免疫组化染色质量控制在肝脏穿刺组织切片中的应用

目的:探讨肝脏穿刺组织HE染色切片及免疫组化染色切片的质量控制与标准化操作在提高病理诊断准确率中的意义。方法:按照质控标准化对298例肝脏穿刺组织行HE制片和免疫组化染色,盲法比较标准化前后病理诊断结果。结果:按照质控标准化制备的常规HE染色切片优良率为92.3%,免疫组化染色切片优良率为91.1%;明显高于未标准化制备的HE切片和免疫组化染色切片(78.9%,74.9%),两者差异有统计学意义(P<0.05)。298例肝脏穿刺组织,标准化后做出明确诊断的有259例(86.9%),标准化前为219例(73.5%),两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论:此实验流程提高了肝脏穿刺组织免疫组化染色的质量,诊断率提高,可作为肝脏穿刺组织制片的标准流程应用。     

淋巴组织免疫组织化学染色方法的探讨

目的:鉴于病理淋巴组织的切片常见组织较硬、细胞脆性大,免疫组织化学染色显色模糊,甚至出现假阴性现象,探讨淋巴组织制片与免疫组化染色的新方法与新思路。方法:采用B-5固定液、软化剂的处理进行石蜡切片、免疫组织化学染色方法进行染色。结果:制出背景清晰、定位准确、反差分明、效果较好的免疫组化染色淋巴组织切片。结论:经B-5固定液固定、软化剂处理过的淋巴组织免疫组化切片能为淋巴组织疾病诊断提供定位准确、阳性明显的抗原表达信息。     

免疫组化染色质量控制在鼻咽组织切片中的应用

目的:建立鼻咽组织常规制片及其免疫组化的标准化实验流程,达到临床病理检验质量控制的要求及日后研究的需要。方法:详细介绍鼻咽组织常规制片及其免疫组化染色的方法以及质量控制环节。结果:用此法制备的鼻咽组织免疫组化切片染色结果稳定可靠、特异性强、敏感性高。结论:此实验流程可改进和提高鼻咽组织免疫组化染色的质量。     

应用组织芯片技术对胃癌组织中cyclin E和p21^WAF1蛋白表达观察的体会

目的：探讨使用组织芯片技术，观察细胞周期的调控因子cyclin E和p21^WAF1在胃癌组织中的表达的方法。方法：以124例为观察研究对象，自制组织芯片，使用S-P法观察单克隆抗体cyclin E(MAB-0019)、p21^WAF1(MAB-0235)在胃癌组织中的表达情况。对其中11例使用常规制片方法进行了对照免疫组化染色。结果：制成组织芯片2块，各合63块组织芯片，所制切片质量较满意，制片组织块完好率为95．2％～98．4％。所制成的组织芯片进行免疫组织化学染色，与采用常规制片方法进行免疫组化染色片对比，阳性率、阳性表达强度结果基本一致。结论：使用自制组织芯片进行cyclin E、p21^WAF1免疫组化染色分析，效果良好，显示了组织芯片技术应用于临床病理免疫组化染色和实验分析的良好前景。     

Van-clear环保透明剂代替二甲苯制作蜡块对免疫组化结果的影响

目的：评估Van-clear环保透明剂代替二甲苯制作石蜡切片对免疫组化结果的影响。方法：用Van-clear环保透明剂代替二甲苯制备蜡块10000个、苏木精-伊红染色10000片和免疫组化染色2265片。结果：用Van-clear环保剂制作的蜡块,组织浸蜡充分,各种组织软硬适中,易于切片;制作的苏木精．伊红片,组织结构清楚,染色清晰,对比及透明度好;免疫组化染色切片,阳性定位准确,强度、对比度与常规制片一致;存档半年后蜡块切片,免疫组化染色结果与半年前结果一致。结论：用Van-clear环保透明剂代替二甲苯对病理常规制片的质量和免疫组化阳性结果无明显影响。Van-elear作为环保产品,有推广使用的价值。     

穿刺组织复合制片及免疫组化染色技术

目的　探讨肾脏、甲状腺等器官穿刺的微小组织复合制片及免疫组化染色技术。方法　采用“一次性复合制片及染色法”。结果　该技术缩短了制片、染色周期 ,省时省力 ,特别节约昂贵的试剂 ,保证各例标本染色条件的一致性 ,为镜下观察各例标本的相互对比性提供了保证。结论　对于切片制作及免疫组化染色过程中的一些技术问题如提高切片质量 ,防止抗原丢失、弥散、修复 ;封酶液选择与时机 ;消除和减轻非特异背景着色及交叉反应所引起的假阳性结果等应进行反复实验。     

应用组织芯片技术对胃癌组织中cyclin E和p21WAF1蛋白表达观察的体会

目的:探讨使用组织芯片技术,观察细胞周期的调控因子cyclin E和p21WAF1在胃癌组织中的表达的方法.方法:以124例为观察研究对象,自制组织芯片,使用S-P法观察单克隆抗体cyclin E(MAB-0019)、p21WAF1(MAB-0235)在胃癌组织中的表达情况.对其中11例使用常规制片方法进行了对照免疫组化染色.结果:制成组织芯片2块,各含63块组织芯片,所制切片质量较满意,制片组织块完好率为95.2 %～98.4 %.所制成的组织芯片进行免疫组织化学染色,与采用常规制片方法进行免疫组化染色片对比,阳性率、阳性表达强度结果基本一致.结论:使用自制组织芯片进行cyclin E、p21WAF1免疫组化染色分析,效果良好,显示了组织芯片技术应用于临床病理免疫组化染色和实验分析的良好前景.     

应用组织芯片技术对胃癌组织中cyclinE和p21~(WAF1)蛋白表达观察的体会

目的 :探讨使用组织芯片技术 ,观察细胞周期的调控因子 cyclin E和 p2 1WAF1在胃癌组织中的表达的方法。方法 :以 12 4例为观察研究对象 ,自制组织芯片 ,使用 S- P法观察单克隆抗体 cyclin E(MAB- 0 0 19)、p2 1WAF 1 (MAB-0 2 35 )在胃癌组织中的表达情况。对其中 11例使用常规制片方法进行了对照免疫组化染色。结果 :制成组织芯片 2块 ,各含 6 3块组织芯片 ,所制切片质量较满意 ,制片组织块完好率为 95 .2 %～ 98.4 %。所制成的组织芯片进行免疫组织化学染色 ,与采用常规制片方法进行免疫组化染色片对比 ,阳性率、阳性表达强度结果基本一致。结论 :使用自制组织芯片进行 cyclin E、p2 1WAF1 免疫组化染色分析 ,效果良好 ,显示了组织芯片技术应用于临床病理免疫组化染色和实验分析的良好前景。     

病理组织免疫组化技术的研究

目的:研究淋巴结病理组织免疫组化技术与标准化操作方法。方法:回顾性分析78例淋巴结患者的临床资料,将患者分为观察组与对照组,每组39例。观察组为患者行免疫组化染色和淋巴结组织HE片穿刺。对照组未行标准化淋巴结组织HE片穿刺,对比两组的免疫组化染色切片情况。结果:通过研究发现观察组的免疫组化染色切片优良率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:利用病理免疫化技术有利于提高染色切片优良率,进一步了解患者病情,改善其预后。     

制作临床快速冰冻切片的质量控制

目的 :探讨冰冻切片的制作、HE染色和免疫组化的标准化实验方法 ,达到质量控制标准。方法 :详细介绍了冷冻切片的方法、影响因素、标准化与质量控制及其在临床快速病理诊断的 HE和免疫组织化学染色方法。结果 :经此方法制备的冷冻切片组织结构完整、细胞染色清晰、境界清楚、核质分明、对比度好 ,无刀痕、皱折、重叠、冰晶、切片平整、厚薄均匀一致等。结论 :可为临床快速病理诊断的 HE染色、脂肪黏液染色、酶组织化学、免疫组织化学、免疫荧光、核酸原位杂交以及原位 PCR等病理诊断与研究提供优质冷冻切片     

原位细胞凋亡TUNEL法的改进及其应用

目的 :寻找一种能快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料的原位细胞凋亡的 TUNEL法。方法 :在原已建立的 TUNEL技术基础上作了如下改进 :1石蜡切片用微波修复技术替代蛋白酶 K的消化作用 ;冰冻切片与细胞爬片或涂片用含 0 .1 % Triton X- 1 0 0和 0 .1 %枸橼酸三钠混合液作穿透处理。 2在滴加反应混合物前 ,切片用 0 .1 %焦碳酸二乙酯 ( DEPC)浸泡 ,抑制内源性核酸内切酶活性。 3在 POD转换剂前 ,切片用 3% H2 O2 -甲醇液阻断内源性过氧化物酶活性 ,并用正常山羊血清封闭非特异结合位点。4苏木素套染细胞核。结果 :改进后的 TUNEL法能特异地显示凋亡细胞为棕黄色 ,其他细胞核为蓝色 ,且对比明显 ,背景浅 ,组织结构完整清晰 ,便于显微照相等特点。结论 :改进后的 TUNEL法是一种快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料细胞凋亡的有效方法。     

TUNEL技术原位检测肝癌细胞凋亡激光共聚焦显微镜观察

目的 用缺口末端标主技术（ＴＵＮＥＬ）对肝硬变,肝细胞肝癌及培养肝细胞癌细胞系的细胞凋亡进行形态学观察。方法 采用德国宝灵曼公司生产的原位末端标记试剂盒对福尔马林固定,石蜡包埋的肝组织和培养肝细胞进行ＴＵＮＥＬ染色,激光共聚焦显微镜观察会细胞凋亡的形态特征。结果：ＴＵＮＥＬ阳性信号为黄绿色或黄色强荧光,位于胞核,呈环行,小圆形或颗粒状,提示凋亡细胞有典型的新月体状染色质边集,核浓缩以及有大量微核体     

SD大鼠皮肤组织教学石蜡切片的改进

目的:探讨一种改善皮肤组织教学切片质量的方法。方法:取大鼠的皮肤,用Bouin液固定、脱水﹑氯仿透明﹑浸蜡﹑包埋﹑切片﹑HE染色和封片,最后在光镜下观察。结果:新方法制作的皮肤组织切片结构完整,厚薄均匀,染色恰当,形态清晰无断裂破碎现象。结论:用Bouin固定液软化,降低组织硬度,氯仿透明不引起组织收缩变形及过度硬脆。这种改进的实验方法可切实提高皮肤组织石蜡切片效果,是可行的。     

宫颈组织塑料包埋与石蜡包埋免疫组化检测CKpan的效果比较

目的:通过对宫颈组织进行塑料及石蜡包埋,对比免疫组化的检测效果,探索一种理想的组织塑料包埋免疫组化检测方法。方法:将宫颈组织进行全层取材,分别进行石蜡及塑料包埋,而后利用免疫组化技术检测CKpan在组织中的表达。石蜡包埋的具体方法参考临床病理诊疗规范,塑料包埋的关键环节均是在低温环境下进行,最大限度的保存抗原及酶的活性。结果:宫颈组织的塑料包埋免疫组化检测CKpan,细胞核细微结构清晰,阳性定位准确。结论:塑料冷包埋技术的最大优势就在于维持细胞结构的完整性,能很好的保存抗原,有利于免疫组化及原位杂交等技术的进一步检测研究,适宜于疾病的诊断和预后评估。     

TUNEL法原位检测凋亡细胞的某些改进

目的 :探索避免TUNEL法检测凋亡细胞出现的假阳性和消除非特异性反应的方法。方法 :脑和心肌组织石蜡切片 ,改进的TUNEL染色。选用多聚甲醛固定 ,蛋白酶K修复抗原 ,将H2 O2 封闭内源性过氧化物酶放在反应液标记DNA片段之后 ,先后用小牛血清或羊血清两次封闭非特异性反应。结果 :证实本实验方法避免了假阳性 ,背底十分清亮。结论 :改进后的TUNEL方法适用于凋亡细胞的检测     

一种组织原位双重标记的方法

目的在同一张切片上 ,分别进行两种标记 ,两种显色系统进行显色。方法应用免疫组织化学S P法检测结肠癌细胞Fasl表达 ,再用TUNEL法检测同一组织切片上细胞凋亡情况。结果同一组织切片Fasl阳性表达于癌细胞胞质和 /或胞膜 ,凋亡表达于细胞核清晰可禁。结论组织原位双重标记结果更为客观可靠。     

区分肾淀粉样变类型的病理染色方法比较

目的分析3种特殊染色及免疫染色方法对区分肾淀粉样变类型的准确性、灵敏度和着色强度的影响,以提高临床的诊治
水平。方法选择30例肾淀粉样变患者的病理切片,采用3种酸化刚果红染色和5种抗原修复法,对轻链蛋白（κ、λ）、淀粉样蛋白
A等指标进行冰冻组织及石蜡组织的免疫荧光、免疫组化染色。使用IPP图像分析系统进行半定量分析及荧光着色半定量分
析,观察比较阳性部位着色的准确性、灵敏度和着色强度效果。结果酸化甲醇刚果红染色法优于酸化Bennhold’s刚果红染色
法、酸化Alkaland’s刚果红染色法,IPP半定量分析冰冻组织的免疫荧光、免疫组化优于石蜡组织（P=0.02）。荧光半定量分析着
色强度相差一个+左右;石蜡组织暴露抗原的方法中蛋白酶K消化优于抗原热修复、胰酶或胃酶消化（P=0.01）。结论酸化甲醇
刚果红染色法在肾组织淀粉样变部位的阳性着色准确性、灵敏度、着色强度和重复率均优于Bennhold’s 刚果红染色法、酸化
Alkaland’s刚果红染色法。起到初步分型及辅助验证免疫荧光染色结果的作用;进行冰冻组织轻链蛋白（κ、λ）及淀粉样蛋白A
免疫荧光染色,更有利于肾淀粉样变的准确分型,如果无冰冻组织也可选用蛋白酶K消化石蜡组织免疫荧光染色。
     

食管癌组织侵袭脉管的免疫组织化学研究

应用血型抗原A、B、H的单克隆抗体及先进的SABC(Streptavidin-biotin Complex)技术对常规处理的51例食管癌组织切片进行免疫组织化学研究.结果表明:该方法为脉管内皮细胞提供了稳定而清晰的染色.能更加客观地观察食管癌组织内部间质及周围组织中的癌栓.其显示脉管侵袭的阳性率为43.14%.明显高于HE染色的23.53%(P<0.01)。食管癌组织侵袭脉管与癌组织的分化程度、生长方式及淋巴结转移等有密切关系(P<0.05)。