赤峰市特教学校耳聋患者GJB2和GJB3及GJB6基因突变分析

目的:利用基因诊断的方法调查内蒙古自治区赤峰市特教学校非综合征耳聋患者的常见分子病因,对GJB2、GJB3、GJB6基因编码区突变进行分析.方法:调查对象来自赤峰市特教学校非综合征耳聋患者134例(耳聋组),对照组为中国北方地区(北京、河北、内蒙、山西)听力正常者100例.所有受检者均采集外周血并提取DNA,首先进行GJB2基因编码区测序,对携带GJB2单杂合突变的患者进一步检查GJB6 del(GJB6-D13S1830)突变并进行GJB6编码区测序.对除GJB2基因、线粒体A1555G突变相关性耳聋及前庭水管扩大综合征外的分子病因不明的91例非综合征耳聋患者进行GJB3基因编码区测序.结果:134例非综合征耳聋患者及100例正常对照中共检测到6种GJB2基因新的突变方式.耳聋组41例携带GJB2病理性突变,其中双等位基因突变22例,单等位基因突变19例,在GJB2单等位基因突变的耳聋患者中未检测到GJB6 del(GJB6-D13S1830)及编码区其他突变;对照组4例携带GJB2基因病理性突变.在91例分子病因不明的耳聋患者及100例正常对照中共检测到3种GJB3基因新的突变方式.耳聋组2例携带GJB3基因病理性突变,均为杂合子,其中1例同时携带GJB2单等位基因突变235delC;对照组1例携带GJB3基因病理性突变.结论:通过GJB2、GJB6、GJB3基因编码区突变分析为赤峰市特教学校16.42%(22/134)的非综合征耳聋学生明确了分子病因;新发现的突变和多态丰富了中国人GJB2、GJB3基因突变及多态性图谱,为深入开展耳聋基因筛查奠定了基础.     

常染色体隐性遗传耳聋家系的诊断和产前诊断

目的对常染色体隐性遗传耳聋家系进行基因检测与产前分子诊断。方法收集先证者临床及家系资料,应用聚合酶链式反应(PCR)、限制性内切酶法检测,并用直接测序技术确认,对该家系成员的GJB2基因外显子进行序列分析。并运用STR位点分析方法排除产前诊断中母体基因组DNA的污染。结果家系1先证者GJB2基因分型为235delC/299-300delAT复合杂合突变,系重度感音神经性耳聋,父亲和母亲分别为299-300delAT和235delC杂合突变携带者,临床表型均正常。家系2先证者系235delC纯合突变,其父母均为235delC杂合突变携带者,具有正常听力表型。产前诊断结果显示,家系1和家系2胎儿GJB2基因分型分别为299-300delAT杂合突变和235delC杂合突变。结论 GJB2基因235delC纯合性突变和235delC/299-300delAT复合杂合突变均为耳聋致病突变,结合运用STR位点分析方法有助于在产前诊断中排除母体DNA对胎儿DNA的污染,产前诊断和早期干预能避免耳聋患儿的出生。     

缝隙连接蛋白26基因相关性聋和大前庭水管综合征家庭的产前诊断和生育指导

目的利用基因诊断方法为有再生育要求的耳聋家庭明确分子致病机制，并行产前诊断鉴别胎儿的基因型，为耳聋家庭提供准确的遗传指导与干预。方法共有8个耳聋家庭参加研究。8个家庭均有一个子女为重度-极重度感音神经性聋患儿，其中7个家庭（家庭1—7）父母均听力正常；1个家庭（家庭8）妻子为听力正常个体，丈夫为中度感音神经性聋个体。母亲均怀孕（6—28周）。所有受检患者均采集外周血并提取DNA，进行缝隙连接蛋白26基因（gap junction beta-2，GJB2）、SLC26A4（或称PDS）基因分析和线粒体DNA（mtDNA）1555位点突变检测。明确受检者基因型后，根据母亲的妊娠时间，行适当的产前诊断取材并提取DNA，测定胎儿的基因型。结果家庭1—4先证者均为GJB2纯合或复合突变，父母均为携带者；家庭5—8先证者及家庭8父亲均为SLC26A4复合突变，其余父母均为携带者。产前诊断显示：家庭1、5、8胎儿仅携带一个父系突变，家庭2、3、6胎儿未携带GJB2或SLC26A4突变，这6个家庭胎儿出生后随访听力均正常；家庭4、7胎儿与先证者基因型相同，父母选择终止妊娠。结论耳聋基因诊断结合产前诊断可以有效预防耳聋家庭再次生育聋儿。     

产前诊断对遗传性耳聋家庭的生育指导

目的通过一典型的有再生育要求的耳聋家庭病例，具体阐述耳聋产前诊断为耳聋家庭提供科学生育指导的内容、过程及意义。方法此耳聋家庭育有一子，为先天性耳聋患者，父母均为昕力正常者。对先证者进行详细的体格检查、昕力学及影像学检查后，采集先证者及其父母的外周血并提取DNA，进行GJB2，SLC26A4（PDS）基因分析和线粒体DNA（mtDNA）A1555G位点突变检测。明确受检者基因型并向该家庭提供遗传学信息后，在母亲妊娠早期（约10周）行产前诊断取材并提取DNA，明确胎儿的基因型。结果先证者携带GJB2复合突变，父母为携带者，此耳聋家庭再发风险为25％，产前诊断显示胎儿仅携带一个母系突变，出生后随访听力正常。结论耳聋产前诊断可为遗传性耳聋家庭提供科学的生育指导。     

中国非综合征遗传性聋人群GJB6基因突变分析

目的：研究GJB6基因[连接蛋白30（Cx30）-]在中国非综合征遗传性聋人群中的突变情况。方法：用特定引物对372例非综合征遗传性聋患者（其中295例分子病因不明,77例携带GJB2病理性单等位基因突变）和182例正常对照者进行聚合酶链反应,检测GJB6基因的342kb大片段缺失del（GJB6〉D13S1830）,并进行GJB6基因编码区扩增,以产物直接测序方法进行突变检测及鉴定。结果：372例耳聋患者中未发现GJB6 del（GJB6〉D13S1830）,其中1例发现携带GJB6基因点突变404C〉A,导致了氨基酸的错义改变T135K,多物种Cx30氨基酸序列进化分析证实该点位于Cx30高度保守的第3跨膜区。对照组中未发现同样突变。结论：GJB6基因突变在中国耳聋人群中整体发生频率较低,GJB6基因可暂不列为第一线耳聋基因检测项目。     

遗传性耳聋家庭康复与预防模式的探讨

目的通过耳聋产前诊断对先证者为人工耳蜗植入者的遗传性耳聋家庭的生育指导,探讨遗传性耳聋家庭康复与预防的理想模式。方法 58个耳聋家庭参与了此研究,这些耳聋家庭均育有一子,为先天性耳聋患者并植入了人工耳蜗,父母均为听力正常者,计划生育听力健康后代。先证者接受详细的体格检查、听力学及影像学检查后,先证者及其父母均采集外周血并提取DNA,进行GJB2序列分析、SLC26A4常见突变外显子分析和线粒体基因(mtDNA)12SrRNA检测,明确了分子病因和后代再发风险。接受产前诊断时,母亲妊娠11²6周,根据母亲的妊娠时间,行适当的产前诊断取材并提取胎儿DNA,测定胎儿基因型,预测胎儿听力状态。结果 35个耳聋家庭的先证者为GJB2纯合或复合突变,父母均为GJB2突变携带者;23个耳聋家庭的先证者为SLC26A4纯合或复合突变,父母均为SLC26A4突变携带者。此58个耳聋家庭再发风险均为25%,共行产前诊断64例次(6个家庭母亲怀孕2次,进行了2次产前诊断),44例次检测结果显示胎儿仅携带一个父系或母系突变,或未携带任何已知突变,随访胎儿出生后听力均正常;20例次检测结果显示胎儿与先证者基因型相同,父母自愿选择终止妊娠。结论对于分子病因明确的遗传性耳聋家庭,先证者接受人工耳蜗植入获得最佳听力语言康复效果,再生育时通过耳聋基因诊断结合产前诊断预防聋儿出生,是最理想的耳聋康复与预防模式。     

河北涿州、高碑店市特教学校非综合征性聋分子病因学分析——GJB2 235delC突变、SLC26A4 IVS7-2A＞G突变和线粒体DNA12SrRNA A1555G突变筛查报告

目的 对河北涿州、高碑店地区重度耳聋患者进行分子流行病学调查，了解耳聋的常见分子病因。方法 对河北涿州、高碑店市特殊教育学校64名耳聋学生进行遗传性耳聋问卷调查、全面的体格检查、耳鼻咽喉专科检查以及听力学评估（包括纯音测听和声导抗）。对64名非综合征型感音神经性耳聋患者分别进行GJB2基因235delC突变、线粒体DNA 12SrRNA基因A1555G点突变的限制性内切酶分析。应用直接测序法检测SLC26A4基因IVS7—2A〉G突变。结果7例（10．93％）携带GJB2基因235delC纯合突变；9例（14．06％）携带GJB2基因235delC杂合突变；6例（9．37％）携带SLC26A4基因ⅣS7—2A〉G纯合突变，12例（18．75％）携带SLC26A4基因IVS7—2A〉G杂合突变：未发现携带线粒体DNA 12SrRNA基因A1555G点突变者。结论 河北涿州、高碑店地区非综合征型耳聋患者存在较高的GJB2基因235delC和SLC26A4基因ⅣS7—2A〉G突变发生率，而线粒体DNA 12SrRNA基因A1555G突变发生率低于全国平均水平。聋病分子流行病学调查提示河北涿州、高碑店地区20.3％的非综合征型耳聋患者在分子水平能够明确诊断．另有32．81％的患者有遗传倾向。进行准确的耳聋早期诊断、遗传咨询、及时干预和治疗在这一地区的聋哑人群中非常重要。     

GJB2基因致病突变杂合携带者核心启动子的研究

目的：探讨GJB2基因致病突变杂合携带的语前聋患者在核心启动子区域是否存在影响功能的碱基突变。方法从前期收集的1750例耳聋患者中选取20例GJB2基因致病突变杂合携带的语前感音神经性耳聋患者和20例GJB2基因无致病突变的语前聋患者，同时选取22例听力表型正常人作为对照。利用其外周血白细胞基因组DNA作模板，运用聚合酶链反应(PCR)的方法对耳聋患者和对照组GJB2基因第一外显子和核心启动子区域进行扩增，扩增产物纯化后进行测序，运用DNAStar软件对测序结果进行生物信息学分析、比对。结果40例患者在GJB2基因第一外显子区未发现突变。20例GJB2致病突变杂合携带者中12例患者在转录起始位点上游-229位点存在T>C碱基改变，呈杂合携带形式；20例GJB2基因无致病突变的耳聋患者中7例在转录起始位点上游-229位点存在T>C碱基改变，呈杂合携带形式，7例在-229位点存在T>C纯合携带形式；22例听力正常对照者10例在转录起始位点上游-229位点存在T>C碱基改变，呈杂合携带形式，3例在转录起始位点上游-229位点存在T>C纯合携带形式。结论本研究发现的GJB2基因转录起始位点上游出现的-229位点T>C碱基改变不是致病突变，目前GJB2致病基因杂合携带的耳聋患者中GJB2基因与耳聋的关系尚难确定。     

应用基因芯片技术对一近亲婚配耳聋家系致聋机制的分析

目的:在DNA水平上对一个非综合征型耳聋家系进行耳聋易感基因的突变筛查,确定家系成员的致病基因及分型。方法:收集家系成员外周血,提取DNA进行等位基因多重PCR,基因芯片杂交筛查GJB2、GJB3、PDS和mtDNA 12SRNA基因突变,DNA测序验证基因芯片结果。结果:先证者为GJB2基因235delC和299-300delAT复合杂合,其父母分别为GJB2基因235delC和299-300delAT纯合突变基因型,父系亲属中耳聋者均为299-300delAT纯合突变基因型,听力正常成员为杂合基因型,该致病基因来源于近亲婚配祖父母。结论:GJB2基因突变是导致该家系发生耳聋的致病因素,耳聋基因芯片检测是确定遗传性聋病因的必要手段。     

运用变性高效液相色谱(DHPLC)对中国人非综合征性耳聋进行GJB2基因突变分析

目的分析中国人非综合征性耳聋GJB2基因的突变频率和特性,并探讨其基因型与表型的关系。方法聚合酶链反应扩增目的片段,变性高效液相色谱进行突变筛查,阳性结果直接测序,对GJB2杂合突变病人进行△(GJB6-D13S1830)突变检测。结果DHPLC突变检测的敏感性和特异性均达到了100%。在255个非综合征性耳聋家系先证者中,共检测到14种GJB2变异,其中235delC是最常见的突变类型,占所有突变的75%。在115例正常人中79G>A和341A>G两种多态的等位基因频率分别为24.8%和20.9%。在12例GJB2杂合突变病人中未检测到△(GJB6-D13S1830)突变。结论GJB2突变是导致学语前聋的主要原因,28.6%的学语前隐性和18.9%学语前散发非综合征性耳聋病人携带了两个GJB2突变。在中国人群中,235delC是GJB2基因最常见的突变形式,而79G>A和341A>G是GJB2基因最常见的两种多态。     

角皮病致病基因GJB4在遗传性耳聋中的研究

目的连接蛋白基因和遗传性耳聋及角皮病有明确的相关性.现有4个连接蛋白基因突变可导致角皮病,即:GJB4、GJB2、GJB3和GJB6,其中3个基因既可导致遗传性耳聋,即GJB2、GJB3和GJB6,而GJB4是否与遗传性耳聋相关还有待于进一步证实.为证实GJB4和遗传性耳聋的相关性,在非综合征型遗传性耳聋中进行突变检测.方法本实验采用PCR-直接测序法对60个非综合征型遗传性耳聋家系先证者进行GJB4的突变检测,其中32个显性遗传,28个隐性遗传.结果发现了四种碱基改变:109G＞A、3'UTR 17 A＞G、611A＞C和507C＞G.109G＞A和3'UTR 17A＞G是新发现的碱基改变,但在家系突变检测中证实为多态.611A＞C和507C＞G两种碱基改变是已报道的多态,611A＞C是我们检测到的最常见的多态.结论本研究发现了GJB4的109G＞A和3'UTR 17 A＞G两种新多态,为今后进一步研究打下了基础,但未能最终证实GJB4为遗传性耳聋的致病基因,可是从该基因背景来分析GJB4仍可能是一个很好的耳聋候选基因,有待于扩大家系收集范围进一步检测.     

Autosomal recessive and sporadic deafness in Morocco: high frequency of the 35delG GJB2 mutation and absence of the 342-kb GJB6 variant

Deafness is a heterogeneous disorder showing different pattern of inheritance and involving a multitude of different genes. Mutations in the gene, GJB2 Gap junction type 1), encoding the gap junction protein connexin-26 on chromosome 13q11 may be responsible for up 50% of autosomal recessive nonsyndromic hearing loss cases (ARNSHL), and for 15–30% of sporadic cases. However, a large proportion (10–42%) of patients with GJB2 has only one GJB2 mutant allele. Recent reports have suggested that a 342-kb deletion truncating the GJB6 gene (encoding connexin-30), was associated with ARNSHL through either homozygous deletion of Cx30, or digenic inheritance of a Cx30 deletion and a Cx26 mutation in trans. Because mutations in Connexin-26 (Cx26) play an important role in ARNSHL and that distribution pattern of GJB2 variants differs considerably among ethnic groups, our objective was to find out the significance of Cx26 mutations in Moroccan families who had hereditary and sporadic deafness. One hundred and sixteen families with congenital deafness (including 38 multiplex families, and 78 families with sporadic cases) were included. Results show that the prevalence of the 35delG mutation is 31.58% in the family cases and 20.51% in the sporadic cases. Further screening for other GJB2 variants demonstrated the absence of other mutations; none of these families had mutations in exon 1 of GJB2 or the 342-kb deletion of GJB6. Thus, screening of the 35delG in the GJB2 gene should facilitate routinely used diagnostic for genetic counselling in Morocco.     

辽宁地区非综合征型耳聋患者常见耳聋基因突变分析

目的：分析辽宁地区重度和极重度非综合征型耳聋患者常见耳聋基因热点突变的特点及规律。方法：收集中国医科大学附属第一医院就诊的非综合征型耳聋患者128例,采集外周血并从中提取DNA,应用耳聋基因芯片检测中国人群中常见的4个基因GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体12SrRNA的热点突变位点,同时结合耳聋问卷调查、听力学检测及颞骨CT检查。结果：128例患者中52例（40．6％）存在不同的被检测基因位点突变：①22例存在GJB2基因突变,其中c．235delC位点纯合突变10例,单杂合突变5例c.176_191 del 16位点单杂合突变1例;c.35 del G位点单杂合突变1例;c．235 del C／c．299_300 del AT复合杂合突变1例,C．235delC／c．176_--191del16复合杂合突变1例,035delG／c.176_191 del 16复合杂合突变1例;c.299_300 del AT纯合／c．919-2A〉G杂合1例儿235 del C纯合／c．919-2 A〉G杂合1例。②30例存在SLC26A4基因突变,其中c．919-2 A〉G位点纯合突变6例、单杂合突变17例,c．2168 A〉G位点纯合突变1例、单杂合突变2例,c．2168 A〉C／c．919-2 A〉G复合杂合突变2例,c．919-2 A〉G／GJ B2 c．235 del C复合突变2例。③无GJB3和线粒体12S rRNA基因突变,考虑与样本量少有关。在基因水平,明确诊断遗传性聋者24例（18．8％）,遗传性耳聋基因突变携带者28例（21．9％）。结论：辽宁地区耳聋患者存在较高的遗传性耳聋发生率,耳聋基因芯片诊断技术可应用于临床中进行快速筛查、诊断并指导聋儿康复。     

耳聋基因panel在耳聋基因诊断中的临床应用

目的探讨耳聋基因panel技术在耳聋患者基因诊断中的应用。方法40例耳聋患者首先采用荧光定量PCR结合Sanger测序法检测4个常见耳聋基因的25个位点突变,初检结果单杂合致病突变者行耳聋基因单基因测序或耳聋基因panel检测;初检结果未发现耳聋基因致病性突变者直接行耳聋基因panel检测。16例患者行父母耳聋基因溯源验证。结果40例患者中,耳聋基因筛查检出GJB2基因纯合或复合杂合突变8例、单杂合突变2例,SLC26A4基因纯合突变1例、单杂合突变2例。4例单杂合突变检出者接受进一步的耳聋单基因或耳聋基因panel测序,其中2例分别检出GJB2基因c.235delC/c.610delC及c.235delC/c.109G>A复合杂合突变,2例检出SLC26A4基因c.919-2A>G/c.1548_1549insC复合杂合突变。27例初检结果阴性患者接受了进一步的耳聋基因panel检测,检出GJB2基因c.109G>A纯合突变4例和c.571T>C/c.G109A复合杂合突变1例,MYO7A基因c.397dupC/c.3484A>T复合杂合突变1例,MYO15A基因c.4779+2T>C/c.5008-2A>G复合杂合突变1例,ACTG1基因c.118C>T单杂合突变1例,CDH23基因c.1765G>A/c.6504T>A及c.6049G>A/c.7225-1G>A复合杂合突变各1例。在16例行父母溯源的耳聋患者中,15例患者耳聋基因突变分别遗传自其父母。结论对于耳聋基因热点突变检测结果阴性的耳聋患者,应用耳聋基因panel能有效提高遗传性致病基因检出效率,为其遗传学诊断和临床治疗提供依据。     

扬州市特教学校耳聋学生常见耳聋突变基因调查报告

目的:调查扬州地区非综合征性聋患儿常见耳聋突变基因的发病情况。方法:选择扬州市特教学校90例中、重度非综合征性聋学生为研究对象。在苏北人民医院医学检测中心利用耳聋基因芯片诊断试剂盒筛查常见的耳聋相关基因的9个热点突变,包括GJB2(35delG、176del16、235delC及299delAT),GJB3(538C>T),SLC26A4(IVS7-2A>G、2168A>G)和mtDNA 12SrRNA(A>G、1494C>T)。结果:在90例耳聋患者中,基因芯片方法共检出携带致聋基因突变64例(71.1%)。其中,GJB2基因突变40例(44.4%),包括235delC纯合突变20例(22.2%),235delC单杂合突变4例(4.4%),235delC和299delAT复合杂合突变2例(2.2%);299de-lAT单杂合突变2例(2.2%),299delAT纯合突变2例(2.2%);176del16单杂合突变2例(2.2%),176del16纯合突变2例(2.2%),176del16和235delC复合杂合突变6例(6.7%)。SLC26A4基因突变22例(24.4%),包括IVS7-2A>G纯合突变2例,IVS7-2A>G和2168A>G复合杂合突变2例(2.2%),IVS7-2A>G单杂合突变18例(20.0%);mtDNA 12SrRNA A>G纯合突变2例(2.2%);未检出GJB3基因突变。结论:应用基因诊断技术可以在耳聋患者病因调查中进行快速筛查诊断,值得推广应用。     

A new de novo missense mutation in connexin 26 in a sporadic case of nonsyndromic deafness

OBJECTIVES: Mutations in the GJB2 gene, encoding Connexin 26, can cause nonsyndromic recessive deafness or dominant hearing loss (HL) with or without keratoderma. The objective was to perform a molecular evaluation to establish the inherited pattern of deafness in the sporadic cases afferent to our center. METHODS: The subject was a 2-year-old Italian girl with nonsyndromic early onset HL. We performed DNA sequencing of the GJB2 gene and deletion analysis of the GJB6 gene in all family members. RESULTS: Direct sequencing of the gene showed a heterozygous C-->G transition at nucleotide 172 resulting in a proline to alanine amino acid substitution at codon 58 (P58A). The analyses indicate that the P58A mutation appeared de novo in the proband with a possible dominant effect. CONCLUSIONS: This mutation occurs in the first extracellular domain (EC1), which seems to be very important for connexon-connexon interaction and for the control of voltage gating of the channel. The de novo occurrence of an EC1 mutation in a sporadic case of deafness is consistent with the assumption that P58A can cause dominant HL.     

常见耳聋基因在大连地区语前聋患者与耳聋高危人群中的检测分析

目的：分析常见耳聋基因突变在大连地区耳聋患者与耳聋高危人群中的分布。方法应用遗传性聋基因芯片,对大连地区持残疾证的1～30岁语前聋患者770例及耳聋高危人群362例进行 GJB2、GJB3、SLC26A4、mtDNA12SrRNA基因的9个突变位点的检测。结果语前聋患者常见耳聋基因的携带率42．99％（331／770）高于耳聋高危人群（27．35％,99／362）;语前聋患者GJB2携带率23．51％（181／770）高于耳聋高危人群（14．09％,51／362）;语前聋患者SLC26A4携带率18．57％（143／770）高于耳聋高危人群（8．84％,32／362）（ P＜0．005）;语前聋患者中GJB2和SLC26A4纯和突变和复合杂合突变发生率为24．16％（186／770）,耳聋高危人群中未发现纯和突变和复合杂合突变;耳聋高危人群mtDNA 12SrRNA的携带率3．87％（14／362）明显高于语前聋患者（0．91％,7／770）（P＜0．005）。耳聋高危人群中发现 GJB3基因突变携带者2例（0．55％,2／362）。结论SLC26A4、GJB2纯合及复合杂合基因突变携带是导致大连地区1～30岁持残疾证的语前聋患者发病的主要致聋基因。     

安阳市特教学校重度感音性聋分子病因学分析--GJB2 235delC突变和线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变筛查报告

目的 调查河南省安阳地区重度感音神经性耳聋聋病分子病因学情况。方法对安阳市聋哑学校160名学生进行耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试。对其中154名非综合征性感音神经性耳聋患者进行线粒体DNA 12SrDNA A1555G点突变检测和G朋12基因突变检测。结果 8例（5．19％）存在线粒体DNA 12SrDNA A1555G点突变；11例（7．14％）存在GJB2 235delC纯合突变；13例（8．44％）存在GJB2 235delC杂合突变。在分子水平能够明确诊断者占20．77％。结论 安阳地区耳聋患者存在较高的遗传性耳聋发生率。特别是线粒体DNA A1555G突变发生率高于全国平均水平，通过聋病分子诊断，可达到防聋、指导聋儿康复及评估耳聋预后等积极效果。