染色体3p14.2-14.3区域一个与鼻咽癌相关新基因的克隆

目的：在染色体３ｐ１４．２－１４．３区域寻找与鼻咽癌发生发展密切相关的新基因。方法：运用ＲＡＣＥ方法获取基因全长ｃＤＮＡ序列,ｐＥＧＦＰ质粒和脂质体共转染ＣＯＳ７细胞进行新基因的蛋白质定位。结果：在３ｐ１４．２－１４．３区域克隆了一个在鼻咽癌中表达不调新基因的全长ｃＤＮＡ序列,被命名为ＣＰＣＤＲ１,编码１０９个氨基酸,其蛋白质聚集在细胞核内,其基因组由２个外显子和１个内含子组成。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印     

C─erbB─2癌基因产物在鼻咽癌原发灶、淋巴结转移灶、细胞系及克隆株中的表达

用抗Ｃ─ｅｒｂＢ─２癌基因产物Ｐ１８５多克隆抗体２１Ｎ，应用免疫组化链菌素亲生物素蛋白─过氧化酶（Ｓ─ｐ）方法，对３５例低分化鼻咽癌组织、１０例鼻咽癌淋巴转移灶组织，１６例慢性鼻咽炎组织，８例人胚鼻咽上皮组织及人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ─１、ＣＮＥ─２Ｚ、克隆株ＣＮＥ─２Ｚ─Ｆ１、Ｈ５、Ｂ７中Ｐ１８５的表达进行了检测。结果显示：鼻咽癌组织中ｐ１８５表达率为６２．８％；淋巴结转移灶中Ｐ１８５表达率为８０％；慢性鼻咽炎中Ｐ１８５表达率为６．３％，和鼻咽癌原发灶及淋巴结转移灶比较均有显著性差异（Ｐ〈０．０１）；人胚鼻咽上皮不表达Ｐ１８５。鼻咽癌细胞系ＣＮＥ─２Ｚ、ｃＮＥ─１及克隆株ＣＮＥ─２Ｚ─Ｆ１、Ｈ５、Ｂ７中Ｐ１８５表达不一。结论：鼻咽癌组织中Ｐ１８５呈高表达；鼻咽癌淋巴结转移灶中ｐ１８５表达高于原发灶，提示可能和肿瘤细胞的转移能力及病人预后密切相关；人胚鼻咽上皮及慢性鼻咽炎组织中不表达或极少表达Ｐ１８５，说明Ｃ─ｅｒｂＢ─２癌基因的激活，可能在鼻咽癌发生发展中起重要作用；不同鼻咽癌细胞系及克隆株间Ｐ１８５的表达各异，提示和肿瘤细胞的分化程度、转移能力及其它生物学特性有关。     

C－erbB－2癌基因产物在良恶性鼻咽组织及鼻咽癌细胞系和克隆株中的表达

用抗Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因产物Ｐ１８５多克隆抗体２１Ｎ，应用免疫组化链菌素亲生物素蛋白－过氧化酶（Ｓ－Ｐ）方法，对６９例良恶性鼻咽组织及人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－１、ＣＮＥ－２Ｚ、克隆株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｆ１、Ｈ５、Ｂ７中Ｐ１８５的表达进行了检测；此外，还观察了克隆株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｂ７在连续传代过程中Ｐ１８５的表达。结果显示：鼻咽癌组织中Ｐ１８５表达率为６６．７％，慢性鼻咽炎中Ｐ１８５阳性表达率为６．３％，人胚鼻咽上皮不表达Ｐ１８５；鼻咽癌细胞系及克隆株中Ｐ１８５表达不一；克隆株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｂ７在连续传代过程中Ｐ１８５的表达逐渐升高。结论：Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因的激活，可能在鼻咽癌发生中起重要的作用；Ｐ１８５的过度表达和肿瘤细胞的分化程度及演进过程有关。     

精细定位和克隆9p21-22区域内鼻咽癌候选抑瘤基因

目的：进一步精细限定鼻咽癌９p２１－２２区域等位基因杂合性丢失的频率和范围,筛选 和克隆其共同缺失区内鼻咽癌相关的候选抑瘤基因。方法：应用１１个定位于９p２１－２ ２区域的高密度微卫星位点,检测２５例低分化鼻咽癌患者的杂合笥技失,确定其共同缺失区;用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ筛出在鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１和鼻咽癌活检组织中表达下调的、定位于共同缺失区内的３’末端ＥＳＴs（Ｅｘｐｒｉｓｓ Ｓｅｑｕｅｎｃ     

鼻咽癌组织中CDK4和p16蛋白的表达

目的：为了观察ＣＤＫ４和p１６蛋白在鼻咽癌组织中的表达状态,探讨其与鼻咽癌的发生 、发展关系。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组化法检测ＣＤＫ４和p１６蛋白在６０例鼻咽癌和２ ０例正常鼻咽部粘膜组织中的表达。结果：６０例鼻咽癌中ＣＤＫ４和p１６蛋白表达率分别为６６．７％和２３．３％。高分化鳞癌p１６蛋白的表达率明显高于低分化鳞癌（Ｐ〈 ０．０１）。２１例淋巴结转移阳性组中p１６蛋白的过度表达与p１６蛋白的低表达可能涉     

染色体7q32-ter最小共同缺失区鼻咽癌抑瘤基因候选者的筛选

目的：在明确７ｑ３２－ｔｅｒ区域等位基因杂合性丢失最小共同缺失区位于以Ｄ７Ｓ５０９为中心的Ｄ７Ｓ５００－Ｄ７Ｓ５０９－Ｄ７Ｓ４９５的基础上，筛选和克隆位于该区内鼻咽癌相关的候选抑瘤基因。方法：应用定位－候选克隆策略筛选位于该最小共同缺失区的３’末端ＥＳＴｓ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｕｑｕｅｎｃｅ ｔａｇｅ，ＥＳＴｓ），ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交筛选出在鼻咽癌细胞株和活检组织中表达下调的ＥＳＴｓ     

鼻咽癌内血管内皮生长因子的表达及其病理临床意义初探

目的探讨血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在鼻咽癌中的表达及其与病理、临床各因素之间的关系。方法利用免疫组化ＳＰ方法检测１０例鼻咽正常粘膜、１６例鼻息肉及５６例鼻咽鳞癌石蜡标本中ＶＥＧＦ的表达,用Ⅷ因子相关抗原显示肿瘤内的微血管数。结果鼻咽正常粘膜中ＶＥＧＦ均为阴性;１６例鼻息肉中有２例粘膜层呈ＶＥＧＦ阳性表达;鼻咽癌中ＶＥＧＦ表达阳性率为７１．４％（４０／５６）。ＶＥＧＦ阳性组血管密度明显高于ＶＥＧＦ阴性组（Ｐ＜０．０５）;ＶＥＧＦ的表达也与放疗后局部复发、远地转移及预后差有关,但与肿瘤的组织学分级及临床分期无关。结论ＶＥＧＦ表达与肿瘤血管生成有关,也是预测鼻咽癌复发、远地转移以及预后差的有用指标。     

免疫组化法检测鼻咽病变组织中PCNA和P53的意义

本文报道采用免疫组化ＡＢＣ法检测了８０例鼻咽活检组织的ＰＣＮＡ和Ｐ５３蛋白表达情况，结果显示：（１）ＰＣＮＡ和Ｐ５３表达的阳性率在鼻咽癌分别为９４．２％和８４．６％，异型性改变为７０．０％和２８．８％，单纯性增生为３．９％和阴性，正常上皮均为阴性；（２）ＰＣＮＡ和Ｐ５３表达的细胞阳性强度和阳性细胞数量与鼻咽癌的组织类型无关，但ＰＣＮＡ和Ｐ５３表达的细胞阳性强度及Ｐ５３表面的阳性细胞数量与肿瘤的间变     

E-cadherin和p16基因蛋白在鼻咽癌中的表达及意义

目的：探讨Ｅ－钙粘素（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ）和p１６基因与鼻咽癌发生发展的关系。 方法：采用免疫组化方法检测７４例鼻咽癌组织和２０例炎性鼻咽部组织中Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和p１６基因蛋白的表达。结果：炎性组织Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和p１６显著高于鼻咽癌组织（Ｐ〈０．０５）；Ｅ－ｃａｄｈｅｉｎ和p１６保留表达与临床分期、病灶大小 无关（Ｐ〉０．０５），但在颈淋巴结转移组显著低于无颈淋巴结转移组（Ｐ〈０．０５）     

组织芯片技术检测人鼻咽癌组织及细胞株KIAA1173基因的表达

背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)致病的分子机制至今仍不清楚,已有研究表明,染色体3p21～22区域存在与鼻咽癌发生密切相关的抑癌基因。KIAA1173基因是定位于3p22.1的一个新的肿瘤相关基因,其与NPC发病的关系尚未见报道。本研究采用KIAA1173基因特异性原位杂交探针,检测其在NPC组织及细胞株中的表达,探讨KIAA1173基因与NPC发病的关系。方法:克隆KIAA1173基因片段(354bp),并制备cDNA探针;采用组织芯片技术,通过原位杂交检测73例鼻咽部不同组织标本(41例NPC、18例鼻咽非典型增生上皮、14例正常鼻咽粘膜上皮)和6种NPC细胞株(CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、6-10B、5-8F)中KIAA1173基因mRNA的表达情况。结果:KIAA1173基因在NPC细胞、非典型增生上皮和正常鼻咽粘膜上皮的阳性率分别为21.9%(9/41)、83.3%(15/18)、92.8%(13/14),而6种NPC细胞株均未见表达;在正常鼻咽粘膜上皮和非典型增生上皮中强阳性率分别是64.3%(9/14)和38.9%(7/18),而NPC中无强阳性,在鼻咽部不同上皮组织中的表达差异有显著性(P<0.001);在38例伴有淋巴细胞浸润的NPC组织中,癌细胞与浸润淋巴细胞之间KIAA1173基因表达有显著性差异(P=0.026),并且呈明显负相关(κ=-0.337,P=0.020)。结论:KIAA1173基因在鼻咽部不同组织中表达不同,正常鼻咽上皮强表达,而NPC细胞中低表达甚至不表达,提示该基因可能参与NPC演变的过程。     

鼻咽癌细胞中表达上调的新基因 NAG23 (FBXO 30) 的克隆与分析

目的：分离位于6号染色体长臂鼻咽癌高频等位基因不平衡位点D6S1581（6q25.3-27）附近与鼻咽癌相关的新基因。方法：运用差异RT－PCR检测定位于D6S1581附近的11个表达序列标签（expressed sequence tage,EST)在正常人鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞系中的表达水平,并对其中一个表达上调的EST在鼻咽癌组织和正常鼻咽组织中的表达情况进行分析。用Northern杂交验证其表达差异并检测其在多脏器中的表达及所代表基因的转录本大小。利用生物信息学资源克隆并获得其全长cDNA ,对该序列进行初步分析。结果：获得了一个位于6q25．3－27的在鼻咽癌中表达上调的新基因,命名为NAG23（FBXO30）(GenBank收录编号：AF248640）。该基因在68．9％的鼻咽癌活检组织中表达上调,cDNA全长3301bp,预测其开放阅读框编码一个含390个氨基酸的胞浆蛋白,该蛋白含一个F－box基序。结论：NAG23基因是一个在鼻咽癌中表达上调的新基因,很可能编码一新的F－box蛋白。NAG23可能参与了鼻咽癌的发生发展。     

细胞角蛋白基因13在鼻咽癌中的作用研究

目的 研究细胞角蛋白基因１３（ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ １３,ＣＫ１３）在人鼻咽癌组织中的表达,并对其甲基化程度进行了检测。方法 应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术检测３２例鼻咽癌活检组织和８例慢性鼻咽炎组织中ＣＫ１３的表达情况。同时运用甲基敏感的限制性内切酶ＨｐａⅡ和ＭｓｐⅠ,结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,对鼻咽癌细胞 ＨＮＥ１及正常人上皮ＣＫ１３基因的甲基化状态进行检测。     

应用EST策略鉴定人类新基因UBAP1的数字化差异表达图谱

背景与目的：UBAP1（ubiquitin associated protein1）基因是我们先前在人类染色体9p21-22鼻咽癌杂合性丢失（loss of heterozygosity,LOH）高频区所获得的一个鼻咽癌相关新基因。进一步地,我们应用EST策略鉴定UBAP1基因在多种肿瘤组织中的差异表达谱。方法：采用基于生物信息学的电子杂交方法,即以UBAP1基因的全长cDNA为“探针”,利用计算机对人类表达序列标签（expressed sequence tag,EST）和Unigene等数据库中代表UBAP1的EST在各类肿瘤及相应正常组织cDNA文库中的分布进行综合分析,研究UBAP1基因的数字化差异表达图谱。同时采用差异RT－PCR方法对UBAP1在3种肿瘤活检组织中的差异表达进行验证。结果：电子杂交结果表明UBAP1基因不仅在42种人类正常组织中广泛表达,而且在11种肿瘤组织中存在可能的表达差异,尤其是在脑瘤、乳腺癌、结肠癌、皮肤癌、睾丸癌和宫颈癌等肿瘤组织中表达显著下调（P＜0．05）,而在肾癌、胰腺癌中高表达（P＜0．05）。进一步采用差异RT－PCR方法发现UBAP1基因在64％的脑膜瘤和72％的结直肠癌活检组织中具有明显表达缺失／下调。结论：UBAP1基因有可能与多种肿瘤的发生发展密切相关,有必要深入研究UBAP1基因的表达异常参与肿瘤发生发展的分子机制。     

Characterization of a novel epigenetically-silenced, growth-suppressive gene, ADAMTS9, and its association with lymph node metastases in nasopharyngeal carcinoma

By using a functional complementation approach, suppression of tumorigenicity was observed after transfer of intact or truncated copies of chromosome 3 into a nasopharyngeal carcinoma (NPC) HONE1 cell line. The extra exogenous chromosome 3 in the microcell hybrids (MCHs) significantly extended the lag period of tumor formation, which may be associated with loss or inactivation of wild type alleles from the normal donor chromosome 3. Representative tumors, which grew in nude mice were reconstituted into culture and expanded as tumor segregants (TSs). In our study, a disintegrin-like and metalloprotease with thrombospondin type 1 motif 9 (ADAMTS9), a gene mapping to 3p14.2, was identified to be critically associated with tumor suppression in NPC. Gene expression analysis showed that ADAMTS9 was either not expressed or was downregulated in HONE1 cells, TSs and NPC cell lines. The mechanism of ADAMTS9 gene inactivation in the NPC cell lines and tissues was attributed to promoter hypermethylation. Using a tissue microarray and immunohistochemical staining, 31 of 66 (47%) of the NPC cases showed downregulated or absence of ADAMTS9 expression. ADAMTS9 expression was downregulated or lost in 17 of 23 (73.9%) lymph node metastatic NPC specimens, which was significantly higher than in 14 of 43 (32.6%) primary tumors. After transfection of the ADAMTS9 gene into 7 NPC cell lines, a dramatic reduction of colony forming ability was observed. These findings support ADAMTS9 as a putative tumor suppressor gene in vivo in NPC that is significantly associated with lymph node metastases.     

组织芯片应用于原发性鼻咽癌中p53表达的高通量分析

目的 :通过对不同临床分期鼻咽癌(NPC)中 p5 3蛋白表达的进一步研究 ,探讨高通量组织微阵列技术 (high throughputtis suemicroarray)应用于大规模临床标本高效筛查的可行性。方法 :用组织阵列仪 (tissuearrayer)制备连续系列分区排列的组织芯片 ,然后用 p5 3单抗免疫组织化学法检测一张组织芯片上 3 2 0例各类型的鼻咽活检组织标本中 p5 3蛋白表达 ,并分析 p5 3表达在不同鼻咽组织的分布状况及其与临床分期的相关性。结果 :在正常鼻咽黏膜组织、癌旁组织及癌组织中 p5 3蛋白的检出率分别为 0 ( 0 / 2 9)、16 7% ( 4 / 2 4)及 61 4% ( 164 /2 67) ,NPC组织中 p5 3蛋白表达率明显高于其他鼻咽非癌组织 ,P <0 0 0 1,其中癌旁 4例全为弱阳性 ,癌组织中 164例中弱阳性为112例 ,占 41 9% ( 112 / 2 67) ,而强阳性为 5 2例 ,占 19 5 % ( 5 2 / 2 67) ;p5 3表达与鼻咽癌的临床分期无显著相关性 ,P =0 0 78,而p5 3过表达 (强阳性 )却与鼻咽癌的临床中晚期密切相关 ,P =0 0 0 71。结论 :鼻咽癌中 p5 3蛋白的高频核积累提示p5 3蛋白功能的抑制在鼻咽癌的发生发展中起重要作用 ;应用组织芯片 (tissuechip)大规模高效筛查临床组织标本是可行性的 ,具有快速、方便、经济的特点