明显加深,易于目测;其比色判定临界值(COV)易于设定(或使用HBeAg临界值血清),与常规ELISA检测HBeAg比色判定差异无统计学意义(配对计数资料比较的χ2检验:相关检验均为P<0.005,υ=1,a=0.05;优劣检验依次为HBeAg临界值血清①P>0.9000,υ=1,a=0.05、中和(竞争)抑制法检测抗HBeEIA商品试剂盒中抗HBe阴性对照;②0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05、ELISA共系统检测HBeAgCOV;③0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,但χ21<χ22<χ23)。结论用竞争抑制法检测抗HBeELISA商品试剂盒能够检测HBeAg,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA双抗体夹心法检测HBeAg试剂盒,实用价廉,值得推广。     

人血小板膜糖蛋白功能测定的酶联免疫分析方法的建立

目的建立测定血小板膜糖蛋白（GP）功能的酶联免疫分析（ELISA）方法 ,并对其灵敏度、批内和批间差异进行方法学考核。方法以抗血小板CD62P单抗SZ51和抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）单抗7E3分别包板,加入经ADP诱导的或未诱导的正常人富含血小板血浆（PRP）,以生物素标记的抗GPIb单抗SZ2（Biotin-SZ2）反应后,加入亲和素标记的辣根过氧化物酶（Avdin-HRP）检测,邻苯二胺（OPD）显色后,酶标仪读取吸光度（A）值。对其灵敏度及批内、批间差异作方法学评估,应用该方法对抑制性单抗SZ-21和阿司匹林抑制血小板活化的功能效果进行测定,并与流式细胞术（FCM）测定结果进行比较。结果该方法可检测血小板计数低达6.25×109/L（SZ51包被板）和3.13×109/L（7E3包被板）的标本,批内和批间变异系数均小于10%。测得50名健康正常人ADP诱导的（未诱导的）血小板的CD62P和GPⅡb/Ⅲa的A值分别为0.68±0.21（0.18±0.09）和0.87±0.29（0.44±0.14）。ELISA测定结果表明,SZ21和阿司匹林可明显抑制ADP诱导的血小板功能。流式细胞仪测定ADP诱导的（未诱导的）人血小板表面CD62P和GPⅡb/Ⅲa的阳性细胞百分率分别为（60.1±7.12）%[（2.56±0.61）%]和（86.32±17.82）%[（20.25±14.56）%],其批内和批间变异系数均〈10%。结论该方法可以测定血小板功能活化剂或抑制剂对血小板功能的影响,可以测定血栓性疾病或血栓形成相关性疾病引起的血小板活化程度。     

尿可溶性抗原检测早期诊断军团菌肺炎的实验研究

为探讨应用生物素-亲和素的酶联免疫测定法检测军团菌可溶性抗原对早期诊断军团菌肺炎价值，用BA—ELISA法检测27只Lp1型军团菌肺炎豚鼠尿标本，发现感染后第1d36．8％（7／19）的豚鼠尿中可测出军团菌可溶性抗原，至感染后第5d达83.3％（20/24），累计敏感性达100％。47只非军团菌感染豚鼠尿检示该法的特异性为91.5％（43／47），与金黄色葡萄球菌（金葡菌）及某些假单胞菌有交叉反应，表明BA—ELISA法检测尿军团菌抗原具有较高和较早的诊断价值。     

ELISA法和免疫印迹法检测抗ENA抗体的比较

目的：将目前国内新开展的两种检测ＥＮＡ技术,即免疫印迹法（ＩＢＴ）和酶免疫法（ＥＬＩＳＡ）进行对比、分析。方法：用 ＩＢＴ法及 ＥＬＩＳＡ法同时检测 １３０例各种结缔组织病、非结缔组织病人及健康人血清中的抗ＥＮＡ抗体。结果：２０例健康人,两法均为阴性;８０例结缔组织病患者,两法检出抗 Ｓｍ抗体的符合率为 ９１．３％,检测抗 ＲＮＰ抗体的符合率为 ８２．５％,以上抗体两法的敏感性无显著差异（Ｐ＞０．０５）。检测抗ＳＳＡ抗体,ＩＢＴ法检出率低。抗ＳＳＢ抗体检出率两法亦无显著差异（Ｐ＞０．０５）,符合率为８７．５０％,在１２例ＳＳ的检测中符合率比较低,为５０％。结论：两种方法在检测抗Ｓｍ、ＲＮＰ、ＳＳＢ抗体时,敏感性无显著差异,ＥＬＩＳＡ法检测抗ＳＳＡ抗体优于ＩＢＴ法。上述两种方法在临床应用于抗ＥＮＡ抗体的检测中于可互相验证和补充。     

ELISA法和MEIA法测定HBV血清标志物的比较研究

目的比较酶联免疫吸附法(ELISA)和微粒子酶免疫分析法(MEIA)对HBV血清标志物的检测性能.方法用ELISA法和MEIA法对HBV的血清标志物(HBsAg,HBeAg,Anti-HBc和Anti-HBe)分别进行检测.结果对1140例病人的血清进行乙肝标志物的检测,MEIA法阳性率高于ELISA法.与MEIA法相比较,ELISA法检测HBsAg的相对灵敏度达97.5%,Anti-HBc(94.9%)和HBeAg(73.4%)次之,Anti-HBe最低,为41.7%.对一些低滴度的HBeAg/Anti-HBe的HBV感染者,ELISA法可以引起假阴性.结论对于血清乙肝标志物的检测,MEIA法和ELISA法均有较高的特异性,但MEIA法敏感性优于ELISA法.