丹参酮IIA 通过调控上皮间质转化抑制食管癌EC9706 和KYSE70 细胞的凋亡、侵袭和迁移

目的:探讨丹参酮IIA 对食管癌EC9706 和KYSE70 细胞侵袭和迁移的影响及其调控机制。方法:食管癌细胞系EC9706 和KYSE70 培养完成后分为4 组：对照组（加DMSO）和2、4、6 μg/ml 丹参酮组。采用CCK-8 法检测EC9706 和KYSE70 细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR和Western blotting 实验检测EMT相关蛋白E-cadherin、Snail-2、Vimentin 和N-cadherin mRNA和蛋白表达水平。结果：小于6 μg/ml的丹参酮IIA 不影响食管癌EC9706 和KYSE70 细胞增殖活力;4、6 μg/ml 丹参酮IIA 组细胞凋亡率明显高于对照组（均P<0.01）;2、4、6 μg/ml 丹参酮组每个视野下的侵袭细胞数及划痕愈合率明显低于对照组（均P<0.01）,且EC9706 和KYSE70 细胞形态由纺锤状的间充质形态转变为上皮形态。与对照组相比,2、4、6 μg/ml 丹参酮组E-cadherin 表达明显升高,Snail-2、Vimentin 和N-cadherin表达明显下降（均P<0.01）。结论：丹参酮IIA 通过抑制EMT促进食管癌EC9706 和KYSE70 细胞凋亡,并减弱其侵袭和迁移能力。     

上皮间充质转化对肺鳞状细胞癌侵袭和迁移能力的影响*

目的:研究肺鳞状细胞癌（lung squamous cell carcinoma ,LSCC）上皮间充质转化（epithelial-to-mesenchymal transition ,EMT ）的临床意义,并阐述EMT 对肺鳞癌侵袭转移能力的影响。方法:对79例肺鳞癌组织切片进行E-cadherin 、Vimentin 及TGF-β 1 的免疫组织化学染色,分析其临床意义。将肺鳞癌细胞系SK-MES-1 于含有不同浓度转化生长因子- β 1（transforming growth factor,TGF-β 1）的培养基中,分别诱导培养5、10d 后,利用Western blot、RT-PCR 检测E-cadherin 、Vimentin 的表达变化,以划痕、侵袭实验来判断不同浓度、诱导时间对SK-MES-1 细胞功能的影响。结果:肺鳞癌发生淋巴转移病例中E-cadherin 表达较未发生淋巴转移者低,而Vimentin 表达则高于未发生淋巴转移的病例,差异具有统计学意义（P < 0.05）。 TGF-β 1 阳性表达与淋巴结转移相关,差异具有统计学意义（P < 0.05）。 Western blot和RT-PCR 显示10ng/mL TGF-β 1 诱导培养的SK-MES-1 细胞中,Vi ?mentin 表达增强明显,E-cadherin 表达减弱。细胞划痕和侵袭实验结果表明SK-MES-1 经诱导后,迁移和体外侵袭能力增强。结论:肺鳞癌的淋巴转移与上皮间充质转化有关,TGF-β 1 可诱导肺鳞癌细胞发生EMT ,增强其侵袭和迁移的能力。      

靶向沉默脂肪酸合酶FASN基因对食管癌细胞失巢凋亡及转移水平的调控作用

目的:探究沉默脂肪酸合成酶(FASN)对食管癌肿瘤细胞失巢凋亡及转移的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定人正常食管上皮细胞系(HEEC)与人食管癌细胞系(CaES-17、EC109、EC9706、KYSE170、TE-1)中FASN mRNA表达水平。实验分为Control组、NC-shRNA组、FASN-shRNA1组、FASN-shRNA2组,分别将慢病毒介导的NC-shRNA、FASN-shRNA1、FASN-shRNA2转染到EC109细胞,倒置显微镜观察绿色荧光表达、qRT-PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测转染效果。应用聚羟乙基异丁烯酸(poly-HEMA)包被培养板模拟各组EC109细胞失巢凋亡,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,Calcein AM/EthD-1荧光双染法鉴定活细胞与死细胞。免疫荧光染色观察各组EC109细胞内上皮型钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)荧光染色,Western blot测定各组EC109细胞内E-cadherin、Vimentin、锌指转录因子(Snail...     

沉默FAM83D基因调控上皮-间质转化对食管鳞癌放射敏感性影响

目的 探讨沉默FAM83D对X线照射后食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、存活能力及侵袭、迁移能力的影响及机制。方法 采用免疫组化法检测 69例ESCC患者组织中FAM83D、E-cadherin、vimentin的表达。免疫印迹法检测ECA109、KYSE30细胞FAM83D基因沉默效果。MTS、克隆形成实验和Transwell方法检测ECA109、KYSE30细胞增殖活性、存活能力及侵袭能力。流式细胞术和免疫印迹法检测ECA109、KYSE30细胞凋亡分布、上皮-间质转化(EMT)及凋亡相关蛋白表达。结果 ESCC组织中55%(38/69) FAM83D强表达,36%(25/69) E-cadherin强表达,61%(42/69) vimentin强表达;FAM83D强表达与E-cadherin强表达呈负相关(r=-0.350,P<0.01),与vimentin强表达呈正相关(r=0.470,P<0.01)。ECA109、KYSE30细胞沉默FAM83D后降低了FAM83D蛋白表达(P<0.01)。MTS和克隆形成实验数据显示照射后沉默FAM83D显著抑制了ECA109、KYSE30细胞增殖水平(P<0.05)、增加了放射敏感性(P<0.01)。照射后FAM83D shRNA组ECA109、KYSE30细胞侵袭力降低(P<0.01)、E-cadherin表达增加,而N-cadherin、vimentin、Snail、p-Akt、p-GSK-3β表达降低(P<0.01)。照射后FAM83D shRNA组ECA109、KYSE30细胞凋亡率明显增加(P<0.01),同时Bcl-2、Mcl-1表达下调,Cleaved caspase-3的表达上调(P<0.01)。结论 FAM83D与ESCC的侵袭发展密切相关。沉默ECA109、KYSE30细胞FAM83D表达联合X线照射降低了其增殖、侵袭和存活能力,诱导了细胞凋亡,增加了放射敏感性,该作用可能通过Snail/Akt/GSK-3β信号途径来调控EMT。     

食管鳞癌中lncRNA uc061hsf.1的表达及对Eca109、KYSE450细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨uc061hsf.1基因在食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）中表达及其对Eca109与KYSE450细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响。方法:本文对34例ESCC组织及癌旁组织进行RT-PCR检测，分析uc061hsf.1的表达与ESCC临床病理特征关系；通过在Eca109与KYSE450细胞系中沉默和上调uc061hsf.1表达，分别检测两组细胞增殖、凋亡、侵袭能力的变化。结果:uc061hsf.1在ESCC组织中低表达，其表达水平在分化差、淋巴结转移的患者中更低（P均＜0.05），与年龄、性别等无明显相关性；沉默uc061hsf.1可导致Eca109与KYSE450细胞系增殖及侵袭能力均明显升高，细胞凋亡无明显变化；相反，上调uc061hsf.1在这两组细胞系中的表达，则两组细胞系的增殖和侵袭能力均明显降低，且细胞凋亡率明显增加。结论:uc061hsf.1沉默可促进食管鳞癌Eca109与KYSE450细胞增殖和侵袭能力；而过表达uc061hsf.1能够抑制Eca109与KYSE450细胞增殖和侵袭，且促进细胞凋亡。     

转录因子Snail对食管癌Eca-109细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Snail在诱导食管癌细胞侵袭和迁移中的作用及机制。方法 采用慢病毒转染构建食管癌细胞株Eca-109-Snail和Eca-109-vc,Real-time PCR及Western blot实验分别检测其mRNA及蛋白表达水平,Transwell及细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。 结果 慢病毒转染细胞株构建成功。经Real-time PCR及Western blot实验鉴定慢病毒转染后的Eca-109-Snail细胞Snail表达量升高,细胞表现出成纤维细胞样外形,细胞之间彼此分离;Eca-109-Snail细胞E-cadherin表达下降,Vimentin和MMP-2表达上升,其侵袭和迁移能力较空载体对照组增强,差异均具有统计学意义（P<0.01）。 结论 Snail通过诱导食管癌Eca-109细胞发生上皮间质转化,进而提高其侵袭和迁移能力。     

miR-34a对结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制探讨

目的 探讨miR-34a对结肠癌细胞株SW480增殖、侵袭和迁移能力的影响及可能的作用机制。方法将miR-34a过表达慢病毒、空病毒载体转染SW480细胞,未做处理细胞作为空白对照组。Real-time PCR检测各组细胞内miR-34a的表达;CCK8法检测细胞增殖能力;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测细胞内E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果 与空病毒载体组及空白对照组相比,转染组细胞中miR-34a的表达增高,且细胞增殖效率、侵袭和迁移能力降低(P＜0.05),miR-34a使E-cadherin蛋白表达增加、Vimentin蛋白表达降低。结论 miR-34a可抑制结肠癌细胞SW480增殖、侵袭和迁移能力,并能影响E-cadherin和Vimentin的表达,miR-34a有望成为干预结肠癌转移和复发的分子靶点。     

热休克蛋白 HSP27 抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移能力简

目的：探讨HSP27分子的表达水平与食管鳞癌高、低转移潜能细胞系侵袭转移能力的关系。方法：选用EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L两对食管鳞癌高、低转移潜能细胞系,利用细胞划痕实验检测不同细胞侵袭转移能力的差异;利用Western blot检测HSP27在不同转移潜能细胞中的表达水平;利用慢病毒转染技术上调HSP27低表达细胞中HSP27的表达,采用细胞划痕实验检测其侵袭转移能力的变化。结果：细胞划痕实验证实,EC9706-H细胞和EC109-H细胞的体外侵袭转移能力高于EC9706-L细胞和EC109-L细胞;Western blot实验结果显示,HSP27在EC9706-H细胞和EC109-H细胞中呈低表达,在EC9706-L细胞和EC109-L细胞中呈高表达;通过慢病毒转染技术上调EC9706-H细胞和EC109-H细胞中HSP27的表达,二者的侵袭转移能力明显降低。结论：HSP27与食管鳞癌的侵袭转移能力呈负相关,即HSP27高表达的食管鳞癌细胞其侵袭转移能力受到抑制。     

Src酪氨酸激酶抑制剂dasatinib对人食管鳞癌细胞KYSE180生长及凋亡的影响

目的:探讨Src酪氨酸激酶抑制剂dasatinib对人食管鳞癌细胞生长和凋亡的影响及其相关机制.方法:采用蛋白质印迹法检测食管鳞癌细胞株KYSE180、EC109、KYSE30和人永生化食管上皮细胞株SHEE中总Src和磷酸化Src激酶的表达.用不同剂量的Src酪氨酸激酶抑制剂dasatinib作用KYSE180细胞后,分别采用MTT法、FCM法、蛋白质印迹法和裸鼠皮下移植瘤实验观察dasatinib对KYSE180细胞Src激酶的抑制作用,以及对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和裸鼠皮下移植瘤的影响.结果:KYSE180、EC109和KYSE30细胞中Src激酶显著活化,而在SHEE细胞中未见活化Src激酶.Dasatinib可显著抑制KYSE180细胞增殖,阻碍细胞G1/S期转换,促进细胞凋亡,并上调caspase 3、cytochrome C和Bax等凋亡相关蛋白的表达.另外,dasatinib可显著抑制裸鼠皮下KYSE180细胞移植瘤的生长.结论:Dasatinib可通过抑制食管鳞癌细胞增殖、促进细胞凋亡以及影响细胞周期等机制,抑制食管鳞癌细胞皮下移植瘤的生长,因此其可望成为治疗食管鳞癌的一个有效药物.     

RACK1对食管鳞癌细胞侵袭转移能力的抑制作用

目的:探讨RACK1表达水平与食管鳞状细胞癌不同转移潜能细胞侵袭转移能力的关系.方法:Transwell实验检测食管鳞癌EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L细胞的转移潜能;利用RT-PCR和Western blot方法,检测食管鳞癌高低转移细胞系EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L中RACK1的mRNA和蛋白表达水平.利用慢病毒转染技术上调RACK1低表达细胞中RACK1的表达后,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的变化.结果:EC9706-H细胞和EC109-H细胞的体外侵袭和迁移能力显著高于EC9706-L和EC109-L细胞系.RT-PCR和Western blot实验结果显示,RACK1在EC9706-H细胞和EC109-H细胞中呈低表达;而在EC9706-L细胞和EC109-L细胞中呈高表达.通过慢病毒转染技术上调EC9706-H和EC109-H细胞系中RACK1的表达,二者的侵袭转移能力明显降低.结论:RACK1表达水平与食管鳞癌细胞的侵袭转移能力负相关,过表达RACK1能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移能力.这提示,RACK1在食管鳞癌的侵袭转移中发挥重要作用,有可能成为其诊断、治疗及预后评估的新靶点.     

尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用

目的：比较选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法：选取食管鳞癌细胞株EC 109、KYSE 150和TE-1,采用Western blot方法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,观察尼美舒利对各组细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结果：COX-2蛋白在EC 109细胞中呈高表达,KYSE 150细胞中呈中等度表达,TE-1细胞不表达COX-2蛋白。尼美舒利在50μmol/L-400μmol/L浓度区间可抑制EC 109、KYSE 150细胞的增殖（P〈0.05）,并呈剂量依赖性,在400μmol/L时对TE-1细胞有抑制作用。EC 109细胞尼美舒利的IC50值最低,KYSE150次之,TE-1最高。尼美舒利可使EC 109和KYSE 150的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。结论：尼美舒利对表达COX-2的食管鳞癌细胞有较好的增殖抑制和促凋亡作用。     

Claudin-2蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其对KYSE450细胞恶性生物学行为的影响

目的:分析Claudin-2蛋白在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其与患者临床病理特征、5年生存率的关系,探索其对ESCC细胞KYSE450的增殖、迁移和侵袭的影响.方法:选取河南省肿瘤医院2010至2013年间初治的ESCC患者手术切除肿瘤组织5...     

Gankyrin oncoprotein overexpression as a critical factor for tumor growth in human esophageal squamous cell carcinoma and its clinical significance

To elucidate the possible involvement of gankyrin in ESCC progression and the effect of its down-regulation in ESCC, we investigated the expression of gankyrin in ESCC tissues comparing it with the corresponding normal esophageal epithelia and tested a short-hairpin RNA (shRNA) expression vector for gankyrin in ESCC cell lines. Gankyrin protein expression in 11 ESCC cell lines (KYSE series) was examined by RT-PCR and western blot. The expression of gankyrin mRNA in 30 ESCC tissues was compared with the corresponding normal epithelia by Real-time PCR. Expression of gankyrin protein was immunohistochemically analyzed in the ESCC of 103 patients. A gankyrin-shRNA vector was stably transfected into KYSE 170 cells to assess the role of gankyrin in cell motility, invasion and proliferation in vitro and tumor formation in vivo. Gankyrin expression increased in all 11 ESCC cell lines. Real-time PCR revealed that gankyrin expression was higher in the cancerous tissue for all 30 patients. In immunohistochemistry, gankyrin overexpression was correlated with lower survival rate (p = 0.0001), extent of the primary tumor, lymph node metastasis, distant lymph node metastasis and stage (p = 0.0072, p = 0.0004, p = 0.0172 and p = 0.0002, respectively). A shRNA vector against gankyrin repressed growth, cell motility, invasiveness in vitro and tumor formation in vivo. Gankyrin overexpression is associated with poor prognosis. It may play an important role in ESCC tumor progression and could be a potentially important therapeutic gene target in ESCC.     

LETM2在食管鳞癌中的表达及其作用

  目的  探讨LETM2在食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的表达,研究LETM2对ESCC细胞系KYSE150和ECA109增殖和侵袭迁移的影响。  方法  免疫组化（immunohistochemistry,IHC）检测90例ESCC及癌旁组织LETM2蛋白表达差异,RT-PCR和Western blot检测ESCC细胞系LETM2表达情况,慢病毒敲低KYSE150和ECA109细胞中LETM2表达。MTT和克隆形成技术检测LETM2对ESCC细胞增殖和克隆形成能力的影响,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell法分析LETM2敲低后细胞迁移侵袭能力的差异。  结果  在ESCC组织中LETM2的表达显著高于癌旁组织,LETM2通过抑制ESCC细胞G₁期向S期转化进而抑制细胞增殖,但对侵袭和迁移能力影响不大。  结论  LETM2可能作为驱动基因促进ESCC的发生发展,是ESCC的关键遗传变异,可能作为ESCC早诊早治的分子标志物。      

Nuclear expression of Twist promotes lymphatic metastasis in esophageal squamous cell carcinoma

Twist-1 protein (also called Twist) has been suggested to be involved in tumor epithelial-mesenchymal transition (EMT) related progression, however, the mechanism by which twist promotes lymph node metastasis is not fully understood. In the present study, we found that nuclear twist expression is clearly correlated with lymph node (LN) metastasis as determined by immunohistochemistry (IHC). A highly invasive EC109 cell subline, EC109-P, was established by repeated in vitro transwell isolations for the cell model. Immunofluorescence (IF) assay demonstrated that nuclear twist expression was markedly higher in the highly invasive EC109-P cell line when compared with EC109 and EC9706 cells. Based on our cell model, the function and mechanism by which twist regulates LN metastasis in ESCC was investigated. The results showed that the overexpression of Twist could significantly increase the invasion and VEGF-C expression of EC9706 cells, whereas the knockdown of twist expression results in the opposite effects. This finding was further strengthened by the results of the analysis of co-expression of twist and VEGF-C by IHC in ESCC clinical samples. In summary, our study indicates that nuclear twist plays an important role in ESCC lymphatic metastasis by increasing the expression of VEGF-C. The combination of twist and VEGF-C detection could be a reliable prediction of LN metastasis in ESCC.     

SOX11 抑制食管癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的 探讨转录因子SOX11 在食管癌组织和细胞系中的表达及对人食管癌细胞EC109增殖和迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法 qRT-PCR和免疫组织化学法分析SOX11在食管癌组织、细胞系(EC109、KYSE150、KYSE410 和 KYSE510)及正常食管上皮细胞 HEEC的表达;分别转染 pcDNA3.1(+)-Flag-SOX11 质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至EC109细胞系,qRT-PCR验证SOX11的过表达;CCK-8实验和Transwell实验分析SOX11对细胞增殖和迁移能力的影响;qRT-PCR及Western blot验证SOX11对细胞增殖和迁移的相关标志物表达分析。结果 与食管上皮组织相比,SOX11 mRNA 和蛋白在食管癌组织中的表达明显下调;SOX11的蛋白表达下调与肿瘤分级(P=0.014)、T分期(P=0.036)、淋巴结转移(P=0.014)相关;同时与食管上皮细胞相比,SOX11 mRNA在食管癌细胞中表达下调,差异具有统计学意义(P＜0.001);与对照组相比,实验组24、48、72 h细胞活性受到明显抑制(P＜0.05);实验组细胞迁移能力明显受到抑制(P＜0.001);与对照组相比,实验组中active-β-catenin 及下游的基因受到了明显的抑制。结论 SOX11在人食管癌组织和细胞系中表达下调,可能通过拮抗Wnt/β-catenin信号通路参与食管癌的进程。     

过表达lncRNA LINC00886 抑制食管鳞状细胞癌Eca109 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的: 检测lncRNA LINC00886 在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织及细胞系中的表达及其对Eca109 细胞体外增殖、迁移及侵袭的影响。方法: 收集2014 年6 月至2016 年12 月河北医科大学第四医院生物标本库69 例ESCC手术患者的癌及对应的癌旁组织标本,以及ESCC细胞系Eca109、TE13、TE1、Kyse150、Yes-2 和Kyse170,用qPCR 法检测LINC00886 在ESCC组织及细胞系中的表达情况。分别用pIRES2-LINC00886、pIRES2-NC转染Eca109 细胞,用qPCR法检测pIRES2-LINC00886 转染Eca109细胞后LINC00886 的过表达效率;用MTS、克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell 侵袭实验分别检测过表达LINC00886 对Eca109 细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果: 在ESCC组织中LINC00886 表达水平明显低于癌旁组织（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）。LINC00886 在ESCC 细胞中的表达水平也低于对照组（均P<0.01）。转染pIRES2-LINC00886 后,Eca109 细胞中LINC00886 的表达水平显著高于对照组（均P<0.05）。与对照组相比,过表达LINC00886 明显抑制Eca109 细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。结论: lncRNA LINC00886 低表达可能与ESCC的发生发展相关,过表达LINC00886可抑制ESCC细胞的增殖、迁移与侵袭能力。     

尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用

目的:比较选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法:选取食管鳞癌细胞株EC 109、KYSE 150和TE-1,采用Western blot方法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,观察尼美舒利对各组细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结果:COX-2蛋白在EC 109细胞中呈高表达,KYSE 150细胞中呈中等度表达,TE-1细胞不表达COX-2蛋白。尼美舒利在50μmol/L-400μmol/L浓度区间可抑制EC 109、KYSE 150细胞的增殖(P<0.05),并呈剂量依赖性,在400μmol/L时对TE-1细胞有抑制作用。EC 109细胞尼美舒利的IC50值最低,KYSE150次之,TE-1最高。尼美舒利可使EC 109和KYSE 150的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。结论:尼美舒利对表达COX-2的食管鳞癌细胞有较好的增殖抑制和促凋亡作用。