离体豚鼠耳蜗灌流一氧化氮供体对耳蜗组织中环磷酸鸟苷含量的影响

目的 通过对离体的豚鼠耳蜗即刻灌流一氧化氮供体（DEA－NO）及可溶性鸟苷酸环化酶（sGC)抑制剂（ODQ），来改变耳蜗组织中环磷酸鸟苷（cGMP）含量，以便进一步研究一氧化氮／环磷酸鸟苷（NO／cGMP)途径在耳蜗中的调节作用。方法 24只纯种白色雄性豚鼠完全随机分为三组，分别灌流人工外淋巴基础液、DEA－NO／人工外淋巴基础溶液、ODQ＋DEA－NO／人工外淋巴基础溶液，收集耳蜗组织标本；用放射免疫的方法测定耳蜗组织中cGMP的含量。结果 向离体耳蜗中灌注1mM DEA-NO溶液可以引起耳蜗组织中cGMP含量的显著增加，先灌注ODQ，后灌注1mM DEA-NO，耳蜗组织中cGMP合成量明显少于单独灌注1mM DEA-NO，但仍高于对照组。结论 对离体的豚鼠耳蜗即刻灌流一氧化氮供体（DEA－NO）及可溶性鸟苷酸环化酶（sGC)抑制剂（ODQ），可以作用于NO／cGMP途径，改变耳蜗组织中cGMP含量，同时用放射免疫测定耳蜗组织中cGMP含量的方法是可行的。     

耳蜗血管纹缘细胞三磷酸腺苷释放机制

三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）被认为是耳蜗中一种重要的信号分子,可以作为共同递质和（或）神经调节物质发挥耳蜗的各种生理功能。目前已证实新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞内的ATP囊泡为溶酶体,可以释放ATP。然而,缘细胞释放ATP的机制还未完全阐明,本文结合国内外文献就耳蜗缘细胞中ATP释放机制的研究现状做一综述。     

P2嘌呤受体在内耳中的分布特性和功能

在听觉系统中，外源性三磷酸腺苷(ATP)除作为耳蜗活性物质外，还可作为神经递质或调质，参与Corti器内感觉毛细胞及支持细胞的各种生理功能，从而产生一系列效应，调节耳蜗听觉生理功能；ATP的这种作用主要是通过P2嘌呤受体介导的信号传导完成的，现就P2嘌呤受体在内耳的分布特点及介导的信号传导在耳蜗听功能中的生物学作用作一综述。     

P2嘌呤受体在内耳中的分布特性和功能

在听觉系统中,外源性三磷酸腺苷(ATP)除作为耳蜗活性物质外,还可作为神经递质或调质,参与Corti器内感觉毛细胞及支持细胞的各种生理功能,从而产生一系列效应,调节耳蜗听觉生理功能;ATP的这种作用主要是通过P2嘌呤受体介导的信号传导完成的,现就P2嘌呤受体在内耳的分布特点及介导的信号传导在耳蜗听功能中的生物学作用作一综述.     

耳蜗中L-精氨酸对Ca2+-ATP酶抑制剂的拮抗作用

目的探讨耳蜗中L-精氨酸对Ca2+-ATP酶抑制剂的拮抗作用。方法选择健康杂色豚鼠70只,雌雄不限,随机分为7组,每组10只:①人工外淋巴液组;②Ca2+-ATP酶抑制剂组;③L-精氨酸组;④Ca2+-ATP酶抑制剂+L-精氨酸组;⑤Ca2+-ATP酶抑制剂+环磷酸鸟苷(cGMP)组;⑥Ca2+-ATP酶抑制剂+L-精氨酸+非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂组;⑦Ca2+-ATP酶抑制剂+L-精氨酸+可溶性环磷酸鸟苷合酶sGC抑制剂组。各组动物分别行全耳蜗灌流以上各组药物120分钟,灌流过程中由圆窗龛每隔30分钟测1次耳蜗微音器电位(cochlear microphonic,CM)和听神经复合动作电位(compound action potential,CAP),比较各组结果。结果第3组灌流Ca2+-ATP酶抑制剂前后CAP阈移为28.5 dB,第4组在此基础上加入L-精氨酸可使CAP阈移改善9 dB,与第5组加入cGMP后作用相似;第6组多加入非选择性NOS抑制剂后CAP阈移为29.5 dB,与第7组加入可溶性环磷酸鸟苷合酶sGC抑制剂作用相似。结论①Ca2+-ATP酶抑制剂通过抑制Ca2+-ATP酶使胞内Ca2+浓度升高,可对耳蜗功能产生影响;②L-精氨酸通过激活NO/cGMP通路可对Ca2+-ATP酶抑制剂的作用产生部分拮抗。     

新生大鼠耳蜗K(o)lliker器支持细胞ATP释放的机制

目的 观察体外培养的新生大鼠耳蜗K(o)lliker器支持细胞是否存在并释放ATP,初步探讨其释放机制.方法 选取出生后ld的Sprague-Dawley大鼠,分离耳蜗膜迷路,采用机械分离与酶消化相结合的方法获得单离的K(o)lliker器支持细胞.观察膜迷路和K(o)lliker器支持细胞的喹丫因染色情况.采用生物发光法,通过影响K(o)lliker器支持细胞ATP代谢、改变细胞内外Ca2浓度、抑制细胞内磷脂酶信号通路及添加缝隙连接半通道阻断剂,观察K(o)lliker器支持细胞释放ATP浓度的变化.结果 用喹丫因染色体外培养的K(o)lliker器支持细胞,发现胞质中存在大量绿色星点状染色.采用生物发光法检测的ATP标准曲线呈明显的对数线性关系.随着巴佛洛霉素A1浓度增加,K(o)lliker 器支持细胞培养液中ATP浓度逐渐降低,而随着己二酸二癸酯浓度的增加,培养液中ATP浓度逐渐升高;在一定浓度范围内,随着细胞外Ca2浓度增加,K(o)lliker器支持细胞ATP的释放减少,而随着细胞内游离Ca2浓度增加,K(o)lliker器支持细胞释放ATP量增加;培养液中加入甘珀酸钠或乌热酸抑制半通道后可以显著的降低ATP释放.此外,抑制细胞内磷脂酶信号通路也可以减少ATP的释放.结论 体外培养的新生大鼠耳蜗K(o)lliker器支持细胞存在并释放ATP,细胞内、外液中Ca2+浓度的变化可能通过调节半通道的开放而影响其ATP的释放.     

豚鼠耳蜗Ca++ -ATP酶组化定位

钙是细胞内一种重要的调节细胞各种功能的信使。其哺乳动物细胞内浓度约为10~(-7)mo l/L。该浓度受Ca~(++)通道系统、离子交换机制、细胞内Ca~(++)储存和Ca~(++)泵的控制。Ca~(++)通道是质膜上的孔,经过它Ca~(++)沿着化学和/或电子梯度被动进入细胞内。在可兴奋细胞中这些通道受生理刺激或神经介质调节。Ca~(++)泵是一种对传出质膜的Ca~(++)具有高度亲和力的磷酸酶,其定位可通过一步法枸橼酸铅反应组化测定。该反应中ATP是底物,Ca~(++)是激活剂,铅     

豚鼠耳蜗一氧化氮合酶异型体的定位

目的 研究一氧化氮合酶(NOS)的异型体在豚鼠耳蜗的定位分布，以探讨一氧化氮(NO)在内耳听觉生理和病理生理机制中的作用。方法 使用特异性NOS异型体抗体，采用ABC免疫组化染色法，观察NOS异型体在正常豚鼠耳蜗的定位表达。结果 NOS Ⅰ主要分布在内骨膜、螺旋神经节的核周体、螺旋韧带和Corti’s器的细胞。NOS Ⅲ是耳蜗的主要NOS异型体免疫染色，其主要免疫染色分布于耳蜗神经、螺旋神经节核周体、螺旋韧带和耳蜗毛细血管球的内皮细胞，也见于Corti’s器的细胞和神经纤维。NOS Ⅱ在正常豚鼠耳蜗内不表达。结论 结构型NOS(cNOS)表达在耳蜗的多个部位，表明NO参与内耳的正常生理功能，包括神经突触的神经传导、耳蜗血流的调节和耳蜗的骨代谢。     

豚鼠耳蜗一氧化氮合酶异型体的定位

目的研究一氧化氮合酶(NOS)的异型体在豚鼠耳蜗的定位分布,以探讨一氧化氮(NO)在内耳听觉生理和病理生理机制中的作用。方法使用特异性NOS异型体抗体,采用ABC免疫组化染色法,观察NOS异型体在正常豚鼠耳蜗的定位表达。结果NOS Ⅰ主要分布在内骨膜、螺旋神经节的核周体、螺旋韧带和Corti's器的细胞。NOSⅢ是耳蜗的主要NOS异型体免疫染色,其主要免疫染色分布于耳蜗神经、螺旋神经节核周体、螺旋韧带和耳蜗毛细血管球的内皮细胞,也见于Corti's器的细胞和神经纤维。NOS Ⅱ在正常豚鼠耳蜗内不表达。 结论结构型NOS(cNOS)表达在耳蜗的多个部位,表明NO参与内耳的正常生理功能,包括神经突触的神经传导、耳蜗血流的调节和耳蜗的骨代谢。     

耳蜗中三磷酸腺苷的来源

耳蜗中的三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)是对调节声转导、听敏度、外毛细胞主动的机械放大、耳蜗内电位、耳蜗内环境稳定、控制血管张力等具有关键作用的信号分子.作为耳蜗中一种候选的传入性神经递质,ATP在耳蜗功能中的作用正受到越来越多的重视.本文重点对耳蜗中ATP来源研究的进展做一综述.