NT-3在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的 :了解ＮＴ - 3在挤压伤脊髓背角表达的变化 .方法 :采用本室建立的成年ＳＤ大鼠 (Ｔ13 -Ｌ1)脊髓挤压伤模型 ,分别于术后 2 4ｈ ,7ｈ ,2 1ｈ处死动物并设正常对照组 ,取Ｌ3 节段脊髓制作 2 0 μｍ厚冰冻连续切片 ,用抗ＮＴ - 3抗体按ＡＢＣ法行免疫组织化学染色 .观察ＮＴ - 3在挤压伤位点尾侧端 (Ｌ3 )背角的表达 ,记录其免疫反应强度 ,计数其免疫阳性神经元数和胶质细胞数 .结果 :ＮＴ - 3的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞 .挤压伤后 2 4ｈ ,背角ＮＴ - 3的免疫阳性神经元和胶质细胞数及其反应强度均较正常者明显降低 (Ｐ <0 0 5 ) ,术后 7ｈ者又较术后 2 4ｈ者明显降低 (Ｐ <0 0 1) ,而术后 2 1ｈ时又显著升高且高过正常者水平 (Ｐ <0 0 1) .结论 :ＮＴ - 3在挤压伤位点尾侧端背角的表达从术后 2 4ｈ至术后 7ｈ进行性减少 ,而术后 2 1ｈ时则增加并高过正常者水平 .提示ＮＴ - 3可能与脊髓挤压伤的早期修复有关并具有双向效应     

NGF在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的：了解神经生长因子（NGF）在挤压伤脊髓背角表达的变化。方法：采用成年SD大鼠（T13－L1）脊髓挤压伤模型并设正常对照组，分别于术后24小时、7天、21天处死动物。取L3节段脊髓制作20μm厚冰冻连续切片，用抗NGF抗体按ABC法行免疫组织化学染色，观察NGF阳性反应物在正常及挤压伤位点尾侧端（L3）背角的分布，记录其免疫反应强度，计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数。结果：NGF阳性反应物主要分布于正常脊髓背角的神经元和胶质细胞。挤压伤后24小时至21天，背角中NGF的免疫阳性细胞数及免疫反应强度均进行性升高（P＜0．01）。结论：脊髓挤压伤后早期，背角NGF的免疫阳性细胞数及免疫反应强度均进行性增加，提示NGF可能在脊髓挤压伤的早期修复中发挥作用。     

BDNF在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的:了解BDNF在挤压伤脊髓背角的表达变化.方法:用本室建立的成年SD大鼠(T13-L1)脊髓挤压伤模型,分别于术后24h,7h,21h处死动物并设正常对照组,取L3节段脊髓制作20μm厚冰冻连续切片,用抗BDNF抗体按ABC法行免疫组织化学染色.观察挤压伤位点尾侧端(L3)背角BDNF免疫反应物的分布,记录其免疫反应强度,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数.结果:BDNF的阳性反应物主要分布于正常脊髓背角的神经元和胶质细胞.术后24h,BDNF的免疫反应强度较正常者明显增强并维持至7h(P<0.05),术后21h又进一步增强并高过术后24h者水平(P<0.01).BDNF的免疫阳性细胞数则从术后24h至21h进行性增加(P<0.01).结论:脊髓挤压伤后早期,BDNF在损伤位点尾侧端背角的表达明显增加,提示BDNF在脊髓挤压伤的早期反应中可能起作用.     

NT-3在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的：了解NT-3在挤压伤脊髓背角表达的变化。方法：制作成年SD大鼠T13-L1节段脊髓挤压伤模型并设正常对照组。分别于术后24h，7d，21d处死动物。取L3节段脊髓制作20胛厚冰冻连续切片，用抗NT-3抗体行免疫组织化学ABC法染色，观察NT-3在背角的表达，记录其免疫反应强度，计数其免疫阳性神经元数和胶质细胞数。结果：NT-3的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞，挤压伤后NT-3的表达从术后24h至术后7d进行性减少，而术后21d时则增加并高过正常者水平。结论：NT-3不仅参与脊髓的正常生理活动，而且可能与脊髓挤压伤的早期修复有关并具有双向效应。     

NGF在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的　了解神经生长因子 (NGF)在挤压伤脊髓背角表达的变化。方法　采用成年 SD大鼠 (T1 3-L1 )脊髓挤压伤模型并设正常对照组 ,分别于术后 2 4小时、7天、2 1天处死动物。取 L3节段脊髓制作 2 0μm厚冰冻连续切片 ,用抗 NGF抗体按 ABC法行免疫组织化学染色 ,观察 NGF阳性反应物在正常及挤压伤位点尾侧端 (L3)背角的分布 ,记录其免疫反应强度 ,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数。结果　 NGF阳性反应物主要分布于正常脊髓背角的神经元和胶质细胞。挤压伤后 2 4小时至 2 1天 ,背角中 NGF的免疫阳性细胞数及免疫反应强度均进行性升高 (P<0 .0 1)。结论　脊髓挤压伤后早期 ,背角 NGF的免疫阳性细胞数及免疫反应强度均进行性增加 ,提示NGF可能在脊髓挤压伤的早期修复中发挥作用     

BDNF在挤压伤脊髓背角表达的时相变化（摘要）

目的 :了解ＢＤＮＦ在挤压伤脊髓背角的表达变化 .方法 :用本室建立的成年ＳＤ大鼠 (Ｔ13 -Ｌ1)脊髓挤压伤模型 ,分别于术后 2 4ｈ ,7ｈ ,2 1ｈ处死动物并设正常对照组 ,取Ｌ3 节段脊髓制作 2 0 μｍ厚冰冻连续切片 ,用抗ＢＤＮＦ抗体按ＡＢＣ法行免疫组织化学染色 .观察挤压伤位点尾侧端 (Ｌ3 )背角ＢＤＮＦ免疫反应物的分布 ,记录其免疫反应强度 ,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数 .结果 :ＢＤＮＦ的阳性反应物主要分布于正常脊髓背角的神经元和胶质细胞 .术后 2 4ｈ ,ＢＤＮＦ的免疫反应强度较正常者明显增强并维持至 7ｈ (Ｐ <0 0 5 ) ,术后 2 1ｈ又进一步增强并高过术后 2 4ｈ者水平 (Ｐ<0 0 1) .ＢＤＮＦ的免疫阳性细胞数则从术后 2 4ｈ至 2 1ｈ进行性增加 (Ｐ <0 0 1) .结论 :脊髓挤压伤后早期 ,ＢＤＮＦ在损伤位点尾侧端背角的表达明显增加 ,提示ＢＤＮＦ在脊髓挤压伤的早期反应中可能起作用     

NT—4在挤压伤脊髓背角表达的时相变化（摘要）

目的 :了解ＮＴ - 4在挤压伤脊髓背角表达的变化 .方法 :采用本室建立的成年ＳＤ大鼠 (Ｔ13 -Ｌ1)脊髓挤压伤模型 ,分别于术后 2 4ｈ ,7ｈ ,2 1ｈ处死动物并设正常对照组 ,取Ｌ3 节段脊髓制作 2 0 μｍ厚冰冻连续切片 ,用抗ＮＴ - 4抗体按ＡＢＣ法行免疫组织化学染色 .观察ＮＴ - 4在挤压伤位点尾侧端 (Ｌ3 )背角的表达 ,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数 .结果 :ＮＴ - 4的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞 .挤压伤后 2 4ｈ ,背角ＮＴ - 4的免疫阳性神经元和胶质细胞数及反应强度与正常者比较无明显变化 (Ｐ >0 0 5 ) ,但从术后第 7ｈ至术后第 2 1ｈ则逐渐增加且高过正常者水平 (Ｐ <0 0 1) .结论 :脊髓挤压伤位点尾侧端背角ＮＴ - 4的表达从术后第 7ｈ开始明显增加 ,术后第 2 1ｈ时又进一步增多 .提示ＮＴ - 4可能在脊髓挤压伤的早期修复过程中发挥作用     

挤压伤脊髓腹角神经元NT-3表达的变化

运用免疫组化ＡＢＣ法探讨了脊髓挤压伤后不同时间腹角ＮＴ－３的表达变化。结果：对照组可见ＮＴ－３免疫反应阳性细胞分布于腹角的大神经元和少量小神经元,胞核、胞浆均染色。此外,亦见少量阳性胶质细胞。     

不同类型损伤对脊髓背角神经元的影响

为了解不同类型损伤对脊髓背角神经元的影响，采用本室建立的SD成年大鼠脊髓挤压伤、半横断伤和全横断伤模型，分别于术后第24h，7d,21d处死动物并设正常对照组，取L3节段脊髓制作20μm厚连续冰冻切片，间隔取片行苏木精染色，光镜下观察损伤位点尾侧端背角的形态改变,计数背角神经元数，结果：组间比较，挤压伤者较正常者神经元明显萎缩，胞体周围有空隙，神经元数无明显减少（P＞0.05），半横断伤和全横断伤者均出现大量空泡，未见丰满而轮廓清楚的神经元，残存的少数神经元明显萎缩，术后神经元数明显减少且以全横断伤者为甚（P＜0.01），组内比较，3种损伤术后各时相神经元数的变化均无显著性差异（P＞0.05），结果表明：不同类型损伤时对背角神经元存活的影响不同，全横断伤者最重，半横断伤者次之，挤压伤者相对较轻。     

脊髓挤压伤后BDNF mRNA表达的RT-PCR研究

目的探讨实验性脊髓挤压伤后内源性神经营养素BDNF mRNA在不同时段的表达变化.方法采用成年SD大鼠简易脊髓挤压伤模型.一步法抽提脊髓组织总RNA,分光光度计测OD260,OD280值.β-actin作内参照,RT-PCR技术检测内源性神经营养素BDNF mRNA在不同时段的表达.结果(1)用RT-PCR技术检测到BDNF mRNA在正常大鼠脊髓表达.(2)脊髓挤压伤后BDNF mRNA在不同时段表达变化趋势不一.术后24h组、5d组、21d组BDNF mRNA的表达水平较正常组显著增高(P<0.05),而术后14d组虽高于正常组水平,但与正常组及损伤后除24h组外各组相比均无显著性差异(P>0.05).此外,除伤后24h组与14d组,伤后各组间比较亦均无显著性差异,表明脊髓挤压伤后24h,5d BDNF-mRNA表达明显增加,而14d略有下降,21d又有回升.结论(1)在正常大鼠脊髓有BDNF mRNA表达,提示BDNF可能与脊髓的生理功能有关.(2)cSCI后24h,5d,21d BDNF mRNA表达增高,可能有利于BDNF的合成,进而BDNF可能参与神经损伤修复.(3)BDNF mRNA于术后24h,5d明显升高,14d又回复近正常水平,而21d又明显回升,表明BDNF的表达在挤压伤脊髓内经历了双向变化.     

神经慢性挤压伤疼痛模型大鼠脊髓GABAA受体mRNA表达的变化

目的：了解大鼠坐骨神经慢性挤压伤（chronic constriction injury, CCI）模型脊髓GABAA受体α2、γ2亚型mRNA表达的变化。方法：SD大鼠20只，5只为正常对照，15只做成CCI模型，用Von Frey细丝和CO2激光测定大鼠足爪的疼痛阈值变化，并于术后3d、7d和14d处死（n=5每组），取L4－5脊髓用RT－PCR方法测定不同时点大鼠脊髓GABAA受体α2、γ2亚型mRNA的表达量。结果：CCI大鼠结扎侧在术后3d即开始出现机械感觉异常和痛觉过敏，7d、14d组逐渐加重（P＜0．05）。与正常大鼠比较，CCI大鼠GABAA受体α2、γ2亚单位mRNA表达量于术后7d开始出现下降（P＜0．05），且术后14d组进一步降低（P＜0．01）。结论：CCI大鼠疼痛模型中脊髓GABAA受体α2、γ2亚单位的表达量明显下降，其在慢性神经性疼痛中发病机制中的确切作用尚待进一步研究。     

挤压伤后脊髓腹角运动神经元NGF,BDNF表达的变化

为探讨脊髓挤压伤后早期不同时间腹角运动神经元NGF和BDNF的表达变化，建立脊髓挤压伤模型，取挤压伤位点尾侧段T13节段脊髓制作冰冻切片，运用NGF，BDNF兔抗血清以免疫组化ABC法染片，观察并计数腹角NGF和BNDF的阳性神经元数。结果：NGF主要分布于正常大鼠脊髓腹角运动神经元的胞核及胞浆，损伤后21d，NGF的阳性神经元数较对照、损伤1d及7d组均明显增多（P＜0．01），与NGF比较，对照组脊髓腹角亦见BDNF免疫阳性神经元，胞浆染色、胞核不着色，损伤后24h，BDNF阳性神经元数已较正常者有显著增加（P＜0．05），此后维持该水平至21d，结论：脊髓挤压伤后腹角神经元NGF和BDNF的表达明显增加，提示NGF和BDNF可能在脊髓损伤修复的早期反应中发挥作用。     

挤压性脊髓损伤模型的制备

为建立一种简易实用,稳定可靠的脊髓损伤动物模型。挤压Ｔ１３脊髓动段至其直径的１／２,术后不同时间观察损伤脊髓的组织学变化并记录损脊髓神经功能的综合评分。结果：光镜下,挤压相临节段脊骨侧索和灰质神经组织部分变形坏死。本模型所致的脊髓损伤结果稳定可靠,操作简便,作为一种损伤模型对研究脊髓损伤有一定的价值。     

大鼠SNI神经痛模型不同时相脊髓背角 p-p38MAPK和p-ATF2表达的变化

目的观察坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型大鼠不同时间点术侧腰段L4~L6脊髓背角神经元磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)和磷酸化活化转录因子2(p-ATF2)的表达情况,探讨脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2在神经病理性痛模型不同阶段中的作用。方法健康雄性SD大鼠36只,完全随机分为空白对照组、假手术组和手术组,各12只。通过结扎腓总神经及切断胫神经,保留腓肠神经的方法建立SNI大鼠模型。观察造模前、造模后3天和14天术侧足跖缩足阈值(PWT);免疫荧光法检测造模后3天和14天术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2阳性细胞表达情况。结果选模后3天和14天,手术组大鼠术侧足跖PWT较假手术组与空白对照组明显降低(P0.01),假手术组大鼠与空白对照组大鼠比较差异无统计学意义(P0.05)。造模后3天和14天,手术组大鼠术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2阳性细胞表达率较假手术组和空白对照组均明显升高(P0.01),假手术组和空白对照组SNI模型大鼠造模后各时间点,术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2阳性细胞表达率差异均无统计学意义(P0.05)。结论 SNI模型神经病理痛的产生和维持可能与术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2表达上调有关。     

大鼠坐骨神经挤压伤后血清SOD，MDA变化及脊髓神经细胞凋亡初步观察

目的研究坐骨神经挤压伤后血清SOD,MDA表达变化和细胞凋亡的规律及三者之间的关系。方法成年sD大鼠36只随机分为神经挤压组和假手术组。1,2,3周每组分别处死6只大鼠,用硫代巴比妥酸（thiobarbituricacid,TBA）法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶（xanthineoxidase,XO）法测定SOD,TUNEL法标记凋亡细胞,计算凋亡指数。结果①与假手术组相比,7d,14d大鼠血清中SOD含量下降,MDA含量升高,组间比较,差异均有显著性（P〈0．05）,7d达峰值,以后SOD逐渐上升,MDA逐渐下降。21d假手术组与手术组比较,差异无显著性（P〉0．05）;②手术组7d,14d大鼠脊髓神经细胞凋亡率比假手术组大鼠相应部位的神经细胞凋亡率增加,组间比较,差异有显著性（P〈0．05）。到21d与假手术组比较,差异无显著性（P〉0．05）;③神经细胞凋亡率与SOD活性呈负相关（r〈0,P〈0．05）,与MDA含量呈正相关（r〉0,P〈0．05）。结论坐骨神经挤压伤后血清SOD,MDA含量变化与脊髓神经细胞凋亡发生发展有关,氧化损伤可能是诱发细胞凋亡的机制之一。     

Caveoline-1蛋白在慢性神经痛大鼠背根神经节和脊髓背角表达的变化

目的 观察Caveolin-1蛋白在神经痛大鼠中不同作用时间脊髓背角和背根神经节表达量的变化。方法 实验动物分组和动物模型制作：对照组28只,神经痛模型组（L5脊神经结扎）28只,按处理时间不同又各分为1、3、5、7、10、14、21天共7组,每组各4只,制备动物模型。痛行为学检测：术后1、3、5、7、10、14、21天,测定各组机械撤足阈值和热撤足潜伏期,神经痛模型组和对照组对比,确定疼痛模型制作成功。神经痛模型组和对照组大鼠均在第22天处死,按同侧和对侧分别提取L5脊髓和背根神经节组织总蛋白,利用蛋白印迹法检测Caveolin-1在各实验分组脊髓背角和背根神经节同侧和对侧的表达量。结果 同侧背根神经节Caveolin-1的表达量在L5脊神经结扎后的第5、7、10、14、21天与对照组比较,分别升高了40.4%±3.67%、126.9%±5.46%、159.7%±4.89%、119.1%±5.77%和91.4%±5.31%,其中术后第10天差异有统计学意义（P<0.01）,同侧脊髓背角Caveolin-1的表达量在L5脊神经结扎后的第5、7、10、14、21天与对照组相比分别升高了33.3%±4.89%、152.8%±3.56%、142.1%±5.43%、103.2%±6.21%、175.6%±4.81%,其中第10、14、21天差异有统计学意义（P<0.05）。对照组之间Caveolin-1的表达无明显变化。结论 慢性神经痛可诱导Caveolin-1在同侧脊髓背角和背根神经节表达量的增加。     

神经病理性疼痛大鼠脊髓背角Sirt1与miR-34b表达的变化

目的研究Sirt1与miR-34b在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角中表达变化的临床意义。方法将14只雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）和坐骨神经慢性压迫性损伤组（CCI组）,每组7只。于模型建立前1d及术后第7、14天,测定大鼠机械缩足反射阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）。术后第14天取大鼠L4~5节段脊髓进行病理学检查,HE染色后观察脊髓背角运动神经元的数量变化。real-timePCR检测脊髓背角内Sirt1与miR-34b的表达,Westernblot测定大鼠脊髓背角内Sirt1、脑源性神经营养因子（BDNF）和环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）的表达。结果经MWT和TWL验证,大鼠CCI神经病理性疼痛模型建立成功。HE染色显示,与Sham组比较,CCI组大鼠在手术后7、14d脊髓背角神经元数量显著减少（均P＜0.05）。real-timePCR结果显示,与Sham组相比,CCI组Sirt1表达降低,miR-34b表达升高（均P＜0.05）。Westernblot显示Sirt1与CREB表达降低,pCREB与BDNF表达增加。结论Sirt1与miR-34b的表达变化可能参与坐骨神经慢性压迫性损伤导致的神经病理性疼痛的形成和维持。     

疼痛对不同年龄大鼠脊髓背角Caspase-3表达的影响

目的 探讨凋亡相关蛋白Caspase-3在大鼠疼痛模型脊髓背角中的表达及与年龄的关系。方法 应用免疫组织化学和免疫印迹反应方法检测Caspase-3在脊髓背角的表达。结果 未刺激侧不同年龄组间Caspase-3表达量无显著性差异（P〉0．05）;疼痛刺激侧青年组Caspase-3表达量明显高于中、老年组（P〈0．05）,中、老年组之间Caspase-3表达量无显著性差异（P〉0．05）;老、中、青各组刺激侧Caspase-3的表达均较同组未刺激侧增加（P〈0．05）。结论 疼痛刺激可以促进脊髓背角Caspase-3的表达,并且疼痛刺激时Caspase-3的表达与年龄有密切的关系。