合肥市产超广谱β-内酰胺酶菌株的SHV型耐药基因分布和耐药性分析

目的了解1999～2000年合肥市临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中,SHV型β-内酰胺酶基因型分布情况和耐药性分析。方法标本为安徽省细菌耐药性监控中心所留取的1999年9月～2000年9月从合肥市4家大医院临床分离的、已被证实产ESBLs的98株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌,采用聚合酶链反应(PCR)扩增产SHV型β-内酰胺酶菌株基因片段,克隆入pGEM-Teasy载体,双脱氧链终止法测定核苷酸序列以鉴定基因型。按照2005年CLSI推荐标准,用琼脂稀释法分别测定临床分离菌株和转移结合子对11种不同抗菌药物的MIC值,并比较分析两者的不同结果。结果98株产ESBLs菌株中有29株产SHV型β-内酰胺酶,其中SHV-1型8株,SHV-11型5株,SHV-12型11株,SHV-18型1株,SHV-28型1株,SHV-89型3株[序列号为(DQ193536)]。临床分离株的MIC结果显示对哌拉西林,头孢噻肟,头孢曲松的敏感率低;转移结合子的敏感性较临床分离菌株有所上升。结论合肥市部分医院产SHV型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌检出率较高,我们在国内外首次报道了SHV-89;并且本地区产SHV型β-内酰胺酶菌株的耐药性较高。     

SHV型超广谱β-内酰胺酶的研究进展

β-内酰胺酶的产生是细菌对β-内酰胺抗生素耐药的主要机制。SHV型超广谱β-内酰胺酶在革兰阴性耐药菌中普遍存在,并通过不断的点突变,拓宽了酶活性谱或增强了耐受β-内酰胺酶抑制剂的能力。现就SHV型超广谱β-内酰胺酶研究进展作一综述。     

液化沙雷菌超广谱β-内酰胺酶的特性研究

目的研究液化沙雷菌超广谱β-内酰胺酶的特性。方法超声破碎法提取临床分离液化沙雷菌CR04的β-内酰胺酶，等电聚焦（IEF）测定其等电点（pI）；硫酸铵反抽提、Sephadex G-75凝胶过滤和DE-52阴离子交换层析进行酶的纯化；SDS—PAGE法测定分子量和紫外分光光度法测定酶动力学参数。结果液化沙雷菌超广谱β-内酰胺酶的pI为7．5，分子量为28．77ku，动力学分析显示，该酶能水解头孢他啶、头孢噻肟和氨曲南，对舒巴坦（IC50为77nmol／L）和三唑巴坦（IC50为17nmol／L）敏感。结论液化沙雷菌产生的超广谱β-内酰胺酶对酶抑制剂敏感。     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的探讨我院肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因分布规律。方法对20株经双纸片试验确证为ESBLs表型阳性的肺炎克雷伯菌进行bla TEM-1、blaSHV-1、CTX—M-1组、TOHO-1组等4种基因PCR扩增，并对16株blaSHV-1基因PCR扩增阳性的菌株进行基因序列测定，在Internet网上与GenBank中的已知序列进行核苷酸相似性分析，并进行编码基因对位和氨基酸序列对比分析。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌中blaTEM-1，blaSHV-1，CTX—M-1组等3种基因扩增阳性率分别是50．0％、95．0％、20．0％。16株肺炎克雷伯菌中有4株序列与SHV—1a（序列号：X98101，74→934）氨基酸序列完全相同；有3株序列与SHV-2（序列号：AY570959，42→812）100％相同；有2株序列与SHV-11（序列号：AY293069，41→817）100％相同；有4株序列与SHV-27（序列号：AF293345，2→821）氨基酸序列完全相同；有1株序列与SHV-28（序列号：AF538324，12→823）100％相同；有2株序列在GenBank中未找到与之完全相同的序列。结论本地肺炎克雷伯菌中有SHV—1a、SHV-11、SHV-28广谱β-内酰胺酶基因和SHV-2、SHV-27 ESBLs基因存在。     

肺炎克雷伯氏菌SHV-28编码基因的克隆、测序及基因定位

以临床分离的一株肺炎克雷伯氏菌99-799株为研究对象，对其所产生的一种β-内酰胺酶编码基因的序列、亚型及基因定位进行研究。采用聚合酶链反应(PCR)，用β-内酰胺酶通用引物、blasHv引物扩增获得β-内酰胺酶及SHV型酶编码基因的片段，将SHV型酶PCR扩增产物克隆入pUCm—T载体，以双脱氧链终止法测定核苷酸序列，再通过GeneBank进行同源性检测确定其亚型和基因所在位置。肺炎克雷伯氏菌99—799株所含的一种β-内酰胺酶基因型为SHV型，与SHV-28编码基因序列完全相同，且位于细菌150bp的大质粒上，说明重庆地区有SHV-28亚型的存在。     

临床产超广谱β-内酰胺酶细菌的耐药表型与基因型分析

目的 分析临床产超广谱β-内酰胺酶菌株的耐药表型与基因型的关系，指导临床合理应用抗生素，减少耐药菌株的出现。方法 选用TEM和SHV两种特异性引物扩增产ESBLs菌株质粒DNA，并对所有菌株进行药敏试验。结果 180株细菌中有68株产酶，ESBLs检出率37．78％，TEM型占81％，SHV型占29％。结论 ESBLs检出率较高，基因型一致，PCR技术是监控产ESBLs菌株爆发流行的好方法。     

尿路感染患者产超广谱β-内酰胺酶菌耐药性分析

目的调查尿路感染患者产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性杆菌发生情况,同时监测其耐药性,指导临床用药。方法用纸片扩散法进行抗菌药物敏感实验,双纸片协同筛选实验和纸片扩散法表型确证实验检测ESBLs。结果241株革兰阴性杆菌尿路感染中分离出产ESBLs菌73株,占30.29%,分别为大肠埃希菌63株,克雷白杆菌9株,沙雷菌1株。产ESBLs菌株对青霉素类耐药率高达95.83%~98.61%,对头孢噻肟、头孢呋辛等第3代头孢菌素耐药率为83.56%~95.83%,对庆大霉素、环丙沙星、磺胺甲噁唑的耐药率分别达65.28%,80.56%和73.17%。对含β-内酰胺酶抑制药的第3代、第4代头孢菌素及碳青霉烯类头孢菌素则有相对较低的耐药性(<22.95%)。结论产ESBLs革兰阴性杆菌尿路感染形势严峻,耐药率高。     

产"超-超广谱"β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的耐药表型及基因分析

目的 首次分析本地区产超-超广谱β-内酰胺酶(super-spectrum β-lactamase,SSBLs)菌株的耐药性及分子流行病学现状.方法 收集自2008年1月～2009年6月本院从临床分离的对头孢西丁和头孢他啶耐药的革兰阴性杆菌105株,采用改良三维试验与质粒结合实验筛选产SSBLs菌株,通过药敏试验鉴定其耐药表型,运用PCR扩增检测其ESBLs基因型与AmpC酶基因型.结果 筛选出的2株产SSBLs菌株(1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌)均表现为多重耐药,仅对亚胺培南敏感.阴沟肠杆菌质粒编码的ESBLs基因型为TEM、CTX-M,AmpC酶基因型为ACT;大肠埃希菌质粒编码的ESBLs基因型为SHV、CTX-M,AmpC酶基因型为ACT.结论 本院存在产SSBLs革兰阴性杆菌引起的感染,但此类菌株尚未在本院传播流行,ACT型是SSBLs菌株质粒AmpC酶主要基因型.     

超广谱β-内酰胺酶研究进展

超广谱p内酰胺酶（extended spectrum β-lactam ases,ESBLs）由质粒介导的能使细菌对第三代头孢菌素类,单酰胺类及青霉素类耐药的一类酶,可在菌株间转移和传播,在体外试验中可使三代头孢和氨曲南的抑菌环缩小,但不一定在耐药范围,临床对β-内酰胺药物（包括青霉素类和头孢类）耐药。ESBLs主要由革兰阴性杆菌产生,尤以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为代表。     

TEM型超广谱β-内酰胺酶的载体构建及其表达

目的构建TEM型ESBLs表达载体。方法收集2006-2007年郑州大学第一附属医院分离产ESBLs大肠杆菌46株,通过PCR克隆目的基因后,采用T4连接pET28 a与目的基因,并通过双脱氧链终止法验证基因,最后采用酶抑制剂增强试验检测载体表达。结果PCR扩增条带约在900bp位置处;序列分析结果正确;酶抑制剂增强试验阳性。结论TEM型ESBLs表达载体构建成功。     

肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶基因分型研究

目的调查广州地区下呼吸道感染肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的分离率及各种基因型的流行病学分布。方法收集广州地区13家医院2001-10～2002-12临床分离的肺炎克雷伯菌511株,采用美国临床实验室标准化委员会规定的ESBL表型筛选和确证试验确定ESBL的发生率、PCR扩增对产ESBL菌初步分型,然后对部分PCR扩增阳性产物测序,序列分析进一步确定基因型。结果肺炎克雷伯菌产ESBL分离率为40.1%。TEM型49株占21.9%,均为TEM-1型;CTX-M型59株占28.8%;SHV型96株占46.8%。结论SHV型是广州地区下呼吸道感染肺炎克雷伯菌产ESBL流行的常见基因型。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物的耐药情况.方法对ESBLs(-)肺炎克雷伯菌73株和ESBLs( )肺炎克雷伯菌31株进行11种抗菌药物的药物敏感性试验.ESBLs采用双纸片协同法测得.结果肺炎克雷伯菌产ESBLs阳性率为29.8%.ESBLs( )菌株对多种抗菌药物敏感率显著低于ESBLs(-)菌.ESBLs( )菌株对亚胺培南、氨曲南的敏感率最高,阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦、环丙沙星次之;对头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松及哌拉西林耐药性很强.结论 ESBLs( )肺炎克雷伯菌耐药性较强,亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦对其有很高的活性,这些数据对临床经验用药有较好的指导作用.     

阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的基因型调查

目的了解北京朝阳医院阴沟肠杆菌中产ESBLs的流行情况,并对携带的ESBLs基因型进行调查。方法采用表型筛选法对58株对第三代头孢菌素或氨曲南敏感性降低的阴沟肠杆菌进行检测。对20株初筛阳性的细菌进行琼脂稀释法药敏试验、等电点测定,并对β-内酰胺酶编码基因进行克隆测序。结果表型筛选法对58株阴沟肠杆菌检测的结果显示产ESBLs菌株的检出率为34.48%(20/58)。药敏结果显示,单独产生ESBLs的菌株对头孢西丁、头孢吡肟、哌拉西林/三唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的敏感率分别为100%、32.5%和87.5%。同时携带ESBLs和AmpC酶的菌株只对亚胺培南敏感。20株检测阳性的细菌中,14株ESBLs编码基因PCR结果阳性,分别为:SHV-2、SHV-2a、SHV-12、CTX-M-14和CTX-M-22型ESBLs。对另外6株进行粗酶等电点测定发现分别存在7.89、8.0、8.57等电点条带,并被克拉维酸抑制。结论产生超广谱β-内酰胺酶是造成阴沟肠杆菌对第三代头孢菌素耐药的另一重要原因。     

尿路感染病原菌中产超广谱β-内酰胺酶菌的药敏分析

目的研究尿路感染病原菌中产超广谱β-内酰胺酶菌的耐药状况,为临床合理用药提供参考。方法收集本院2008年1月～2008年12月尿液标本分离出的病原菌326株,用Kirby-Bauer纸片扩散法进行抗菌药物的敏感性实验,ESBLs纸片法筛选和确证试验。操作按NCCLS-2006年标准进行。结果326株病原菌中分离出革兰阴性杆菌223株,其中产ESBLs的有99株,占44．40％,分别为大肠埃希菌73株,肺炎克雷伯菌26株。产ESBLs大肠埃希菌对20种抗菌药的敏感性排在前3位的是美罗培南（100％）、亚胺培南-西司他丁（100％）、阿米卡星（84．9％）。产ESBLs肺炎克雷伯菌对20种抗菌药物的敏感性排在前3位的是芙罗培南（100％）、亚胺培南-西司他丁（100％）、哌拉西林-他唑巴坦（73．1％）。结论本院尿路感染病原菌中分离出的产超广谱β-内酰胺酶菌多重耐药率高,临床应参考药敏结果,合理选用抗菌药物。     

肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶检测及药敏分析

目的 检测肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及耐药特点,指导临床更有效的使用抗生素治疗感染性疾病.方法 用美国临床实验室标准委员会(NCCLS)1999年规定的试验检测78株肠杆菌科细菌是否产ESBLs,用纸片扩散法作细菌的药敏试验.结果 ESBLs总阳性率为35.9%.大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌...     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的探讨

目的：了解本地区分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-酰胺酶的发生率、耐药性及超广谱β-酰胺酶可能的基因型。方法：用MICs试验和PCR方法研究了从武汉地区医院ICU病房收集的288株大肠埃希菌和103株肺炎克雷伯菌产超广谱β-酰胺酶的发生率、可能的基因型。结果：强产超广谱β-酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的发生率分别为25．0％（72／288）和46．6％（48／103）。RAPD分析显示一些不同的产超广谱β-酰胺酶的菌株具有相同的RAPD型别，而不同的RAPD型别的菌株可能含有相同的产超广谱β-酰胺酶的基因型。这些菌株耐受绝大部分含β-内酰胺的药物（包括第3代头孢菌素）和不含β-酰胺的药物（例如氨基糖苷、四环素和氯霉素），几乎所有的产超广谱β-内酰胺酶菌株对亚氨培南，头孢美唑和β-酰胺／克拉维酸敏感。TEM是产超广谱β-内酰胺酶的主要基因型，CTX-M型也常见，其中以CTX-M-3为主。产超广谱β-酰胺酶一些的大肠埃希菌和大部分的肺炎克雷伯菌的菌株含不止一个超广谱β-酰胺酶的基因型。产超广谱β-酰胺酶菌株的传播绝大部分依赖质粒的水平转移。结论：这些结果证明在武汉地区分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌菌株产超广谱β-酰胺酶很常见，对这些菌株的监测和阻止其传播具有重要意义。     

儿科137株产超广谱β-内酰胺酶耐药菌的耐药性分析

目的 研究儿科病房产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细茵的耐药性.方法 对2004年1月～2004年12月分离的肠杆菌科细菌,用生物-梅里埃ATB药敏系统进行鉴定和药物敏感试验.结果 543株肠杆菌科细菌共检出137株产ESBLs细菌(检出率25.2%),其中大肠埃希茵61株(29.0%),肺炎克雷伯菌48株(43.6%).产ESBLs菌对18种抗生素的耐药率与不产ESBLs菌相比差异有显著性.结论 产ESBLs茵对大多数抗生素耐药性严重,应加强对产ESBLs细茵耐药性的监测;及时准确地检测病原菌,指导临床合理用药,减少耐药茵株产生.     

惠东地区产ESBLs大肠埃希菌中TEM型β-内酰胺酶临床研究

目的探讨惠东地区产ESBLs大肠埃希菌中TEM型β-内酰胺酶分型、耐药性及基因突变类型。方法收集86例产ESBLs大肠埃希菌菌株,分析其基因类型;对产ESBLs大肠埃希菌TEM型进行耐药试验及基因突变类型的相关检测。结果 86例产ESBLs大肠埃希菌菌株中,TEM基因型49株(57.0%),SHV基因型16株(18.6%),CTX-M基因型21株(24.4%);TEM分型主要有TEM-1、TEM-2、TEM-105、TEM-116和TEM-128,其中TEM-1和TEM-2型例数最多,分别为18例和17例;TEM基因突变类型主要为缺失和碱基置换;产ESBLs大肠埃希菌菌株TEM型仅对亚胺培南/西司他丁和美罗培南敏感。结论探讨惠东地区产ESBLs大肠埃希菌基因突变分型及药敏试验对抗菌药物的选择具有重要的临床价值。     

婴幼儿社区获得性肺炎产超广谱β-内酰胺酶菌分布及耐药性分析

目的:了解婴幼儿社区获得性肺炎(CAP)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌的分布及耐药情况。方法:选取2013年1-12月我院收治的婴幼儿CAP患儿2 526例,取痰标本送细菌培养,药敏试验采用琼脂扩散敏感试验(K-B法)。结果:2 526例患儿中痰培养检出产ESBLs菌173株(检出率6.85%),其中大肠埃希菌89株、肺炎克雷伯菌56株、阴沟肠杆菌14株、产气肠杆菌10株、铜绿假单胞菌4株(产酶率分别为55.3%、56.6%、41.2%、29.4%、18.2%);产ESBLs菌的检出率在3个月内的小婴儿明显高于3个月以上患儿(P均<0.01);产ESBLs菌对氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛、头孢噻肟高度耐药(耐药率85.55%~100%),对头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南中度耐药(耐药率43.35%~58.38%),对头孢西丁、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南敏感;产ESBLs菌的耐药率明显高于非产ESBLs菌(P<0.01)。结论:婴幼儿CAP产ESBLs菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌为主,其检出率与年龄密切相关,3个月内的小婴儿感染率高,对临床常用青霉素类、头孢菌素类抗生素大部分耐药,对头霉素类及酶抑制剂复合制剂大部分敏感,对碳青霉烯类抗生素完全敏感。     

尿液标本中大肠埃希菌的耐药性分析及其产超广谱β-内酰胺酶监测

目的分析清远地区2003年9月至2004年4月间门诊住院患者尿液标本中大肠埃希菌的耐药性及其产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,以便更好地指导临床用药。方法应用微生物分析系统MicroScanAutoScan-4进行鉴定,并用仪器专家系统判断可疑ESBLs菌株,用纸片扩散法表型确证试验检测ESBLs。结果尿液标本中的大肠埃希菌对亚胺培南、哌拉西林/三唑巴坦、头孢西丁的耐药性最低,分别为3%、5%、8%,而对氨苄西林/舒巴坦、头孢噻吩、哌拉西林的耐药性均>70%,产ESBLs的大肠埃希菌对亚胺培南、哌拉西林/三唑巴坦、头孢西丁的耐药性均<10%,对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢噻吩、环丙沙星均表现出很强的耐药性。结论尿路感染应根据抗生素敏感试验选择敏感药物进行合理用药并检测相应的产ESBLs情况。