五种祛风湿类中药对小鼠T淋巴细胞的影响研究

目的:应用小鼠体外T淋巴细胞模型,对几种常见祛风湿类中药进行体外实验研究.方法:无菌分离小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞,与待测药物预孵1小时,加入刀豆蛋白A刺激剂继续培养,总计培养72小时后收获细胞,进行MTT染色,以酶标仪进行测定.结果:放线菌酮对T细胞有强的抑制作用,其IC50为4.01×10-4mol/L,五种祛风湿类药材对小鼠T淋巴细胞均有一定的抑制作用,其中五加皮的抑制作用最强.结论:可以把应用ConA诱导的T淋巴细胞作为药物抗炎活性筛选的一种模型.     

地黄饮子脑脊液对离体神经元AD模型自由基损伤的保护作用及其相关酶的影响

目的 :探讨地黄饮子对β -淀粉样蛋白 (Aβ2 5- 35)诱导体外原代培养海马神经元AD模型自由基损伤的保护作用。方法 :把实验用兔分成三组 ,分别灌胃给服地黄饮子水煎剂 (生药比 :2∶1)、VitE水溶剂和等体积的生理盐水 1h后抽取脑脊液。把离体培养的海马神经元分为 6组 :空白对照组、模型组、VitE组、中药脑脊液低剂量组、中药脑脊液中剂量组和中药脑脊液高剂量组。各组分别加入培养液 10 μl、正常脑脊液 10 μl、VitE脑脊液 10 μl和中药脑脊液低剂量 5 μl、中剂量 10 μl、高剂量 2 0 μl,每组 8孔 ,加培养液补至 10 0 μl,37℃孵育 2h后各组加入经老化处理的Aβ2 5- 35,终浓度为 10mmol·L- 1,空白对照组添加等体积的无血清培养液 ,继续 37℃孵育 2 4h ,然后分别测定细胞培养液中脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)活性 ,观察中药地黄饮子脑脊液对受损神经元抗氧化能力的影响。结果 :地黄饮子能明显降低Aβ2 5- 35诱导的海马神经元细胞培养液中MDA含量 ,提高SOD、CAT和GSH -Px等抗氧化酶活性。结论 :地黄饮子能对抗Aβ2 5- 35诱导的海马神经元自由基损伤 ,表现出对海马神经元一定的保护作用。     

康莱特对人肺腺癌细胞A549增殖活性影响的实验研究

目的 观察薏苡仁注射液(康莱特)对人肺腺癌细胞细胞增殖的影响,探讨康莱特抗肺腺癌细胞的作用及机制.方法 A549细胞,分别加入5,10,15,20,25μl/ml康菜特,对照组加等量生理盐水,分别孵育24,48 h,MTT方法测定生长抑制率,流式细胞术测定细胞周期的变化.20 μl/ml康莱特孵育48 h后,收集细胞,RT-PCR、Western blot分别测定PC-NA、P21、P27和P53 mRNA和蛋白的表达.结果 MTT比色法结果显示康莱特对A549细胞具有明显的增殖抑制作用,流式细胞术结果显示康莱特处理后,G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少;20μl/ml康莱特处理A549细胞48 h后,PCNA mRNA和蛋白表达显著下降,P21、P27及P53的mRNA和蛋白表达显著上升.结论 康莱特可通过下调PCNA表达、上调细胞周期抑制蛋白P21和P27,以及P53表达,进而影响细胞周期,发挥其抑制肺腺癌细胞增殖的作用.     

桂枝茯苓胶囊对子宫内膜异位症大鼠脾脏 CD4+T淋巴细胞数和NK细胞杀伤活性的影响

目的:观察桂枝茯苓胶囊对子宫内膜异位症(EMs)模型大鼠脾脏CD4+T淋巴细胞数和NK细胞杀伤活性的影响。方法:改进制作大鼠子宫内膜异位症动物模型,ig桂枝茯苓胶囊0.256,1.024 g.kg-1,28 d后取脾脏,分离淋巴细胞,采用流式细胞分析术测定大鼠脾脏中CD4+T淋巴细胞数;将分离的NK细胞与K562细胞共孵育后,MTT法检测其杀伤活性。结果:低剂量组CD4+T淋巴细胞数比模型组提高19.0%,NK细胞杀伤活性提高54.1%,具有显著意义。结论:桂枝茯苓胶囊可显著提高CD4+T淋巴细胞数和NK细胞杀伤活性。     

地黄饮子含药脑脊液对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用

目的:探讨古方地黄饮子对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用。方法:把离体培养的进入对数生长期的PC12细胞分为6组:空白对照组、模型对照组、VitE脑脊液组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组。待24h细胞贴壁后吸去培养液,分别加入空白培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、中药脑脊液低、中、高剂量,加培养液补至等量,37℃孵育2h。然后除空白组之外的各组加入经老化处理的Aβ25-35(终浓度为10μmol/L),建立AD细胞模型。空白组加入等量的培养液,继续孵育24h后收集培养液,对培养液进行MTT法和LDH法检测细胞生存活力。结果:地黄饮子能升高MTT代谢率,降低LDH释放。结论:地黄饮子能改善Aβ25-35损伤后的PC12细胞生存状态,提高细胞生存活力。     

黄芩苷对T淋巴细胞增殖与活化的影响

目的:研究黄芩苷对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并探讨其免疫调节机制。方法:以刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA) 离子霉素(ionomycin,Ion)诱导小鼠淋巴细胞中T细胞增殖,用MTT法测定细胞增殖;利用ConA或PMA诱导T细胞激活,流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子与CD25分子表达情况。结果:在ConA或PMA Ion刺激48h后,小鼠淋巴细胞MTT吸光度显著高于对照组(P<0.01)。黄芩苷(10~40uM)显著降低了ConA或PMA Ion引起的MTT吸光度增加(P<0.01)。在ConA或PMA刺激18h后,小鼠T细胞CD69表达率显著提高(P<0.01),ConA或PMA刺激36小时后,T细胞CD25表达率显著提高(P<0.01),黄芩苷(10~40uM)能显著降低活化(P<0.01)。结论:黄芩苷可以显著抑制多克隆刺激剂ConA或佛波醇酯(PMA)介导的小鼠T细胞的活化和增殖。     

小鼠脾淋巴细胞模型在中药复方免疫活性物质筛选中的应用研究

目的:观察四物汤等6个方剂不同提取物对小鼠离体脾淋巴细胞转化增殖能力的影响,探讨小鼠脾淋巴细胞模型在中药复方免疫活性成分筛选中的应用.方法:制备四物汤、四君子汤、六味地黄汤、玉屏风散、桂枝汤、龙胆泻肝汤等6个方荆的水提物、水提醇沉物、醇提物,选择其没有明显细胞毒性的浓度范围,在96孔板中分别与小鼠正常的和经PMW诱导的小鼠脾淋巴细胞共同孵育,以MTT法检测细胞转化增殖情况.结果:四物汤上述三种提取物、四君子汤与六味地黄汤水提物和水提醇沉物、龙胆泻肝汤水提物能明显增强经PMW诱导的小鼠脾淋巴细胞转化增殖能力(P<0.05或P<0.01);桂枝汤醇提物能明显押制经PMW诱导的小鼠脾淋巴细胞转化增殖能力(P<0.01);仅有四物汤水提物能明显增强小鼠正常脾淋巴细胞转化增殖能力(P<0,01),其活性明显较PMW诱导组低(P<0.01).上述方荆刺激淋巴细胞转化增殖的效应具有提取物和浓度的差异性.结论:在中药复方免疫活性物质的筛选中,丝裂原刺激下的小鼠脾淋巴细胞模型作用稳定,应用时注意选择没有明显细胞毒性的药物浓度.     

仙茅多糖对小鼠巨噬细胞吞噬活性的影响

目的:探讨仙茅多糖对小鼠巨噬细胞吞噬活性的影响。方法:采用不同浓度的仙茅多糖(500,250,125,62.5,31.25μg/mL)分别处理小鼠腹腔原代巨噬细胞和小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞,36 h后加入荧光标记的大肠杆菌,室温避光孵育1.5 h,荧光显微镜下观察不同剂量的仙茅多糖对两类细胞吞噬大肠杆菌活性的影响。结论:仙茅多糖呈剂量依赖性增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能。     

Forskolin对小鼠体外T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响

目的：研究Forskolin对刀豆蛋白A（Con A）刺激的小鼠CD3^＋T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法：无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术来检测CD3^＋T细胞早期活化标志CD69的表达水平;用羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色技术结合流式细胞术和CELLQuest、Mod Fit^LT软件,分析T细胞增殖情况;用碘化丙锭（PI）染色技术分析细胞周期分布。结果：加入终浓度为10^-7、10^-6、10^-5M的Forskolin,孵育8 h后,CD3^＋T细胞CD69的表达水平和平均荧光强度（MFI）与Con A组相比都有显著的降低,且呈梯度依赖性;对Con A刺激的小鼠CD3^＋T细胞的增殖指数（PI）也有梯度性抑制;对细胞周期的影响表现为：随着Forskolin浓度升高,处于G0/G1期的细胞增加,S期细胞减少,G2/M期的细胞也有少量减少。结论：Forskolin能有效抑制小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖,阻滞细胞从G0/G1期进入S、G2/M期。由此推断Forskolin在某种程度上是一种潜在的免疫抑制剂。     

甘寒归肝肾经中药药性研究(Ⅰ)——对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响

目的:探讨甘寒归肝肾经中药药性与免疫增强药理活性之间的关系,寻找归肝肾经甘寒中药有别于其他中药的共同药效。方法:以环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)制备小鼠免疫低下模型并结合体外药理实验,测定灌胃给药后小鼠体内巨噬细胞吞噬率、体外腹腔巨噬细胞(macrophage,Mф)活性及其吞噬鸡红细胞(chicken red blood cell,CRBC)的功能、血清溶血素抗体水平,并观察植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)诱导T淋巴细胞的增殖反应。结果:甘寒归肝肾经中药显著提高免疫抑制小鼠的免疫功能。结论:提高免疫抑制小鼠的免疫功能是甘寒归肝肾经中药药效谱(药性)中的一项共同药效,但与另3类中药比较,不具备特有性。     

中药"腰痛定"对体外培养小鼠星形胶质细胞的影响

目的:观察"腰痛定"对体外培养星形胶质细胞(脊髓)增殖能力的影响.方法:取经过传代培养的小鼠(脊髓)星形胶质细胞,随机分为实验组和对照组.MTT比色法观察星形胶质细胞在体外培养24 h、48 h和72 h后的增殖情况.结果:腰痛定低浓度(6 mg/ml)组对星形胶质细胞增殖有明显促进作用,尤其是72 h后MTT测试结果与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.05).结论:"腰痛定"在适当浓度范围内可以促进星形胶质细胞增殖.     

五味子不同炮制品对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的:比较五味子不同炮制品对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响,为五味子临床合理用药提供实验依据。方法:将五味子不同质量浓度(400,200,100,50 mg·L-1)提取液与细胞密度为4×106个/m L的脾淋巴细胞于96孔板中共同培养48 h,每组6个复孔,以增殖率为指标,采用CCK-8比较生五味子、酒五味子、醋五味子对小鼠脾淋巴细胞、刀豆蛋白A(Con A)和脂多糖(LPS)诱导的T,B淋巴细胞增殖的影响。结果:与空白组比较,Con A,LPS可诱导T,B淋巴细胞增殖;与不同指标相应空白组比较,五味子给药组均能不同程度促进未活化脾淋巴细胞及Con A和LPS诱导的T,B淋巴细胞的增殖,同等剂量下,酒五味子增殖效果最佳,优于生五味子、醋五味子(P0.05,P0.01)。结论:五味子酒制后对小鼠淋巴细胞增殖作用显著增强,符合"入补药熟用"传统理论。     

连术颗粒对内毒素血症大鼠肠黏膜免疫功能的影响

目的探讨连术颗粒对内毒素血症大鼠肠道黏膜免疫功能的保护作用。方法将健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、连术颗粒组(1.8 g/kg)、黄连素组(0.2 g/kg),每组10只,灌服相应药物,疗程72 h。疗程结束后,除正常对照组外,每只腹腔注射脂多糖(LPS)30 mg/kg,观察大鼠一般情况;收集小肠黏膜,HE染色观察肠道黏膜改变、采用放射免疫法检测肠道黏膜TNF-α、IL-1β、SIgA含量改变、免疫组化法检测小肠I-gA+浆细胞数量、MTT法检测淋巴细胞(T、B细胞)增殖活力。结果与正常组相比,模型大鼠腹泻次数明显增加,肠黏膜可见明显病理性改变,且T、B淋巴细胞增殖抑制,TNF-α、IL-1β炎症因子大量分泌,肠道免疫功能受损,即SIgA含量、IgA+浆细胞数量减少。连术颗粒在促进肠道T、B淋巴细胞增殖、SIgA含量,增加IgA+浆细胞数量,减少TNF-α、IL-1β炎症因子分泌方面均优于黄连素组。结论连术颗粒能有效保护内毒素血症大鼠肠黏膜的免疫屏障,其机制可能是促进肠道T、B淋巴细胞增殖、SIgA分泌,减少TNF-α、IL-1β炎症因子释放等。     

结血蒿醇提物对小鼠脾细胞增殖和活化的抑制作用

目的：观察藏药结血蒿75%乙醇提取物对体外丝裂原刀豆蛋白A（Concanavalin A,ConA）刺激的小鼠脾细胞活化和增殖的抑制作用.方法：用Con A刺激小鼠脾细胞,分别用四甲基偶氮唑盐染色法（MTT 法）,流式细胞术等方法观察结血蒿醇提物对细胞增殖和活化的作用.结果：结血蒿醇提物对体外Con A刺激的小鼠脾细胞的增殖和活化均有显著的抑制,作用呈剂量依赖性.结论：结血蒿醇提物可抑制C0n A刺激的小鼠脾细胞的增殖和活化,提示其具有免疫抑制活性.     

蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞增殖的抑制作用研究

目的:观察蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞增殖的影响.方法:(1)采用倒置显微镜观察蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞形态的影响;(2)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法检测蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞生长的影响.结果:蔡氏扶正消癥汤生药能抑制胃癌细胞的增殖.在实验浓度范围内,随着剂量的增加,抑制作用更加明显;同一剂量下,72h内药物作用时间越长,抑制作用越明显.结论:蔡氏扶正消癥汤能够抑制胃癌细胞的增殖.     

人参皂苷Rh2对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的影响

目的:探讨20(S)-人参皂苷-Rh2(GS-Rh2)对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用MTT法检测GS-Rh2对T24细胞增殖抑制率;光学显微镜观察GS-Rh2作用前后细胞形态变化;流式细胞仪检测GS-Rh2对T24细胞凋亡和细胞周期分布影响;RT-PCR检测mRNA表达。结果:GS-Rh2在5 mg/L～21.97mg/L浓度范围内,对T24细胞增殖无明显抑制作用;21.97 mg/L～160mg/L浓度范围内,GS-Rh2对人膀胱癌T24细胞的生长有抑制作用,呈量-效关系,IC50为37mg/L。T24细胞经GS-Rh2(40mg/L)作用后光镜下呈死亡形态改变;细胞增殖指数(PI)由42.534%下降至31.03%;早期凋亡细胞数明显增加;p53和myc mRNA表达下降。结论:GS-Rh2能显著抑制人膀胱癌T24细胞增殖、诱导T24细胞凋亡,其机制可能与GS-Rh2下调P53和myc mRNA表达,阻滞细胞进入S/G2期等有关。     

鬼臼酰肼对白血病K562细胞株作用的实验研究

目的:研究鬼臼毒素衍生物鬼臼酰肼对K562白血病细胞的抑制增殖、诱导细胞凋亡作用.方法:采用集落形成实验、MTT比色法观察鬼臼酰肼对K562白血病细胞增殖的影响;流式细胞仪等技术手段研究鬼臼酰肼对K562细胞凋亡的影响.结果:鬼臼酰肼能抑制K562白血病细胞增殖,与对照组相比有显著性差异(P＜0.01),抑制作用与剂量呈显著性正相关.鬼臼酰肼可诱导K562细胞的凋亡,在5.0 μg/ml处理48 h,鬼臼酰肼组凋亡百分率33.5%.结论:鬼臼酰肼具有抗肿瘤活性,鬼臼毒素衍生物的不同结构对抗肿瘤活性有一定影响.     

东亚钳蝎毒抗癌多肽对H22荷瘤小鼠免疫调节作用

目的：探讨东亚钳蝎毒抗癌多肽(APBMV)对H²²荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：采用MTT比色法和血清溶血素测定法检测了经APBMV及其与5-Fu联合用药治疗的H²²荷瘤小鼠的细胞及体液免疫功能。结果：APBMV组及APBMV与5-Fu联用组的NK细胞活性明显增高(P<0.05),ConA 诱导的淋巴细胞转化指数明显增高(P<0.05 ;P<0.01),与5-Fu组比较差异显著(P<0.05;P<0.01)。DNCB诱导的皮肤迟发型超敏反应表明,APBMV组及其与5-Fu联用组的耳重差显著增高(P<0.01;P<0.05), 与5-Fu组比较也有显著差异(P<0.01)。5-Fu组的白细胞数最低,与APBMV组及APBMV与5-Fu联用组比较有显著差异性(P<0.001;P<0.05),APBMV组的半数溶血值(HC50)显著增高(P<0.01)。结论：APBMV可显著增强H22荷瘤小鼠免疫功能,减低肿瘤或化疗所致的免疫功能低下。     

半枝莲逆转白血病细胞株K562/A02耐药性的实验研究

目的:探讨半枝莲对白血病细胞株K562/A02耐药性逆转能力的影响。方法:体外培养K562细胞,分别加入高三尖杉酯碱(HHT)、长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)3种药物得到耐药细胞株K562/A02,MTT比色法检测半枝莲含药血清对3种K562/A02耐药性逆转作用的影响。结果:不同浓度的半枝莲含药血清均能够逆转K562/A02细胞的多药耐药性。结论:半枝莲在一定程度上能够逆转肿瘤细胞的多药耐药性,提高对化疗药物的敏感性。