体外和体内内皮化在胶原包埋羟基磷灰石涂层的人工机械瓣膜的实验研究

目的：通过体外内皮化和体内内皮化,探讨沉积胶原包埋羟基磷灰石（HA）涂层人工机械瓣膜的可行性及其在人工机械瓣膜支架体内的再细胞化能力。方法制备犬血管内皮细胞（VEC）悬液,接种在胶原包埋 HA 涂层人工机械瓣膜材料上,置培养箱内分组培养如下：①37℃孵箱中静态培养2周;②动态旋转培养装置中培养2周,比较两组 VEC 分泌一氧化氮（NO）、前列环素（PGI2）水平;再分别将人工机械瓣膜植入犬右心房,术后6周,取出部分材料,扫描电子显微镜（SEM）下观察 VEC 在 HA 材料上的附着情况,了解 HA支架材料在体内的再细胞化能力。结果与静态系统相比,人工机械瓣膜在动态旋转系统构建胶原包埋 HA 涂层 VEC分泌 NO 、PGI2水平显著升高（P ＜0．05）;在犬右心房人工机械瓣膜取出材料中,动态旋转系统构建胶原包埋 HA 涂层VEC 层均匀分布,并有心脏内皮细胞附着,而静态培养系统中 VEC 层分布不均匀,胶原包埋 HA 涂层有心脏血管内皮细胞附着,而单纯人工机械瓣薄膜表面出现较多的血栓形成。结论动态旋转系统中构建的组织工程化瓣膜模型中, VEC 可能成为组织工程化机械瓣膜材料;胶原包埋的 HA 涂层人工机械瓣膜有利于 VEC 的黏附和生长。     

体外培养的新生小牛冠状动脉内皮细胞释放NO、ET-1和PGI2的实验研究

目的：建立新生小牛冠状动脉内皮细胞体外培养模型，并观测其对NO、ET－1和PGI2的分泌。方法：采用机械分离方法，通过内皮细胞Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色和其在倒置相差显微镜下的形态进行鉴别。用放免法和比色法测定培养液中ET－1、PGI2、NO浓度。结果：新生小牛冠状动脉内皮细胞在体外生长曲线呈“S”形，并能分泌ET－1、PGI2和NO。结论：新生小牛冠状动脉内皮细胞能够进行体外培养，并能分泌ET－1、PGI2和NO。     

钛基表面纳米银复合涂层的组织相容性研究

目的探讨钛基表面羟基磷灰石/纳米银(HA/Ag)复合涂层的组织相容性,为进一步临床研究和应用奠定基础。方法应用脉冲电泳方法,根据不同浓度的钙-磷-银电解液,在钛金属表面沉积3种复合涂层材料。按国家和ISO对生物材料相容性的检测标准,检测钛基表面HA/Ag复合涂层的生物相容性。以新西兰兔、昆明小鼠进行热原试验、皮肤刺激试验、急性毒性试验和溶血试验。结果静脉注射材料浸提液后,兔体温升高值<0.6℃。浸提液皮内注射法及划痕法观察72 h,兔局部皮肤无红肿、渗出、溃烂等刺激反应。腹腔注射浸提液后,小鼠未出现异常症状,体质量有增加趋势。3种材料溶血率均低于生物医用材料溶血国际标准(5%)。结论在钛基表面沉积制备的HA/Ag纳米复合材料,具有良好的组织相容性。     

益肺活血复方对人肺动脉内皮细胞微结构及内分泌功能的影响

目的:观察益肺活血复方对人肺动脉内皮细胞微结构及内分泌功能的影响。方法:建立人肺动脉内皮细胞低氧高二氧化碳模型;制备益肺活血复方不同给药剂量(生药10、20、40 g/kg)的含药血清;在细胞培养液中共同孵育12 h后,利用透射电镜观察细胞微结构变化,采用放射免疫法测定各组细胞培养液上清中内皮素-1(ET-1)及前列环素(PGI2)的含量,采用硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量。结果:低氧高二氧化碳条件下,人肺动脉内皮细胞微结构损伤,而中、高剂量益肺活血复方组细胞微结构损伤减轻。各组细胞培养液或培养液上清中ET-1、NO、PGI2的含量比较,差异有统计学意义(F=121.870、60.040、49.060,P均<0.001);模型组ET-1含量高于空白对照组,NO、PGI2含量低于空白对照组(P均<0.01);中、高剂量益肺活血复方组ET-1含量低于模型组,NO和PGI2含量高于模型组(P均<0.01)。结论:低氧高二氧化碳导致人肺动脉内皮细胞微结构及功能障碍,而中、高剂量益肺活血复方可减轻其结构及功能损伤的程度。     

人脐静脉内皮细胞用于构建组织工程心脏瓣膜的实验研究

目的：以人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)为种子细胞，体外构建组织工程心脏瓣膜(TEHV)，并对其分泌纤溶物质——组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI-1)的作用进行观察。方法：获取并扩增HUVECs，种植在猪脱细胞主动脉瓣叶上，体外静态构建TEHV。观察内皮细胞的形态学变化和生长状况。收集瓣膜培养液，采用发色底物法检测瓣膜内皮细胞分泌的t-PA和PAI-1活性。结果：以猪脱细胞主动脉瓣叶作支架，HUVECs做种子细胞，体外成功构建TEHV，种植的HUVECs在瓣膜表面长成一层连续的细胞层，生长状态良好。瓣膜表面的内皮细胞能够分泌纤溶物质t-PA和PAI-1。结论：HUVECs种植在猪脱细胞瓣膜支架上可以构建TEHV，且瓣膜内皮细胞能够分泌t-PA和PAI-1。     

螺内酯对高血压病患者血管内皮细胞功能的影响

目的探讨螺内酯对高血压病患者血管内皮细胞功能的影响.方法选择52例高血压病患者作为试验组,30例健康者作为对照组,给药前先测定试验组和对照组的内皮素(ET)、血栓素A2(TXA2)、一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2),再予以试验组螺内酯20 mg/d,3个月后再测定试验组的患者ET、TXA2、NO、PGI2并进行比较.结果给药前试验组患者的ET、TXA2水平显著高于对照组,NO、PGI2水平显著低于对照组;给药后试验组患者ET、TXA2较给药前明显降低,而NO、PGI2水平较给药前明显升高.结论螺内酯可以有效地改善血管内皮细胞功能,对逆转高血压病患者血管内皮细胞功能紊乱起重要的作用.     

应用骨髓干细胞和自制胶原-壳聚糖构建组织工程心瓣膜

目的探讨应用骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)诱导分化的内皮细胞为种子细胞,以胶原-壳聚糖复合物为支架材料,运用组织工程学的原理和方法体外构建组织工程心脏瓣膜(tissue engineering heart valve,TEHV)的可行性。方法兔主动脉壁体外分离、培养、传代平滑肌细胞、成纤维细胞,将培养的成纤维细胞、平滑肌细胞与兔骨髓基质干细胞诱导分化的内皮细胞按顺序种植在预湿处理的胶原-壳聚糖复合支架上,通过组织学及倒置显微镜、扫描电镜观察内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞在支架上生长、增殖和基质分泌情况。结果 HE染色示内皮细胞能够在胶原-壳聚糖复合支架黏附、伸展、增殖,在TEHV表面长成连续的细胞层;扫描电子显微镜示TEHV表面光滑,细胞生长良好,细胞层完整,且瓣膜表面的内皮细胞具有合成和分泌前列环素(PGI2)的功能。结论以兔主动脉壁体外分离、培养、传代的平滑肌细胞、成纤维细胞和BMSCs诱导分化的内皮细胞为种子细胞,依次种植在胶原-壳聚糖复合支架上可以构建TEHV,且内皮细胞能够分泌PGI2。     

纳米羟基磷灰石膜复合材料与小鼠成纤维细胞的相容性

目的探讨纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料(nano-Hydroxyapatite/ polyurethane,nHA/PU) 与小鼠成纤维细胞（L929）的生物相容性[1]。方法 将小鼠成纤维细胞与纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料体外复合培养,并设单独细胞培养的阴性对照和细胞与传统材料复合培养的对照组,倒置相差显微镜、扫描电镜行形态学观察,计数接种后的黏附情况,流式细胞仪分析接种到材料上的细胞的生长周期,CCK-8法[2]检测材料对细胞增殖影响。结果 小鼠成纤维细胞在纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料上良好的黏附、生长、增殖,流式细胞仪分析接种到材料上的细胞,其细胞周期与空白对照组和传统对照对比差异均无显著统计学（P>0.05）,CCK-8检测显示材料对细胞增殖的影响小于传统材料。结论 纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料具有良好的细胞相容性,可望作为组织工程人工肛门括约肌的外层套囊材料。     

PLGA材料应用于组织工程血管的初步研究

目的探讨PLGA材料应用于组织工程血管的可行性。方法应用胎儿脐血管和平滑肌细胞，内皮细胞种植于PLGA血管片上并进行培育，应用光镜与电镜观察细胞生长情况并采用放免方法测定内皮细胞功能状况。同时把血管片包埋于小鼠皮下，观察血管钙化与组织相容性情况。结果顺序培育4周后，平滑肌细胞，内皮细胞在PLGA血管片上贴附良好，血管片结构与正常血管相一致；并且细胞种类可通过免疫组化方法鉴定，平滑肌细胞多层排列，而内皮细胞层为单层。同时在血管片培养液中可检测出内皮素和6-酮-前列腺素。包埋实验显示在各个观察时间点血管片无钙化，并且组织相容性较好。结论采用PLGA血管片做细胞支架，平滑肌细胞，内皮细胞在血管片上贴附和生长良好，且内皮细胞还能合成分泌血管活性物质。同时具有良好的组织相容性。该结果说明在PLGA血管片上顺序接种上平滑肌细胞和内皮细胞可开发出具有一定形态和功能特征的组织工程血管片。具有用作组织工程血管的潜能。     

川芎嗪对离断再植血管内皮细胞的功能影响的实验研究

目的：探讨川芎嗪对血管内皮细胞(VEC)结构与功能的影响，为川芎嗪应用于显微外科提供实验依据。方法：将实验大白兔随机分为川芎嗪组、肝素组、生理盐水组，切断股动脉后，吻合血管，术后第12小时、第2天至第14天作静脉注射药物，于术后24小时、术后第3天、第7天、第14天抽血检测血管内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、及前列腺素II／血栓素II(PGI2／TXA2)含量。结果：实验川芎嗪组和肝素组的ET值低于生理盐水组；而川芎嗪组和肝素组的NO值则高于生理盐水组，川芎嗪组的NO值高于肝素组；川芎嗪组和肝素组的PGI2／TXA2值高于生理盐水组。结论：川芎嗪能够明显降低血管再植术后血中内皮素(ET)的含量，增高一氧化氮(NO)的含量，升高PGI2／TXA2值，对保护血管内皮细胞，预防血栓形成有较好作用。     

羟基磷灰石/磷酸三钙作为细胞载体的体外实验

目的：探讨羟基磷灰石/磷酸三钙（HA/TCP）复合材料作为组织工程载体的可能;为基质材料表面改性提供实验基础。方法：应用人骨髓基质细胞（hBMSCs）和脐静脉内皮细胞(UVECs)和HA/TCP进行混合培养,应用光学显微镜、荧光显微镜及扫描电子显微镜对其进行观察。结果：人骨髓基质细胞和脐静脉内皮细胞在HA/TCP表面均生长良好,并可观察到细胞长入基质材料微孔内的改变。结论：羟基磷灰石/磷酸三钙（HA/TCP）复合材料可作为细胞移植的载体。     

恒河猴骨髓基质干细胞与新型可吸收羟基磷灰石及β-磷酸三钙体外相容性的观察

目的观察恒河猴骨髓基质干细胞(rBMSC)与新型可吸收羟基磷灰石(HA)及AO人工骨β-磷酸三钙(β-TCP)的体外相容性．为在灵长类动物体内构建组织工程化骨作材料方面的准备，方法取第三代恒河猴骨髓基质细胞与材料复合培养。实验分3组：A组将rBMSC与HA复合培养；B组rBMSC与β-TCP复合培养：C组为对照，只有细胞不加材料。倒置相差显微镜、扫描电镜观察各组细胞形态及增殖情况．MTT法半定量检测细胞增殖。结果倒置显微镜下见HA组细胞生长良好，与对照组无显著差异。β-TCP组有一些细小颗粒脱落散在分布于板底或细胞表面．有少量细胞脱落死亡。扫描电镜见HA组细胞贴附、增殖良好，β-TCP组细胞贴附率不高。MTT法显示HA组细胞增殖与对照组接近，而β-TCP组则显著低于对照组。结论新型HA与恒河猴BMSc生物相容性好，可用作恒河猴骨组织工程的支架材料．AO人工骨需要作性能上的改进。     

恒河猴骨髓基质干细胞与新型可吸收羟基磷灰石及β-磷酸三钙体外相容性的观察

目的 观察恒河猴骨髓基质干细胞(rBMSC)与新型可吸收羟基磷灰石(HA)及AO人工骨茁-磷酸三钙(茁-TCP)的体外相容性。为在灵长类动物体内构建组织工程化骨作材料方面的准备。方法 取第三代恒河猴骨髓基质细胞与材料复合培养。实验分3组:A组将rBMSC与HA复合培养;B组rBMSC与茁-TCP复合培养;C组为对照,只有细胞不加材料。倒置相差显微镜、扫描电镜观察各组细胞形态及增殖情况,MTT法半定量检测细胞增殖。结果 倒置显微镜下见HA组细胞生长良好,与对照组无显著差异。茁-TCP组有一些细小颗粒脱落散在分布于板底或细胞表面,有少量细胞脱落死亡。扫描电镜见HA组细胞贴附、增殖良好,茁-TCP组细胞贴附率不高。MTT法显示HA组细胞增殖与对照组接近,而茁-TCP组则显著低于对照组。结论 新型HA与恒河猴BMSc生物相容性好,可用作恒河猴骨组织工程的支架材料,AO人工骨需要作性能上的改进。     

养阴益气活血方药对VEC血管调节物质的影响

目的：观察养阴益气活血方药物血清对血管内皮细胞（VEC）病理模型血管调节物质的影响及其对血瘀证的治疗机理。方法：经LPS及养阴益气活血方药物血清作用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）12h后,取上清培养液测定NO与ET水平。结果;养阴益气活血方药物血清可降低LPS所致NO与ET的升高。结论：养阴益气活血方可以维持VEC血管调节物质的动态平衡。维持其正常生理功能,从而能有效预防和治疗血瘀证。     

健胎液对人脐静脉内皮细胞分泌血管活性物质的影响

采用血清药理学方法观察健胎液对缺氧人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌血管活性物质——内皮素（ET）、前列环素（PGI2)、一氧化氮（NO)的影响,以及对缺氧HUVEC形态结构的保护作用,旨在探讨健胎液防治胎儿宫内生长迟缓（IUGR）的机理。结果表明健胎液可显著提高缺氧HUVEC合成分泌PGI2、NO（P<0.05,P<0.01）,同时减少ET的释放(P<0.05);从超微结构上观察,健胎液能明显减轻缺氧对HUVEC细胞器和细胞核的损伤。结果提示健胎液通过增强HUVEC对缺氧的耐受性,调节血管活性物质的分泌是其防治胎儿宫内生长迟缓的机制之一。     

罗格列酮对高糖环境下人脐静脉内皮细胞分泌NO及ICAM-1的影响

目的 研究在高糖环境下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌NO及ICAM-1的量随时间的变化以及罗格列酮的干预作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分为正常对照组、高糖组、罗格列酮干预组,加入相应培养液培养不同时间（0 h,24h,48 h,72 h,96 h）.用硝酸还原酶法测细胞上清液中NO^-3＋NO^-2含量,来反映NO水平;用酶联免疫吸附技术双抗体夹心法（ABC-ELISA）测定细胞上清液中ICAM-1水平.结果 与正常对照组相比,高糖组NO含量在24 h明显升高,在48 h显著降低,于72 h基本达底线水平,ICAM-1水平在各时间点均明显升高且呈时间依赖性;罗格列酮可显著抑制高糖引起的NO的变化及ICAM-1的增高.结论 罗格列酮可纠正高糖诱导的内皮细胞功能紊乱,起到保护血管的作用.     

高胰岛素对人内皮细胞分泌前列环素和内皮素-1的影响

目的：了解高胰岛素对人内皮细胞分泌前列环素（PGI2）和内皮素-1（ET-1）的影响.方法：采用酶消化法收集人脐静脉内皮细胞,经原代培养后随机分为4组：正常对照组,高胰岛素组,正常＋谷胱甘肽组,高胰岛素＋谷胱甘肽组;放免法测定4种培养基培养24 h,48 h,72 h时培养基中的PGI2和ET-1含量.结果：①高胰岛素组较正常对照组PGI2显著下降（P＜0.01）,ET-1显著升高（P＜0.01）;②高胰岛素＋谷胱甘肽组较高胰岛素组PGI2显著升高（P＜0.05）和ET-1显著下降（P＜0.05）.结论：高胰岛素对血管内皮细胞有损伤作用,还原型谷胱甘肽可减轻这种损伤.     

流行性出血热病毒感染对离体人脐带静脉血管内皮细胞分泌前列环素的影响

用两株流行性出血热病毒（EHF）感染体外培养的人脐带静脉血管内皮细胞（HUVEC），观察EHFV对HUVEC形态学和分泌前列环素（PGI2）的影响。结果发现：感染EHFV的HUVEC未出现明显的细胞病变，但PGI2的分泌显著增加。研究结果揭示：EHFV可直接刺激血管内皮细胞分泌PGI2，可能是引起流行性出血热患者病程初期血浆PGI2水平升高的重要原因。     

糖基化终末产物对人内皮细胞分泌前列环素和内皮素-1的影响

目的 了解糖基化终末产物（AGES）对人内皮细胞分泌前列环素（PGI2）和内皮素-1（ET-1）的影响,以及α-硫辛酸（α-LPA）对其的影响。方法 采用酶消化法收集人脐静脉内皮细胞,经原代培养后随机分为4组：正常对照组、AGES组、正常+AGES组和AGES + α-LPA组;放免法测定培养24、48、72h时培养基中的PGI2和ET-1含量。结果 ①AGES组较正常对照组PGI2显著下降(P＜0.05),ET-1显著升高(P＜0.05);②AGES +α -LPA组较AGES组PGI2显著升高 (P＜0.05),ET-1显著下降 (P＜0.01)。结论 AGES对血管内皮细胞有损伤作用,α-LPA可减轻这种损伤,提示抗氧化剂可用于保护血管内皮细胞。