放疗前后宫颈癌细胞凋亡及Fas、p53及bcl-2的表达

目的:探讨Fas、p53及bcl-2放疗前后的变化及与细胞凋亡的关系。方法:采用免疫组织化学SP法和脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术,分别检测40例宫颈鳞癌患者放疗前后同一位点凋亡阳性率及Fas、p53和bcl-2的表达。结果:放疗前后凋亡阳性率有显著性差异(P<0.01);放疗后Fas与p53表达明显升高(P<0.01),而bcl-2表达明显降低(P<0.01);放疗后p53与Fas及bcl-2表达有相关性(P<0.05)。结论:Fas、p53及bcl-2对放射线诱导的宫颈癌细胞凋亡均具有重要调控作用。p53可能通过上调Fas在宫颈癌中的表达参与了放疗诱导的细胞凋亡过程。     

凋亡与增殖及其调控基因表达在直肠癌术前放疗前后的对比研究

目的 :通过检测直肠癌术前放疗患者放疗前后凋亡、增殖指数以及凋亡调控基因表达的变化 ,探讨直肠癌自发性凋亡及放射性凋亡的可能调控机制。方法 :分析 2 3例接受术前放疗的直肠癌患者的临床资料。采用TUNEL法观察放疗前活检标本及放疗后手术切除标本的细胞凋亡情况。免疫组化方法检测所取标本的p5 3、p2 1、PCNA、bcl 2、bax等表达情况。结果 :放疗前活检标本中凋亡指数为 2 8± 1 4,而放疗后标本中凋亡指数为 4 9± 1 3 ,P <0 0 1。放疗后p5 3、p2 1、bcl 2、PCNA染色阳性率较放疗前均下降 ,而bax表达阳性率由放疗前的 3 4 8%上升到放疗后的 65 2 % ,但差异均无统计学意义 ,P >0 0 5。在放疗前活检标本中 ,p5 3 ( -)p2 1( )组的凋亡指数为 4 2± 1 0 ,高于p5 3 ( )p2 1( -)组的 2 3± 0 6,P <0 0 5。放疗后手术标本中 ,p5 3 ( -)p2 1( )组的凋亡指数为 5 8± 1 5 ,高于p5 3 ( )p2 1( -)组的 4 3±0 6,P <0 0 5。结论 :在直肠癌组织的自发凋亡和放射性凋亡过程中 ,p5 3 /p2 1途径均起到了关键作用 ,bax也可能起到一定的作用。     

宫颈癌肿瘤细胞再增殖与近距离放疗剂量间关系的动态监测

目的：通过对同一宫颈癌患者放疗前、放疗2周10Gy、4周20Gy连续宫颈肿物活检,Ki67、增殖细胞核抗原（PCNA）、突变型p53(mtp53)等增殖指标检测,探讨在后装分次放疗过程中加速再增殖出现时间。方法：运用流式细胞仪行Ki67抗原检测及细胞周期分析S期比例（SPF）、增殖指数（PI）、DNA异倍体（DEN）,用免疫组化方法和计算机图像分析仪定量分析PCNA、mtp53蛋白表达情况,观察各增殖指标随剂量增加时变化规律。结果：Ki67、PCNA、mtp53抗原表达及DEN随放疗剂量的增加、疗程的延长而明显增加,其中Ki67、PCNA、mtp5310Gy时与放疗前比较有统计学意义,与20Gy时比较差异无统计学意义。结论：肿瘤细胞加速再增殖在宫颈癌后装分次放疗后2周10Gy时已经出现,而10Gy与20Gy时各指标差异不明显,提示肿瘤细胞增殖速度稳定,为宫颈癌后装加速治疗时机的选择提供理论依据。     

术前区域动脉灌注化疗联合放疗对低位直肠癌Survivin、P53和Bax蛋白表达的影响及意义

背景与目的:新辅助治疗越来越受到关注和重视,有关术前区域动脉灌注化疗联合短期放疗对直肠癌Survivin表达有何影响仍不清楚。本研究旨在探讨术前区域动脉灌注化疗或放疗对Survivin表达影响及其与P53、Bax表达之间的关系。方法:60例低位直肠癌患者随机分为术前区域动脉灌注化疗联合放疗组19例(简称放化疗组)、术前短期放疗组15例(简称放疗组)和单纯手术组26例(简称对照组)。术前区域动脉灌注化疗采用Seldinger技术,术前短期放疗采用前后双野照射,放疗剂量每天每野2Gy,共5天20Gy,术后追加放疗30Gy,对照组术前不做放化疗,术后放疗50Gy。应用免疫组织化学方法检测新辅助治疗前后Survivin、P53和Bax表达。结果:新辅助治疗后,放化疗组、放疗组与对照组Survivin、P53、Bax阳性率无显著差异(P>0.05)。放化疗组Survivin阳性率由治疗前63.16%(12/19)降低至治疗后的26.32%(5/19),P53高表达率由治疗前57.89%(11/19)下降至26.32%(5/19);放疗组Survivin高表达率由治疗前53.33%(8/15)降低至治疗后的13.33%(2/15)(P<0.05),P53阳性率治疗前后分别为73.33%(11/15)、60.00%(9/15),无显著变化(P>0.05)。放化疗组、放疗组Bax阳性率分别由治疗前42.11%(8/19)、46.67%(7/15)增加到治疗后的63.16%(12/19)、73.33%(11/15),有升高趋势(P>0.05);新辅助治疗后(包括放化疗组和放疗组),Survivin表达“减少”组平均生存期(50.05个月)高于表达“增加”组(42.61个月)(P<0.01);Survivin表达变化与P53、Bax表达变化无相关性(P<0.05)。结论:新辅助治疗可以降低P53和Survivin表达,可能上调Bax表达,促进癌细胞凋亡,对低位直肠癌具较好的近期疗效。     

宫颈癌放疗前后肿瘤细胞凋亡及其相关基因的变化

目的:探讨宫颈癌组织放疗前后肿瘤细胞凋亡及凋亡调节基因p53、bcl-2和bax蛋白表达的变化及意义.方法:选择未经治疗的宫颈癌患者20例为试验对象,采集放疗前和放疗10Gy后宫颈癌组织标本,用原位DNA切口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞;单克隆抗体免疫组化SABC法检测细胞凋亡相关基因p53、bcl-2和bax的蛋白表达水平.结果:1)在宫颈癌放疗前后,肿瘤细胞凋亡阳性率和平均凋亡指数分别为25.00%和0.11%、75.00%和3.40%,放疗前后有显著性差异(P＜0.01);2)放疗前肿瘤细胞凋亡相关基因p53、bax和bcl-2蛋白表达阳性率分别为55%、10%和20%,而放疗后分别为25%、60%和25%,放疗后p53蛋白表达减少,bax蛋白明显增加,bcl-2蛋白无明显变化.结论:放射治疗诱导宫颈癌肿瘤细胞凋亡,可能与凋亡调节基因bax基因表达的诱导密切相关.     

不同放疗方法联合手术治疗137例宫颈癌的疗效比较

目的:总结分析腔内后装放疗配合外照射联合根治术治疗Ⅱa~Ⅲa期宫颈癌的5年生存概率和远期并发症。方法:137例行子宫切除和盆腔淋巴结清除术宫颈癌,其中1组84例行术前联合放疗(外照射加腔内放疗,以下同);第2组28例采用术前单纯腔内照射;第3组25例行术后放疗。外照射采用60Co治疗机,给予全盆外照射,B点剂量术前放疗者为25~30 Gy;术后放疗者40~50 Gy;腔内放疗采用192Ir高剂量率后装机,A点剂量5~18 Gy。结果:5年生存概率:术前联合放疗组为77.4%(65/84),术前单纯腔内放疗组为67.9%(19/28),术后放疗组为32.0%(8/25)。术前联合放疗组与术后放疗组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。主要并发症为放射性直肠炎和膀胱炎,第1、2、3组的并发症发生率分别为35.7%(30/84)、32.1%(9/28)、36%(9/25),差异无统计学意义(P>0.05)。结论:宫颈癌根治术前腔内照射加体外放疗可显著提高Ⅱa~Ⅲa期患者的5年生存概率,并发症的发生率无明显改善,值得临床进一步推广。     

调强适形放疗联合紫杉醇加顺铂方案对中晚期宫颈癌患者的临床疗效及鳞状细胞癌抗原的影响

目的观察调强适形放疗(IMRT)联合TP方案(紫杉醇加顺铂)对中晚期宫颈癌患者的临床疗效及其对患者血清鳞状细胞癌抗原(SCCA)的影响。方法回顾性分析福建医科大学附属宁德市医院于2012年2月至2014年2月间收治的68例中晚期宫颈鳞状细胞癌患者,根据治疗方案的不同分为IMRT+TP组(34例)和普通放疗+TP组(34例),比较两组患者的临床疗效和不良反应,以及治疗前、放疗中和治疗后的血清SCCA水平。结果 IMRT+TP组和普通放疗+TP组患者的近期治疗有效率分别为100.0%和91.2%,差异无统计学意义(P>0.05);IMRT+TP组患者的皮肤反应、直肠反应发生率均低于普通放疗+TP组(均P<0.05)。全盆外照射30 Gy后,两组患者的SCCA水平均低于治疗前(均P<0.05),且IMRT+TP组患者的SCCA水平均低于普通放疗+TP组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者SCCA水平均低于全盆外照射30 Gy后(均P<0.05),治疗后两组患者间SCCA水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IMRT联合TP方案对中晚期宫颈癌患者临床效果较好,可降低放疗后不良反应的发生率,值得临床推广。     

宫颈癌根治性放疗预防照射骶前淋巴结的临床研究

目的探讨宫颈癌患者根治性放疗预防照射骶前淋巴结的临床价值。方法 248例宫颈癌患者行根治性放疗。随机分为2组,治疗组为照射骶前淋巴结,对照组为不照射骶前淋巴结。所有患者均采取常规盆腔外照射放疗加腔内后装放疗。先行全盆腔外照射,剂量为20~30 Gy,2~3周后,治疗组改成盆腔凹形野照射和腔内后装治疗,对照组改成盆腔四野照射和腔内后装治疗。盆腔外照射总剂量至46~50 Gy,腔内后装42~48 Gy/7~8次。结果治疗组、对照组5年无瘤生存率分别为63.20%vs 60.98%;5年总生存率分别为70.40%和69.11%,两组比较差异均无统计学意义,放射性肠炎的发生率及程度两组比较差异有统计学意义。结论宫颈癌患者根治性放疗预防照射骶前淋巴结不能提高局控率和生存率。     

凋亡和p53突变对非小细胞肺癌预后的影响

目的:研究细胞凋亡及凋亡相关蛋白p53在肺癌组织中的表达水平,及其对预后的影响。方法:应用DNA缺口末端标记技术和免疫组化方法检测111例肺癌患者组织中细胞凋亡和突变型p53蛋白表达水平。结果:111例肺癌组织中,细胞凋亡数量≥1%的病例有47·7%(53/111),突变型p53蛋白阳性表达率为40·5%(45/111);单因素分析肺癌患者预后的影响因素有凋亡(χ2=6·77,P<0·01)、突变型p53(χ2=6·56,P<0·05)、淋巴结转移(χ2=16·31,P<0·01)和TNM分期(χ2=15·86,P<0·01);COX模型多因素分析显示,肿瘤大小(χ2=4·12,P<0·05)、淋巴结转移(χ2=12·94,P<0·01)和细胞凋亡(χ2=4·61,P<0·05)是肺癌患者的预后不良因素。结论:凋亡及凋亡相关蛋白p53影响肺癌患者的生物学行为及预后。     

伊立替康增敏对宫颈癌放疗中细胞凋亡和增殖及VEGF表达的影响

目的探讨伊立替康增敏对局部晚期宫颈癌放疗前、放疗中癌组织的细胞增殖、凋亡及VEGF的影响。方法41例局部中晚期宫颈癌患者(Ⅱb-Ⅳa期)随机分成两组,增敏组(20例)常规放疗 伊立替康,伊立替康40 mg/m2,放疗第一天开始使用,在放疗后1 h内给予,每周1次,共用5周;对照组(21例)常规放疗。每个病例在放疗前及放疗(10 Gy)后的24 h各取材1次。原位凋亡法检测细胞凋亡指数(A-LI),免疫组化方法检测宫颈癌组织的增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,计算宫颈局部肿瘤消退50%所需时间(T50)。结果增敏组治疗中及治疗诱导的A-LI较对照组明显增加(P=0.004,P=0.034);PCNA的表达增敏组较对照组降低更明显(P=0.037);VEGF的表达增敏组和对照组均较治疗前上升,但两者比较差异无显著性(P=0.425)。增敏组T50明显短于对照组(P<0.05)。治疗诱导的A-LI与T50呈负相关。结论伊立替康增敏可抑制放疗早期宫颈癌细胞增殖,促进放疗诱导的癌细胞凋亡,使宫颈肿瘤消退50%时间缩短,肿瘤体积缩小更快。     

靶向CD19和BCMA的CAR-NK92MI细胞的构建及抗肿瘤活性研究

目的:探讨嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)结构对CAR-NK细胞特异性杀伤能力的增强情况.方法:利用逆转录病毒载体分别构建出稳定表达靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)与分化群抗原19(cluster of differentiat...     

叉头框转录因子M1、Slug、E-cadherin及vimentin在基底细胞样乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨叉头框转录因子M1（FOXM1）、Slug及上皮间质转化的相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）在基底细胞样乳腺癌（BLBC）、非基底细胞样乳腺癌（non-BLBC）及癌旁乳腺组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学Max Vision法对2005年1月至2014年5月在本院治疗的95例BLBC及其癌旁乳腺组织和100例non-BLBC中FOXM1、Slug、E-cadherin及vimentin的表达进行检测。计数资料的分析运用χ2检验,相关性分析采用Spearman相关性分析。结果在95例BLBC中,FOXM1、Slug和vimentin蛋白的阳性表达率分别为76.84%（73/95）、67.36%（64/95）及52.63%（50/95）,显著高于其在non-BLBC[57.00%（57/100）、47.00%（47/100）、31.00%（31/100）]及癌旁乳腺组织[25.26%（24/95）、26.31%（25/95）、9.47%（9/95）]中的表达（χ^2=51.673、32.146、41.337,P均=0.000）。BLBC中E-cadherin的阳性表达率为27.37%（26/95）,显著低于其在non-BLBC[51.00%（51/100）]及癌旁乳腺组织[75.79%（72/95）]中的表达（χ^2=44.590,P=0.000）。FOXM1、Slug、E-cadherin及vimentin的表达均与BLBC的淋巴结转移及临床分期有关,差异具有统计学意义（χ^2=4.348、4.669、18.387、21.287,P均〈0.050;χ^2=7.752、5.366、4.230、7.167,P均〈0.050）。BLBC中,FOXM1、Slug与vimentin的表达呈正相关（r=0.279,P=0.006;r=0.284,P=0.005）,与Ecadherin表达呈负相关（r=-0.503,P=0.000;r=-0.378,P=0.000）,FOXM1与Slug的表达呈正相关（r=0.310,P=0.002）。E-cadherin与vimentin的表达呈负相关（r=-0.363,P=0.000）。结论FOXM1及Slug通过抑制E-cadherin表达、促进vimentin表达从而促进了BLBC的局部侵袭和远处转移,可以作为BLBC预后评价的指标。     

嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞对 HER2 阳性乳腺癌细胞的杀伤

目的:探讨用特异性靶向HER2抗原的嵌合抗原受体(HER2-CAR)修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率.方法:通过PCR获得HER2-CAR片段,运用常规分子克隆技术,将其构建到慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒对NK-92MI细胞进行转染;应用流式细胞术检测细胞转染效率以及转染前后NK-92MI的IFN-γ和颗粒酶分泌差异;使用7-AAD和流式细胞术体外检测HER2-CAR-NK92MI细胞对乳腺癌细胞的杀伤效率;构建小鼠乳腺癌原位肿瘤模型进行体内细胞毒性的检测.结果:用HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌肿瘤细胞MCF-7和T47D的杀伤效率明显高于未被基因修饰的NK-92MI细胞[分别为(62.4±1.3)％ vs (22.1±1.2)％和(50.0±1.9)％vs(16.9±0.6)％,P＜0.01];而两者对HER2阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-468的杀伤效率没有明显差异[(13.6±1.4)％vs(12.7±0.8)％,P＞0.05].同时,经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞相比未被基因修饰的NK-92MI细胞,IFN-γ的分泌明显升高(P＜0.01).结论:经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率明显提高,且具有特异性靶向,此为治疗乳腺癌等恶性肿瘤提供了临床依据.     

Genomic alterations (LOH, MI) on chromosome 17q21-23 and prognosis of sporadic colorectal cancer

Genomic alterations at the long arm of chromosome 17, and in particular at the nm23 locus, are still controversial in colorectal cancer (CRC). Our aim was to investigate the possible relationship of loss of heterozygosity (LOH) and microsatellite instability (MI), at 4 microsatellite loci spanning the 17q21-23 region, to the risk of liver metastasis and nm23 protein expression. Genomic DNA extracted from 58 primary and 54 liver secondary formalin-fixed and paraffin-embedded CRCs was obtained from 82 patients. A fluorescent PCR coupled with an automated DNA sequencer was applied. Increasing fraction of loci showing LOH was positively associated with risk of liver metastases (logrank test for trend, p = 0.005); this remained independent after adjusting to T-stage (Cox regression, p = 0.022), N-stage (p = 0.007), or Dukes' stage (p = 0.012). Conversely, increasing frequency of MI was associated with a reduced risk of liver metastases in Dukes' B tumours (logrank test for trend, p = 0.032). When comparing 30 primary and matched liver secondary lesions, we found concordant genomic alteration in 72% (NME1) to 43% (D17S579). Finally, we observed a trend in association between the proportion of loci with LOH and nm23 positivity (chi2 test for trend, p = 0.024). Our findings suggest that genomic alterations in the 17q21-23 region may affect prognosis of CRC as well as regulation of the nm23 protein expression via an unknown underlying mechanism.     

IL-7和IL-21修饰的NK-92MI细胞对其自身及正常人外周血T细胞的 影响

目的： 研究经IL-7和IL-21修饰后的NK-92MI细胞的增殖和细胞毒性及其对正常人外周血中T细胞的影响。 方法： 通过基因工程将IL-7和IL-21基因片段构建到电转载体上,通过电转的方式构建了NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞。 以细胞计数法和CFSE/7-AAD流式术分别对NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性和细胞毒性进行 比较。将正常人PBMC与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外共培养后,用流式细胞术检测PBMC中T细 胞的表型变化;同时检测正常人活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞共存时相互的细胞毒性以 及对肿瘤细胞的毒性比较。 结果： 成功构建了高表达IL-21的NK-92MI/IL-21细胞和同时高表达IL-7和IL-21的NK-92MI/IL-7& 21细胞;NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对Jurkat和K562细胞的细胞毒性没有变化,但是NK-92MI/IL-21和 NK-92MI/IL-7&21细胞相对于亲本细胞NK-92MI的体外增殖活性有所提高;NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对PBMC 中T细胞的活化有一定的促进作用;活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相互之间几乎无细胞 毒性;同时,当T细胞和3种NK细胞共存时,T细胞不影响NK细胞对K562细胞的细胞毒性。 结论： 基因工程修饰的NK-92MI/ IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性有所提高,它们对外周血T细胞的活化有一定的刺激和促进作用;T细胞和NK- 92MI细胞之间无细胞毒性,同时活化T细胞的存在不影响NK-92MI细胞的细胞毒性。     

靶向CD19 抗原的CAR-NK-92MI和CAR-CD19-T 细胞对套细胞淋巴瘤的体外杀伤

[摘要] 目的：探讨靶向CD19 抗原的CAR-NK-92MI和CAR-CD19-T 细胞对套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma,MCL）的体外杀伤作用。方法：利用近年来在B细胞急性淋巴细胞白血病（B-lineage acute lymphoblastic leukemia, B-ALL）临床试验中获得的成功嵌合抗原受体基因修饰的T（CAR-T 细胞）技术,针对MCL高表达CD19 抗原的情况,分别构建了靶向CD19 抗原的CAR-CD19-T和CAR-NK-92MI细胞,运用LDH释放法检测两者对MCL细胞的体外杀伤作用,另外通过流式细胞术对其杀伤作用进行了验证。结果：相对于对照,无论是CAR-NK-92MI细胞还是CAR-CD19-T 细胞,都对MCL细胞具有极高的杀伤能力（均P <0.01）,都对K562-CD19 细胞具有非常高的毒性（均P <0.01）,而对K562 细胞基本不起作用。CAR-NK-92MI细胞组MCL细胞的死亡率比对照组高30%~40%,CAR-CD19-T 细胞组MCL细胞的死亡率比对照组高40%~50%。结论：CAR-NK-92MI和CARCD19-T细胞在体外对MCL细胞具有强的特异性杀伤作用。     

Cryo-thermal therapy inducing MI macrophage polarization created CXCL10 and IL-6-rich pro-inflammatory environment for CD4+ T cell-mediated anti-tumor immunity

Purpose: We previously developed a novel cryo-thermal therapy to treat malignant mammary carcinoma and melanoma in a mouse model; long-term survival and CD4⁺ T cell orchestrating anti-tumor immune memory response were achieved. Moreover, cryo-thermal-induced CD4⁺ T cell differentiation into Th1 and CD4⁺CTL sub-lineages, in which M1 macrophage polarization played a direct, important role. In particular, cryo-thermal therapy triggered M1 macrophage polarization with up-regulated expression of C–X–C motif ligand 10 (CXCL10) and Interleukin 6 (IL-6). But whether CXCL10 and IL-6 contribute to CD4⁺ T cell-mediated anti-tumor immunity remains unclear. In this study, the role of cryo-thermal-induced CXCL10 and IL-6 in anti-tumor immunity was determined.

Methods: The level of CXCL10 and IL-6 in spleen and serum was determined by RT-PCR and ELISA on day 14 after cryo-thermal therapy. Splenic dendritic cells (DCs) and macrophages were isolated from cryo-thermal-treated mice on day 5 and 14, and the level of CXCL10 and IL-6 in macrophages and DCs was determined by ELISA. The transwell migration assay was performed to study immune cell migration. In vivo neutralization of CXCL10 or IL-6 was performed to investigate the phenotypic changes of immune cells.

Results: Cryo-thermal therapy induced M1 macrophage polarization with up-regulation of CXCL10 and IL-6 expression in spleen. CXCL10 and IL-6 promoted DCs migration and maturation, and subsequently promoted CD4⁺ T cell migration and differentiation into Th1 and CD4⁺ CTL, moreover, reduced myeloid-derived suppressor cells (MDSCs) accumulation.

Conclusions: Cryo-thermal-induced CXCL10 and IL-6 created acute inflammatory environment to initiate a systemically cascading innate and adaptive anti-tumor immunity, which was more permissive for tumor eradication.