SEPT9基因在人肝细胞癌侵袭转移中的作用

目的研究SEPT9基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响。方法通过westernblot法筛选SEPT9蛋白高表达肝癌细胞系,慢病毒转染沉默后检测细胞SEPT9蛋白表达量,通过EdU染色检测sh-SEPT9对肝癌细胞增殖的影响;Transwell和划痕实验检测沉默SEPT9表达后肝癌细胞的侵袭能力和迁移能力;westernblot分析沉默SEPT9表达对肝癌细胞HIF-1α、Ki67、PCNA、MMP-9、VEGF、Vimentin, N-cadherin、E-cadherin蛋白表达影响。结果 westernblot显示SEPT9蛋白在肝癌HepG2细胞存在高表达,慢病毒转然能够获得稳定遗传的HepG2-SEPT9-shRNA细胞系,sh-SEPT9转然后,EdU染色显示HepG2细胞增殖受到明显抑制(P0.05),细胞的侵袭能力和迁移能力显著降低(P0.05);HepG2细胞Ki67、PCNA、Vimentin、N-cadherin、HIF-1α、MMP-9及VEGF表达量明显降低,E-cadherin的蛋白水平明显上升(P0.05)。结论 SEPT9基因通过增强肝癌HepG2细胞的EMT机制,促进肝癌HepG2细胞的侵袭转移。     

miR-425对胶质瘤细胞迁移与侵袭的影响

目的探讨miR-425对人胶质细胞瘤U87细胞迁移与侵袭能力的影响。方法利用Lipo2000转染试剂体外瞬时转染人胶质细胞瘤U87,将细胞分为实验组(转染miR-425 mimics)、抑制组(转染miR-425 inhibitors)、空白组(无转染)。Real-time PCR检测细胞中miR-425表达;划痕实验检测细胞的迁移距离,Transwell实验检测细胞的迁移以及侵袭能力,Western印迹检测基质金属蛋白(MMP)2、MMP9的表达水平。结果与空白组相比,miR-425 mimics组miR-425表达明显上调,约为空白组的8倍,细胞侵袭与迁移能力下降,MMP2、MMP9表达下降,miR-425 inhibitors组miR-425表达明显下调,约为空白组的0.14倍,细胞侵袭与迁移能力显著增强,MMP2、MMP9表达增强。结论 miR-425的表达水平与胶质瘤U87细胞的迁移与侵袭能力密切相关。     

苦参碱对人肝癌HepG2细胞的作用机制研究

目的:探讨中药提取物苦参碱(matrine,MA)对人肝癌HepG2细胞系增殖及迁移的影响。方法:将不同浓度的MA作用于人肝癌HepG2细胞,用相差倒置显微镜观察HepG2细胞形态变化,用MTT法检测HepG2细胞的增殖情况;用Transwell小室测定HepG2细胞的迁移能力。结果:实验组与对照组比较,实验组细胞形态变得欠规则并出现不完整细胞;MTT检测显示MA对HepG2细胞有抑制作用(P0.05),并呈浓度和时间依赖性;Transwell小室测定显示MA会导致HepG2细胞迁移能力下降(P0.01)。结论:中药提取物MA能干扰人肝癌HepG2细胞正常形态,抑制其增殖和迁移。     

全反式维甲酸对肝癌细胞HepG2的分化、侵袭迁移的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对肝癌细胞HepG2的诱导分化作用及侵袭迁移的影响.方法:MTT法测定ATRA对肝癌细胞HepG2的抑制作用;平皿集落形成法检测ATRA对HepG2细胞锚定依赖性生长作用;ELISA法检测ATRA作用前后HepG2 AFP分泌量的变化;RT-PCR检测ATRA对HepG2细胞MMP-9及Nanog的mRNA表达的影响;Western blot检测ATRA对HepG2细胞MMP-9及Nanog蛋白表达的影响;Transwell及划痕实验检测其对侵袭及迁移能力的影响.结果:MTT法显示ATRA抑制体外培养人肝癌细胞HepG2细胞生长,呈剂量和时间依赖性;ELISA显示ATRA诱导HepG2细胞分化和凋亡,使代表肝细胞恶变的AFP分泌量明显下降(P<0.05);平皿克隆形成实验结果表明未经ATRA处理的HepG2可形成克隆,但经ATRA刺激后,其形成克隆变小且数目明显减少;ATRA呈时间及浓度依赖性下调Nanog mRNA及蛋白的表达,并在24h呈浓度依赖性下调MMP-9 mRNA及蛋白表达;Transwell实验和划痕实验结果显示ATRA能抑制HepG2细胞的侵袭和迁移能力.结论...     

亚甲酰胺异羟肟酸联合索拉非尼对肝癌细胞迁移与侵袭的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)亚甲酰胺异羟肟酸(SAHA)联合索拉非尼(SRFN)对HepG2细胞迁移和侵袭的影响。方法用SAHA、SRFN或SAHA联合SRFN后,采用划痕法、Transwell法和Western印迹等方法检测HepG2细胞的迁移、侵袭及相关蛋白表达。结果分别用SAHA、SRFN和联合治疗对HepG2细胞进行作用,与对照组相比,其侵袭能力分别为69.0%、47.8%和15.0%;分别用SAHA、SRFN和联合治疗对HepG2细胞进行治疗,与对照组相比,迁移能力分别为56.0%、47.0%和3.5%。与对照组相比,SAHA或SRFN显著上调E-cadherin蛋白,下调基质金属蛋白酶(MMP)-2、Vimentin表达(P0.05),SAHA联合SRFN组更加明显,而对MMP-9蛋白表达无明显影响。结论 SAHA或SRFN通过上调E-cadherin蛋白的表达,下调MMP-2和波形蛋白的表达,抑制HepG2细胞迁移和侵袭,SAHA和SRFN之间存在协同和叠加效应。     

SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化的机制研究

［摘要］　目的　探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）的机制。方法　在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测是否转染成功。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p与ZEB1的靶向关系,FQ-PCR和Western blot法检测SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail的表达水平。结果　肝癌组织中SNHG3表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义（P<0.05）。克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加（P<0.05）。细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。Transwell小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义（P<0.05）。FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论　SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点。     

FOXC2对结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨叉头框(FOX) C2对结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制。方法结肠癌细胞SW620转染shRNA对照、FOXC2 shRNA,命名为shRNA-NC组和FOXC2 shRNA组,同时以不做转染的细胞为对照组,Real time-PCR和Western印迹检测FOXC2水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Western印迹检测FOXC2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和钙黏蛋白E(E-cadherin)水平。结果shRNA-NC组细胞FOXC2 mRNA及蛋白表达、增殖活性、克隆形成能力、迁移和侵袭能力及MMP-2、MMP-9和E-cadherin蛋白水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0. 05)。FOXC2 shRNA组与对照组比较细胞中FOXC2 mRNA及蛋白表达水平、细胞增殖活性、克隆形成能力、细胞侵袭和迁移能力及MMP-2、MMP-9蛋白水平均显著下降,E-cadherin水平显著升高(均P<0. 05)。结论下调FOXC2抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,作用机制可能与调控MMP-2、MMP-9和E-cadherin水平有关。     

细胞外泛素对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的通过体外细胞实验,探讨细胞外泛素对肝细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法利用不同浓度的细胞外泛素(200、400、800 ng/ml),分别干预肝癌细胞(HepG2),采用CCK8法检测细胞的增殖情况;利用Transwell法检测不同浓度泛素对肝癌细胞侵袭能力的影响;利用划痕实验和蛋白免疫印迹检测细胞外泛素对肝癌细胞迁移能力的作用。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 CCK8法检测结果显示,细胞外泛素干预后能明显促进肝癌细胞的增殖能力,并具有明显的浓度依赖性,且泛素干预浓度在400 ng/ml时作用最显著,在48、72、96 h相对吸光度值均明显高于对照组(P值均0. 05)。Transwell实验结果显示,与对照组相比,不同浓度的细胞外泛素均可明显促进肝癌细胞的侵袭,且在400 ng/ml泛素干预组最显著[(134. 00±8. 18)个vs (347. 33±18. 90)个,t=17. 94,P 0. 001]。划痕实验和蛋白免疫印迹结果显示,400 ng/ml泛素能显著增加HepG2肝癌细胞的迁移能力。结论细胞外泛素在体外能明显促进HepG2肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,且具有浓度依赖性。     

葛根素对人炎性因子肿瘤坏死因子-α诱导的小细胞肺癌细胞迁移和侵袭促进作用的影响及机制

目的研究葛根素(SP)对人炎性因子肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的小细胞肺癌(SCLC)细胞的迁移和侵袭促进作用的影响及作用机制。方法用浓度为10 ng/ml的TNF-α作用于体外培养至对数期的SCLC细胞H446,24 h后用集落形成实验检测H446细胞集落形成能力,用Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,RT-PCR和Western印迹分析TNF-α处理对H446细胞中侵袭转移相关基因基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的影响。用不同浓度(40、80、160、320和640μg/ml)的SP处理H446细胞72 h,利用(CCK)-8法检测SP对H446细胞活力的抑制作用。给予H446细胞TNF-α与浓度为320μg/ml的SP共同作用,检测细胞集落形成能力和迁移、侵袭能力及MMP-2和MMP-9表达量。结果与Con组相比,TNF-α(10 ng/ml)作用24 h后,H446细胞集落形成能力明显升高(P<0.05),且迁移和侵袭能力均明显升高(P<0.05),MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达水平均明显上升。不同浓度的SP作用72 h后,H446细胞活力受到抑制,且具有浓度依赖性(P<0.05)。与Con相比,TNF-α单独处理组细胞的集落形成能力和迁移、侵袭能力均显著升高(P<0.05),且MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达量均明显升高(P<0.05),而TNF-α与SP共同处理组无明显变化。结论SP可抑制TNF-α对SCLC细胞H446迁移和侵袭的促进作用,其作用机制与抑制侵袭转移相关基因MMP-2和MMP-9的表达有关。     

外源性骨形态发生蛋白9转入肺鳞癌细胞对其活性的影响及作用机制

目的观察骨形态发生蛋白(BMP)9对人肺鳞癌细胞株YTMLC-90迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法 RT-PCR和Western印迹法检测YTMLC-90细胞和正常人支气管上皮细胞(NHBE)中BMP9 mRNA和蛋白表达水平;以转染重组腺病毒Ad-BMP9的YTMLC-90细胞为研究组,转染Ad-GFP为阴性对照组,未转染为空白对照组;采用划痕愈合实验检测3组细胞迁移能力,Transwell实验检测迁移和侵袭能力,同时检测迁移相关因子基质金属蛋白酶(MMP)2 mRNA和蛋白表达情况;Western印迹法检测3组细胞BMP-Smad信号通路中Smad 1/5磷酸化水平。结果YTMLC-90细胞中BMP9 mRNA和蛋白表达量均明显低于NHBE细胞(P<0.05)。Ad-BMP9转染YTMLC-90细胞后胞内BMP9蛋白表达量明显高于阴性对照组(P<0.01)。空白对照组48 h的细胞划痕愈合率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);研究组细胞划痕愈合率明显低于阴性对照组和空白对照组,穿过小室膜和基质胶的YTMLC-90细胞数均明显少于阴性对照组和空白对照组,MMP2表达量明显低于阴性对照组,MMP2mRNA和蛋白表达量均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。YTMLC-90细胞高表达BMP9后其p-Smad 1/5表达量明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。结论外源性BMP9转入人肺鳞癌细胞株YTMLC-90可有效抑制其迁移和侵袭能力,激活BMP-Smad信号通路是该抑制作用的机制之一。     

HBx基因对HepG2.2.15细胞MICA-A5.1表达及侵袭、迁移的影响

目的探究HBx基因对HepG2.2.15细胞侵袭、迁移及主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类链相关基因A(MICA)-A5.1表达的影响。方法体外培养HepG2.2.15细胞系(插入HBV全基因组并持续表达的HepG2细胞),随机分为对照组、HBx过表达质粒组、HBx空载质粒组、HBx siRNA组、HBx siRNA阴性对照组,分别转染质粒及siRNA后,以CKK-8法分别检测24 h、48 h后细胞增殖情况,筛选合适药物作用时间;以Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测各组细胞侵袭迁移能力;以免疫印记法检测HBx、MICA-A5.1蛋白和上皮间质转化标志蛋白E-cadherin、Vimentin的表达;以酶联免疫吸附法检测各组细胞培养基中sMICA水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK q检验。结果与对照组比较,24 h后,HBx过表达质粒组细胞活力升高,HBx siRNA组细胞活力降低,差异均有统计学意义(q值分别为8.268、4.365,P值分别为<0.001、0.036);48 h后,HBx过表达质粒组细胞活力升高,HBx siRNA组细胞活力降低,差异均有统计学意义(q值分别为12.680、7.523,P值均<0.001)。与对照组比较,HBx过表达质粒组细胞HBx、MICA及Vimentin蛋白表达、细胞培养基中sMICA水平、迁移细胞数目、侵出Transwell小室的细胞数目均升高,E-cadherin表达降低(q值分别为9.427、6.697、10.500、5.042、22.740、15.720、5.258,P值均<0.05);HBx siRNA组细胞HBx、MICA及Vimentin蛋白表达、细胞培养基中sMICA水平、迁移细胞数目、侵出Transwell小室的细胞数目均降低,E-cadherin表达升高(q值分别为8.133、8.828、7.616、7.673、5.391、7.694、6.226,P值均<0.05)。结论HBx基因调控HepG2.2.15细胞MICA-A5.1表达及侵袭、迁移,上调该基因可促进MICA-A5.1表达,增强HepG2.2.15细胞侵袭转移能力。     

中药复方从脾虚论治肝癌的作用机制研究

目的:探讨脾虚方对肝癌HepG2细胞凋亡和迁移侵袭的影响。方法:体外培养HepG2细胞,加入不同中药复方含药血清干预48 h后,用流式细胞仪检测含药血清对HepG2细胞凋亡的影响;Transwell实验检测药物对细胞侵袭能力的影响。结果:干预48 h后,毒痰瘀方组、脾虚方组及索拉非尼组HepG2细胞的凋亡率分别为(11.63±0.87)%、(12.47±0.56)%、(24.20±1.61)%,脾虚方组诱导细胞凋亡效果显著,与正常对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05);毒痰瘀方组、脾虚方组及索拉非尼组的迁移细胞数分别为124.6±8.4、121.0±9.6、100.2±7.1,细胞侵袭数分别为80.4±7.6、89.2±8.4、71.4±7.3,脾虚方可有效抑制HepG2细胞的迁移、侵袭能力,与正常对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:脾虚方药物血清具有促进HepG2细胞凋亡,抑制HepG2细胞迁移与侵袭的作用。     

miR-138-5p通过靶向SETD6基因调控Raf/MEK/ERK通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭的分子机制

目的探究miR-138-5p通过靶向赖氨酸甲基转移酶(SETD6)基因调控Raf/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭的分子机制。方法qRT-PCR、Western印迹检测正常肝细胞L02、肝癌细胞HepG2、Hep3b、HuH-7细胞中miR-138-5p、SETD6的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力,Western印迹检测转染后Hep3b细胞中CyclinD1、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验及Western印迹检测miR-138-5p与SETD6的联系。结果与人正常肝细胞L02比较,肝癌细胞HepG2、Hep3b、HuH-7中miR-138-5p的表达水平显著降低,SETD6水平显著升高(P<0.05),选择Hep3b细胞进行后续实验;与NC、miR-con组比较,miR-138-5p mimics组miR-138-5p的表达水平显著升高,细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、SETD6、CyclinD1、MMP-2水平显著降低(P<0.05);与NC、si-con组比较,si-SETD6组中SETD6蛋白水平显著降低,细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2水平显著减少(P<0.05);TargetScan生物信息学软件预测显示,miR-138-5p与SETD63'UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示,miR-138-5p与SETD63'UTR区域特异性结合,Western印迹进一步检测显示miR-138-5p与SETD6直接结合负向调控SETD6的表达;与miR-138-5p+pcDNA组比较,过表达SETD6后,miR-138-5p+pcDNA-SETD6组细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、SETD6、CyclinD1、MMP-2蛋白水平显著升高(P<0.05);与miR-con组比较,过表达miR-138-5p后,miR-138-5p组Raf、p-MEK、p-ERK蛋白水平显著降低,与miR-138-5p+pcDNA组比较,过表达SETD6后,miR-138-5p+pcDNA-SETD6组Raf、p-MEK、p-ERK蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到miR-138-5p及SETD6的双重调控,miR-138-5p可能通过调节SETD6的表达调控Raf/MEK/ERK通路进而调节肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,可为肝癌患者分子靶向治疗研究提供思路。     

整合素β1基因沉默对胰腺癌细胞PANC1体外侵袭能力的影响及机制研究

目的 应用短发夹RNA(shRNA)沉默人胰腺癌细胞株PANC1的整合素α1(integrinβ1)基因表达,观察其对PNAC1细胞体外侵袭能力的影响,探讨其机制.方法 构建靶向integrinβ1基因的shRNA真核表达质粒integrinβ1-shRNA及对照真核表达质粒c-shRNA,转染人胰腺癌PANC1细胞,以未转染质粒的细胞作为对照组.应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测integrinβ1、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平,应用Transwell侵袭小室检测细胞体外侵袭能力.结果 integrinβ1-shRNA 组、c-shRNA组和对照组细胞integrinβ1 mRNA表达量分别为0.0029±0.0004、0.0131±0.0009、0.0138±0.0005;integrinβ1蛋白表达量为0.0159±0.0062、0.3215 ±0.0126、0.3107±0.0094.integrinβ1-shRNA 组integrinβ1 mRNA和蛋白表达抑制率分别为(78.6±7.2)％和(92.9±3.2)％(P＜0.01).而c-shRNA 组与对照组差异无统计学意义(P =0.2999).integrinβ1-shRNA组穿膜细胞数由(52±5)个降低至(21 ±4)个(P＜0.01);MMP-2和MMP-9mRNA表达分别从0.592±0.073和0.847±0.069降低到0.102±0.034和0.273±0.071;MMP-2和MMP-9蛋白表达分别从0.225±0.046和0.416±0.081降低到0.059±0.013和0.106±0.022(P值均＜0.05).结论 重组质粒integrinβ1-shRNA能有效地抑制PANC1细胞integrinβ1基因的表达,并可能通过下调MMP-2和MMP-9基因表达而抑制其体外侵袭能力.     

miR-30b对血管平滑肌细胞迁移能力的影响

目的探究microRNA-30b(miR-30b)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)迁移能力的影响。方法体外分离培养大鼠VSMC,将VSMC随机分为正常对照组(未进行转染)、miR-对照组(转染miR-NC,浓度为50 nmol/L)、miR-30b mimics组(转染miR-30b mimics,浓度为50 nmol/L)。采用实时荧光定量PCR实验检测miR-30b及钙黏附蛋白E-Cadherin的表达情况;采用划痕愈合实验检测VSMC的迁移率;采用Transwell实验检测VSMC的迁移能力;采用Western blot技术检测E-Cadherin蛋白的表达。结果①miR-30b mimics组与正常对照组和miR-对照组比较,miR-30b表达水平升高(P0.05)。②划痕愈合实验结果显示,与正常对照组和miR-对照组相比,miR-30b mimics组VSMC的划痕修复率明显降低(P0.05)。③Transwell实验可见,miR-30b mimics组VSMC的迁移能力较正常对照组和miR-对照组明显减弱(P0.05)。④miR-30b mimics组E-Cadherin mRNA和蛋白的表达较正常对照组和miR-对照组明显增强(P0.05)。结论 miR-30b上调E-Cadherin的表达,从而抑制大鼠VSMC的迁移。     

塞来昔布干预对人胃癌细胞E-钙黏蛋白和基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨COX-2与E-cadherin、MMP-2之间的相互关系及其参与胃癌细胞侵袭迁移的可能机制。方法应用塞来昔布(celecoxib)对体外培养的人胃癌细胞SGC7901进行干预,采用实时荧光定量反转录PCR检测COX-2、E-cadherin、MMP-2 mRNA的表达;运用免疫荧光标记法结合激光共聚焦荧光显微镜分析E-cadherin的蛋白表达量;应用Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力的变化。结果塞来昔布明显抑制体外培养的人胃癌细胞SGC-7901中COX-2 mRNA的表达,E-cadherin mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性升高,MMP-2 mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性降低。塞来昔布30μmol/L干预人胃癌细胞SGC7901 24、36、48 h后,激光共聚焦荧光显微镜检测E-cadherin的蛋白表达量明显升高。塞来昔布干预组细胞穿过Transwell小室的细胞数明显少于对照组。结论 COX-2特异性抑制剂塞来昔布通过抑制COX-2的表达,上调E-cadherin的表达,下调MMP-2的表达,抑制体外培养的胃癌细胞SGC7901的侵袭迁移能力。     

PLAGL2与结肠癌侵袭能力的相关性研究

目的探讨多形性腺瘤基因样因子2（PLAGL2）在结肠癌和癌旁组织中的表达水平以及与结肠癌临床病理因素之间的关系,研究PLAGL2对结肠癌细胞侵袭能力的影响及其机制。 方法通过免疫组化检测40例新鲜结肠癌组织及40例癌旁组织中PLAGL2的表达情况,根据术前影像检查结果及术后组织病理结果判断病人分期情况,分析PLAGL2与临床病理因素之间的关系。构建重组质粒pcDNA3.1-PLAGL2,利用转染试剂脂质体2000对SW480细胞进行转染PLAGL2质粒及对照组空载体质粒,分SW480、Vector、PLAGL2三组进行细胞培养,通过Transwell侵袭实验比较三组细胞侵袭能力的差异,并通Western-blot方法检测三组细胞中E-cadherin、vimentin及MMP-7的表达情况。 结果PLAGL2在Ⅲ~Ⅳ期、Ⅰ~Ⅱ期结肠癌组织与癌旁组织中的免疫组化评分（IS值）分别为8.12±2.997、5.71±2.494、2.17±0.984,差异有统计学意义（F=64.225,P<0.01）。卡方检验结果提示PLAGL2表达增高的病例临床分期较晚（χ²=5.700,P=0.017）、肿瘤较大（χ²=8.174,P=0.008）以及更易发生远隔脏器转移（χ²=13.610,P<0.001）;Transwell侵袭实验比较细胞侵袭个数,PLAGL2组明显高于SW480和Vector两组,差异有统计学意义（F=27.997,P<0.01）;Western-blot方法检测PLAGL2组细胞中E-cadherin表达明显降低（F=38.461,P<0.01）、vimentin（F=28.741,P<0.01）及MMP-7表达升高（F=24.520,P<0.01）,差异有统计学意义。 结论PLAGL2的表达上调与结肠癌的发生、发展密切相关,并且能够促进结肠癌细胞的侵袭能力,可能机制与诱发上皮间质化（EMT）形成有关。     

Netrin-1 Induces Epithelial–Mesenchymal Transition and Promotes Hepatocellular Carcinoma Invasiveness

Background

Hypoxia is often found in solid tumors and is associated with tumor progression and poor clinical outcomes. We elucidated the mechanism by which netrin-1 released under hypoxic stress can induce epithelial–mesenchymal transition (EMT) to promote invasion in hepatocellular carcinoma (HCC) cells.

Methods

The expression of netrin-1 and the dependent receptors UNC5H and deleted in colorectal cancer (DCC) in HCC was examined by immunohistochemistry or western blot. The HepG2 cells were cultured in 21 % O₂ (normoxia) or 1 % O₂ (hypoxia) for 24 h. The release of netrin-1 from hypoxic cells was detected by ELISA. Expression of E-cadherin and vimentin were examined by western blot. Inverted microscopy or confocal microscopy was used to show the cell morphology or cytoskeletal rearrangements. Cell invasion induced by hypoxia was analyzed by Transwell chamber. Cytokine IL-8 and IL-10 mRNA levels were assessed by real-time PCR.

Results

The expression of netrin-1 was increased in HCC tissue and cell lines. The dependent receptors UNC5H and DCC were decreased in most HCC cell lines. Hypoxia induced netrin-1 release in a time-dependent manner. EMT induction was found to occur in hypoxic HCC cells in a process that was dependent on the extracellular release of netrin-1. Moreover, overexpression of netrin-1 resulted in EMT induction in normoxic tumor cells. Cytoskeletal rearrangements were found to occur and cell invasion was increased in cells with netrin-1 overexpression. Lastly, mRNA of IL-8 and IL-10 were also increased after recombinant human netrin-1 treatment.

Conclusion

These results suggest that in hypoxic HCC cells, netrin-1 activates downstream signaling pathways to induce EMT activation with subsequent production of multiple inflammatory mediators which in turn promotes cancer invasion.     

槲皮素对食管癌Eca109细胞迁移侵袭及血管生成的影响

目的研究槲皮素(Que)对人食管癌Eca109细胞迁移侵袭及血管生成的影响。方法分别用5μg/mL、10μg/mL Que处理Eca109细胞,通过平板克隆形成实验、创伤愈合实验及Transwell实验观察其克隆形成能力以及迁移和侵袭能力的改变。制备Eca109肿瘤条件培养基,诱导人脐静脉内皮细胞CRL-1730迁移及成管,观察Que对其的影响。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定Que对Eca109细胞的血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达的影响。结果 10μg/mL Que可显著抑制Eca109细胞的单细胞克隆形成能力(P0.05),而5μg/mL Que则不影响Eca109细胞的单细胞克隆形成能力(P0.05)。10μg/mL Que可抑制Eca109细胞的迁移和侵袭(P0.05),5μg/mL Que仅抑制Eca109细胞的侵袭(P0.05),但并不明显影响其迁移(P0.05)。5μg/mL、10μg/mL Que均可抑制Eca109肿瘤条件培养基诱导的CRL-1730细胞迁移和管腔形成(P均0.05),且10μg/mL Que的效果更明显。10μg/mL Que可明显降低VEGF-A、MMP2和MMP9的表达(P均0.05),5μg/mL Que仅降低MMP2的表达(P0.05)。结论 Que可以抑制Eca109细胞的迁移、侵袭及血管新生,并呈剂量依赖性。