中国人白介素18结合蛋白基因的克隆及其序列分析

白介素１８结合蛋白是新近发现的一种能与ＩＬ－８特异性结合并拮抗其相关生物学功能的蛋白质，它参与Ｔｈ１介异的细胞免疫调控。另外，某些病毒编码的蛋白与ＩＬ－１８ＢＰ有较高的同源性，提示这可能与此类病毒逃避机体免疫的机制有关。我们利用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人外周血细胞中扩增获得ＩＬ－１８ＢＰｃＤＮＡ片段，将其克隆至Ｔ载体中并进行了核苷酸序列分析，为进一步表达和研究其生物学功能奠定了基础。     

快速老化小鼠海马组织中IL-18的增龄性变化

目的:探讨老化小鼠海马组织中IL-18表达变化特点.方法:本研究选3、9月龄的快速老化小鼠亚系8(Senescence accelerated mouse/prone 8,SAMP 8)作为实验组,而同龄抗快速老化亚系1(Senescence accelcrated mouse/resistance 1,SAMR 1)作为SAMP系的正常对照组.用RT-PCR方法检测各组动物海马组织中IL-18的表达,ELISA方法检测各组动物海马组织中IL-18蛋白表达.结果:3、9月龄SAMR 1海马组织中仅有少量IL-18 mRNA及IL-18蛋白表达.9月龄SAMP 8海马组织中IL-18 mRNA的表达均较SAMR 1对照组显著增高(P＜0.05);IL-18蛋白的表达类似于IL-18mRNA的改变.结论:老化小鼠海马病理性损伤与海马组织IL-18的异常表达有关.     

不同剂量X射线诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-18表达的量效关系

目的：观察X射线照射对小鼠腹腔巨噬细胞IL-18表达的影响。方法：昆明种小白鼠80只,随机分为10组（每组8只）,即假照组、 4个单次低剂量X射线照射组（0.05、0.075、0.1 和0.2 Gy）和5个单次高剂量X射线照射组（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）,X 线全身照射（WBI）后16 h处死小鼠,取腹腔巨噬细胞,用RPMI 1640培养基,在37℃、5％ CO₂培养箱中培养72 h,留取上清液,采用ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-18的分泌量。结果：0.05 Gy X射线WBI后,IL-18的表达有所增高,检测值为(59.53±3.68)ng•L^-1,与假照组(51.29 ±3.26)ng•L^-1比较差异无显著性（P＞0.05）;0.075 Gy X射线WBI后,IL-18的表达量增高至(122.78±8.07)ng•L^-1,与假照组比较差异有显著性(P<0.01);随着X射线辐射剂量增加至0.1、0.2 、0.5和1.0 Gy,IL-18的表达量增高至(135.32±5.27)、(149.40±16.54)、(200.42±15.42)及(347.59 ±17.88)ng•L^-1,1.0 Gy照射达到峰值,随后IL-18表达呈下降趋势;2.0、4.0及6.0 Gy WBI后,IL-18的表达量分别为(229.49±14.68)、(253.79±6.69)及(223.32 ±20.85)ng•L^-1,均高于假照组(P<0.01)。结论：高、低剂量X射线照射均能诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-18的表达。     

地塞米松抑制小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素—18的表达

目的：研究糖皮质激素（GC）对小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）IL-18表达的调控作用。方法：以半定量RT-PCR法检测经不同浓度地塞米松（Dex）处理的Mφ脂多糖（LPS）诱导的IL-18mRNA的表达,以ELISA法检测Mφ培养上清IL-18的含量。结果：Dex剂量依赖性地抑制MφLPS诱导的IL-18mRNA及等抑制作用可被糖皮质激素受体拮抗剂-RU486阻断。结论：GC能抑制MφLPS诱导的IL-18的表达。     

人白细胞介素18cDNA的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

获得ＩＬ－１８全长ｃＤＮＡ序列，研究ＩＬ－１８在大直菌中的表达。方法利用ＲＴ－ＰＣＲ方法人人外周血单个核细胞中扩增出人白细胞介素的ｃＤＮＡ，以Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测序。     

系统性红斑狼疮患者血清中IL-18、IL-10和IFN-γ的变化

目的:探讨IL-18、IL-10和IFN-γ水平变化与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)发病的关系.方珐:采用ELISA法检测SLE患者52例、对照组48例血清IL-18、IL-10和IFN-γ的水平.结果:SLE组IL-18(265.7士78.3)pg/mL、IL-10(78.2士2.2)pg/mL、IFN-7(22.4±9.2)Pg/mL较正常对照组IL-18(184.1±63.6)pg/mL、IL-10(18.3±6.4)pg/mL、IFN-γ(12.5士5.1)pg/mL有高度显著性差异(P＜0.01),且活动期SLE患者IL-18(382.7±156.4)pg/mL、IL-IO(90.8±12.9)pg/mL与非活动组IL-18(91.3±48.6)pg/mL、IL-10(45.1士15.4)pg/mL之间比较有高度显著差异(P＜0.01),活动期IFN一7(26.8±9.8)pg/mL和非活动期患者IFN-γ(18.9±9.1)pg/mL之间比较无显著性差异(P＞0.05).结论:SLE患者IL-18、IL-10水平增高,且与疾病活动性有关,可作为判断疾病疗效的监测指标.SLE患者血清IFN-γ水平也显著提高,表明在SLE患者中,参与炎症反应可能既有Th1型细胞因子,也有Th2型细胞因子.     

机械通气治疗COPD前后细胞因子IL-8、IL-13及IL-18的变化

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性呼吸衰竭患者行有创机械通气治疗前、后细胞因子白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-13(IL-13)及白细胞介素-18(IL-18)的变化。方法采用酶联免疫吸附试验测定30例COPD急性呼吸衰竭患者行有创机械通气治疗前及治疗后1、2、6、72 h细胞因子IL-8、IL-13及IL-18的水平,并与10例COPD稳定期患者进行比较。结果 COPD急性呼吸衰竭患者IL-8、IL-13及IL-18水平在行机械通气治疗后较治疗前显著下降,机械通气治疗72 h后与COPD稳定期患者比较差异无统计学意义。结论 COPD急性呼吸衰竭患者IL-8、IL-13及IL-18的表达显著升高,经机械通气治疗后可下降至COPD稳定期水平。     

IL-18和 IL-33在不同发病期哮喘患者中的应用价值

【目的】探讨白细胞介素-18（IL-18）、IL-33在支气管哮喘（简称哮喘）中表达及意义。【方法】选取125例哮喘患者（哮喘组）,根据患者病情将其分为哮喘缓解48例（缓解组）,急性发作期77例（急性期组）,其中轻度组32例,中度组25例,重度组20例,另选取正常体检者48例（对照组）,采用免疫吸附法测定各组IL-18、IL-33水平,同时观察第一秒用力呼气容积（FEV1）占预计值的百分比（FEV1％）及嗜酸性细胞（EOS）的变化。【结果】与对照组相比,哮喘组 IL-18,IL-33,EOS 水平显著升高,而 FEV1％水平显著下降,差异有统计学意义（ P ＜0．05）;与缓解组相比,急性期组IL-18,IL-33,EOS水平显著升高,而 FEV1％水平显著下降,差异有统计学意义（ P ＜0．05）;与轻、中度哮喘组相比,重度组患者 IL-18,IL-33,EOS水平较高,而 FEV1％水平较低,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。急性期各组患者治疗后IL-18,IL-33,EOS水平显著低于治疗前,而FEV1％,高于治疗前,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。【结论】IL-18、IL-33在急性哮喘发作过程中起到促炎作用,加强气道反应;对急性期患者应用激素治疗能有效抑制炎症,控制气道反应,改善患者预后。     

炎症因子IL-18与多囊卵巢综合征相关性研究

【摘要】目的探讨IL-18在多囊卵巢综合征（polycysticovarysyndrome,PCOS）患者发病中的可能作用。方法临床收集PCOS患者血清,分为PCOS肥胖组及PCOS非肥胖组,另设正常女性组为对照组。检测各组试验对象的IL-18血清水平,并分析其与体重指数（BMI）、空腹血糖（FBG）及血清睾酮（T）等指标的相关性。结果PCOS患者IL-18血清水平高于对照组（P〈0．05）,并且PCOS肥胖组高于非肥胖组（P：0．003）。患者IL-18与BMI、FBG、LH及T呈正相关（r=0．613,0．520,0．362,0．781,P〈0．05）,其他检测指标与IL—18水平无相关（P〉0．05）。结论IL-18与PCOS发病密切相关,但其具体的作用及可能机制有待进一步研究。     

联合检测血清IL-6、IL-18及IL-18BP在原发性肝癌中的临床价值

目的探讨联合检测血清IL-6、IL-18及IL-18BP在原发性肝癌的诊断、分期及治疗中的临床价值。方法采用ELISA法检测肝癌患者血清中的IL-6、IL-18及IL-18BP水平。结果①肝癌组血清IL-6、IL-18BP明显高于肝良性肿瘤组、肝硬化组及正常对照组;血清IL-18明显低于肝良性肿瘤组、肝硬化组及正常组,差异有统计学意义(P<0.05);②在临床早期,血清IL-6、IL-18BP比临床晚期水平低,而血清IL-18水平较临床晚期高,差异有统计学意义(P<0.05);③肝癌患者手术后血清IL-18水平较手术前有明显的升高,而血清IL-6、IL-18BP较手术前有所降低,差异有统计学意义(P<0.05);④血清IL-6、IL-18、IL-18BP与AFP有相关性(P<0.01)。结论联合检测血清IL-6、IL-18及IL-18BP,可以作为原发性肝癌的血清辅助诊断及临床分期提供有效的参考价值,有可能为肝癌患者的靶向治疗提供潜在靶点。     

一种简单有效的平端PCR产物克隆方法

介绍一种使用ｐＵＣ质粒做为载体进行平端ＰＣＲ产物连接的方法。首先将特异的ＰＣＲ扩增产物纯化，不经任何处理，与用ＳｍａⅠ内切酶消化的载体ｐＵＣ质粒进行连接，并在连接体系中加入ＳｍａⅠ内切酶，２３℃连接１８～２０小时。转化宿主菌后，挑选白色菌落进行重组鉴定。在ＰＣＲ产物＜５００ｂｐ的ＤＮＡ片段重组阳性率占转化菌白色菌落的７０％，而＞１０００ｂｐ的ＤＮＡ片段重组阳性率占转化白色菌落的１０～２０％。     

人干细胞因子的cDNA基因克隆

采用逆转录－ＰＣＲ的方法从骨髓基质细胞中扩增出人干细胞因子基因，并与载体ｐＫＫ２３３－２和ｐＵＣ１８重组。经该基因的限制酶酶解图谱分析及ＤＮＡ序列分析证实。     

瑞舒伐他汀对AMI病人血清脂联素和IL-18水平影响

目的观察不同剂量瑞舒伐他汀对急性心肌梗死（AMI）病人血清中脂联素、白细胞介素18（IL-18）水平的影响。方法66例AMI病人均于发病12h内行经皮冠状动脉介入术（PCI）,术中见至少一根血管完全闭塞,所有病人均给予常规治疗（硝酸脂类药物、β受体阻滞剂、氯吡格雷、阿司匹林、低分子肝素）,术后随机分成两组,分别给予瑞舒伐他10mg（10mg组）、瑞舒伐他汀20mg（20mg组）,每日1次,用药前及用药后4周测量血清中脂联素、1L-18的水平。结果药物治疗4周后,10mg组、20mg组脂联素水平较治疗前明显升高,差异有显著意义（t=5．980、4．184,P＜O．05）,且10mg组与20mg组治疗前后差值比较,差异有显著性（t=2．459,P＜O．05）;4周后两组IL-18水平均较治疗前明显下降,,差异有显著性（t=2．239、5．466,P＜O．05）,且10mg组与20mg组治疗前后的差值比较,差异有显著性（t=2．594,P＜O．05）。结论瑞舒伐他汀可提高AMI病人血清中抗炎因子脂联素的水平,降低致炎因子IL-18水平,有较好的抗炎效果,且高剂量的变化更明显,效果更显著,呈剂量依赖性。     

血清IL-18水平与过敏性哮喘的关系

目的探讨血清IL-18水平及其编码基因-137G/C-、607C/A多态性与过敏性哮喘的相关性。方法提取受试者白细胞DNA,采用等位基因特异性引物PCR检测37例过敏性哮喘病人(哮喘组)和52例对照组IL-18基因多态性;酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组血清IL-18含量。结果哮喘组IL-18基因-137G/C-、607C/A基因型频率和等位基因频率与对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。哮喘组血清IL-18水平明显低于对照组,差异有显著性(t=27.751,P<0.001)。哮喘组不同基因型间血清IL-18水平比较差异均无显著性(P>0.05)。结论过敏性哮喘病人血清IL-18水平表达降低,提示过敏性哮喘的发生可能与血清IL-18水平低下有关。     

88Arg IL-2的克隆构建及原核表达

目的 构建^88ArgIL-2的重组克隆,并在大肠杆菌中表达。方法 根据天然IL-2的基因序列设计含目的突变位点的引物,经PCR定点诱变技术获得^88ArgIL-2的重组克隆,插入原核表达质粒pGEX4T-2中．经IPTG诱导在大肠杆菌DH5α中表达^88ArgIL-2与GST的融合蛋白。结果 所表达的蛋白相对分子质量约为42000。Western blot检测结果表明,该蛋白具有与亲本IL-2相同的抗原性。MTT比色结果表明,^88ArgIL-2可促使IL-2依赖细胞株CTLL-2生长,具有与亲本IL-2相近的生物学活性。结论 成功构建了^88ArgIL-2的重组克隆,在原核表达系统中高效表达出融合蛋白,并且具有生物学活性。     

广西眼镜蛇神经生长因子的克隆及序列分析

目的:扩增广西眼镜蛇神经生长因子(NGF)的全长基因并进行序列分析.方法:应用聚合酶链反应技术,以广西眼镜蛇cDNA为模板,扩增出编码NGF的全长基因,并克隆至pMD18-T载体中进行基因测序.结果:所得序列与Genbank提供的序列(M61180)对比显示,广西眼镜蛇prepro-NGF与Naja kaouthia (monocled cobra)、Bungarus multicinctus、mouse、人的NGF同源性分别为99%、91%、66%、68%,将不同氨基酸相同的化学性质计算在内,同源性更高.结论:成功地获得了广西眼镜蛇NGF的全长基因,且序列与已知序列高度一致.     

冠心病病人血清VEGF与IL-18变化及临床意义

目的 探讨冠心病（CHD）病人血清中血管内皮细胞生长因子（VEGF）和白细胞介素-18（IL-18）水平的变化及其临床意义。方法 将经临床确诊的CHD病人60例分为稳定型心绞痛（SAP）组、不稳定型心绞痛（UAP）组、急性心肌梗死（AMI）组、陈旧性心肌梗死（OMI）组,每组各15例,以20例健康查体者作为对照组。应用ELISA法分别检测其血清VEGF和IL-18水平。结果 CHD病人血清VEGF与IL-18水平显著高于对照组（t=9．094、6．638,P〈0．01）;SAP、UAP、AMI与OMI四组病人之间两两比较,差异有显著意义（F=65．01、30．17,q=3．11～18．11,P〈0．05、0．01）;SAP与OMI两组病人血清IL-18水平比较,差异无显著意义（q=1．43,P〉0．05）。CHD病人血清VEGF与IL-18水平具有相关性（r=0．53,P〈0．01）。结论 CHD病人血清VEGF与IL-18水平显著升高且两者具有相关性,提示两者在冠心病的病程进展中可能存在一定的相互作用。     

p73 OD区基因的克隆与表达

目的:获取p73 OD (oligomerization domain)区重要功能蛋白.方法:应用多聚酶联反应扩增目的基因,把目的基因插入质粒PET-29a( ),构建成C末端含6个组氨酸的重组体,原核细胞表达并通过镍离子-多聚组氨酸亲和法纯化该目的蛋白.结果:成功构建p73(344～382)-PET-29a( )重组体;该重组体在大肠杆菌BL21(DE3)中高度表达;纯化后的p73(344～382)蛋白质形成四聚体,在磷酸盐缓冲液(PBS)、Bis-Tris和洗脱缓冲液中性质稳定. 结论:p73(344～382)构建在PET-29 a( )中有融合蛋白情况下才得到高度表达.获得较纯的p73(344～382)蛋白.     

IL-18基因多态性与原发性干燥综合征的相关性

目的探讨IL-18基因-137G/C、-607C/A位点多态性及其血清水平与原发性干燥综合征的相关性。方法提取受试者白细胞DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测28例原发性干燥综合征病人和52例健康对照者IL-18基因-607C/A、-137G/C位点多态性,酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组血清IL-18含量。结果两组IL-18基因-137G/C、-607C/A位点基因型频率及等位基因频率比较差异均无显著性(P>0.05)。原发性干燥综合征组血清IL-18水平明显低于健康对照组,差异有显著性(t=24.06,P<0.001)。原发性干燥综合征组不同基因型间血清IL-18水平比较差异均无显著性(P>0.05)。结论血清IL-18水平表达降低可能是原发性干燥综合征的促发因素。     

新生儿高间接胆红素血症IL-6、IL-8水平变化及其意义

目的 :探讨新生儿高间接胆红素血症 (高间胆 )血清中白细胞介素 6 (IL- 6 )及白细胞介素 8(IL- 8)水平变化及其意义。方法 :采用 EL ISA法对住院的高间胆病婴的感染组 (A组 )和非感染组 (B组 )以及对照组进行血清 IL- 6、 IL- 8及胆红素的检测 ,比较各组的胆红素、IL- 6、IL- 8水平 ,黄疸消退前后 IL- 6、IL- 8水平 ,并进行相关因素的分析。结果 :A组总胆红素 (344 .0 3± 74.5 ) μmol/ L,较 B组高 [(2 77.83± 45 .12 ) μm ol/ L],间接胆红素 (间胆 ) (32 2 .9± 72 .12 ) μm ol/ L,较B组高 [(2 5 4.2 9± 44 .8) μmol/ L],A、 B两组 IL- 6分别为 (10 1.6 2± 38.77) ng/ L、 (75 .13± 13.77) ng/ L,均显著高于对照组 [(30 .6 6± 3.17) ng/ L],A、B两组 IL- 8分别为 (190 .0 2± 5 9.0 3) ng/ L 及 (15 0 .5 4± 2 5 .6 2 ) ng/ L,均显著高于对照组 [(10 8.30± 7.37) ng/ L];两组黄疸消退前后的 IL- 6及 IL- 8比较有显著性差异 (P <0 .0 0 1) ,多因素相关分析 ,IL- 6与感染因素密切相关 (P <0 .0 1) ,IL- 8与间胆呈正相关 (P <0 .0 0 1)。结论 :IL- 6及 IL- 8水平高低可作为高间胆病因及免疫自损程度诊断手段之一。