siRNA对HSC结缔组织生长因子的抑制作用

目的研究化学合成的小分子干扰RNA ( siRNA) 对鼠肝星状细胞 (HSC)结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的抑制作用.方法针对大鼠CTGF mRNA 483、885和946位点化学合成3对21核苷酸(nt) siRNA, 分别以50、100、200 nmol/L浓度转染HSC T6, 以空白及转染非特异siRNA作为对照, 应用RT-PCR检测CTGF mRNA表达, 筛选出抑制效率最高的siRNA及其浓度; 再转染HSC T6, 抽提孵育24、48、72 h细胞总RNA及蛋白质, 应用RT-PCR和Western blot检测CTGF mRNA及蛋白质表达.结果与对照相比, 转染siRNA的HSC T6细胞CTGF mRNA表达水平明显降低, siRNA抑制效率在50 ～ 200 nmol/L范围呈浓度依赖性增高, 以483 siRNA 200 nmol/L最显著, 转染非特异siRNA的HSC T6细胞CTGF mRNA表达水平无明显变化; 转染483 siRNA的HSC T6细胞24 48、72 h CTGF mRNA分别下调 (91±2) %、(65±3) % (P均<0.01)和 (10±7) % (P=0.0634), 蛋白分别下调 (86±5)%、(94±4)%和 (42±9)% (P均<0.01).结论化学合成483 siRNA能高效抑制HSC的CTGF基因表达, 有效阻抑时间达72 h, 提示化学合成siRNA具有预防和治疗肝纤维化的潜力.     

发卡样CTGF特异性RNA干扰重组体的构建及筛选

目的：利用Pgenesil 1质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA表达的质粒，并筛选有效的抑制序列。方法:分别设计3对有小发夹结构的两条DNA序列及1对非特异对照序列，经退火成互补双链,再克隆至带有U6启动子的质粒载体Pgenesil 1中，构建重组体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。将构建成功的4组重组体转染HSC T6 24?h后，通过半定量RT PCR分析HSC T6 CTGFmRNA的表达水平，与空白对照及仅加转染试剂组比较分析。结果:CTGF的shRNA片段被成功克隆到Pgenesil 1质粒载体中，经酶切与测序证实构建成功，转染HSC T6 24?h后，与空白对照组相比，通过半定量RT PCR分析发现有两组细胞CTGFmRNA水平明显下降，24?h抑制效率分别为(74±5)%,(P<0.01);(61±3)%,(P<0.05)。转染非特异shRNA组及仅加转染试剂组CTGFmRNA表达水平无明显变化。结论:成功构建了能表达CTGFshRNA的3组重组体，并筛选出能高效抑制CTGF表达的shRNA序列，为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了实验基础。     

小干扰RNA对肝星状细胞基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的抑制作用

目的观察化学合成的小干扰RNA(siRNA)转染大鼠肝星状细胞(HSC)-T6后不同时间点,对基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的抑制作用,同时筛选高效的siRNA片断。方法对大鼠TIMP-1 mRNA nt161~181、nt 190~208、nt 208~226、nt 226~244及nt 445~463化学合成的5对siRNA和1对荧光标记的非特异siRNA(与TIMP-1 mRNA无同源性的FITC标记的21nt siRNA),在阳离子脂质体的介导下将不同浓度的非特异siRNA转染至大鼠HSC-T6后,用流式细胞仪确定最佳转染浓度。提取转染50 nmol/L siRNAs后24 h,48 h和72 h细胞蛋白,用W estern b lot检测TIMP-1蛋白质表达,筛选出抑制效率最高的siRNA,同时确定siRNA转染细胞后的最佳作用时间。结果50 nmol/L siRNAs对HSC-T6有较高的转染效率;5对siRNA中的3对在转染后48 h有较强的抑制HSC-T6细胞TIMP-1基因表达的作用,其中抑制作用最强的1对siRNA对TIMP-1表达的抑制作用与对照组相比可增强80%以上,而在转染后72 h,其抑制作用基本消失。结论化学合成的siRNA在短时期内可有效地抑制TIMP-1基因的表达,筛选到的高效阻抑TIMP-1表达的siRNA可构建于病毒载体,以实现长期抑制TIMP-1表达的功效。     

siRNA特异性抑制卵巢癌细胞生长因子受体-2基因表达及其意义的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)抑制卵巢癌细胞表皮生长因子受体-2(HER-2)基因的表达及其细胞效应。方法实验分为以下3组空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV-3细胞)、转染非特异性的siRNA组及转染特异性的siRNA组。干涉后5d加顺铂。采用半定量PCR技术(RT-PCR)和Western印迹法检测HER-2mRNA和蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞对顺铂的化学敏感性的变化,分析观察细胞生物学特性的改变。结果HER-2siRNA对HER-2mRNA表达明显抑制,作用能持续10d左右;干涉第7天后开始出现蛋白质表达的明显减弱,转染特异性siRNA组的蛋白质阳性表达率为(25·5±0·8)%,非特异性siRNA组为(95·7±0·8)%,空白对照组为(96·6±1·2)%,前组与后两组比较差异有统计学意义(均P<0·001)。干涉后随着HER-2mRNA表达下降,细胞凋亡增加,第6天凋亡率最高,达(53·2±1·0)%,转染非特异性siRNA组为(4·1±0·3)%,空白对照组为(4·1±0·3)%,差异有统计学意义(P<0·001);干涉后,转染特异性siRNA组的细胞存活率为(58·4±0·8)%,转染非特异性siRNA组为(68·0±0·6)%,空白对照组为(67·0±0·3)%,前组与后两组比较差异有统计学意义(均P<0·001)。结论体外合成的siRNA能有效抑制SKOV-3细胞中HER-2表达,促进细胞的凋亡,提高细胞对顺铂的敏感性,RNAi为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。     

利用siRNA对β细胞上胰岛素受体的抑制作用

目的:利用siRNA抑制β TC-3细胞中胰岛素受体基因的表达.方法: 化学合成胰岛素受体(IR)基因的4对特异siRNAs(实验组:siRNA-1组,siRNA-2组,siRNA-3组,siR-NA-4组)和1对非特异siRNA(NC组).通过阳离子脂质体将siRNAs分别转染β TC-3细胞,24 h后荧光显微镜下观察不同浓度siRNA转染细胞的效率;应用逆转录PCR检测IRmRNA表达.结果: ①50,100,150,200 nmol/L siRNA转染βTC-3细胞24 h后,转染效率分别为(73.1±4.1)%,(92.9±3.4)%,(90.8±4.0)%,(93.9±2.8)%,选择190 nmol/L浓度作为siRNA转染浓度.②转染100 nmol/L siRNAs 24 h后,与对照组相比siRNA-1,2,3,4组B TC-3细胞IR mRNA表达都有不同程度下调,其中以siRNA-2组抑制效果最为明显,表达减少了70.5%.结论: 靶向IR mRNA的siRNA能在体外特异性的抑制IR的表达,为进一步研究β细胞上IR的功能提供了实验基础.     

血管紧张素Ⅱ对的人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的 :研究血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mR NA表达的影响。方法 :采用体外培养人近端肾小管上皮细胞株 (HPTC) ,分别观察不同浓度(0、10 -9、10 -7、10 -5mol·L-1)AngⅡ处理 48h ,或用AngⅡ (浓度为 10 -7mol·L-1)处理不同时间 (0、12、2 4、48、72h)对HPTC结缔组织生长因子 (CTGF)mRNA表达的影响 ,CTGFmRNA表达采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法测定。结果 :AngⅡ (10 -7mol·L-1)作用于HPTC12h后 ,细胞CTGFmRNA的表达开始增加 ,72h达最高水平 ,与对照组相比 ,AngⅡ作用 48h后显著增加〔(0 0 97± 0 0 15 )vs(0 63 2± 0 0 41) ,P <0 0 1〕 ;无AngⅡ的DMEM培养HPTC ,72h内细胞CTGFmRNA水平未见明显改变 (P >0 0 5 )。不同浓度 (10 -9、10 -7、10 -5mol·L-1)AngⅡ作用于HPTC 48h ,CTGFmRNA的表达均有增加 ,分别是对照组 (0mol·L-1)的 1 5、5 5和 7 4倍 (P <0 0 1) ,对扩增产物进行测序证实与基因库中人CTGF的cDNA序列一致。结论 :AngⅡ呈时间和剂量依赖性地刺激HPTCCTGFmRNA表达 ,此结果提示AngⅡ可能通过促进CTGF表达而参与小管间质纤维化的发生     

siRNA沉默结缔组织生长因子对鼠肝星状细胞生物学特性的影响

目的研究化学合成的小干扰RNA（483 siRNA）对大鼠原代肝星状细胞（HSCs）结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达及细胞生物学特性的影响。方法以胶原酶原位灌注消化、密度梯度离心分离大鼠原代HSCs,以脂质体Oligofectamine包裹483 siRNA转染培养72h的原代HSCs作为转染组,并设空白对照组。收集孵育96h的HSCs及培养上清液,采用Western blotting、免疫细胞化学染色、MTT和RT—PCR法分别检测细胞CTGF蛋白表达、α-SMA表达、细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;放射免疫法检测培养上清液中透明质酸及Ⅲ型前胶原含量。结果与对照组比较,转染组HSCs的CTGF蛋白表达下调（92&#177;5）％,α—SMA染色阳性细胞减少（58&#177;6）％,细胞增殖活性下调（18&#177;5）％,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达分别下调（53&#177;6）％和（41&#177;7）％;培养上清中透明质酸和Ⅲ型前胶原含量分别降低（48&#177;5）％和（33&#177;8）％。结论483 siRNA能显著下调原代HSCs CTGF蛋白表达,并由此抑制细胞活化、增殖及细胞外基质的合成和分泌。提示针对CTGF靶位的siRNA可能具有防治肝纤维化的潜力。     

siRNA干预CTGF和TIMP-1对大鼠肝星状细胞胶原分泌的影响

目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默结缔组织生长因子(connective tissue growthfactor,CTGF)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-1)对肝星状细胞(hepaticstellate cell,HSC)CTGF和TIMP-1基因表达以及对Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌的影响。方法根据已筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,将化学合成siRNA CTGF和siRNA TIMP-1以脂质体LipofectamineTM2000介导,瞬时转染HSC-T6细胞,分别设siRNA CTGF组、siRNA TIMP-1组、siRNA CTGF和siRNA TIMP-1联合组、脂质体组及非特异性(negative control,NC)siRNA组,抽提转染24、48h细胞mRNA和蛋白,并收集细胞上清液。应用RT-PCR鉴定CTGF和TIMP-1mRNA的表达;Western blot检测其蛋白表达;ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌。结果各干预组转染24、48h后分别与脂质体组和NC siRNA组比较,HSC-T6细胞CTGF及TIMP-1mRNA和蛋白表达均明显下调(均P<0.05),且干预组HSC-T6培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显减少(均P<0.05)。siRNA联合组分别与siRNA CTGF组和siRNA TIMP-1组比较,于转染48hsiRNA联合组较siRNA TIMP-1组抑制率高,细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原量比siRNA TIMP-1组少,且差异具有统计学意义(均P<0.05);而与siRNA CTGF组比较,其CTGF mR-NA和蛋白抑制率增高,细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原量较siRNA联合组减少,但差异无统计学意义(均P>0.05)。结论针对HSC-T6CTGF mRNA基因全长943位点和TIMP-1mRNA 304位点化学合成的siRNA,对靶基因mRNA和蛋白表达有较好的抑制效果,CTGF和TIMP-1沉默可显著减少细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;CTGF和TIMP-1两种基因同时沉默,有增强抗肝纤维化效果的可能。     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对结缔组织生长因子表达的影响

目的 :在体外培养的新生大鼠心肌成纤维细胞中 ,研究血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )及其受体拮抗剂洛沙坦对结缔组织生长因子表达 (CTGF)的影响。方法 :差速贴壁法分离新生SD大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)及免疫组化法对其进行鉴定 ,不同浓度的AngⅡ (10 -8、10 -7、10 -6、10 -5mol/L)刺激CFs 4 8h ,再选浓度 10 -6mol/L分别作用 6、2 4、4 8及 72h得出AngⅡ对CTGF表达作用的时量关系 ;再选 10 -6mol/L作诱导浓度 ,与 10 -5mol/L洛沙坦孵育 4 8h ,采用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术测定CFsCTGFmRNA的表达 ,WesternBlot法测定CTGF蛋白的表达。结果 :不同浓度的AngⅡ (10 -8、10 -7、10 -6、10 -5mol/L)作用 4 8h及 10 -6mol/LAngⅡ分别作用 12、2 4、4 8、72h ,AngⅡ以浓度 -时间依赖的方式促进CFsCTGFmRNA及蛋白水平的表达 ;洛沙坦 10 -5mol/L作用4 8h ,与AngⅡ组比较 ,6 5 %以上抑制AngⅡ诱导的CTGFmRNA水平的表达即 (1.4 6± 0 .18)比 (2 31± 0 .2 3) ,(P<0 .0 1) ,蛋白水平上使AngⅡ诱导的CTGF的表达减弱约 73%即 (35 .99± 5 .6 4 )比 (6 8.86± 7 2 7) ,(P <0 .0 1)。结论 :AngⅡ通过AT1受体介导机制上调CFs中CTGF的形成 ,可能是AngⅡ致纤维化通路中的关键环节 ;洛沙坦可能通过抑制CTGF的表达 ,从而延缓     

针对CTGF的siRNA对高糖诱导小鼠足细胞nephrin、podocin减少的影响

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在高糖诱导小鼠足细胞nephrin、podocin表达减少中的作用,及针对CTGF基因的siRNA对其影响.方法 将体外培养的小鼠足细胞分为6组:(1)正常对照组,1640培养基含D-葡萄糖1 g/L;(2)等渗对照组,1640培养基合D-葡萄糖lg/L,甘露醇3.5 g,L;(3)高糖组,1640培养基含D.葡萄糖4.5 g,L;(4)高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于舍D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于含D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养;(6)高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后于含D-葡萄糖4.5g/L中的1640培养基中培养.应用Reahime PCR检测nephrin、podocin、CTGFmRNA水平,Western blot检测CTGF,nephrin、podocin蛋白表达水平.结果 高糖可诱导CTGF mRNA及蛋白表达增加,下调足细胞的nephrin、podocin mRNA及蛋白水平,而通过特异性siRNA抑制CTGFmRNA表达后,CTGF表达减少,同时伴有细胞nephrin、podocin表达升高.结论 CTGF是高糖诱导小鼠足细胞损伤的重要介质,高糖可通过CTGF诱导nephrin,podocin表达减少.针对CTGF的siRNA能明显改善这种损伤,为DN发病机制的研究提供新的实验依据.     

全血标本保存条件对人总RNA提取效率的影响

目的探讨全血标本保存条件对RNA提取效率和RNA完整性的影响。方法从179例保存在不同温度、不同时间的全血标本中提取总RNA,测定其浓度和纯度、分析其完整性。另选20例标本研究冻融次数对RNA提取效率的影响。179例中的73例总RNA在-80℃下保存1周前、后分别测定浓度和纯度,观察两者差异。结果新鲜血来源的总RNA浓度最高,平均306.51ng/μl;冻融2次全血仍可获得足量的RNA,浓度181.98ng/μl,RNA完整性有所下降;-80℃保存1周的RNA,浓度和纯度都略有下降。结论利用Trizol法可从小体积全血标本中获取足量有效的总RNA;不同保存条件全血中所获取的总RNA浓度存在差异;总RNA-80℃短期保存也会略有降解。     

二甲氨基偶氮苯诱发大白鼠肝癌的研究——癌变过程核糖体和多核糖体RNA含量及其PolyA~+ RNA相对含量的改变

本实验以二甲氨基偶氮苯(DAB)诱发大白鼠肝癌不同时期的肝组织为材料,观察了核糖体和多核糖体RNA含量及其polyA~+RNA相对含量的改变。结果表明:DAB诱癌6周、16周及肝癌的癌区组织核糖体和多核糖体RNA含量均低于正常对照组。而癌周组织的含量未见有显著性变化。核糖体和多核糖体RNA中polyA~+RNA的相对含量在诱癌6周、16周时低于对照组,但在肝癌形成时则高于对照组。本文就这种变化的意义作了初步讨论。     

大鼠肝细胞核体外转录活性随增龄变化的研究

本文用同位素参入法研究不同月龄大鼠的肝细胞核体外转录活性。结果观察到老年大鼠的肝细胞核体外转录活性较断乳鼠及青年鼠分别下降了47％及42％,而肝组织中总RNA的含量随增龄变化不十分明显;负责rRNA及tRNA的RNA聚合酶Ⅰ+Ⅲ所致的转录活性随增龄明显下降,而负责n.RNA合成的RNA聚合酶Ⅱ所致的转录活性则改变不太明显;RNA合成后从细胞核转运到核外的变化趋势是1～10月龄时上升,11—28月龄时下降。     

灵芝多糖(GL-B)对肿瘤坏死因子α和γ干扰素产生及其mRNA表达的影响

目的:探讨灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides B, GL-B)对小鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage, PM)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNFα)、脾细胞γ干扰素(interferon-γ, IFNγ)的产生及其mRNA表达的影响.方法:采集小鼠PM和脾淋巴细胞,体外给药,分离细胞培养上清.生物法测定TNFα,ELISA测定IFNγ;RT-PCR方法检测mRNA的表达.结果:GL-B 25～400 mg.L-1使正常小鼠PM培养上清中TNFα的活性升高,并呈剂量依赖关系,24h达高峰,72h后开始减少.GL-B对小鼠PM的TNFαmRNA表达有显著促进作用.GL-B 12.5～200mg.L-1明显增加正常小鼠脾细胞培养上清中IFNγ的产生.24h内随培养时间的延长而增加,48 h后开始减少.GL-B对IFNγ mRNA的表达有促进作用.结论:灵芝多糖GL-B明显促进小鼠PM及脾细胞TNFα和IFNγ mRNA的表达,增加TNFα和IFNγ的产生.     

美托洛尔对心力衰竭大鼠心脏β3肾上腺素能受体mRNA表达水平的影响

[目的]探讨心力衰竭大鼠心脏β3肾上腺素能受体(β3受体)mRNA表达,以及β受体阻滞剂美托洛尔对其的干预效果.[方法]28只大鼠随机分为假手术组(n=10)和心力衰竭组(n=18),主动脉缩窄法建立心衰模型.3个月后心力衰竭组存活16只分为心衰对照组,美托洛尔组,每组8只.美托洛尔组以美托洛尔6 mg·kg-1·d-1口服灌注,心衰对照组灌注等量生理盐水.口服灌注3个月后检测血流动力学,心室质量指数及RT-PCR方法测定心室β3受体mRNA表达.[结果]与假手术组比较,心衰对照组大鼠心率明显增快(P＜0.05),左室收缩末压、左室内压最大收缩和舒张速率的绝对值显著降低,左室舒张末压显著增高(P均＜0.01).美托洛尔组大鼠血流动力学参数明显改善(P＜0.01).与假手术组比较,心衰对照组大鼠心室质量指数明显增加,美托洛尔组大鼠较心衰对照组明显下降(P＜0.01).心衰对照组、美托洛尔组心室β3受体mRNA表达明显高于假手术组(P＜0.01),但心衰对照组、美托洛尔组之间比较无统计学意义(P＞0.05).[结论]心衰大鼠心脏β3受体mRNA表达明显增加.美托洛尔可以改善心衰大鼠的血流动力学,明显抑制心室重塑,但对心室β3ARmRNA表达无显著影响.     

大鼠INS-1细胞中IGFBP-2 mRNA的表达调控

目的:研究大鼠胰腺肿瘤β-细胞(INS-1)中,葡萄糖(Glucose)、胰岛素(Insulin)和生长激素(GH)对胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)基因的表达调控,探索IGFBP-2基因调节机制及其在维持正常胰腺细胞生理功能中的作用.方法:RNA印迹法(Northern blotting)检测INS-1细胞IGFBP-2 mRNA的表达,酶标法测定INS-1细胞胰岛素分泌量.结果:葡萄糖对IGFBP-2 mRNA调节作用不同;高浓度(10mmol/L)葡萄糖条件下,胰岛素分泌量增加,而IGFBP-2mRNA表达被抑制;低浓度(1～5.6 mmol/L)葡萄糖条件下,胰岛素分泌量无显著性变化,IGFBP-2 mRNA正常表达.INS-1细胞在不完全培养液中,加入GH培养,在不同时间间隔提取培养液进行IGFBP-2 mRNA检测,结果发现,培养16 h以上,IGFBP-2 mRNA表达开始显著下降.外源胰岛素抑制IGFBP-2 mRNA的表达.结论:葡萄糖和生长激素对INS-1细胞中IGFBP-2 mRNA表达的抑制作用是通过胰岛素调控的.     

大鼠脊髓损伤后肾上腺髓质素的mRNA表达

目的;观察大鼠正常及损伤脊髓组织中肾上腺髓质素ｍＲＮＡ的表达。方法;采用原位组织化学杂交技术,对正常及损伤脊髓组织中ＡＭ ｒＲＮＡ的表达进行组织定位,并采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果：正常大鼠脊髓组织即有大量ＡＭｍＲＮＡ表达。损伤后３０ｍｉｎ表达量增加,８ｈ达高峰,２４ｈ后逐渐减少,７２ｈ低于正常组。     

苦参素对成纤维细胞增殖及Ⅲ型原胶原mRNA表达的影响

目的;研究甘参素对成纤维细胞增殖及Ⅲ型原胶原ｍＲＮＡ表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法：用ＭＴＴ法及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分别检测ＮＩＨ ３Ｔ３成纤维细胞增殖及型原胶原ｍＲＮＡ的表达。结果：苦参素能明显抑制成纤维细胞增殖及Ⅲ型原胶原ｍＲＮＡ的表达,并呈剂量依赖性。     

干扰素治疗HCV-RNA阴性反复转氨酶升高丙肝的疗效观察

目的:观察干扰素治疗HCV-RNA<1000IU/ml反复转氨酶升高,应用保肝降酶药物难以持久控制的丙肝的疗效。方法:治疗组在保肝治疗基础上加用干扰素300万单位肌注隔日1次,对照组应用保肝降酶药物对症治疗,疗程1年。结果:治疗组转氨酶下降,肝纤维化指标,B超改变较对照组在统计学上有显著差异。结论:此类患者在知情同意的基础上可予抗病毒治疗。     

小干扰RNA抑制高迁移率族蛋白B1基因表达对肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因表达对肺癌细胞L9981增殖和侵袭能力的影响.方法 L9981细胞分3组,其中2组分别转染靶向HMGB1基因的siRNA(HMGB1-siRNA组)和无关序列siRNA(无关siRNA组),1组为空白对照组.转染后72 h,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平;细胞活力计数仪测定各组细胞活力.分别在转染后24、48、72和96 h应用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞生存状态.应用Boyden小室实验检测转染后72 h各组细胞的体外侵袭力.结果 HMGB1-siRNA组HMGB1mRNA相对表达量(1.0±0.0)明显低于无关siRNA组(12.8±1.3,P<0.05)和空白对照组(12.1± 1.0,P<0.05),HMGB1蛋白表达水平也明显受到抑制;细胞活力(44.7%±1.7%)明显低于无关siRNA组(73.7%±2.1%,P<0.01)和空白对照组(77.3%±1.9%,P<0.01).MTT测定显示转染后不同时间HMGB1-siRNA组L9981细胞生长均受到明显抑制.Boyden小室实验显示HMGB1-siRNA组穿膜细胞数(个/高倍视野,18.3±2.2)明显少于无关siRNA组(127.7±9.3,P<0.01)和空白对照组(132.3±10.7,P<0.01).结论 利用siRNA技术抑制HMGB1基因表达可有效抑制肺癌细胞的体外增殖和侵袭.