青霉素和头孢菌素生物合成的基因克隆化

工业发酵生产抗生素已完全建立,但对微生物代谢物的生产控制的分子机制和生物合成尚缺乏基础研究。了解抗生素生物合成的进展部分由于所涉及的酶的固有不稳定性而一直很缓慢。因此对β-内酰胺类抗生素(青霉素类、头孢菌素类、头霉素类、碳青霉烯类、单酰胺菌素类而言,已鉴定了涉及青霉素、头孢菌素和头霉素生物合成的某些酶,但尚未综述生物合成途径及其控制机理。抗生素产生菌的分子遗传学还处于发展的早期阶段。产黄青霉和顶头孢霉中重组DNA技术的应用将导致合理构建含多拷贝抗生素生物合成基因的菌株。另一目的是通过把它们和强真菌启动子融合增加这些结构     

HBxAg反式调节基因11剪切体的克隆化及生物信息学分析

目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式调节的靶基因11(XTP11),获得未知功能的新基因-XTP11剪切体,对其进行生物信息学分析,探讨其结构和功能。方法从肝母细胞瘤细胞系HepG2中提取总RNA,逆转录为cDNA后,设计特异性引物克隆XTP11剪切体,生物信息学技术获得编码序列、物理化学性质、蛋白质结构和功能等基本信息。结果成功扩增出XTP11剪切体基因,生物信息学分析推定ORF为1 314个核苷酸,编码产物为437个氨基酸残基。结论此文发现并鉴定了HBV XTP11剪切体,为阐明其在HBV X蛋白致病机制中的作用提供新的研究线索。     

用克隆化酶供体免疫分析法测定茶碱血药浓度

用克隆化酶供体免疫分析法（ＣＥＤＩＡ）在全自动生化分析仪上测定茶碱的血药浓度，在０～４０μｇ／ｍｌ范围内线性关系良好。和高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）比较，６３例样品相关系数为０．９８７，斜率为１．０２５，且对６例病人的茶碱药动学研究两法亦无明显差异。     

角质细胞生长因子-2的发酵及纯化工艺研究

目的研究重组人角质细胞生长因子 2 (rhKGF 2 )工程菌的高密度发酵和提纯工艺。方法通过增加培养基营养成分 ,发酵过程补加葡萄糖 ,获得高产率菌体。细菌裂解液经硫酸铵沉淀、分子筛、肝素亲和色谱和离子交换色谱等方法进行纯化 ,电泳分析结果。结果每 1L发酵液可获得菌体 12 .2g ,表达率达 2 8.7%。纯化后rhKGF 2纯度达 97%。结论rhKGF 2工程菌可获得高密度发酵。纯化工艺适用于rhKGF 2的大量制备     

克拉霉素对Caco-2细胞转运他克莫司的影响及机制研究

目的 探讨克拉霉素对Caco-2细胞转运他克莫司的影响及机制。方法 用化学发光免疫分析法测定他克莫司药物浓度；建立Caco-2细胞单层模型，计算表观渗透系数，比较不同浓度他克莫司在Caco-2细胞单层中转运及不同浓度克拉霉素抑制他克莫司的转运。结果 他克莫司浓度为20，40和80 μg·mL^-1时吸收渗透系数P_appAP-BL分别为（2.47±0.09）×10^-6，（3.91±0.17）×10^-6和（4.49±0.16）×10^-6 cm·s^-1；分泌渗透系数P_appBL-AP分别为（6.05±0.21）×10^-6，（9.86±0.70）×10^-6和（11.75±0.28）×10^-6 cm·s^-1；外流比（apparent permeability ratio，PDR）分别为2.45±0.03，2.52±0.12和2.62±0.11；加入不同浓度的克拉霉素（15，30，60 μg·mL^-1）后，分泌渗透系数显著降低，而吸收系数影响不大，PDR随着克拉霉素浓度增加显著降低。结论 Caco-2细胞外排转运体可能参与了他克莫司的转运，克拉霉素合用他克莫司可显著影响他克莫司的吸收。     

钙拮抗剂对HSB—2细胞摄取镉的影响

本研究观察了钙拮抗剂对ＨＳＢ－２细胞Ｃｄ摄取作用的影响，发现ＣｄＣｌ２和ＣｄＭＴ均可为细胞摄取，在１０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｃａ２＋存在的条件下使得Ｋｍ值发生改变，而Ｖｍａｘ无影响，提示Ｃａ２＋是通过竞争性抑制Ｃｄ２＋进入细胞的。Ｌ型电压依赖性Ｃａ２＋通道抑制剂Ｖｅｒａｐａｍｉｌ却使Ｖｍａｘ减小，Ｋｍ值不变，说明其非竞争性拮抗Ｃｄ２＋入胞的本质，这为Ｃｄ可以通过钙通道摄取提供了证据。钙调素拮抗剂ＣＰＺ对细胞Ｃｄ摄取动力学无影响，以ＣｄＭＴ染毒细胞时，Ｃａ２＋，Ｖｅｒａ，ＣＰＺ对ＣｄＭＴ的摄取均未产生显著影响。     

甘蓝细胞溶质超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

通过对甘蓝细胞溶质ＳＯＤ的纯化及性质研究,开拓制备ＳＯＤ的廉价原料来源。经硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－ＤＥ５２层析３个步骤,将昨细胞溶质ＳＯＤ纯化到均一程度。从１０００ｇ叶片中得到３．２ｍｇ酶,酶的比活力达９７００Ｕ／ｍｇ蛋白。经鉴定该酶是Ｃｕ．ｚｎ－ＳＯＤ。测得其Ｍｒ约为３２２００,亚基Ｍｒ约为１６０００。该酶的Ｎ－末端为丙酸,其可见光区与紫外光区的最大吸收峰分别在     

人类白细胞介素—2的纯化

采用硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤三步法纯化人美外周血制备的白细胞介素－2的粗制品，并比较国内外纯化制品的比活性和回收率。     

黄曲霉对Hep—2细胞生长的影响观察

在病毒学的细胞培养中,无菌技术的要求十分严格。在细胞培养中,除RPMI1640液是它的主要成份外,小牛血清亦不可缺少。细胞生长需要一定的成份,血清不仅促进细胞生长,还有助于细胞贴管。在动物血清中,以小牛血清最好,它含有胎素,能促进细胞生长[1]。我们观察到细胞一旦被细菌污染,便很快脱落,而被霉菌污染的细胞,其形态及折光性不仅未发生改变,反而生长良好c故我们对这一现象进行了初步探索,报告如下。1材料与方法三．且材料三·l·豆HeP－2细胞,本室液氮保存。玉．豆．2污染霉菌的鉴定：参照文献卜,’三方法进行。商落特点…     

IL-2基因转移对CD3AK细胞生物学功能的影响研究

白细胞介素 2 (ＩＬ 2 )是Ｔ细胞活化分泌 ,能与Ｔ细胞上ＩＬ 2Ｒ结合后 ,增强Ｔ细胞增殖的一种重要的细胞因子。ＣＤ3ＡＫ细胞是利用抗ＣＤ3单克隆抗体与ＴＣＲ/ＣＤ3 复合体的结合 ,同时提供少量外源ＩＬ 2 ,激活产生的具有细胞毒效应的杀伤细胞 ,常用于过继免疫治疗。临床资料表明体内使用外源性ＩＬ 2常导致毒副作用。能否利用基因转移技术将ＩＬ 2基因导入ＣＤ3ＡＫ细胞 ,使其表达并维持ＣＤ3ＡＫ的活化状态呢 ?抗ＣＤ3ＭｃＡｂ活化的Ｔ细胞作为逆转录病毒载体的受体细胞 ,已有应用于ＩＬ 1 β基因转移研究的报道。本实验利用逆转录病…     

重组白细胞介素2纯化方法的建立

目的：本文建立了重组人白细胞介素2（rIL－2）的纯化方法。方法依次利用 CM Sepharose FF 捕获、SOURCE 30 RPC纯化、CM Sepha－rose FF浓缩和凝胶过滤法分离重组白细胞介素2。结果通过SDS－PAGE电泳和HPLC－PRC检测,表明纯化后的rIL－2纯度较高。结论建立了rIL－2的纯化方法,该纯化方法简单,稳定,纯化效果好,可为rIL－2的生产工艺提供技术支持和依据。     

HPLC法在干扰素α—2b的纯化和蛋白纯测度中的应用研究

目的：为开发干扰素α－２ｂ新剂型提供纯化和质控的技术指标。方法：用反相离子对色谱法对干扰素α－２ｂ的粗品进行分离纯化;用分子排阻色谱法测定其蛋白纯度。结果：反相离子对色谱法可使纯度为８５％精品提高到９５％以上;分子排阻色谱法可通过峰面积比,快速、客观地确定表达蛋白的百分比,对主峰、次峰的分离度大于１．５。结论：反相离子对ＨＰＬＣ法可作为干扰素α－２ｂ的纯化方法;分子排阻色谱法是鉴定基因工程干扰素的     

咪唑克生对胰岛细胞的损伤效应及其机制

目的　观察咪唑克生 (idazoxan)对克隆胰岛素分泌细胞 (BRIN BD11细胞 )的损伤效应。方法　采用MTS还原法测定胰岛细胞活力 ,用流式细胞计 (FACS)进行细胞周期分析来测定咪唑克生对BRIN BD11细胞DNA完整性的影响。结果　①咪唑克生明显降低BRIN BD11细胞的活力 ,破坏DNA ,且具有时间和剂量依赖性。②genistein、5 HT1A受体拮抗剂NAN190和蛋白激酶G (PKG)抑制剂———KT5 82 3对咪唑克生引起的BRIN BD11细胞损伤没有保护作用。结论　咪唑克生对克隆胰岛素分泌细胞具有细胞毒效应 ,可诱导细胞发生凋亡     

SP-sephadex C25离子交换层析纯化细胞色素C的工艺研究

目的 :研究SP sephadexC2 5离子交换层析纯化细胞色素C的工艺。 方法 :用SP sephadexC2 5树脂取代AmberliteIRC 5 0树脂对细胞色素C进行纯化。结果 :SP sephadexC2 5离子交换纯化细胞色素C一次层析收率达 85 %以上 ,纯度达 98%左右。结论 :SP sephadexC2 5树脂用于细胞色素C的纯化 ,与用AmberliteIRC 5 0树脂相比 ,大大提高了层析得率和产品的纯度 ,提高了产品合格率。