脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶基因表达变化的实验研究

目的　探讨大鼠脊髓损伤后诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）基因表达变化规律。方法参考Ｎｙｓｔｒｏｍ方法建立的大鼠脊髓压 迫伤模型,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定伤段脊髓组织ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达情况。结果正常脊髓组织内未 见ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达,脊髓压迫伤后ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ开始表达并逐渐增强,伤后２４ｈ达到高峰。结论ｉＮＯＳ未参与脊髓 组织正常生理调节,脊髓损伤后ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ开始表达并逐渐增强,提示ｉＮＯＳ参与了继发性脊髓损伤过程。     

大鼠肺和脑组织中一氧化氮合成酶mRNA表达的研究

以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂法法观察了３种一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）即脑ＮＯＳ（ｂＮＯＳ）内皮ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）和巨噬细胞ＮＯＳ（ｍａｃＮＯＳ）在大鼠肺和脑组织中ｍＲＮＡ的表达情况，结果显示：肺组织存有ｅＮＯＳ和ｍａｃＮＯＳｍＲＮＡ表达，其ｍＲＮＡ杂交带分子大小分别为４．８ｋｂ和４．５ｋｂ脑组织只有ｂＮＯＳｍＲＮＡ表达，其杂交带分子大小为１０．５ｋｂ，提示３种ＮＯＳ基因结构各异，且其在大鼠肺和脑组织中的     

大鼠肺和脑组织中一氧化氮合成酶mRNA表达的研究

以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法观察了３种一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）即脑ＮＯＳ（ｂＮＯＳ）、内皮ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）和巨噬细胞ＮＯＳ（ｍａｃＮＯＳ）在大鼠肺和脑组织中ｍＲＮＡ的表达情况。结果显示：肺组织存有ｅＮＯＳ和ｍａｃＮＯＳｍＲＮＡ表达，其ｍＲＮＡ杂交带分子大小分别为４．８ｋｂ和４．５ｋｂ；脑组织只有ｂＮＯＳｍＲＮＡ表达，其杂交带分子大小为１０．５ｋｂ。提示３种ＮＯＳ基因结构各异，且其在大鼠肺和脑组织中的分布和表达亦不相同。     

大鼠脊髓损伤后内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达

目的 研究大鼠脊髓损伤后内皮型一氧化氮合酶（eNOS)mRNA表达的变化规律。方法 建立大鼠脊髓压迫伤模型。用逆转录聚合酶链反应法测定伤段脊髓组织eNOSmRNA的表达情况。结果 正常脊髓组织内存在eNOSmRNA的表达,脊髓压迫伤后eNOSmRNA表达迅速增强,在伤后6h达到高峰。结论 eNOS可参与脊髓组织正常的生理调节,并可能在继发性脊髓损伤过程中起保护作用。     

血管紧张素Ⅱ对心肌细胞内皮型一氧化氮合酶基因表达 …

目的 观察血管紧张素Ⅱ对心肌细胞内皮型一氧化氮合酶表达的影响。方法 用逆转聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测新生大鼠心肌细胞ｅＮＯＳ ｍＲＮＡ（以ＧＡＰＤ为内标）水平。结果 在培养新生大鼠心肌细胞和非心肌细胞中均能检测到ｅ ＮＯＳ ｍＲＮＡ,其中心肌细胞的表达高于非心肌细胞;血管紧张素Ⅱ作用６,１２和２４ｈ,心肌细胞ｅＮＯＳ ｍＲＮＡ水平明显减少。结论 在大鼠心肌细胞和非心肌细胞皆有ｅＮＯＳ基因表     

大鼠脑、肝和前列腺一氧化氮合酶mRNA表达

根据大鼠脑型一氧化氮合酶（ｂＮＯＳ）和内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）的ｃＤＮＡ序列分别设计特异引物，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２种ＮＯＳ在脑、肝脏和前列腺中的ｍＲＮＡ表达差异。结果表明：ｂＮＯＳ在小脑、大脑皮质和海马中有表达，并且在肝脏和前列腺组织中也有表达：ｅＮＯＳ在肝组织中有表达，在小脑、大脑皮质和海马等脑组织中均有表达，但前列腺组织中未检测到ｍＲＮＡ表达。２种ＮＯＳ在上述组织中的广泛分布提示ＮＯ具有多种复杂的、有时甚至是相反的生理功能可能与ｂＮＯＳ和ｅＮＯＳ甚至诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）分别或共同作用有关。     

脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶基因表达变化的实验研究

目的：探讨大鼠脊髓损伤后诱导型NOS（iNOS)基因表达变化规律。方法：参考Nystrom方法建立的大鼠脊髓压迫伤模型,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定伤段脊髓组织iNOS mRNA的表达情况。结果：正常脊髓组织内未见iNOS mRNA表达,脊髓压迫伤后iNOS mRNA开始表达并逐渐增强,伤后24h达到高峰。结论：iNOS未参与脊髓组织正常生理调节,脊髓损伤后iNOS mRNA开始表达并逐渐增强,提示iNOS参与了继发性脊髓损伤过程。     

脊髓伤后脊髓组织一氧化氮合酶活性的动态变化及其意义＊

目的 探讨脊髓损伤后早期伤段脊髓组织一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的动态变化规律。方法 通过伤段脊髓组织催化〔∧３Ｈ〕标记的精氨酸转化生成〔∧３Ｈ〕标记的瓜氨酸的量，测定脊髓压迫伤后０～６０ｍｉｎ伤段脊髓组织ＮＯＳ的活性。结果 脊髓压迫伤后，ＮＯＳ活性明显增加，伤后５ｍｉｎ达最高点；然后又迅速下降，于伤后１ｈ恢复正常水平。结论 在脊髓伤后１ｈ内，伤段脊髓组织ＮＯＳ活性迅速而短暂升高。     

间歇性气囊挤压大鼠腿部对挤压部位和远端骨骼肌一氧化氮？…

目的：为了进一步了解间歇性气囊挤压法（Ｉｎｔｅｒｎｉｔｔｅｎｔ ｐｎｅｕｍａｔｉｃ ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ,ＩＰＣ）挤压大鼠腿部与一氧化氮（ＮＯ）的关系。方法：检测中大鼠骨髓肌中３种一氧化氮合酶（ＮＯＳ）同工酶,神经型ＮＯＳ（ｎＮＯＳ）;诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）和内皮细胞型ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）ｍＲＮＡ在ＩＰＣ作用后的表达变化。２５只ＳＤ大鼠被随机分为３个模拟组和４个ＩＰＣ实验组。每只鼠取右侧胫前肌（     

低氧对大鼠不同节段肺动脉一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的探讨正常状态下肺动脉结构型一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ）基因表达的定位及慢性低氧对不同节段肺动脉ｃＮＯＳ基因表达的影响。方法应用原位杂交技术,采用ｃＮＯＳｃＲＮＡ探针,观察低氧１周组、低氧２周组及对照组大鼠肺动脉ｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达与分布。结果对照组大鼠与细支气管伴行的肺动脉内皮细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达明显高于与呼吸细支气管及终末细支气管伴行的肺动脉（ｑ＝８１３,５４９;Ｐ均＜００１）。低氧１周及２周组大鼠与终末细支气管及细支气管伴行之肺动脉内皮细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达较对照组大鼠均明显降低。对照组大鼠各级肺动脉平滑肌细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达差异无显著意义（Ｆ＝２２６,Ｐ＞００５）;低氧１周及２周组大鼠与呼吸细支气管及终末细支气管伴行之肺动脉平滑肌细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达较对照组大鼠均明显降低。结论正常大鼠近端肺动脉内皮细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达强度最高;慢性缺氧主要抑制近端肺动脉内皮细胞及远端肺动脉平滑肌细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达。     

脊髓伤后脊髓组织一氧化氮合酶活性的动态变化及其意义

目的探讨脊髓损伤后早期伤段脊髓组织一氧化氮合酶（NOS）活性的动态变化规律。方法通过伤段脊髓组织催化［3H］标记的精氨酸转化生成［3H］标记的瓜氨酸的量,测定脊髓压迫伤后0～60min伤段脊髓组织NOS的活性。结果脊髓压迫伤后,NOS活性明显增加,伤后5min达最高点;然后又迅速下降．于伤后1h恢复至正常水平。结论在脊髓伤后1h内,伤段脊髓组织NOS活性迅速而短暂升高。     

神经生长因子对大鼠脊髓损伤后N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和神经元一氧化氮生成的影响

目的 :探讨神经生长因子 (NGF)对脊髓损伤保护作用的机制 ,为其临床应用提供理论依据。方法 :采用Allen s法以 1 0g× 2 5cm力致伤大鼠T8脊髓 ,插蛛网膜下腔导管于术后 2h、4h、8h、1 2h、2 4h注入NGF溶液 (60 μg/ 2 0 μl)或生理盐水组。采用原位杂交法检测N 甲基 D 天门冬氨酸受体 1 (NMDAR1 )和神经元型一氧化氮合成酶 (nNOS)在脊髓中的表达。结果 :与正常组比较 ,大鼠伤后脊髓前角运动神经元出现NMDAR1和nNOSmRNA的异常表达 ,NGF组与生理盐水组相比较 ,NMDAR1和nNOSmRNA异常表达减少 (P <0 0 1 )。结论 :NGF能通过抑制脊髓损伤后NMDAR1和一氧化氮 (NO)的产生 ,从而保护了损伤的神经组织。     

诱导型一氧化氮合酶反义核酸在脊髓损伤后细胞凋亡和p-p38 MAPK信号转导通路中的作用

目的研究一氧化氮合酶(NOS)反义核酸(ASODN)对脊髓损伤后NOS表达、细胞凋亡、信号转导通路的影响。方法设计并合成诱导型NOS反义寡脱氧核苷酸(ASODN-iNOS)及诱导型NOS无义寡脱氧核苷酸(NSODN-iNOS),微量注入大鼠蛛网膜下腔并制备成脊髓压迫伤动物模型。伤后6 h分别用RT-PCR检测iNOS mRNA表达及用Western blotting检测组织中磷酸化丝裂原激活蛋白激酶(p-p38 MAPK)的变化,用双标染色流式细胞术检测伤后72 h细胞凋亡情况。损伤对照组鞘内注射不含核酸的溶液成分。结果脊髓损伤后组织中存在iNOS的表达和p-p38 MAPK变化;损伤后局部组织中存在明显的细胞凋亡;ASODN-iNOS可以抑制iNOS的表达,并可以显著抑制损伤后p-p38 MAPK的表达和细胞凋亡的发生,与损伤对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论ASODN-iNOS可以抑制脊髓损伤后iNOS的表达和细胞凋亡,ASODN的这种作用可能与p-p38 MAPK信号转导通路有关。     

eNOS对大鼠颈动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖的影响

目的研究内皮型一氧化氮合酶(eNOS)对大鼠球囊损伤后平滑肌细胞增殖的影响。方法构建腺病毒-eNOS(AdCMV-eNOS)质粒,以脂质体介导转染293细胞,扩增后转染SD大鼠球囊损伤后平滑肌细胞(实验组),以转染Ad-LacZ重组质粒的平滑肌细胞作为对照组。RT-PCR技术观察转染后平滑肌细胞eNOS mRNA的表达;细胞计数法分别检测实验组、对照组、正常组和单纯球囊损伤组平滑肌细胞的增殖能力。。结果RT-PCR检测发现实验组平滑肌细胞表达eNOS mRNA,而对照组无表达。各时间点细胞计数结果显示,正常组均明显少于单纯球囊损伤组(P<0.05),而实验组均明显少于单纯球囊损伤组和对照组(P<0.05)。结论重组腺病毒表达载体构建正确;eNOS可以抑制平滑肌细胞增殖。为eNOS预防经皮腔内冠状动脉成形术术后再狭窄基因转染奠定了基础。     

脑源性神经营养因子mRNA在胚胎脊髓修复成鼠脊髓损伤过程中的变化

观察脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）在胚胎脊髓修复成鼠损伤脊髓过程中的变化。方法将妊娠１４天胚胎脊髓植入急性损伤的成体脊髓后１、３、５、７、１０、１５和３０天，用原位和斑点分子杂交技术对胚胎脊髓和正常脊髓内ＢＤＮＦｍＲＮＡ的表达变化作了定性和定量观察。结果在正常脊髓内，ＢＤＮＦｍＲＮＡ以前角运动神经元和少量胶质细胞分布为主；脊髓损伤后，杂交产物扩大到中小型神经元，同时更多的胶质细胞参与了反应；胚胎脊髓移植后，除移植物本身继续维持表达外，正常脊髓阳性反应神经元和胶质细胞数量进一步增加。损伤组原位和斑点分子杂交的反应强度明显高于正常组，而移植组的分子杂交反应又在很多时相点上显著高于损伤组。结论移植的胚胎脊髓除为自身和宿主脊髓提供神经营养外，也诱发了正常脊髓在发生过程中曾经拥有的合成机制，以增强神经营养因子表达的方式为自身的再生提供营养，同时也为移植物的发育分化提供合适的营养环境。     

中药脊髓I号对脊髓损伤大鼠背根节CGRP表达的影响

为研究在脊髓损伤后服用中药脊髓I号 (SCI)对背根节 (DRG)神经元降钙素基因相关肽 (CGRP)表达的影响 ,探讨SCI促进脊髓修复再生效应的机制 ,用免疫细胞化学法和定量图像分析法 ,检查了SCI对Wistar大鼠下胸髓半横断损伤诱发的局部DRG神经元CGRP表达的影响。结果发现 :①脊髓半横断引起同侧首、尾向各 3个DRG内CGRP表达的明显和持续性下调 ;②损伤后投给SCI冲剂 ,可以明显减轻、但不能完全阻止脊髓损伤诱发的CGRP表达下调 ;③损伤后投给中药补阳还五汤 ,或用大剂量的氢化可的松治疗 ,不能减轻脊髓损伤诱发的CGRP表达下调 ;④在服用SCI大鼠脊髓的损伤区 ,显示有明显的修复再生。提示 :CGRP表达程度与脊髓损伤及其修复再生的情况相关 ;SCI可能通过对CGRP mRNA基因表达的调节 ,激发损伤脊髓组织的修复再生。     

一氧化氮与急性脊髓损伤后脊髓水肿的关系

目的 观察急笥脊髓损伤后一氧化氮（NO）与脊髓水肿的关系。方法 采用Allen‘s打击法建立大鼠脊髓损伤模式,测定脊髓损伤早期不同时点脊髓组织NO含量、一氧化氮合酶（NOS）活性及含水量。结果 脊髓损伤早期脊髓组织中的NO含量、NOS活性均增加,同时脊髓组织的含水量也增加,结论 脊髓损伤中NO含量及NOS活性的增加与脊髓水肿密切相关,提示NO参与了脊髓的继发性损伤。     

褪黑素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达的影响

目的：探讨褪黑素对大鼠脊髓损伤后诱生型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用改良Allen’S撞击法制备脊髓损伤模型;成年SD大鼠110只随机分为假损伤组、损伤组和药物治疗组3组,其中损伤组和药物治疗组各50只,分5个时间点（8小时、24小时、72小时、7天、14天）处死;假损伤组10只,于手术后14天处死,采用HE染色和免疫组化检测脊髓损伤后脊髓组织中iNOS蛋白的表达。结果：与损伤组比较,药物治疗组大鼠损伤后脊髓组织iNOS表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：褪黑素可通过抑制iNOS蛋白表达对大鼠脊髓损伤起保护作用。