枸杞多糖对神经元缺氧损伤的保护作用

【目的】观察枸杞多糖对神经元缺氧损伤的保护作用。【方法】建立原代培养神经元缺氧损伤模型,通过形态学观察以及细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）释放量、细胞内SOD活性及MDA含量的测定,研究枸杞多糖对神经元缺氧损伤的保护作用。【结果】枸杞多糖能明显改善缺氧损伤神经元的形态改变,提高细胞存活率,减少细胞内LDH的漏出,并可显著提高细胞内SOD活性,减少脂质过氧化产物MDA的产生。【结论】枸杞多糖对神经元缺氧损伤具有明显的保护作用。     

丹酚酸B对大鼠皮层神经元缺糖缺氧损伤的影响

目的探讨丹酚酸B(SalB)对原代培养大鼠皮层神经元缺糖缺氧损伤的影响。方法采用原代培养的大鼠皮层神经元,随机分为正常组、模型组和丹酚酸B组,复制缺糖缺氧4h的细胞模型,MTT法观察神经元的活性和存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP)、细胞内游离Ca2 和细胞凋亡率。结果丹酚酸B组神经元的活性(0.450±0.105)、存活率(58.20±13.56)%以及MMP荧光值(126.24±12.09)高于模型组神经元的活性(0.336±0.037)、存活率(43.40±4.73)%以及MMP荧光值(109.75±10.15),两者比较有明显差异(P(0.05);而丹酚酸B组LDH漏出率(15.84±1.47)%、细胞内Ca2 荧光强度(66.75±5.93)及凋亡率(4.82±2.48)%则低于模型组的LDH漏出率(27.39±3.75)%、细胞内Ca2 荧光强度(101.09±16.08)及凋亡率(10.83±2.13)%,两者相比亦有显著性差异(P(0.01)。结论丹酚酸B通过维持细胞内Ca2 稳态,稳定线粒体膜电位及降低细胞凋亡率,对缺糖缺氧损伤的大鼠皮层神经元起到保护作用。     

加味四逆散对心理应激损伤大鼠海马nNOS表达的影响

【目的】观察调肝治法方药——加味四逆散对慢性心理应激损伤大鼠海马神经元神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响。【方法】取W istar大鼠24只随机分为3组:正常组(不施加任何刺激)、模型组(给予21 d的随机应激刺激)、加味四逆散组(每次刺激前1 h灌胃中药1次,剂量为3.38 g/只)。正常组及模型组每次灌胃等容积生理盐水。采用免疫组织化学方法检测nNOS表达。【结果】3组大鼠海马的CA3区锥体细胞均有nNOS表达,而模型组表达的强度显著高于正常组,其阳性细胞数及阳性累积分显著性增多(P<0.01);加味四逆散可显著性降低大鼠海马nNOS表达,减少其阳性细胞数及阳性累积分(P<0.01)。【结论】加味四逆散改善慢性心理应激的作用与其能抑制大鼠海马神经元nNOS的高表达,从而避免NO升高损害细胞有关。     

双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用

目的 观察双苯氟嗪(Dipfluzine,Dip)对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用,并探讨其作用机制.方法 以原代培养的海马神经元作为研究对象,用谷氨酸建立海马神经元损伤模型,通过测定细胞存活率,乳酸脱氢酶(LJ)H)泄漏率和胞内游离钙浓度(Ca2+)变化,观察双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用.结果 双苯氟嗪可显著提高谷氨酸损伤海马神经元存活率,降低LDH泄漏率,对谷氨酸诱导的海马神经元细胞内ca2+升高有明显的抑制作用.结论 双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制谷氨酸诱导的细胞内钙超载有关.     

抗抑郁药奥氮平对大鼠海马神经细胞凋亡和细胞周期的影响

目的：探讨抗抑郁药物奥氮平对谷氨酸（Glu）损伤的大鼠海马神经元凋亡、坏死和细胞周期的影响,阐明奥氮平神经保护作用的机制。方法：采用体外原代培养的大鼠海马神经元,复制Glu损伤模型,细胞分为正常对照组、Glu损伤组和奥氮平+Glu损伤组,在体外通过流式细胞术测定各组神经元细胞凋亡率、坏死率和细胞周期的改变。结果：与正常对照组比较,其他组细胞凋亡率增加 (P<0.01);与Glu损伤组比较,10.0 μmol/L奥氮平+Glu损伤组细胞凋亡率降低（P<0.01 )。与正常对照组比较,Glu损伤组神经元坏死率升高2.9倍 (P<0.05);与Glu损伤组比较,100.0和200.0 μmol/L奥氮平+Glu损伤组神经元坏死率降低(P<0.05或P<0.01)。与正常对照组比较,Glu损伤组G0/G1期细胞百分数增加 (P<0.01）,S期细胞百分数下降（P<0.01）,G2 + M期变化不明显;而与Glu损伤组比较,
50.0和100.0 μmol?L-1奥氮平+Glu损伤组G0/G1期细胞比例下降为Glu损伤组的79.9%和62.6% (P<0.05或P<0.01);S期细胞比例上升为Glu损伤组的2.5和3.8倍 (P<0.05或P<0.01)。结论：奥氮平能够抵抗Glu诱导的神经元凋亡和坏死,改变细胞周期进程。     

铅对原代培养海马细胞的毒性作用

目的 观察铅对原代培养海马神经元的毒性.方法 原代培养乳大鼠海马神经元,不同质量浓度的醋酸铅(10、50、100和200 μg/mL)作用后,MTT法检测细胞存活率,HE染色和尼氏体染色观察细胞形态的改变,激光扫描共聚焦显微镜定量分析神经元胞浆中游离Ca2+的平均荧光强度.结果 较低质量浓度醋酸铅(10μg/mL)对海马神经元无细胞毒性,反而可能有助于细胞存活;而低、中、高浓度醋酸铅(50、100、200μg/mL)作用海马神经元24 h后细胞存活都明显低于正常对照组(P<0.05),并呈剂量和时间依赖关系.HE染色结果表明,随着醋酸铅浓度的增加,神经元变性、固缩及坏死等形态变化越严重.尼氏体染色结果表明醋酸铅能使海马神经元的尼氏体减少.着色浅淡,且有剂量依赖关系.激光共聚焦显微镜检测结果显示随着醋酸铅剂量的增大,细胞内液Ca2+浓度也随着增大,醋酸铅3个浓度组的平均荧光强度均显著高于正常对照组(P<0.01),并有剂量反应关系.结论 原代培养的海马神经元随着醋酸铅剂量的加大和作用时间的延长,呈现不同程度的损伤.     

胍丁胺拮抗谷氨酸所致大鼠海马神经元兴奋性神经毒性的研究

目的探讨胍丁胺对L-谷氨酸（Glu）诱导的大鼠海马神经元损伤的影响。方法采用大鼠原代海马神经元培养的方法,用不同浓度Glu（1、10、100μmol/L）处理原代培养海马神经元1h,建立Glu诱导的原代培养大鼠海马神经元损伤模型,经乳酸脱氢酶（LDH）活性检测和显微镜下观察,确定建立大鼠海马神经元损伤模型的最佳浓度。处理组在已建立的大鼠海马神经元损伤模型中加入不同浓度（10、50、100μmol/L）胍丁胺,观察胍丁胺对Glu诱导的海马神经元损伤的作用。未经Glu处理的为正常对照组。结果上清液中的LDH活性（P〈0.01）和形态学观察均提示100μmol/L Glu为诱导原代海马神经元损伤的最佳浓度;100μmol/L胍丁胺能显著抑制模型中大鼠海马神经元LDH的释放（P〈0.01）;明显改善损伤后的神经元形态。结论胍丁胺对Glu诱导的大鼠海马神经元损伤具有保护作用。     

白果内酯对谷氨酸兴奋毒性致神经损害的保护作用

目的 观察不同剂量白果内酯对谷氨酸致海马神经元损害的影响,以探讨白果内酯在抗兴奋毒性神经损害中的应用价值。方法 原代培养新生 SD 大鼠海马神经元,建立谷氨酸诱导的兴奋毒性模型;采用台盼蓝染色、TUNEL 染色凋亡神经元测定及乳酸脱氢酶 (LDH) 活性测定的方法观察不同剂量白果内酯的神经保护作用,并与谷氨酸 NMDA (-甲基-D-天门冬氨酸盐) 受体非竞争性拮抗剂 MK-801 的神经保护作用相比较。结果 在一定剂量范围内,白果内酯可提高谷氨酸损伤的海马神经元细胞的存活率、降低细胞凋亡率、减少细胞中 LDH 的漏出,具有剂量依赖性,于 100 μmol/L 剂量下呈现最佳神经保护效果,但弱于 MK-801 (浓度为 10 μmol/L)。结论白果内酯对谷氨酸诱导的兴奋毒性神经损害具有保护作用。     

抗精神病药奥氮平的神经保护作用

目的：探讨抗精神病药物奥氮平对谷氨酸损伤的海马神经元存活率、乳酸脱氢酶（LDH）的释放及凋亡和坏死的影响。方法：采用体外原代培养的大鼠海马神经元,复制谷氨酸损伤模型,实验分为正常对照、谷氨酸损伤和奥氮平给药组,在体外通过MTT法检测奥氮平对神经元存活率的影响,分光光度法测定LDH的释放情况,流式细胞术（FCM）测定奥氮平应用前后神经元凋亡和坏死的改变情况。结果：谷氨酸的兴奋性神经毒性使神经元存活率降低,约为正常的50% (P<0.05);与谷氨酸损伤组比较,奥氮平浓度为200和500 μmol•L^-1时其存活率升高 (P<0.05),100 μmol•L^-1时明显升高 (P<0.01)。谷氨酸损伤组LDH的释放急剧升高,是正常组的7.4倍;奥氮平组与谷氨酸损伤组比较,LDH释放减少（P<0.05或P<0.01）。谷氨酸损伤组与正常对照组比较,细胞凋亡率增加 ( P<0.01 );而奥氮平作用后凋亡细胞百分数显著低于谷氨酸损伤组。谷氨酸的神经毒性使体外培养的神经元坏死细胞比例升高 ( P<0.05 );而奥氮平组与谷氨酸损伤组比较,坏死细胞比例降低（P<0.05或P<0.01）。 结论：奥氮平能够抵抗谷氨酸诱导的神经元损伤,提高神经元存活 率,减少LDH的释放,维持细胞膜的完整性,减少神经元的凋亡和坏死,具有神经保护作用 。     

灯盏花素对谷氨酸体外诱导大鼠皮质神经元损伤的保护作用

目的 探讨灯盏花素对谷氨酸(Glu)体外诱导原代培养大鼠皮质神经元损伤的作用及机制.方法 通过MTT法观察灯盏花素对Glu诱导神经元损伤的细胞存活率的影响,并结合超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)生化测试及细胞钙影像方法探讨相关作用机制.结果 灯盏花素呈质量浓度依赖性提高Glu诱导神经元损伤细胞的存活率,并拮抗由Glu诱导的[Ca2 ];升高、MDA生成,提高SOD活性.结论 灯盏花素对Glu体外诱导大鼠皮质神经细胞损伤具有保护作用,可能与减轻胞内Ca2 超载、提高神经细胞抗氧化能力有关.     

睫状神经营养因子对皮质酮致海马神经元损伤的保护作用

目的 :观察睫状神经营养因子 (CNTF)对皮质酮致原代培养海马神经元损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法 :大鼠海马神经元原代培养 ,结晶紫法测定细胞存活率 ,TU NEL法检测细胞凋亡及应用免疫组化法 ,观察 CNTF对皮质酮致神经元存活率降低的保护作用 ,及其与 Bax和 Bcl- 2含量的关系。 结果 :皮质酮可剂量依赖地降低原代培养海马神经元的细胞存活率 (P<0 .0 1)。 1× 10 - 7m ol/ L的皮质酮作用 2 4h后 ,(1)约 45 %的海马神经元死亡 ;(2 )出现紫蓝色 TU NEL阳性细胞和圆形坏死细胞 ;(3) Bcl- 2免疫组化阳性神经元减少 ,着色浅淡 ;Bax免疫组化阳性神经元增加 ,着色深。同时给予培养细胞1× 10 - 7mol/ L 皮质酮和不同浓度的 CNTF2 4h后 ,发现与对照组相比 ,CNTF组原代培养海马神经元 (1)存活率升高 ;(2 )紫蓝色 TU NEL 阳性细胞和未着色的圆形坏死细胞均减少 ;(3) Bcl- 2免疫组化阳性神经元增加 ,着色深 ;Bax免疫组化阳性神经元减少 ,着色浅淡。结论 :凋亡和坏死过程共同参与了皮质酮致原代培养海马神经元损伤。外源性 CNTF可通过减少细胞坏死和凋亡而改善神经元损伤 ,其减轻细胞凋亡的作用可能是通过上调抑制凋亡蛋白 Bcl- 2和下调促进凋亡蛋白 Bax实现的     

睫状神经营养因子对N-甲基-D-天冬氨酸引起海马神经元内钙离子浓度升高的影响

①目的　研究睫状神经营养因子 (CNTF)对谷氨酸 (Glu)受体激动剂N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)引起的海马神经元内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)升高的影响 ,并探讨G蛋白是否参与此作用。②方法　原代培养海马神经元 ,用活细胞内荧光探针Fura 2 /AM实时检测应用CNTF和G蛋白抑制剂百日咳毒素 (PTX)后由NMDA引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 的变化。③结果　用CNTF孵育经NMDA刺激的海马神经元后 ,细胞内 [Ca2 + ]i 升高的程度较单独NMDA刺激细胞引起的 [Ca2 + ]i 升高程度低 (t=2 .97～ 4 .86 ,P <0 .0 5 ) ,加入PTX可减弱CNTF的抑制作用。④结论　G蛋白可能参与CNTF调节NMDA引起的海马神经元内 [Ca2 + ]i 升高的快速作用途径     

红景天苷对谷氨酸损伤海马神经元Bax和Bcl-2表达的影响

目的观察红景天苷对谷氨酸（Glu）损伤海马神经元Bax和Bcl-2基因和蛋白表达的影响。方法原代培养胚鼠海马神经元,不同浓度红景天苷（60、120、240μmol/L）预孵育24 h后,加入125μmol/L Glu损伤24 h。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组海马神经元活力;显微镜下观察各组细胞形态;Hoechst染色观察细胞凋亡情况;RT-PCR观察细胞内Bax和Bcl-2 mRNA的表达变化;Western blot观察细胞内Bax和Bcl-2蛋白的表达变化。结果红景天苷细胞可显著改善Glu损伤后的神经元生长状态和活力,降低Glu引起的细胞凋亡率（均P〈0.01）;拮抗Glu损伤导致的细胞Bcl-2/Bax mRNA及其蛋白比例的下降,此作用存在剂量效应关系,至240μmol/L时作用最显著（P〈0.05或〈0.01）。结论红景天苷可显著拮抗Glu诱导海马神经元的凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达有关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症海马NVU神经元的调控作用及其机制

目的探讨糖尿病并发抑郁症(DD)状态下谷氨酸(Glu)失衡对海马神经血管单元(neurovascular unit,NVU)中神经元GluR2、Beclin-1蛋白表达的影响,及左归降糖解郁方对其干预作用。方法原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元、星形胶质细胞及脑微血管内皮细胞,构建海马NVU体外共培养体系,采用免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定;采用高糖(150 mmol/L)联合皮质酮(200μmol/L)干预构建海马NVU细胞模型;将培养的细胞随机分组,未造模细胞分为正常组、空白血清对照组,造模细胞分为模型组、左归降糖解郁方(32. 82 g/kg)含药血清组和阳性药(氟西汀0. 18 g/kg+二甲双胍1. 8 mg/kg)含药血清组,除正常组与模型组给予等量培养液,其余组给予相应体积分数10%的含药血清或空白血清;采用酶联免疫吸附法检测各组海马NVU神经元培养液上清中Glu含量;采用免疫荧光染色与高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测各组海马神经元内GluR2、Beclin-1蛋白表达情况;采用Tunel染色检测各组海马神经元凋亡情况。结果与正常组及空白血清对照组比较,模型组海马NVU培养液上清中Glu含量显著升高(P 0. 01),GluR2表达明显减少(P 0. 01),Beclin-1表达明显增加(P 0. 01),细胞凋亡明显增多;与模型组比较,阳性药含药血清组与左归降糖解郁方含药血清组Glu含量显著降低(P 0. 01),GluR2表达上调(P 0. 01),Beclin-1表达下调(P 0. 01或P 0. 05),细胞凋亡显著减少。结论左归降糖解郁方对海马NVU细胞模型中神经元GluR2、Beclin-1蛋白表达具有明显的调控作用,该作用可能与改善谷氨酸失衡有关,这可能是其抑制细胞自噬继而抗DD海马神经元凋亡的重要机制。     

脑神康胶囊对缺氧复氧损伤大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察脑神康胶囊对缺氧复氧损伤大鼠海马神经元凋亡及其Bcl 2、Bax mRNA表达的影响。方法随机将原代培养大鼠海马神经元分为对照组、损伤组、中药低、中、高浓度组。对照组正常培养,损伤组及中药组建立缺氧复氧损伤模型,中药各浓度组于复氧时换以不同浓度含药血清的培养液,采用MTT法测各组细胞存活率,采用流式细胞仪检测凋亡率,采用RT PCR法检测Bcl 2和Bax mRNA的表达并计算两者比值。结果损伤组细胞存活率及Bcl 2 mRNA表达明显下降(P均＜0.01),凋亡率及Bax mRNA表达显著升高(P均＜0.01),Bcl 2/Bax降低(P＜0.01);中药各浓度组较损伤组细胞存活率及Bcl 2 mRNA表达均升高(P均＜0.01),凋亡率及Bax mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Bcl 2/Bax增加(P＜0.01),且呈明显的剂量依赖性。结论脑神康胶囊对海马神经元缺氧复氧损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其调节凋亡相关蛋白、减少凋亡密切相关。     

CNTF对AMPA和NMDA引起海马神经元Ca2+浓度升高的作用

①目的探讨睫状神经营养因子(CNTF)对两种谷氨酸(Glu)离子型受体激动剂(α-氨基羧甲基异哑恶唑丙酸,AMPA;N-甲基-D-天冬氨酸,NMDA)激发的海马神经元内游离Ca2+([Ca2+]i)升高的作用.②方法原代培养海马神经元,在有或无CNTF条件下用活细胞内荧光探针Fura-2-AM实时检测AMPA和NMDA引起海马神经元内[Ca2+]i变化的情况.③结果 AMPA和NMDA均可引起细胞内[Ca2+]i升高,并呈量效依赖性;CNTF可快速抑制NMDA引起的海马神经元内[Ca2+]i升高(t=2.97～4.86,P＜0.05),而对AMPA的作用无影响(t=0.22～0.74,P＞0.05).④结论 CNTF可能通过与NMDA型受体相互作用而快速启动Ca2+信号的途径,保护因Glu引起的海马神经元损伤.AMPA型受体可能与CNTF的快速作用无关.     

重组人BDNF对Aβ25-35致原代培养海马神经元损伤的保护作用

目的 观察人脑源性神经营养因子(BDNF)对Aβ 25-35致原代培养海马神经元损伤的保护作用.方法 取新生wistar大鼠海马细胞进行体外培养.分别加入不同浓度的BDNF及聚集态A β 25-35作用于培养的海马神经元,采用MTT法观察BDNF对A β 25-35致海马神经元存活率影响及Hoechst 33342染色观察BDNF对A β 25-35致海马细胞凋亡的影响.结果 显微镜下观察BDNF处理组比A β 25-35模型组细胞损伤小,细胞生长良好.MTT结果显示随着BDNF浓度增高,细胞存活率逐渐增高,在0.6nmol/L时最明显,与A β 25-35模型组比较,细胞存活率显著增高(P＜0.01).Hoechst 33342染色显示随着BDNF浓度增大凋亡率减少,与A β 25-35组比较凋亡率均显著减少(P＜0.01).结论 BDNF对培养海马神经元有神经营养活性,对Aβ致培养海马神经元的损伤有保护作用.     

白藜芦醇诱导大鼠原代脂肪细胞凋亡及机制

【目的】 探讨白藜芦醇(Res)对大鼠原代脂肪细胞凋亡的影响及其机制?【方法】 培养大鼠原代脂肪细胞,添加不同剂量的Res干预,用Hoechst 33258染色,在荧光显微镜下观察细胞核形态;用DNA Ladder实验观察DNA断裂的条带;检测各组培养基和细胞内的乳酸脱氢酶(LDH)含量,计算LDH漏出率;用流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western blot检测相关位点,包括沉默信息调节因子1(Sirt1)?细胞色素C(Cytochrome C)?半胱天冬氨酸酶家族(Caspase 9和Caspase 3)的蛋白质表达?【结果】 经过Res干预后,细胞核染色质高度凝集,电泳后出现180 ~ 200 bp整数倍的寡核苷酸片段?细胞LDH漏出率升高,呈剂量-反应关系(P < 0.05或P < 0.01)?Res作用后细胞凋亡率明显上升,呈剂量-反应关系(P < 0.01)?Sirt1?Cytochrome C?活化的Caspase 9及Caspase 3表达水平上升,胞浆Cytochrome C释放也增加?【结论】 Res促进原代脂肪细胞凋亡,其机制可能是通过增加Sirt1表达,经由线粒体凋亡途径,作用于Caspase 9和Caspase 3     

抗抑郁药万拉法新对大鼠海马神经细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨抗抑郁药物万拉法新对谷氨酸(Glu)损伤的海马神经元凋亡、坏死细胞周期的影响,阐明其神经保护作用的机制.方法:采用体外原代培养的大鼠海马神经元,复制Glu损伤模型,实验分为正常对照、Glu损伤和万拉法新给药组,在体外通过FCM测定万拉法新应用前后神经元凋亡、坏死和细胞周期的改变情况.结果:与正常对照组比较,G...     

川芎嗪对缺氧大鼠海马神经元凋亡及bcl-2、p53基因表达的影响

【目的】观察川芎嗪对缺氧大鼠海马神经元凋亡及bcl-2、p53基因表达的影响,探讨脑缺血后神经元损伤途径以及川芎嗪的保护作用机制。【方法】采用大鼠海马神经元体外原代培养法复制缺氧模型。海马神经元培养第14天,分为模型对照组及川芎嗪高、中、低剂量组(剂量分别为800、200、50μg/mL),分别持续缺氧1.5 h。采用流式细胞仪定量分析神经细胞凋亡率,原位杂交法检测海马神经元bcl-2、p53 mRNA的表达。【结果】川芎嗪中剂量组在缺氧1.5 h凋亡率与模型对照组及其他剂量组比较均有显著性差异(P<0.05)。对缺氧1.5 h大鼠海马神经元bcl-2、p53 mRNA原位杂交阳性信号进行分析,川芎嗪中剂量组bcl-2、p53 mRNA的表达与其他各组比较均有显著性差异(P<0.05)。【结论】在无血清培养条件下给予缺氧处理证实了凋亡是脑缺血后神经元损伤途径之一。一定剂量范围的川芎嗪具有抑制神经细胞凋亡的作用,而抑制p53基因的过度表达,上调bcl-2基因表达可能是其作用机制之一。