ClC-3反义寡核苷酸对ConA诱导的T淋巴细胞增殖的影响

目的　研究ClC 3蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用。方法　采用脂质体转染技术 ,将寡核苷酸导入细胞 ,免疫印迹 (WesternBlot)方法分析ClC 3蛋白表达 ;[3H] TdR参入法观察ClC 3反义寡核苷酸对细胞增殖的作用。结果　①ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的ClC 3蛋白的表达 ;②ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖。结论　ClC 3蛋白参与了ConA诱导的T淋巴细胞的增殖过程     

咖啡酸苯乙酯对小鼠CD3~+T细胞体外活化和增殖的影响

目的研究咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对小鼠CD3+T淋巴细胞活化及增殖的影响,探讨其作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结淋巴细胞,制备淋巴细胞悬液。在淋巴细胞活化实验中,分别与不同浓度的咖啡酸苯乙酯预先孵育2h后,加入促分裂原伴刀豆蛋白A(ConA),运用荧光抗体染色技术结合流式细胞术,8h后,检测T淋巴细胞早期活化标记分子CD69的表达情况;24h后,检测T淋巴细胞中期活化标记分子CD25的表达情况;在淋巴细胞增殖试验中,运用CFDA-SE标记法检测T淋巴细胞刺激48h后的增殖情况。结果CAPE(0·5、1、5、10mg·L-1)能够明显地抑制ConA刺激的小鼠淋巴细胞活化,且呈浓度依赖性;CAPE(0·5、1、5、10mg·L-1)能够明显地抑制ConA刺激的小鼠淋巴细胞增殖,且呈浓度依赖性。结论CAPE对小鼠CD3+T淋巴细胞的体外活化和增殖具有抑制作用,其作用机制可能通过同时抑制PLC-γ信号途径和MAP激酶途径,由此推理CAPE是一种潜在的有效的免疫抑制剂。     

内皮素-1对牛脑血管平滑肌细胞ClC-3通道表达的影响

目的　研究内皮素 1(ET 1)对牛脑血管平滑肌细胞(CSMC)内源性ClC 3表达的影响。方法　采用培养的CSMC ,用免疫印迹 (westernblot)方法分析CSMCClC 3通道表达。结果　①牛脑基底动脉、大脑中动脉、微动脉均有ClC 3蛋白表达 ,分子量约 10 5ku ,以微动脉表达最丰富 ,基底动脉表达最少 ;②培养的CSMC有内源性ClC 3蛋白表达 ,分子量约 95ku ;③ET 1能增加CSMCClC 3蛋白表达 ;④nifedipine、SK&F96 36 5能减少ET 1作用 ,环匹阿尼酸(cyclopiazonicacid ,CPA)浓度依赖性促进ClC 3蛋白表达 ,并能增强ET 1作用。结论　脑血管平滑肌细胞存在内源性ClC 3,ET 1可增强ClC 3表达 ,减少或增加胞浆内Ca2 + 浓度均可影响ET 1的作用     

蟾酥不同溶剂萃取物对小鼠免疫细胞功能的影响

目的对蟾酥不同溶剂萃取物进行初步免疫活性筛选。方法用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞(M)能量代谢水平,中性红吞噬法测定腹腔M的吞噬功能,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群和S期细胞的百分率。结果蟾酥各萃取层中的水层(VB2)、乙酸乙酯层(VB4)及总水提蛋白层(VB6)分别在1.25～30、10～20和10～40mg.L-1浓度范围内增强刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应;其他3组(VB1,VB3和VB5)蟾酥提取物单独作用或与ConA联合作用对小鼠脾淋巴细胞增殖反应无明显影响;VB2,VB4和VB6在1.25～40mg.L-1浓度范围内可增强ConA诱导的小鼠腹腔M能量代谢水平和吞噬中性红的能力。在10mg.L-1时,VB2,VB4和VB6可协同ConA增加脾淋巴细胞中S期细胞百分率,并降低CD4+CD8-和CD4-CD8+、增加CD4+CD8+T淋巴细胞亚群百分率。结论蟾酥不同溶剂萃取物VB2,VB4和VB6体外可协同ConA促进脾淋巴细胞和腹腔M的免疫功能,其机制可能与协同ConA促进DNA合成并活化CD4+CD8-T细胞表达CD8a抗原、增加兼具辅助和细胞毒作用的CD4+CD8+T淋巴细胞亚群的数量有关。     

丙二酸次氮酰胺对刀豆蛋白刺激的胶原性关节炎模型大鼠CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞体外分化的影响

目的:研究来氟米特活性代谢物丙二酸次氮酰胺(A771726)对刀豆蛋白(ConA)刺激的胶原性关节炎(CIA)模型大鼠CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Tregs)体外分化的影响及其治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法:取大鼠分为正常对照组和CIA模型组,建模后制备脾淋巴细胞悬液,再分为正常组、模型组和A771726低、中、高剂量(0.1、1、10μmol·L-1)组,各组加入ConA刺激和相应药物培养液培养48h后,以MTT法检测各组脾淋巴细胞增殖情况,流式细胞术检测各组CD4+CD25+Tregs占CD4+T淋巴细胞的比例;反转录-聚合酶链式反应检测各组CD4+CD25+Tregs特异性标志物Foxp3和转化生长因子β(TGF-β)mRNA表达情况;酶联免疫吸附测定法检测各组TGF-β浓度。结果:与正常组比较,模型组脾淋巴细胞增殖明显升高(P<0.01),CD4+CD25+Tregs占CD4+T淋巴细胞的比例、Foxp3和TGF-βmRNA表达、TGF-β浓度均明显降低(P<0.05);与模型组比较,A7717263个剂量组脾淋巴细胞增殖明显降低(P<0.05或P<0.01),A771726高剂量组CD4+CD25+Tregs占CD4+T淋巴细胞的比例明显升高,A771726中、高剂量组Foxp3和TGF-βmRNA表达、TGF-β浓度均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:A771726可抑制CIA模型大鼠脾淋巴细胞增殖,诱导CD4+CD25+Tregs的分化,其机制可能与上调TGF-β的表达和分泌有关。     

杨梅素对淋巴细胞活化及增殖的影响

目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术,流式细胞仪检测杨梅素对小鼠CD3+T细胞CD69表达的影响;采用3H-TdR参入法检测杨梅素对淋巴细胞增殖的影响,采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测杨梅素对IL-2mRNA表达的影响。采用ELISPOT检测杨梅素对IFN-γ分泌的影响。结果杨梅素能抑制T细胞早期活化标志CD69的表达,并能抑制淋巴细胞增殖反应,同时对淋巴细胞活化后IL-2 mRNA的表达及IFN-γ的分泌也有抑制作用。结论杨梅素对淋巴细胞的活化增殖反应具有抑制作用。     

内质网应激和未折叠蛋白反应相关分子对儿童自身免疫性脑炎T淋巴细胞的影响

目的观察内质网应激(Endoplasmic ReticulumStress,ERS)对自身免疫性脑炎(Autoimmune Encephalitis,AE)病人 T淋巴细胞存活和凋亡的影响以及未折叠蛋白反应(Unfolded Protein Response,UPR)信号通路在 AE淋巴细胞存活和死亡中的作用。方法本研究在 2017年 2月至 2019年 2月选取石家庄市第一医院儿科 AE病人和健康供者外周血样本进行研究,并用不同浓度的毒胡萝卜素(Thapsigargin,TG)(浓度为 0、0.5、1、5、10 nM)分别处理 AE病人和健康供者的 T淋巴细胞 48 h,然后利用八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK?8)实验方法检测细胞存活能力;用 TG(浓度为 5 nM)分别处理 AE病人和健康供者的 T淋巴细胞 48 h,流式细胞仪检测 TG未处理以及 TG处理的 T淋巴细胞的细胞凋亡情况; TG(浓度为 5 nM)刺激 AE病人和健康供者的 T淋巴细胞 48 h,蛋白质印迹法(Western blot)检测 UPR标志分子免疫球蛋白结合蛋白(BIP)和同源蛋白(CHOP)的蛋白表达水平以及凋亡相关蛋白 B淋巴细胞瘤 ?2(Bcl?2)、 B淋巴细胞瘤 ?XL(Bcl?XL)和 bcl?2相关 X蛋白(Bax)表达水平。结果 TG以剂量依赖性抑制 AE病人 T淋巴细胞的增殖,促进 AE病人 T淋巴细胞凋亡,并且使 AE病人 T淋巴细胞的 BIP(0.50±0.05)%比(0.23±0.04)%和抗凋亡蛋白 Bcl?2(1.41±0.04)%比(0.73±0.07)%、Bcl?XL(1.23±0.06)%比(0.51±0.05)%表达下调, CHOP(0.53±0.06)%比(0.81±0.07)%和促凋亡蛋白 Bax(0.51±0.01)%比(1.25±0.05)%的表达水平显著增加。结论内质网应激抑制 AE病人 T淋巴细胞的增殖,促进细胞凋亡,可能通过 BIP和 CHOP来影响细胞凋亡。     

大豆异黄酮体外对大鼠淋巴细胞激活和天然杀伤细胞活性的作用(英文)

目的 :研究大豆异黄酮对大鼠免疫细胞的体外作用。方法 :取大鼠抗凝血 ,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 ,以伴刀豆球蛋白A(ConA)和体内所能达到的不同浓度的金雀异黄素或大豆苷元共同孵育 6 8h后 ,四唑蓝还原法 (MTT)测定体外ConA诱导的淋巴细胞增殖 ;另取外周血单核细胞为效应细胞 ,YAC 1细胞为靶细胞 ,以乳酸脱氢酶法测定天然杀伤细胞 (NK )活性。结果 :在 0 .0 1～ 1μmol·L- 1浓度范围内 ,大豆苷元可剂量依赖性的增强体外ConA诱导的淋巴细胞增殖 (P <0 .0 1) ,1μmol·L- 1的大豆苷元可明显增强NK细胞活性 (P<0 .0 1)。而同样浓度范围内的金雀异黄素对淋巴细胞增殖及NK细胞活性均无明显作用。结论 :大豆苷元体外能剂量依赖性的刺激ConA诱导的淋巴细胞转化 ,增强NK细胞活性 ,这种增强的免疫功能可能是大豆制品抗肿瘤作用的机制之一     

紫杉醇对小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖作用的流式细胞术分析

目的研究紫杉醇对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖的影响,并探讨其机制。方法利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDASE)标记技术结合流式细胞术分析PDB+Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖指数。结果PTX无论对ConA或PDB刺激组T细胞CD69表达均无抑制作用(P>0.05),而对T细胞CD25表达有明显抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系;PTX无论对ConA或PDB+Ion刺激组T细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系。但在ConA及PDB+Ion刺激初立即或是24h后加入不同浓度的PTX,PTX抑制T细胞增殖作用无差异(P>0.05)。结论PTX可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞中后期活化及增殖,其作用机制可能与早期活化相关蛋白PTK及PKCθ无关,而与PKCθ下游活化信号相关。     

Ca~(2+)运动对α_1-肾上腺素受体引起内源性ClC-3氯通道表达的作用

目的　研究Ca2 +运动对α1 肾上腺素受体引起ClC 3氯通道表达的作用。方法　在A10细胞上 ,用RT PCR和Westernblot检测ClC 3mRNA和蛋白质表达情况。结果　苯肾上腺素 ( 10 μmol·L-1)和thapsigargin( 0 1μmol·L-1)可促进ClC 3mRNA和蛋白质的表达 ;SK&F963 65 ( 10 μmol·L-1)和genistein( 10 μmol·L-1)可抑制苯肾上腺素引起的ClC 3的表达 ,nifedipine( 10 μmol·L-1)无此作用。结论　在A10细胞上 ,通过钙池操纵性Ca2 +通道 (SOCC)的Ca2 +内流参与了α1 肾上腺素受体引起的内源性ClC 3氯通道的表达 ,而通过电压依赖性Ca2 +通道 (VDCC)的Ca2 +内流可能与此无关。蛋白酪氨酸激酶参与了ClC 3氯通道的表达     

可乐定对小鼠体外淋巴细胞转化的影响

可乐定是肾上腺素能α_2受体激动剂,呈剂量依赖性地抑制小鼠体外淋巴细胞诱生抗体反应。本文研究了可乐定时ConA或PHA诱导小鼠淋巴细胞转化反应的影响。在培养开始或培养24小时后加入可乐定(10~(-8)～10~(-5)M),对ConA或PHA诱导的淋巴细胞转化均无明显影响。实验提示,在体外反应个T淋巴细胞和B淋巴细胞对可乐定的反应可能存在差别。     

低剂量白藜芦醇增强小鼠免疫反应

目的:研究低剂量白藜芦醇的免疫调节作用.方法:用ConA和Sac分别刺激T淋巴细胞和抗原细胞并诱导细胞因子产生;[~3H]-胸腺嘧啶核苷掺入法检测淋巴细胞增殖;ELISA法检测IL-2,IL-12,IL-10和IFN-γ;用DNFB诱导小鼠迟发型超敏反应(DTH),小鼠耳肿胀作为DTH反应指标;流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞亚群的变化.结果:白藜芦醇(0.75-6μmol/L)剂量依赖性地促进小鼠T淋巴细胞的增殖和IL-2的产生;白藜芦醇还剂量依赖性地促进脾脏淋巴细胞IFN-γ和IL-12的生成,同时抑制IL-10的产生;白藜芦醇(4 mg/kg)灌胃给药能对抗乙醇(16％,w/v)对小鼠DTH反应的抑制作用;白藜芦醇对脾脏淋巴细胞亚群无明显改变,但能逆转乙醇对脾淋巴细胞中巨噬细胞数量和 MHC-II分子表达的下调作用.结论:低剂量白藜芦醇能促进小鼠细胞介导的免疫反应,促进Th1细胞因子产生及影响巨噬细胞功能是其可能的机制.     

广西藤茶总黄酮对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响

目的：探讨藤茶总黄酮（TF）对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。方法：以皮下注射地塞米松或环磷酰胺（CTX）复制小鼠免疫抑制模型．药物组给予不同剂量的TF（200,100和50mg·kg^-1）,并设空白组与模型对照组。分别以5,10μg·mL^-1刀豆蛋白（ConA）刺激脾淋巴细胞,以MTT法测定其增殖功能;以MTT法和廓清率测定小鼠的NK细胞杀伤活性和单核细胞吞噬功能。结果：TF能够显著提高免疫抑制小鼠NK细胞杀伤活性和单核细胞廓清率。当ConA浓度为10μg·mL^-1时,200mg·kg^-1和100mg·kg^-1 TF能促进免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖;当ConA浓度为5μg·mL^-1时,200mg·kg^-1 TF能显著促进免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖。结论：TF可提高免疫抑制小鼠的细胞免疫功能。     

青藤碱治疗类风湿性关节炎免疫作用和机制

目的研究青藤碱(sinomenine,SIN)对动物免疫功能和细胞凋亡的影响及对人滑膜细胞增殖影响。方法 MTT法测定脾淋巴细胞增殖反应及滑膜细胞增殖反应。采用流式细胞术测定脾T淋巴细胞亚型。流式细胞仪和DNA Ladder测定脾淋巴细胞凋亡。结果SIN在体给药抑制LPS及PMA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖。SIN离体给药可抑制ConA，LPS和anti-CD3 mAb诱导小鼠脾淋巴细胞增殖；SIN可使AA大鼠升高的CD4⁺/CD8⁺比值降低。SIN体外使小鼠脾淋巴细胞早期凋亡百分比显著增加。SIN对人类风湿关节炎滑膜细胞增殖也有抑制作用。结论 SIN对小鼠和类风湿关节炎大鼠脾淋巴细胞免疫功能具有抑制作用，诱导细胞凋亡可能是SIN免疫抑制作用的机理之一。