针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白、诱导性一氧化氮合酶及其基因表达的效应

目的研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白（ＨＳＰ）、诱导性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）及其ｍＲ－ＮＡ表达的效应。方法将２４只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后,随机分为３组：电针（ＥＡ）组、对照１（Ｃ１）组和对照２（Ｃ２）组。将３组收集的腹腔巨噬细胞制备成玻片和硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）两种标本,应用原位杂交、免疫细胞化学、细胞化学及斑点印迹技术检测ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲＮＡ。结果ＨＳＰ７０定位于巨噬细胞的胞质和胞核;ｉＮＯＳｍＲＮＡ及ｉＮＯＳ均定位于巨噬细胞的胞质;３组的ｉＮＯＳｍＲＮＡ、ｉＮＯＳ、ＨＳＰ７０的斑点印迹的扫描数值均为ＥＡ组＞Ｃ２组＞Ｃ１组（Ｐ＜０．０１）。结论电针可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲ－ＮＡ表达。     

针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白诱导性一氧化氮合酶？…

目的 研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白（ＨＳＰ）,诱导性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）及其ｍＲＮＡ表达的效应。方法 将２４只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后,随机分为３组;电针（ＥＡ）组,对照１（Ｃ１）组和对照２（Ｃ２）组。将３组收集的腹腔巨噬细胞制备成玻片和硝酸纤维素（ＮＣＭ）两种标本,应用原位杂交,免疫细胞化学,细胞化学及斑点印变技术检测ＨＳＰ７０,ｉＮＯＳ,及ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ。     

抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的：探讨ＮＦкＢ在大鼠肺微血管内皮细胞ｉＮＯＳ基因诱导表达中的作用及抗氧化睦内皮细胞ｉＮＯＳ诱导表达的影响及其机制。方法：Ｇｒｉｅｓｓ法测定细胞上清液ＮＯ２水平以反映ＮＯ的生成,Ｎｒｔｈｅｒｎ印迹分析ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平,ＥＭＳＡ法测定细胞核内ＮＦкＢ的结合活性。结果：抗氧化可阻断内皮细胞培养体系ＬＰＳ和ＴＮＦα诱导的ＮＯ生成及ｉＮＯＳｍＲＮＡ的表达;ＬＰＳ和ＴＮＦα可诱导大鼠肺微血管内皮细胞Ｎ     

抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的 :探讨ＮＦκＢ以及抗氧化剂在大鼠肺微血管内皮细胞中对ＴＮＦ α加ＬＰＳ诱导的ｉＮＯＳ基因表达的作用及其机制。方法 :通过免疫组化染色ＡＢＣ法用抗内皮细胞抗体ＣＤ31对培养的大鼠肺微血管内皮细胞进行鉴定。Ｇｒｉｅｓｓ法测定细胞培养上清液中的亚硝酸盐浓度以反映ＮＯ的生成。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结合ＲＴ ＰＣＲ分析ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平。ＥＭＳＡ法测定细胞核内ＮＦκＢ的结合活性。结果 :ＴＮＦα(10 0Ｕ/ｍｌ)加ＬＰＳ(1ｕｇ/ｍｌ)处理内皮细胞 2ｈ后ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平明显上升 (Ｐ <0 .0 5 ) ,2 4ｈ后能明显增加…     

β—内啡肽增强人外周血单个核细胞IL—1β,IL—6和 i …

目的 研究β－内啡肽（β－ｅｎｄｏｒｐｈｉｎ,β－ＥＮＤ）对人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－６和诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的ｍＲＮＡ表达,探讨神经递质对免疫细胞产生细胞因子和ｉＮＯＳ的调节作用。方法 以不同浓度β－ＥＮＤ体外作用于人外周血单个核细胞,随后提取细胞ＲＮＡ。逆转录成ｃＤＮＡ,并分别和相应的上下游引物进行ＰＣＲ扩增,扩增产物在含有溴化乙锭（ＥＢ）的琼脂糖凝胶上     

束缚应激大鼠下丘脑内一氧化氮合酶、c-fos的组化研究和图象分析

束缚应激大鼠下丘脑内一氧化氮合酶、ｃ－ｆｏｓ的组化研究和图象分析宋春杰齐建国章为（华西医科大学组胚教研室）本实验应用ＮＡＤＰＨ－ｄ组化法和ｃ－ｆｏｓ免疫组化技术（ＡＢＣ）法相结合的方法，对束缚应激大鼠丘脑内一氧化氮合酶（ＮＯＳ）和ｃ－ｆｏｓ的分布以及...     

THE WAVELET ANALYSIS OF EVOKED POTENTIALS

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应激对中枢神经系统即刻早期基因c-fos表达及HPA轴的调节作用研究

目的：研究应激对即刻早期基因ｃ－ｆｏｓ表达的调节作用及其与ＣＲＦｍＲＮＡ、ＨＰＡ通路和行为之间的关系。方法：制造社会应激动物模型,高架十字迷宫和空场实验评估大鼠应激行为,免疫组织化学技术检测ＦＯＳ蛋白表达,计算机图像分析系统定量,原位杂交检测ＣＲＦｍＲＮＡ表达,放射免疫分析方法和酶联免疫吸附方法（ＥＬＩＳＡ）检测血清ＡＣＴＨ和Ｃｏｒｔｉｓｏｌ。结果：提示室旁核（ＰＶＮ）部位所ｃ－ｆｏｓ,可能作为第     

LEAKAGE TESTING OF ENDOSCOPE

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食管癌及癌旁组织中EGR-1、c-fos、cyclin D1的表达

目的：研究ＥＧＲ－１、ｃ－ｆｏｓ、ｃｙｃｌｉｎＤ１３种基因ｍＲＮＡ及其相应蛋白在人食管癌癌变过程中的表达水平及其相关性,并探讨其与食管癌的发生、发展及生物学行为的关系。方法：原位杂交法检测４７例食管鳞状细胞癌及其癌旁、上切缘中３种基因的ｍＲＮＡ、免疫组化ＳＡＢＣ法检测蛋白表达水平。结果：３种基因原位杂交、免疫 化阳性表达产物均分别定位于胞浆及胞核中,ＥＧＲ－１ｍＲＮＡ、ｃｆｏｓｍＲＮＡ、ｃｙｃｌｉ     

肝细胞癌及其癌旁肝组织中MAPK磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达的关系

目的：研究MAPK磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达在HCC发生中的作用。方法：利用S－P免疫组织化学技术检测55例HCC及其癌旁肝组织中p-MAPK,c-fos和c-jun蛋白的表达。结果：p-MAPK蛋白的阴性表达主要位于细胞核;c-fos和c-jun蛋白呈核型和（或）核浆型;HCC中,p-MAPK,c-fos和c-jun蛋白的阳性率和阳性表达强度均高于癌旁肝组织（P＜0．01）,p-MAPK表达与c-fos和c-jun蛋白表达强度呈明显正相关,癌旁肝组织中p-MAPK与c-fos蛋白表达亦呈正相关。结论：MAPK信号传导级联异常可能主要在HCC发生的早期起作用;癌旁呈p-MAPK,c-fos或c-jun蛋白表达的肝细胞可能是一种具有恶性潜能的癌前细胞群。     

硒、碘对大鼠海马神经细胞原癌基因c-fos、c-jun表达的影响

目的 探讨硒、碘对培养大鼠海马神经细胞原癌基因c-fos、c-jun表达的影响。方法 以无血清培养大鼠民神经细胞为实验对象,培养液中加入不同浓度的碘,硒,用盖玻片培养法。在培养的1,3,5,7和10d时对海马神经细胞进行c-fos、c-jun的mRNA原位分子杂交和蛋白产物的免疫组织化学SABC法染色,对杂交信号和免疫阳性产物进行计算机图像分析。结果 硒可明显促进海马神经细胞原癌基因c-fos、c-jun mRNA及其蛋白的表达。硒、碘合用的促进作用最明显,尤其是c-jun mRNA表达。结论 碘和硒可通过促进海马神经细胞即刻早期基因c-fos、c-jun表达,特别是c-jun表达,进而影响神经功能发育。     

人肝癌和癌旁组织c－myc基因扩增、转录和表达的研究

应用１４例配对的肝切除标本，系统性地探讨了肝癌和癌旁组织ｃ－ｍｙｃ基因扩增、ｍＲＮＡ转录和ｃ－ｍｙｃ基因产物表达水平的变化，肝癌和癌旁组织未见ｃ－ｍｙｃ基因扩增。原位杂交检测可见１１例癌组织，１０例癌旁组织ｍＲＮＡ转录水平增加，Ｐ６２ｍｙｃ免疫组化显示，染色阳性率分别为癌组织８５．７％，癌旁组织９２．９％。结果表明，人肝癌和癌旁组织存在着转录和基因产物水平高频率的超表达。统计学分析表明两者之间有高度的一致性，结论是ｃ－ｍｙｃ基因超表达与基因扩增无关，不伴有扩增的超表达是肝癌在分子水平呈现的一个重要征象。     

银杏叶制剂对脑缺血再灌注后热休克蛋白、c-fos表达的影响

目的： 研究银杏叶制剂对大鼠脑缺血再灌注后热休克蛋白（HSP）、c-fos表达的影响，探讨其神经保护机制。 方法： 采用改良Longa法复制大鼠局灶脑缺血再灌注模型。56只实验大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组及银杏叶制剂预处理组。银杏组大鼠在实验前灌服银杏制剂2 mL，1日3次，连用5 d。应用HSP70及c-fos免疫组化染色、c-fos mRNA原位杂交、原位细胞凋亡及HE染色等方法观察缺血再灌注不同时点（1 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d）两者的变化，并对其阳性结果进行半定量分析。 结果： 银杏制剂预处理组各时段神经细胞缺血程度明显轻于未处理组、TUNEL阳性细胞数明显少于未处理组，HSP70及c-fos表达的阳性细胞数则明显多于未处理组（P<0.01）。脑缺血再灌注组1 h 时c-fos即有表达，6 h达高峰，后逐渐下降。再灌注6 h组HSP70在缺血侧皮质及基底节开始表达，24 h达高峰。再灌注6 h细胞凋亡最显著。 结论： 银杏制剂可能通过诱导HSP70及c-fos的表达，发挥其神经保护作用。     

BTK抑制剂GDC-0853通过TLR4/NF-κB通路抑制M1巨噬细胞极化并改善UUO肾损伤

目的探究BTK抑制剂GDC-0853对巨噬细胞极化的影响、对小鼠单侧输尿管梗阻(unilated ureteral obstruction,UUO)肾损伤的缓解作用并揭示其相关的机制。方法使用不同浓度BTK抑制剂GDC-0853(20、50、100μmol/L)干预LPS+IFNγ诱导RAW264.7小鼠M0型巨噬细胞向M1型极化,流式细胞术检测巨噬细胞M1型标记物CD86与M2型标记物CD206的表达频率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-23(IL-23)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平,Western blot法检测CD86、iNOS蛋白表达以及TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达情况;60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham)、UUO组、UUO+BTK抑制剂GDC-0853(低、中、高剂量)组,分别予以生理盐水和20 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg GDC-0853灌胃预处理3 d,UUO术后再处理7 d后取小鼠肾组织,HE染色观察肾组织病理变化,免疫组化染色检测iNOS阳性表达。结果与LPS+IFNγ组比较,不同浓度BTK抑制剂GDC-0853干预后,M1型巨噬细胞标记物CD86百分比下降而M2型巨噬细胞标记物CD206百分比上升,TNF-α、IL-6、IL-23、iNOS mRNA表达水平以及CD86、iNOS、TLR4、p-IκBα、p-P65蛋白表达水平也显著下降,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.01)。BTK抑制剂GDC-0853处理的小鼠肾组织病理损伤较UUO组呈剂量依赖性地减轻,同时,iNOS阳性表达较UUO组也呈剂量依赖性地减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论BTK抑制剂GDC-0853可改善小鼠UUO的肾损伤,可能是通过介导TLR4/NF-κB信号通路调控巨噬细胞M1的极化来实现的。     

大鼠脑缺血再灌注后线粒体呼吸链相关基因表达

目的:研究海马神经元缺血再灌注后线粒体相关基因的表达。方法:改良Pulsinell四血管阻断模型致大鼠脑缺血10min再灌注24h后,取新鲜海马组织抽提mRNA。逆转录后经液相杂交递减无差异表达序列。以抑制性PCR方式扩增差异表达序列。之后构建cDNA文库,测序鉴定阳性克隆。最后应用斑点杂交确认差异表达。结果:构建cDNA文库后获得的78个阳性克隆中有7个克隆经最后的鉴定具有差异表达性。测序提示为细胞色素氧化酶C亚单位和NADH-泛醌氧化酶复合体4链的表达性片段。结论:细胞色素氧化酶C亚单位的差异表达从另一个侧面证实了之前提出的再灌注损伤中细胞色素氧化酶C的重要作用。再灌注损伤后NADH-泛醌氧化酶复合体4链的表达提示原来功能不明的NADH-泛醌氧化酶复合体β亚基可能在这一病理过程中发挥一定的作用。     

Changes of expression of glial cell line-derived neurotrophic factor and its receptor in dorsal root ganglions and spinal dorsal horn during electroacupuncture treatment in neuropathic pain rats

Injury to the nervous system occasionally leads to intense and persistent neuropathic pain, which is resistant to conventional analgesic methods. It was reported that electroacupuncture (EA) had potent analgesic effect on neuropathic pain by activating various endogenous transmitters such as the opioid peptides. Glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) has been hypothesized to play an important role in modulation of nociceptive signals especially during neuropathic pain state. Using immunohistochemistry, Western blot, and RT-PCR analysis techniques, the present study observed the effects of EA on the expression of GDNF and GDNF family receptor alpha-1 (GFRalpha-1, the high-affinity receptor of GDNF) in neuropathic pain rats. The results showed that both protein and mRNA levels of GDNF and GFRalpha-1 in the dorsal root ganglions (DRG), as well as GDNF protein in the spinal dorsal horn, were significantly increased after chronic constriction injury (CCI) of the rats' sciatic nerve and could be further enhanced by EA treatment. The present data demonstrated that EA could activate endogenous GDNF and GFRalpha-1 system of neuropathic pain rats and this might underlie the effectiveness of EA in the treatment of neuropathic pain.