苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡及其作用机制。方法将浓度为0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.6 mg/ml的苦参碱作用于卵巢癌细胞株A21-2和骨肉瘤细胞株MG63,利用倒置相差显微镜观察不同浓度苦参碱作用后细胞的形态变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡周期、Caspase-3蛋白的表达。结果倒置相差显微镜观察表明,苦参碱能抑制MG63细胞和A21-2细胞的增殖;FCM分析发现,苦参碱与细胞作用72h后,C_0/G_1期前出现凋亡峰,与对照组比较,观察组不同浓度下凋亡率升高(P<0.01),且随浓度升高,凋亡率亦增高,差异有统计学意义(P<0.05),FCM分析显示,与对照组比较,观察组不同浓度下Caspase-3蛋白表达升高(P<0.01),且随浓度升高,Caspase-3蛋白表达亦升高,差异有统计学意义(P<005)。结论苦参碱能明显抑制A21-2细胞和MG63细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与促进Caspase-3蛋白的表达有关。     

活性氧激活线粒体凋亡通路介导高糖诱导心肌细胞凋亡的研究

目的探讨氧化应激和p53介导的线粒体凋亡通路在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的作用。方法将培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机分为四组：对照组、高糖组（葡萄糖浓度为25mmol/L）、高糖＋抗氧化剂组（抗氧化剂浓度为10mmol/L）和高糖＋p53抑制剂组（p53抑制剂浓度为50μmol/L）。荧光分光光度计检测细胞内的活性氧,分光光度计检测上清液中的超氧化物歧化酶,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot对各组细胞p53和Caspase-9进行半定量分析。结果与对照组相比,高糖组心肌细胞凋亡率（P〈0.01）和ROS明显升高（P〈0.01）,上清液中的SOD含量明显降低（P〈0.01）,Caspase-9（P〈0.01）和线粒体蛋白p53表达增多（P〈0.01）。与高糖组相比,高糖＋抗氧化剂组心肌细胞凋亡率（P〈0.01）和ROS明显降低（P〈0.01）,上清液中SOD明显升高（P〈0.01）,Caspase-9（P〈0.01）和线粒体蛋白p53表达减少（P〈0.01）。与高糖组相比,高糖＋p53抑制剂组的心肌细胞凋亡率（P〈0.01）和ROS明显降低（P〈0.05）,上清液中SOD含量升高（P〈0.05）,Caspase-9（P〈0.01）和线粒体蛋白p53表达减少（P〈0.01）。结论高糖可能通过产生的活性氧介导p53转位到线粒体激活线粒体凋亡通路,引起心肌细胞凋亡。     

苦参碱对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Fas/FasL表达的影响

目的：探讨中药苦参碱对人Burkitts淋巴瘤Raji细胞凋亡的作用及其可能机制.方法：应用MTT法测定苦参碱对Raji细胞生长的抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;WesternBlot检测Fas,FasL,Caspase-3蛋白的表达量.结果：苦参碱0.2～1.6g/L作用Raji细胞24,48,72h后,对Raji细胞生长具有增殖抑制作用,且呈明显的量效和时效关系,48h半数抑制浓度（IC50）为1.34g/L.苦参碱0.4,0.8,1.6g/L组作用48h后,Raji细胞总凋亡率分别为15.10%,27.88%,48.08%,与对照组8.78%相比较差异具有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）.Western Blot检测结果显示Fas,FasL,Caspase-3蛋白表达水平随苦参碱浓度的提高而增加.结论：一定浓度苦参碱可诱导Raji细胞发生凋亡,其凋亡机制可能与上调Fas,FasL蛋白的表达以及激活Caspase-3有关.     

芍药苷抑制FasL诱导的Fas/FasL信号转导通路的实验研究

目的探讨芍药苷对Fas配体（FasL）诱导大鼠颈椎间盘纤维细胞的Fas/FasL信号转导通路的影响。方法采用1月龄SD大鼠（雌雄不拘）的颈椎间盘纤维环,采用酶消化法,建立椎间盘纤维环细胞体外培养。传至3代纤维环细胞,建立FasL诱导体外培养纤维环细胞凋亡模型。实验中,将细胞随机分为空白组、模型组和药物组,模型组应用适宜浓度的Fas配体（FasL）诱导其凋亡,药物组在FasL诱导的同时给予适宜浓度芍药苷培养液干预。Annexin V/FITC法检测细胞凋亡率,分别鉴定模型复制情况及观察芍药苷保护作用;荧光定量PCR技术检测Fas、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平。结果药物组纤维环细胞的凋亡率明显低于模型组（P〈0.01）,药物组的Fas、Caspase-3、Caspase-8凋亡因子基因的表达明显低于模型组（P〈0.01）。结论芍药苷可通过下调纤维环细胞的Fas、Caspase-3、Caspase-8的基因表达,抑制Fas/FasL信号转导通路,从而降低纤维环细胞的凋亡率。     

苦参碱诱导HepG2细胞凋亡与cyclin D1和p27kip1关系的实验观察

目的研究苦参碱抗肿瘤机制，初步探讨其与细胞周期调控蛋白cyclin D1和p27^kip1是否有关。方法苦参碱诱导后运用电镜、流式细胞仪方法检测HepG2细胞形态及细胞周期分布，并用免疫细胞化学法检测细胞内cyclin D1和p27^kip1蛋白表达变化。结果发现苦参碱诱导HepG2细胞凋亡，使细胞周期停滞于G1期。随着干预的苦参碱浓度增加cyclin D1下调，而p27^kip1蛋白上调，有统计学意义（P〈0．05）。结论苦参碱抗肿瘤机制可能是诱导肿瘤细胞凋亡，与细胞周期调控蛋白cyclin D1和p27^kip1有关。     

苦参碱对胰腺癌PC-3细胞凋亡及Bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参碱对人胰腺癌PC-3细胞增殖和凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和bax的影响,为苦参碱在抗肿瘤临床应用提供理论基础。方法应用MTT法检测苦参碱对人胰腺癌PC-3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测苦参碱对PC-3细胞凋亡的影响,RT-PCR检测苦参碱对PC-3细胞Bcl-2和bax表达的影响。结果 MTT结果显示苦参碱对PC-3细胞的生长抑制作用呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性（P〈0.01）。苦参碱能诱导PC-3细胞凋亡（P〈0.01）。苦参碱能明显的抑制PC-3细胞Bcl-2基因mRNA的表达;诱导bax基因mRNA的表达（P〈0.01）。结论苦参碱呈现浓度依赖性和时间依赖性抑制PC-3细胞的生长,诱导细胞凋亡,其作用与抑制PC-3细胞Bcl-2和bax基因mRNA的表达密切相关。     

血红素氧合酶-1对体外氧糖剥夺海马神经元Caspase-12表达抑制作用的研究

目的研究HO-1对氧糖剥夺海马神经元Caspase-12的影响及其机制.方法将培养7d的大鼠海马神经元随机分为4组：正常培养组（C组）、正常培养＋血晶素组（C＋H组）、氧糖剥夺组（D组）、氧糖剥夺＋血晶素组（D＋H组）.C组正常培养方法培养.C＋H组在正常培养的神经元培养液中加入血晶素使其终浓度为10μmol/L后按正常培养24h.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D＋H组神经元用10μmol/L血晶素处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.进行神经元纯度鉴定,细胞存活率的检测,HO-1、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和神经元凋亡的检测.结果C＋H组神经元HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3、神经元存活率和神经元凋亡率变化无统计学意义（P〉0.05）;D组神经元HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3高于C组（P〈0.01）,神经元存活率低于C组（P〈0.01）,神经元凋亡率高于C组（P〈0.01）;D＋H组神经元HO-1表达高于D组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3低于D组（P〈0.01）,神经元存活率高于D组（P〈0.01）,神经元凋亡率低于D组（P〈0.01）.结论HO-1可抑制氧糖剥夺海马神经元Caspase-12的表达,从而抑制神经元的凋亡.     

苦参碱诱导K562细胞向红系分化伴随凋亡

目的 体外研究苦参碱诱导K562细胞向红系分化伴随的细胞凋亡改变.方法 体外培养K562细胞,采用不同浓度的苦参碱诱导K562细胞4 d.分别采用倒置显微镜、透射电子显微镜观察诱导前后细胞的形态学和超微结构改变,进一步采用免疫细胞化学方法检测细胞周期调控蛋白p27kipl表达变化.结果 与阴性对照组K562细胞相比,0.10/gL浓度的苦参碱诱导后K562细胞形态学和超微结构均显示有凋亡特征,同时细胞内p27kipl蛋向表达明显增加.结论 苦参碱在体外诱导K562细胞向红系分化伴随凋亡.可能与p27kipl蛋白表达增加相关.     

熊果酸对肝星状细胞内活性氧产生的影响及与细胞调亡的关系

目的：体外观察熊果酸对肝星状细胞内活性氧（ROS）的产生、细胞凋亡、NF-κB核易位及X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP ）mRNA表达的影响,探讨熊果酸诱导肝星状细胞凋亡的机制。方法：取对数生长期的肝星状细胞（HSC-T6）进行分组：A组：瘦素(100 ng/ml)刺激组,B组：瘦素+熊果酸（50μM）组,C组：瘦素+ N-乙酰-L半胱氨酸（10mM）组,D组：空白对照组。检测DCF荧光强度（反映ROS水平）、细胞凋亡率、NF-κB（P65）核移位率; XIAP mRNA的表达。结果：1. A组HSC-T6细胞内DCF荧光强度明显强于D组,B组、C组细胞内ROS水平明显降低于A组（均P<0.001）。2．A组在48h的HSC-T6细胞凋亡率低于D组（P<0.05）;B组在48h的 HSC-T6凋亡率不仅明显高于A组（P<0.001）, 而且高于C、D组（均P<0.05）。3．A组细胞凋亡率显著高于D组（P<0.001）;B组、C组的NF-κB核移位率均显著低于A组（均P<0.001）;4．瘦素作用HSC-T6细24h的XIAP mRNA表达显著高于D组（P<0.01）;B组、C组在12h、24h的表达均低于A组(P<0.01 或P<0.05)。结论：熊果酸能抑制瘦素刺激HSC-T6细胞引起的ROS产生,并能诱导HSC-T6细胞凋亡,其机制可能与抑制ROS对 NF-κB的活化,下调XIAP基因表达有关。     

二氢青蒿素对膀胱癌T24细胞株的抑制作用及其机制研究

目的探讨二氢青蒿素体外抗膀胱癌T24细胞株活性及相关机制。方法采用体外培养的T24细胞株为研究对象,流式细胞仪检测二氢青蒿素作用后T24细胞凋亡率,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞凋亡关键蛋白p53、Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达变化。结果二氢青蒿素能够诱导T24肿瘤细胞凋亡（P〈0.01）,且呈剂量-效应关系;二氢青蒿素还可引发T24肿瘤细胞Caspase-3活性水平升高（P〈0.05或P〈0.01）,促凋亡蛋白Caspase-3、Bax高表达（P〈0.01）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低（P〈0.01）,且均呈现时间-效应关系。p53表达水平无显著改变（P〉0.05）。结论二氢青蒿素具有明确的抑制膀胱癌T24细胞株的效应,其机制可能是激活非依赖于p53的Bcl-2家族介导的细胞色素C途径,进而引发T24细胞凋亡。     

苦参碱抑制人肾癌细胞系GRC-1细胞株增殖和促凋亡的实验研究

目的观察苦参碱对体外人肾癌细胞系GRC-1细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨苦参碱诱导GRC-1细胞株凋亡的作用机制。方法应用不同浓度的苦参碱分别作用于人肾癌细胞系GRC-1细胞株24、48、72、96h。采用MTT法观察苦参碱对GRC-1细胞株的细胞毒作用;透射电镜和流式细胞术观察、检测苦参碱诱导的细胞凋亡;免疫细胞化学技术检测苦参碱对GRC-1细胞株Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果不同浓度的苦参碱对GRC-1细胞株均有一定的增殖抑制作用,且呈量效和时效关系。苦参碱能明显诱导GRC-1细胞株凋亡。经苦参碱作用后,GRC-1细胞株Bcl-2蛋白表达明显减弱而Bax蛋白表达明显增强。结论苦参碱对体外人肾癌细胞系GRC-1细胞株有一定的增殖抑制作用,其机制可能与调节Bcl-2/Bax蛋白表达比值以诱导细胞凋亡相关。     

奥曲肽对大鼠肝星状细胞增殖的抑制作用

目的：观察奥曲肽（OCT）对肝星状细胞（HSC）Ⅰ型、Ⅲ型胶原和基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因及蛋白表达的影响,阐明其抗肝纤维化的机制。方法：体外培养rHSC-99细胞,以不同浓度OCT作用24　h后,MTT法观察细胞增殖,ELISA法测定上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原,半定量RT-PCR法检测MMP-2、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：与对照组比较,OCT能显著抑制体外培养的rHSC-99增殖(P<0.05),在一定剂量范围（1～8 μg?L-1）内,随着OCT浓度升高,细胞增殖抑制率增加。与对照组比较,OCT各组细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原浓度明显降低(P<0.05),且Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组比较,OCT组MMP-2 mRNA呈高表达（P<0.05)。结论：OCT能抑制HSC增殖,下调Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA及其蛋白表达,上调MMP-2 mRNA表达水平,这可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

苦参碱诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨苦参碱对人RD横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用。方法将不同浓度的苦参碱作用于培养的RD横纹肌肉瘤细胞，通过MTT比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、电子显微镜技术观察检测细胞凋亡，研究分析其对RD横纹肌肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果苦参碱浓度为0．5、1．0、1．5g／L时，细胞生长抑制率分别为13．2％、23．7％、40．5％；流式细胞术测定RD横纹肌肉瘤细胞的凋亡率分别为10．1％、17、7％、26．3％；DNA电泳见DNA“梯形”图谱；电镜显示肿瘤细胞的凋亡形态。结论苦参碱能抑制RD横纹肌肉瘤细胞增殖，诱导其凋亡。     

苦参碱抑制U937细胞增殖与诱导凋亡的体外实验研究

目的 探讨苦参碱对U937细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 U937细胞培养:在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中传代培养,细胞处于对数生长期时加药;通过细胞生长曲线、细胞形态、MTT实验、细胞周期测定、乳酸脱氢酶(LDH)活性测定方法观察苦参碱对U937细胞的诱导凋亡与增殖的影响.结果 与对照组相比,0.2～1.0 mg/mL的苦参碱均显著抑制U937细胞的生长(P＜0.01),且苦参碱对U937细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性,苦参碱作用U937细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)为0.4 mg/mL;随细胞增殖LDH比活性相应上升,与对照组相比,0.2、0.3 mg/mL苦参碱组LDH比活性均明显降低(P均＜0.01),苦参碱作用浓度越高,LDH比活性降低越明显;0.2～1.0 mg/mL苦参碱可使U937细胞发生S期阻滞,且随苦参碱浓度增加,G0/G1期细胞减少和S期细胞增多越明显(P＜0.01).结论 0.2～1.0 mg/mL苦参碱对U937细胞具有诱导凋亡与增殖抑制作用,呈时间-剂量依赖关系.     

苦参碱对大肠癌细胞凋亡发生及Bad蛋白表达的影响

目的 观察苦参碱(matrine)对体外大肠癌细胞凋亡发生及Bad蛋白表达的影响.方法 大肠癌LOVO细胞株分为对照组和苦参碱不同浓度作用组,将终浓度分别为0.1、0.5、2.5g/L的苦参碱加入培养液中,观察大肠癌细胞形态学变化,测定各组苦参碱作用1、4、16h后的细胞活力(MTT法)、细胞凋亡率(流式细胞术)、Bad蛋白含量(免疫组化法和western blot法).结果 与对照组比较,苦参碱组出现细胞皱缩、脱壁、细胞漂浮及细胞破碎现象,细胞活力显著降低,细胞凋亡率增加,Bad蛋白表达增加,有明显的时间和浓度依赖关系.结论 苦参碱能提高大肠癌细胞凋亡发生率和Bad蛋白的表达.     

苦参碱抑制人大肠癌HT29细胞增殖及诱导凋亡作用与机制

目的探讨苦参碱对人大肠癌HT29细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及其可能机制。方法分别采用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡、透射电镜观察细胞结构变化、基因芯片检测细胞基因表达改变。结果0.0625～0.5mg/mL苦参碱处理48h后,细胞增殖明显受抑制;但1mg/mL时增殖抑制率降低而凋亡诱导作用明显增强;苦参碱对细胞G2/M和G1/S期均有阻滞作用;电镜下可见凋亡的形态学变化;基因芯片检测发现苦参碱影响细胞增殖、周期和凋亡相关基因的表达。结论苦参碱通过影响HT29细胞一些与增殖、周期和凋亡相关基因的表达发挥增殖抑制和凋亡诱导作用,且与苦参碱质量浓度相关。     

苦参碱诱导血管紧张素Ⅱ作用的心肌成纤维细胞凋亡

目的 :研究苦参碱 (matrine,Mat)诱导血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )作用的小鼠心肌成纤维细胞 (cardiacfi broblast,CFB)凋亡及相关调控蛋白表达的影响。方法 :不同浓度苦参碱作用于体外培养AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞 ,利用倒置显微镜、PI/Hoechst 33342双染结合荧光显微镜技术观察细胞形态 ;流式细胞术检测其凋亡率、细胞周期及凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达的改变 ;采用WesternBlotting检测Caspase 3蛋白的表达。 结果 :不同浓度Mat处理AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞 2 4h ,可见到染色质浓缩、边集、碎裂 ;凋亡率随浓度的升高而升高 ;细胞周期分析显示G1升高 ,S期下降 ,G2 /M期无明显变化 ;,Bcl 2的表达量减少 ;Bax的表达量增加且呈剂量效应 ;WesternBlotting检测显示Caspase 3活化。结论 :Mat诱导AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞凋亡且呈剂量效应 ,其机制可能与降低Bcl 2、升高Bax、增强Caspas 3活性有关。     

甲孕酮联合苦参碱对耐药细胞株K562/AO2多药耐药逆转作用的研究

目的应用甲孕酮(MPA)联合苦参碱(MAT)逆转人白血病细胞株K562/AO2对阿霉素的耐药性,观察联合用药逆转耐药的疗效。方法用MTT法检测MPA与MAT的细胞毒性,荧光分光光度法检测各组细胞内药物(ADM)浓度的改变,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况,流式细胞术检测细胞的p-gp表达情况。结果(1)确定了甲孕酮及苦参碱对K562/AO2细胞的非细胞毒性剂量和低细胞毒性剂量,确定了非细胞毒性剂量的两药联合应用后未出现毒性叠加。(2)在与ADM合用时,K562/AO2+甲孕酮及K562/AO2+苦参碱组,细胞凋亡百分率均高于K562/AO2耐药组(P<0.05,P<0.01),但均低于K562/AO2+甲孕酮+苦参碱组(P<0.01,P<0.05)。(3)与K562比较,K562/AO2细胞中P-gP呈高表达;与K562/AO2耐药组比较,K562/AO2十苦参碱组及K562/AO2+甲孕酮组P-gp表达量降低(P<0.01),但当两者联合应用时作用大于两者单独作用。(4)与ADM组比较苦参碱、甲孕酮均能提高K562/AO2细胞内ADM浓度,P均<0.01,两者联合应用时作用大于两者单独作用。结论非细胞毒性剂量的...     

苦参碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进非小细胞肺癌A549 细胞的自噬和凋亡

目的探讨苦参碱对非小细胞肺A549细胞增殖的抑制作用及潜在的分子机制。方法苦参碱（终浓度为0、0.4、0.8、1.2、 1.6、2.0 g/L）处理非小细胞肺癌A549细胞24、48、72 h,采用CCK-8检测A549细胞的存活情况,荧光显微镜下观察A549细胞的 形态学变化,流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡情况,Western blot 分析苦参碱和PI3K特异性抑制剂LY294002（10 nmol/L）对 A549细胞AKT信号通路和自噬相关蛋白的影响。结果苦参碱对A549细胞增殖的抑制作用呈时间-剂量依赖性（P<0.05）,当 苦参碱浓度达到1.6 g/L时,细胞萎缩加剧,细胞碎片和悬浮细胞明显增多,吖啶橙染色,可以观察到自噬液泡。FCM分析显示 随着苦参碱浓度增加,细胞凋亡率也升高,浓度为0.8~1.6 g/L的苦参碱诱导细胞凋亡呈时间和剂量依赖性增加。同时,1.6 g/L苦 参碱和LY294002（10 nmol/L）组p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平较对照组明显减低（P<0.05）,自噬相关轻链蛋白3B（LC 3B）表 达水平高于对照组（P<0.05）。结论苦参碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性,抑制A549细胞增殖,诱导细胞自噬和 凋亡,苦参碱可能是一种潜在的肺癌治疗药物。