荧光定量分型PCR法在HBV-DNA检测中的应用

目的：探讨荧光定量分型PCR法在乙型肝炎病毒（HBV）-DNA检测中的作用,为HBV基因的分型提供参考。方法对120份 HBV-DNA阳性样本分别采用荧光定量分型PCR法和直接测序法检测,比较两种方法的检测效果。结果120份样本均被荧光定量分型PCR 法和直接测序法成功分型,荧光定量分型PCR 检出29（24．17％）例混合感染样本,直接测序法检出7（5．83％）例,前者检出率高于后者（χ^2＝15．817,P＝0．000）;两种方法的一致性较好（Kappa 值为81．67％）;检测结果不一致的样本经TA 克隆后,证实与荧光定量分型PCR 法的检测结果一致。结论荧光定量分型PCR 法是一种简便、快速高效的HBV 基因分型法,对基因型混合感染样本的检出率高于直接测序法,且正确率高。     

PCR-荧光探针法检测乙型肝炎病毒YMDD变异与DNA序列分析法的比较

目的 评估聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法用于乙型肝炎病毒基因聚合酶区YMDD变异检测的敏感性、特异性和准确性.方法 采用PCR-荧光探针法和DNA序列分析法,平行比对检测202份标本中HBV YMDD变异情况.结果 以DNA序列检测分析为相对标准,PCR-荧光探针法检测YMDD变异的相对灵敏度为99.06%,相对特...     

研究ELISA联合荧光定量PCR检测丙型肝炎病毒的效果

目的 评估丙型肝炎病毒检测应用酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA）联合荧光定量聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）检测的应用价值。方法 选取2022年8月—2023年8月滕州市疾病预防控制中心接诊的90例疑似丙型肝炎病毒患者为研究对象,采用ELISA联合荧光定量PCR检测,以丙型肝炎病毒（Hepatitis Virus C, HCV）RNA检测结果作为“金标准”,分析检测方式的应用价值。结果 HCV RNA检测结果显示,阳性率为47.78%,ELISA检测的阳性率40.00%,荧光定量PCR检测发现阳性量率42.22%,联合检测的阳性率46.67%。ELISA检测与荧光定量PCR检测在灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值以及阴性预测值方面比较,差异无统计学意义（P均>0.05）。联合检测的灵敏度为93.02%、准确度为94.44%、阳性预测值为95.24%以及阴性预测值为93.75%,显著高于ELISA检测的67.44%、76.67%、80.56%、74.07%,联合检测的灵敏...     

乙型肝炎病毒携带产妇进行乳汁H BV DN A检测对哺乳的指导价值

[目的]探讨乙型肝炎病毒携带产妇乳汁中乙型肝炎病毒DNA（HBV DNA）携带状况与母乳喂养安全性的关系,从而正确指导乙型病毒性肝炎产妇产后母乳喂养。[方法]采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测280例 HBV 携带产妇血清 HBV 免疫血清学标志物,将其分为乙型肝炎病毒 e抗原（HBeAg）阳性组和 HBeAg阴性组,同时采用荧光定量 PCR法检测血清及乳汁 HBV DNA含量。[结果]280例病人血清中 HBV DNA阳性172例（61.4%）,乳汁 HBV DNA阳性128例（45.7%）;血清 HBV DNA阳性组172例产妇乳汁中检测出 HBV DNA阳性124例（72.1%）,108例血清 HBV DNA阴性者中2例（1.8%）乳汁 HBV DNA阳性;HBeAg阳性组122例检测出血清 HBV DNA 阳性105例、乳汁 HBV DNA 阳性96例;HBeAg 阴性组158例检测出血清HBV DNA阳性67例、乳汁 HBV DNA阳性30例。[结论]在乙型肝炎病毒携带者母乳喂养问题上,应以 HBV DNA 检测为参考标准;乳汁 HBV DNA含量与血清 HBV DNA含量呈正相关,对血 HBV DNA阳性产妇,建议人工喂养,并母婴隔离;对血清HBV DNA阴性产妇可以哺乳,但应给予正确的哺乳指导。     

献血人群血清anti-HBC和HBV DNA检测的意义

目的探讨无偿献血者乙型肝炎病毒核心抗体与隐匿性感染的关系。方法收集无偿献血者样本9 100份,采用ELISA法进行HBsAg和anti-HBC血清学筛查,对anti-HBC阳性血清PCR检测乙肝病毒核酸。结果 911份（10.01%）标本为anti-HBC阳性,其中820份（90.01%）HBsAg阴性,34例血清HBV DNA阳性。结论常规检测对于献血者筛查具有重要意义。     

HBV DNA定量检测方法的评价

目的　协助临床检验工作者及科研人员选择适合本单位实际条件的HBV DNA定量检测方法。方法　采用核酸分子杂交、荧光定量PCR、微板核酸杂交三种方法对89 例乙型肝炎大三阳患者进行HBV DNA测定。结果　三种方法测定结果依次为荧光定量PCR法阳性89 例,微板核酸杂交法阳性81例,斑点杂交法阳性62例,三种方法均阳性61 例。结论　斑点杂交法准确性和特异性较高,适合于流行病学调查和药物观察等研究。荧光定量PCR技术灵敏度较高,若能提高其检测结果的准确性,它应为临床及科研之首选方法。微板核酸杂交技术有较高的灵敏度和特异性,操作简便,可常规普及。     

HBV DNA定量检测方法的评价

目的协助临床检验工作者及科研人员选择适合本单位实际条件的HBV DNA定量检测方法。方法采用核酸分子杂交、荧光定量PCR、微板核酸杂交三种方法对89例乙型肝炎大三阳患者进行HBV DNA测定。结果三种方法测定结果依次为荧光定量PCR法阳性89例，微板核酸杂交法阳性8l例，斑点杂交法阳性62例，三种方法均阳性61例。结论斑点杂交法准确性和特异性较高，适合于流行病学调查和药物观察等研究。荧光定量PCR技术灵敏度较高，若能提高其检测结果的准确性，它应为临床及科研之首选方法。微板核酸杂交技术有较高的灵敏度和特异性，操作简便，可常规普及。     

两种HBV DNA荧光定量试剂盒检测结果比较

目的 比较两种乙型肝炎病毒(HBV)荧光定量PCR检测试剂盒的临床性能.方法 采用两种HBV荧光定量PCR检测试剂盒对526例临床样本进行检测,比较两种试剂的灵敏度、检测结果的一致性及相关性.结果 两种试剂阳性一致性为97.44%,阴性一致性为95.77%,总一致性为96.77%,两种试剂具有较好的相关性,相关系数r=0.965.结论 HBV一步法试剂具有操作简便、定量准确、灵敏度较高等优点,是一种较好的临床HBV快速定量检测试剂.     

多重定量PCR法同步检测HBV、HCV和HIV-1在血液筛查中的优化及应用

目的 初步探讨多重定量聚合酶链反应（PCR）同步检测乙型肝炎病毒（HBV） DNA,丙型肝炎病毒（HCV） RNA及人类免疫缺陷病毒（HIV）-1 RNA在血液筛查中的应用前景.方法 选择2012年8月至12月,于孝感市中心血站志愿献血的合格献血者血样中,经2次酶联免疫吸附法（ELISA）检测HBV表面抗原（HBsAg）、抗HCV及抗HIV-1,检测结果均呈阴性的4 800份血样为研究对象.采用全自动核酸混合提取仪对该4 800份血样进行核酸提取,然后利用多重定量PCR方法对血样中HBV、HCV及HIV-1进行同步扩增检测.采用中国药品和生物制品检定所提供的HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA标准参考品,检测多重定量PCR的灵敏度,并与单重定量PCR的灵敏度进行比较.在HBV、HCV及HIV-1 3者中任意1种病毒基因组浓度较高的条件下,对多重定量PCR检测另2种低浓度病毒基因组的能力进行评估.结果 增加多重定量PCR中c-MMLV逆转录酶和Hot Taq酶的用量,并适量加入单链结合蛋白（SSB）,可使其扩增效率提升至单重定量PCR扩增水平.本组4 800份血样中,经多重定量PCR检测出3份HBV DNA阳性样品,ELISA漏检率为0.062 5％,未发现HCV RNA和HIV-1 RNA阳性样品;多重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为115 IU/mL、376 IU /mL和232 IU /mL;单重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为51 IU /mL、94 IU /mL和78 IU/mL.结论 本研究初步建立了对献血者血液同时进行HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA检测的多重定量PCR检测方法;该检测体系经过进一步优化后,有望应用于临床大规模血液病毒筛查.     

乙型肝炎病毒大蛋白临床检测意义初探

目的通过检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒大蛋白（Hepatitis B virus large surface protein,LHBs）、HBVDNA、乙肝五项（HBV M）等指标．探讨LHBs用于临床检测乙型肝炎的意义。方法采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测乙肝五项（HBVM）以及乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）,采用荧光定量PCR方法对标本HBV DNA进行检测。结果①LHBs吸光度（OD值）与HBV DNA呈正相关关系（γ=0．972）;②73例HBsAg、HBeAg均为阳性患者中HBV DNA与LHBs的检出没有显著性差异（χ^2=0．00,P〉0．05）。两者的检出一致率为97．26％[（71＋0）／73]。③80例HBsAg阳性、HBeAg阴性患者中HBV DNA与LHBs的检出没有显著性差异（χ^2=0．11,P〉0．05）。两者的检出一致率为82．19％[（42＋18）／73]。结论乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）与HBV DNA呈正相关性,临床上可以用于反映乙型肝炎病毒的复制情况,特别是HBeAg阴性的患者病毒复制情况,用于填补由于病毒变异引起的HBeAg检测的不足。     

三种方法检测乙型肝炎表面抗原的临床应用及评价

目的对3种不同检测方法即时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）、胶体金法（ACON）就检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的结果进行分析。方法 198例乙型肝炎患者为试验组,126例非乙型肝炎患者为对照组,分别用以上3种方法同时检测HBsAg并对检测结果进行分析。结果 3种检验方法的灵敏度及特异性由高到低依次是：TRFIA、ELISA、ACON。结论 ACON成本低廉,时效快但灵敏度偏低,可作为一般性初筛,不能作为确诊依据。ELISA成本低,操作简便、灵敏度高、能基本满足临床需要,可作为定性检测HBsAg为临床诊断和基础研究提供可靠的实验依据。TRFIA成本高、试剂稳定性好、灵敏度高、特异性好,能定量检测血样中HBsAg的浓度,常被用作乙型肝炎病毒感染的确诊实验。     

磁珠法测定痕量肝炎病毒的研究

目的寻求灵敏而简便的肝炎病毒临床检测新方法。方法采用氧化硅包覆的磁珠同时提取肝炎病毒的DNA及RNA,结合荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)及丙型肝炎病毒(HCV)。结果磁珠法可以同时提取HBV-DNA和HCV RNA,磁珠法提取HBV-DNA的效率高于离心柱法和煮沸法,磁珠法提取HCV RNA的效率与离心柱法相近,但提取效率都高于煮沸法。结论将磁珠的富集分离与高灵敏度的检测手段相结合,可显著提高检测的特异性和灵敏度,且方法简便可自动化操作,可以满足大批样品肝炎病毒筛选检测的要求,适用于血液中心筛查及医院检测等领域。     

乙肝病毒前S1抗原阳性在临床检验中的应用价值探讨

目的探讨乙肝病毒前S1抗原阳性在临床检验中的应用价值。方法总结乙肝患者200例资料,应用酶联免疫吸附的方法检验患者血清中乙肝病毒前S1抗原和乙肝的标志物,应用荧光实时定量试验方法检测HBV DNA,应用全自动生化仪检测患者的ALT和AST,最后用统计学相应方法进行分析。结果所有乙肝患者中乙肝病毒前S1抗原和HBV DNA的阳性率分别为65%（130例）和70.5%（141例）,乙肝病毒前S1抗原的阳性率随着HBV DNA载量的增大也相应变大,当后者载量超过105copies/mL时,前者的阳性率也会超过95%。结论乙肝病毒前S1抗原对乙肝患者的病毒复制和肝功损伤方面具有一定的临床价值,其检测门槛相对较低,便于推广。     

一种快速检测HBV基因的荧光定量PCR法的建立

目的：利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种能用于临床的快捷、敏感、特异、价格低廉的HBV实时荧光定量PCR检测方法。方法：根据HBV基因组保守区域precore／core设计二聚体蝎型荧光探针和引物,构建质粒标准品,优化荧光定量PCR条件,并进行方法学评价。结果：所建方法的检测范围为10^1～10^8 copies／μl,灵敏度达到10copies／μl,低拷贝样品的批内和日间重复性（CV）分别为1．71％和2．57％,高拷贝样品的批内和日间GV,分别为3．00％和3．86％。与商品化TaqMan试剂盒相比,本法阳性检出率较高,且检测时间缩短了45min（约减少1／3）,成本降低50％。结论：成功建立了快速检测HBVDNA的二聚体蝎型荧光定量PCR方法,为研发适合临床应用的HBV基因定量检测试剂盒奠定了基础。     

时间分辨荧光免疫法检测HBVPreSIAg试剂盒的应用评价

目的建立乙型肝炎病毒前S1抗原（HBVPreSlAg）时间分辨荧光免疫法（TrFIA）,并对自研试剂盒检测PreSlAg的应用价值进行评价。方法对自研试剂盒的精密度、灵敏度、特异度、稳定性和参考值等分析性能指标进行评价;与对照试剂盒平行检测l020例样本,检验结果的一致性采用Kappa检验。采用时间分辨荧光免疫法检测PreSlAg和乙型肝炎病毒标志物（HBVDNA）,用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测HBVDNA,探讨PreSlAg与HBVDNA之间的相关性并对比三者在临床样本中的阳性检出率。结果自研试剂盒符合企业内部栓定标准,批内变异系数小于10％,自研试剂盒灵敏度较酶联免疫法高,有效期为12个月;自研试剂盒与对照试剂盒检测结果的总符合率达98．82％,Kappa指数达0．9763;350例样本中PreSlAg检出率与HBVDNA检出率差异无统计学意义（x2=1．69,P〉0．05）;在HBVDNA阳性时PreSIAg与HBeAg的检出灵敏度一致（x2=0．21,P〉0．05）;但在HBVDNA阴性时特异性PreSlAg不及HBeAg（x2=50．24,P〈0．05）。PreSlAg和HBeAg的检出率均随HBVDNA浓度升高而升高;PreSIAg和HBeAg联合应用检出率（66．00％）高于HBVDNA检出率（49．43％）（x2=20．88,P〈o．05）。结论PreSlAg是反应HBV复制和传染性的一个重要补充标志物。自研试剂盒在预示HBV的感染、复制和传染性等方面具有重要的价值。     

Taqman MGB探针分型技术检测HBV YMDD 变异及临床应用研究

摘　要: 目的：建立一种快速准确的HBV YMDD变异检测方法，用于乙肝患者拉米夫定治疗中耐药性突变的监测。方法：采用三种特异性TaqmanMGB探针和一对共同引物，建立了检测HBV YMDD变异的荧光定量PCR方法。分别针对总HBV 、YIDD变异、YVDD变异的三管并行检测，可以确定YMDD变异的类型及其在病毒群中的比例。对YMDD野生株、YIDD变异株、YVDD变异株的病毒质粒经过梯度稀释进行检测验证。以序列直接测定法作为诊断YMDD 变异的金标准，对该方法YMDD变异检测的灵敏度、特异性和诊断符合率作评价。并对112例经拉米夫定治疗的血清HBV DNA持续阳性的乙型肝炎患者检测其YMDD变异情况。结果　该方法在105--108Copies/ml 的YMDD野生株、YIDD变异株、YVDD变异株检测中匀未出现非特异性扩增信号；相同浓度的YMDD、YIDD、YVDD在三种不同探针的反应管中的扩增效率基本一致；病毒野生株与YVDD变异株的实际混合比例与计算比例基本一致；该方法检测YIDD、YVDD的最低检测界限为1000 Copies/ml，能在106Copies/ml病毒群中检出0.1%的变异株的存在。以直接测序方法为金标准，该方法YMDD变异检测的灵敏度100%、特异性96%，诊断符合率97.5%。该方法检测112例经拉米夫定1--3年治疗血清HBV-DNA持续阳性的乙型肝炎患者37 例发生YMDD 变异,阳性率27.2%。结论：该方法能够直接检测HBV YMDD变异的类型及其在病毒群中的比例，具有快速、灵敏、准确、经济实用等优点，适合临床实验室开展拉米夫定耐药性突变的监测。     

荧光定量 PCR 法检测乙肝病毒 DNA 和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的：探讨荧光定量 PCR 法（FQ-PCR）检测乙肝病毒 DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒标志物（HBV-M）ELISA 法检测的临床价值。方法选取2013年4～12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用 ELISA 法对其血液标本进行 HBV-M 模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HbsAb）、乙型肝炎 e 抗原（HbeAg）、乙型肝炎 E 抗体（Hbe-Ab）、乙肝表面核心抗体（HbcAb）;再采用 FQ-PCR 法进行 HBV-DNA 定量检测,观察不同 HBV-M 模式检测结果。结果 HB-sAg、HbeAg、HbcAb 检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1（＋）、3（＋）、5（＋）模式]和[1（＋）、3（＋）模式]的 HBV-DNA 阳性率分别为97．97％、94．74％,显著高于其他模式的 HBV-DNA 阳性率（P ＜0．05）。大三阳的 HBV-DNA 表达水平（5．59×10^6±2．42×10^5）copies/mL,明显高于其他模式（P ＜0．05）。结论联合 HBV-M 定性及 HBV-DNA 定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

核酸扩增技术（NAT）在献血者血液初筛中的应用现状

随着输血在临床中的应用越来越广泛,对输血传播疾病问题的研究也就越来越受到重视.直到20世纪90年代,针对输血传播疾病的初筛完全依赖于血清学试验,除了乙型肝炎病毒（HBV）可以使用乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测以外,其他病毒的检测基本上都是检测抗体的方法.分子技术（如PCR）的出现,为提高献血者的血液初筛检出率,降低经血传播疾病这种风险提供了可能.本文对国内外核酸扩增技术在献血者血液初筛中的应用现状进行了回顾.     

乙型肝炎病毒基因型与病毒复制的关系

目的检测乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清HBV基因型和病毒载量（HBV-DNA定量），探讨它们之间的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）-微板核酸杂交-酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HBV6种基因型，ELISA法检测血清HBV标记物，荧光定量-聚合酶链反应（FQ-PCR）检测血清HBV-DNA定量值，并对结果进行分析。结果159例标本中能检出基因型者115例，其中B型28例（24．3％），C型56例（48．7％），D型9例（7．8％），混合型22例（19．1％），没有发现A、E和F型。不同基因型的HBV-DNA定量对数值差异无统计学意义（P=0．371〉0．05）。不同基因型的HBeAg阳性率差异也无统计学意义（P=0．473〉0．05）。结论东莞部分地区HBV基因型以C型为主要检出型，混合型检出率偏高。HBV病毒复制与病毒基因型无明显关系。