瘦素与胰岛细胞

瘦素抑制或促进胰岛素 (INS)分泌 ,又可刺激瘦素产生。体内与体外试验均证实瘦素可通过增加脂肪酸氧化和减少其酯化来减少胰岛细胞内甘油三酯的含量 ,通过使一氧化氮水平降低 ,诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达下降 ,B细胞淋巴瘤白血病 2 (BCL 2 )等抗凋亡因素的表达增加以实现其阻止脂性凋亡及脂毒性的作用。并且瘦素可通过上调节胰岛细胞内节俭基因———解偶联蛋白 2mRNA表达以达到其下丘脑途径外的产热作用 ,从而调节体内的能量代谢     

瘦素、脂肪酸对大鼠胰岛细胞解偶联蛋白2 mRNA表达的影响

以瘦素、脂肪酸作用于体外培养的大鼠胰岛细胞，以甘油三酯含量，解偶联蛋白2 mRNA表达水平为指标，显示瘦素通过外周途径调节产热，脂肪酸可损害胰岛功能。     

氧化应激对胰岛β细胞功能的影响

体外低糖培养胰岛β细胞,以葡萄糖/葡萄糖氧化酶(G/GO)为过氧化氢(H2O2)产生体系摸拟体内氧化应激水平,以流式细胞术检测细胞内H2O2,以RT-PCR。方法检测胰岛β细胞内胰腺十二指肠同源异型盒(PDX-1)的mRNA表达,检测胰岛素和C肽浓度。结果随着细胞内产生的H2O2逐渐升高,PDX-1的mRNA的表达逐步减少,胰岛素及C肽量也逐渐减少,而加入过氧化氢酶(CAT)清除H2O2后可部分逆转这一趋势。结论氧化应激可减少胰岛β细胞内的PDX-1 mRNA表达,从而减少胰岛β细胞胰岛素和C肽的分泌。     

一氧化氮介导的白细胞介素（IL）—β和IL—6对大鼠胰岛细胞的作用

目的 观察一氧化氮（ＮＯ）在白细胞介素（ＩＬ）－１β、ＩＬ－６对胰岛细胞影响中的作用。方法 应用体外单层培养的大鼠胰岛细胞检测ＩＬ-１β、ＩＬ－６对胰岛细胞内Ｄ ＮＡ、胰岛素含量和细胞活性的影响,并进一步观察一氧化氮合酶抑制剂Ｎ^G－单甲基－Ｌ－精氨酸（Ｌ－ＮＭＭＡ）的作用。结果 以ＩＬ－１β诱导,胰岛细胞亚硝酸盐生成量显著增加（Ｐ〈０．００１）;同时胰岛细胞内ＤＮＡ、胰岛素含及细胞活性（ＭＴＴ值）均     

一氧化氮可能参与多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

目的：探讨多巴胺（DA）诱导的PC12细胞凋亡是否与内源性一氧化氮（NO）生成有关。方法：酶还原法测定NO浓度，RT－PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS)和caspase-3 mRNA表达水平，免疫细胞化学方法和蛋白印迹法分别检测活化型caspase-3蛋白和iNOS蛋白水平。结果：在多巴胺诱导PC12细胞凋亡过程中，iNOS mRNA和蛋白表达明显增加，内源性NO生成增多，caspawse-3mRNA和活化型caspase-3蛋白的表达也明显增加，结论：内源性NO可能参与多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用。     

瘦素对游离脂肪酸致大鼠胰岛β细胞脂毒性的保护作用

目的 探讨瘦素对于游离脂肪酸(FFA)导致的大鼠胰岛β细胞脂毒性的保护作用。方法体外分离Wistar大鼠胰岛进行培养,根据培养液中加入不同物质而分为4组:(1)对照组,(2)瘦素组,(3)FFA组,(4)FFA+瘦素组。培养72h后测定胰岛内甘油三酯(TG)含量,基础状态及葡萄糖刺激下胰岛素分泌情况,并用RT-PCR方法检测胰岛β细胞内脂肪酸氧化酶-肉毒碱软脂酰转移酶Ⅰ(CPT-Ⅰ)、脂肪酸合成酶-乙酰辅酶A羧化酶(ACC)以及过氧化质体增殖物激活受体α(PPARα)和PPARγ的mRNA表达情况 结果 (1)FFA使胰岛内TG含量增加(P<0.01),瘦素使胰岛内TG含量减少(P<0.01)。(2)瘦素抑制基础状态及高糖负荷后胰岛素分泌(均P<0.01);FFA使基础胰岛素分泌增加而高糖负荷后胰岛素分泌的增高幅度明显低于对照组(均P<0.01)。(3)瘦素使CPT-Ⅰ和PPARα表达增加(分别P<0.01和P<0.05),ACC和PPARγ表达减少(均P<0.01);FFA使CPT-Ⅰ和ACC表达增加,PPARα和PPARγ表达减少(均P<0.01)。结论 FFA使胰岛内TC聚集增加,基础状态胰岛素分泌增加而高糖负荷后胰岛素分泌减少,形成高胰岛素血症。而瘦素可以通过PPARα和PPARγ途径使胰岛内脂肪酸氧化酶表达增加,脂肪酸合成酶表达减少,胰岛内TG聚集减少,同时抑制胰岛素分泌,减轻高胰岛素血症,从而起到对于FFA导致的大鼠胰     

干扰素γ促进胰岛β细胞中白细胞介素18和白细胞介素1β转换酶的表达

目的：探讨白细胞介素18（IL－18）和IL－1β转换酶（caspase-1 )在胰岛β细胞的表达状况及其调控机制。方法：大鼠胰岛素瘤（RIN）细胞，FACS纯化的大鼠胰岛β细胞，大鼠离体胰岛和干扰素调节因子1（IRF－1）基因敲除小鼠的离体胰岛与细胞因子孵育后，用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测IL－18和caspase-1 mRNA的表达，用Western blot方法检测IL－18蛋白的表达。结果：（1）干扰素γ（IFN-γ）可增强IL－18mRNA在RIN细胞，纯化大鼠β细胞和大离体胰岛中的表达，该效应在IRF－1基因敲除小鼠胰岛中未见明显变化，（2）IFN-γ显著增强caspase-1mRNA在RIN细胞和大鼠离体胰岛中的表达，该效应在IRF－1基因敲除小鼠胰岛中完全消失；（3）在RIN细胞的培养上清液和细胞裂解物中未能检测到IL－18蛋白。结论：IFN-γ上调IL－18和caspase-1在胰岛β细胞中的表达，IL－18的表达不受转录因子IRF－1的影响，caspse-1的表达呈IRF－1依赖性。     

一氧化氮在白介素—1β诱导的离体大鼠胰岛细胞损伤机制中的作用

目的 观察一氧化氮（ＮＯ）在白介素－１β（ＩＬ－１β）诱导的胰岛细胞损伤机制中的作用。方法 应用体外单层培养的大鼠胰岛细胞,分别检测ＩＬ－１β、一氧化氮合酶抑制剂Ｎ＾Ｇ－单甲基－Ｌ精氨酸（Ｌ－ＮＭＭＡ）（１ｍｍｏｌ／Ｌ）、胰岛细胞保护剂尼克酰胺（ＮＡ）（１０．２０ｍｍｏｌ／Ｌ）及ＩＬ－１β诱导,胰岛细胞亚硝酸盐生成量显著增加,同时胰岛素基础细胞内ＤＮＡ、胰岛素含量和细胞活性的影响。结果 以ＩＬ－６     

糖尿病及其慢性并发症与细胞凋亡

细胞凋亡是一种调节机体结构与功能稳定的重要机制。识别自身抗原的免疫活性细胞凋亡过程受阻和胰岛β细胞凋亡增加是导致1型糖尿病（DM）发生的重要原因,白介素－1（IL－1）、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、干扰素－γ（INF－γ）等多种细胞因子可能通过一氧化氮（NO）途径介导β细胞凋亡,过度氧化也可能参与这一过程。此外,bcl-2、Bcl-x、Bax、CPP32等多种凋亡调节基因表达的改变与DM肾脏、视网膜、神经病变等DM并发症的发生也密切相关。     

胰岛B细胞凋亡与1型糖尿病

胰岛B细胞凋亡与死亡受体Fas及其配体（FasL）系统、Bcl－2家族、胱氨酸门冬氨酸蛋白裂解酶（caspase）家族及线粒体的功能密切相关,同时受胰岛素、葡萄糖等多种因素的影响。浸润细胞可通过FasL、穿孔素／颗粒酶B,肿瘤坏死因子－α、干扰素－γ、白介素－1β以及一氧化氮等多效应分子导致胰岛B细胞凋亡,而通过去除和（或）抑制促凋亡因素如诱导免疫耐受、免疫豁免,阻断凋亡效应分子作用以及直接干预细胞凋亡过程等均可阻止或延缓胰岛B细胞的凋亡,将为临床1型糖尿病的防治提供新的途径。     

雷公藤多甙对NOD小鼠胰岛β细胞半胱天冬蛋白酶表达的影响

用环磷酰胺促进NOD小鼠1型糖尿病的发病，腹腔注射雷公藤多甙（TWP）4周，监测糖尿病发病率，TUNEL法检测胰岛细胞凋亡，免疫组化法观察胰岛β细胞半胱天冬蛋白酶（caspase）3的表达，RT-PCR方法检测胰腺caspase-8 mRNA的表达。结果提示TWP组糖尿病发病率下降，胰岛β细胞凋亡减少，胰岛β细胞caspase-3蛋白及胰腺caspase-8 mRNA的表达均减少。     

TFP5抑制高糖诱发的细胞周期依赖性激酶5过度激活、减少胰岛β细胞凋亡

目的：探讨TFP5对高糖诱发的细胞周期素依赖性激酶5（Cdk5）活性的抑制作用及其对胰岛β细胞的保护作用。方法体外培养小鼠胰岛细胞株Min6。将TFP5转染Min6细胞,分别用免疫印迹和免疫荧光观察其表达。实验分3组：低糖（5mmol/L）组,高糖（25mmol/L）＋空病毒载体（EV）组和高糖（25mmol/L）＋TFP5组,分别用同位素标记法测定3组细胞内Cdk5激酶活性;用酶联免疫吸附法测定3组细胞胰岛素分泌水平;用免疫印迹法测定胰岛β细胞凋亡。结果（1）表明TFP5来源和它的分子序列;（2）TFP5在Min6细胞内表达良好;（3）在高糖＋TFP5组Cdk5的活性明显低于高糖＋EV组（ P＜0.01）,而且在高糖＋TFP5组胰岛素分泌明显高于高糖＋EV组（P＜0.01）;（4）在高糖组Min6细胞的Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比值升高,细胞凋亡增加（P＜0.01,vs 低糖组）,而加入TFP5后,Bax表达减少,Bcl-2表达增加,Bax/Bcl-2的比值减低（P＜0.01,vs 高糖组）,细胞的凋亡减少。结论 TFP5可抑制高糖诱发的Cdk5激酶的过度活性、减少高糖刺激下胰岛细胞凋亡,从而恢复胰岛素分泌,具有潜在的以Cdk5为靶点治疗2型糖尿病的前景。     

尼美舒利和5-氟尿嘧啶联用对胃癌细胞的协同抑制作用及机制

目的 体外研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利和5-氯尿嘧啶（5-FU）对胃癌细胞的抑制作用及机制。方法 以胃癌细胞株MKN45、MKN28为研究对象．观察尼美舒利和5-FU单独或联合应用对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。应用MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡（FITC-Annexin-V/PI双标记）和细胞剧期，RT-PCR观察朋药前后COX-2 mRNA在两株细胞中的表达，Western免疫印迹法观察经两种药物单独和联合作用48h后细胞内凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 在MKN45和MKN28细胞中均可观察到不同水平的COX-2 mRNA表达，尼美舒利和5FU联合应用可明显抑制COX-2 mRNA表达。尼美舒利可抑制两株细胞的增殖并诱导凋亡。尼美舒利和5-FU具有协同抑制细胞增殖及诱导凋亡的作用，该作用与两种药物作用顺序无关，但在联用时作用最强。两药协同抑制增殖的作用主要通过协同杀伤和诱导凋亡而实现。5-FU增强了凋亡诱导蛋白Bax的表达，而尼美舒利则减少凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。两药联用可明显抑制胃癌细胞株生长。结论 选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利和5-FU通过抑制COX-2 mRNA的表达硬增强Bax／Bcl-2的表达比率诱导胃癌细胞凋亡．从而对胃癌细胞起到协同抑制增殖的作用。     

碘对人甲状腺细胞凋亡的影响

目的：研究碘对人甲状腺细胞亡的影响,探讨其在甲状腺疾病发病机制中的作用和意义。方法：分别以不同浓度Nal刺激单层培养的人正常甲状腺上皮细胞,采用流式细胞术,Western印迹和半定量RT－PCR等方法分别检测刺激前后细胞凋亡率,凋亡相关蛋白Fas,Bcl-2和Bak以及Fas,可溶性Fas(sFas)mRNA表达的变化。并以ELISA法检测细胞培养液中sFas的含量。结果：（1）低浓度NaI(10^-8mol/L)明显抑制细胞凋亡（P＜0．05）,中,高浓度（10^-6-10^-4mol/L)时显著增加细胞凋亡（P＜0．05）;（2）低浓度NaI显著促进sFas蛋白及mRNA的表达（P＜．05）,不影响Fas蛋白及mRNA的表达;（3）中、高浓度NaI则明显增加Fas蛋白及mRNA表达,但抑制sFas蛋白及mRNA表达（P＜0．05）;（4）在10^-8-10^-4mol/L浓度范围内,NaI剂量依赖性地抑制甲状腺上皮细胞表达Bcl-2蛋白,但显著增加Bak蛋白的表达（P＜0．05）,结论：碘可通过调节Fas,sFas,Bcl-2及Bak的表达,影响甲状腺细胞凋亡的发生,其中低浓度碘可抑制凋亡,而中,高浓度碘则促进细胞凋亡。     

转录因子PDX—1在猪胰干细胞体外诱导分化过程的表达及意义

目的：检测转录因子PDX－1在体外诱导胰干细胞分化过程中的表达，探讨PDX－1表达的意义。方法：自动胰岛分离系统分离胰腺组织，获得纯化的胰管上皮细胞，在有血清培养基（RPMI1640）中进行细胞原代培养，而后在无血清培养基（DMEM／F12）中加入表皮生长因子（EGF）和尼克酰胺（nicotinamide)促进胰管上皮细胞中的干细胞分化。Western Blotting检测化各个阶段贴壁细胞、衍生胰岛和成熟胰岛PDX－1蛋白表达，逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）检测PDX－1mRNA和上皮细胞标志抗原CK－19(cytokine-19)mRNA在分化各个阶段的表达。结果：转录因子PDX－1在分化的各上阶段表达逐渐增加，上皮细胞标志抗原CK－19在各个分化阶段表达逐渐减少。结论：转录因子PDX－1可能在胰干细胞分化衍生为胰岛的过程中起重要作用。     

18α-甘草酸二铵对丝裂霉素C诱导的HepG2细胞凋亡的影响及机制

目的探讨18α-甘草酸二铵对丝裂霉素（MMC）诱导的HepG2细胞凋亡的影响及机制。方法18Ⅸ一甘草酸二铵不同浓度与低剂量MMC（50p．g／m1）MMC联合作用,采用MTT比色法观察MMC对HepG2细胞活性率的影响;流式细胞术分析凋亡细胞的百分率、线粒体膜电位的改变及Caspase－3的活性变化;WesternBlot检测细胞内细胞色素c的表达及凋亡相关蛋白Bcl－2／Bax的表达情况。结果单独MMC（50gg／m1）处理的HepG2细胞活性率明显降低,凋亡率显著增加,线粒体膜电位下降,Caspase-3活性增加,细胞内细胞色素C表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,而促凋亡蛋白Bax表达增加。不同浓度的18α-甘草酸二铵与MMC合用组,这些指标的变化均受到抑制。结论18Ⅸ一甘草酸二铵可抑制MMC诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能通过调控凋亡相关蛋白的表达而实现。     

糖皮质激素诱导胰岛素抵抗的分子机制

糖皮质激素是体内重要的胰岛素拮抗激素,可诱导胰岛素抵抗。糖皮质激素可以干扰骨骼肌细胞的葡萄糖摄取和利用,抑制脂肪组织中葡萄糖转运蛋白（GLUT）-4的胞内分布及糖转运活性从而抑制糖摄取。并可通过调节脂肪细胞因子如脂联素、抵抗素、瘦素、内脏脂肪素的分泌,影响胰岛素的敏感性。此外,糖皮质激素还可抑制胰岛β细胞功能,使胰岛素分泌减少,并触发胰岛细胞凋亡。     

GLP-1对大鼠胰岛细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察胰升糖素样肽1（GLP-1）对大鼠胰岛细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法 （1）GLP-1与大鼠胰岛细胞瘤细胞株RINm5f共育，观察其增殖情况；（2）检测GLP-1对IL-1D诱导的RINm5f细胞凋亡的保护作用；（3）GLP-1与原代培养大鼠胰岛细胞共育1、3、5天后，检测BAX及Bcl-2基因的表达。结果（1）随着GLP-1浓度增高及刺激时间延长，RINm5f细胞A值呈剂量及时间依赖性增加；（2）GLP-1组与对照组相比RINm5f细胞凋亡率显著下降（P〈0．05）；（3）与GLP-1共育后，大鼠胰岛BAX基因的表达量无明显变化，对照组BAX基因的表达逐渐增加（P〈0．05）；而Bcl-2基因的表达量随着与GLP-1共育时间的延长呈时间依赖性增加。结论GLP-1对大鼠胰岛细胞增殖有明显促进作用；同时对胰岛细胞的凋亡有保护作用。     

长期高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡和功能相关基因表达的影响

目的　探明长期高浓度葡萄糖对体外胰岛细胞功能和凋亡相关基因表达的影响。方法应用放免法检测不同浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞在葡萄糖刺激时培育上清液和细胞内的胰岛素水平 ;应用半定量多重RT PCR和Northern印迹法检测培养后IDX 1(Isletduodenalhomeobox 1) ,葡萄糖激酶 (GK ) ,葡萄糖转运子 2 (GLUT2 ) ,C/EBPβ和Bcl xmRNA的表达情况 ;应用TUNEL法检测培养后的细胞凋亡百分率。结果　 ( 1)长期高浓度葡萄糖培养导致大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞对葡萄糖刺激的胰岛素分泌反应降低和细胞内胰岛素含量的减少 ;( 2 )高糖培养 14天可以使大鼠胰岛细胞IDX 1和GLUT2mRNA表达明显减少 (P <0 .0 5 ) ,C/EBPβmRNA表达明显增加 ,GKmRNA表达无明显变化 ;( 3 )高糖培养可以明显增加大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡百分率 ;( 4 )大鼠胰岛细胞高糖培养 14天后Bcl xSmRNA水平明显增加 ,Bcl xLmRNA水平无明显变化 ,Bcl xL/Bcl xSmRNA比率明显减少 (P <0 .0 5 )。结论　 ( 1)长期高糖培养可以诱导大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡和功能缺陷 ;( 2 )IDX 1表达的变化在大鼠胰岛细胞功能缺陷中起重要作用 ;( 3 )大鼠胰岛细胞的Bcl xL/Bcl xS比率变化在高糖所致的胰岛细胞凋亡中起重要作用。     

一氧化氮合酶抑制剂调控白细胞介素1β和脂多糖对关节软骨的损害

目的：评价兔膝关节内注射白细胞介素－1β（IL-1β）和脂多糖（混合液后，一氧化氮合酶（iNOS）抑制剂S－甲基异硫脲（SMT）调控关节软骨代谢的作用。方法：实验分为3组，正常组：不使用任何干预药物；对照组：皮下注射生理盐水后，膝关节内给予白细胞介素－1（IL－1）和LPS；实验组：SMT持续皮下注射72h后，关节内注射内浓度IL－1β和LPS。经8h后通过检测硝酸盐和亚硝酸盐的含量来观察膝关节滑液、滑膜和软骨NO的释放量以及iNOS的活性；用原位杂交检测软骨iNOS mRNA的表达。48h后，通过Na2^35SO4掺入法检测关节软骨蛋白糖的合成率。结果：IL－1β和LPS混合液可诱发iNOS mRNA显著表达，使兔膝关节滑液、滑膜和软骨释放大量NO和增加NOS活性。关节软骨是关节内NO的主要来源。SMT减少了NO释放，降低了NOS活性，抑制了iNOS mRNA表达，并且部分逆转了蛋白多糖的抑制作用。结论：iNOS抑制剂SMT对关节软骨的损伤具有部分保护作用；体内高浓度药物的维持是其发挥作用的保证。