不同剂量内毒素刺激枯否细胞分泌肿瘤坏死因子-α及内皮素-1的体外观察

目的:探讨体外脂多糖(LPS)刺激枯否细胞(KC)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及内皮素-1(ET-1)的作用。方法:采用大鼠肝KC分离与培养技术,动态观察LPS刺激KC分泌TNF-α和ET-1的作用。结果:LPS具有明显活化KC作用,在一定LPS浓度范围内对KC分泌的TNF-α及ET-1有促进作用。结论:LPS可促进体外培养的KC分泌TNF-α及ET-1,这可能与内毒素血症导致的肝损伤有关。     

IRF3 基因干扰对LPS 刺激原代枯否细胞早期细胞因子分泌动态变化的影响

目的:探讨干扰素调节因子3(Interferon regulator factor 3,IRF3)shRNA腺病毒对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)早期细胞因子分泌动态变化的影响。方法:采用在体灌注分离培养大鼠原代KC,以IRF3shRNA腺病毒体外感染KC,48 h后采用LPS刺激细胞,于0、2、4和6 h收集细胞培养上清液,并收集6 h细胞。上清液细胞因子的分泌采用ELISA分析;细胞IRF3基因表达采用RT-PCR和Western blot方法检测。结果:LPS刺激诱导了KC内IRF3 mRNA和蛋白质表达升高,IRF3 shRNA腺病毒的应用抑制了LPS刺激诱导和非刺激组成性IRF3 mRNA和蛋白质的表达;KC受LPS刺激活化后极早期(2 h)IFN-β分泌即上升,4 h达峰值,6 h分泌水平开始下降,但仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激后各时间点IFN-β的分泌,抑制分泌高峰的出现,并使6 h分泌水平趋于正常;KC活化后极早期即分泌大量TNF-α,并于2 h内达到峰值,随后分泌逐渐下降,但6 h仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激各时间点TNF-α的分泌,并抑制了分泌高峰的出现;IL-1β分泌增高出现于LPS刺激4 h后,6 h分泌水平达更高值。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激早期KC对IL-1β的分泌;KC受LPS刺激活化后极早期IL-10分泌即上升,且随着LPS刺激时间延长,其分泌水平逐渐增加。IRF3 shRNA腺病毒的应用促进了LPS刺激后早期各时间点IL-10的分泌。结论:IRF3 shRNA腺病毒可使原代枯否细胞IRF3基因表达沉默;在LPS刺激原代KC,IRF3可促进其下游信号分子IFN-β、前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌,并抑制抑炎细胞因子IL-10分泌。因此,IRF3可能在肝组织免疫炎症性损伤的发生中起中心作用。     

UⅡ/UT系统在LPS刺激大鼠肝枯否细胞前炎细胞因子TNF-α和IL-1β表达与分泌中的作用研究

目的探讨UⅡ/UT系统在LPS刺激大鼠肝枯否细胞(Kupffer cell,KC)TNF-α和IL-1β表达和分泌中的作用。方法采用胶原酶灌注消化和密度梯度离心分离大鼠KC。细胞分组和处理方法:正常对照组urantide(-)LPS(-)、urantide或UⅡ处理组urantide/UⅡ(+)LPS(-)、LPS刺激组urantide(-)LPS(+)、urantide或UⅡ预处理组urantide/UⅡ(+)LPS(+);细胞内基因表达采用RT-PCR和real-time PCR方法检测,细胞培养上清液中蛋白质分泌水平采用ELISA分析方法检测。结果 LPS刺激后,KC内UⅡ、UT mRNA相对表达水平和细胞培养上清液UⅡ多肽水平显著升高,但urantide预处理组显著低于LPS刺激组(P0.01)。Urantide处理组细胞UⅡ/UT mRNA和上清液UⅡ多肽水平与正常对照组之间无明显统计学差异(P0.05);LPS刺激后(LPS刺激组、UⅡ预处理组和urantide预处理组),TNF-α和IL-1βmRNA表达和蛋白质分泌水平较正常对照组明显升高(P0.01),但urantide预处理组较LPS刺激组和UⅡ预处理组显著降低(P0.01),LPS刺激组与UⅡ预处理组之间无明显统计学差异(P0.05)。UⅡ或urantide处理组KC上述前炎细胞因子的表达和分泌水平与正常对照组之间无明显统计学差异(P0.05)。结论 UⅡ/UT信号系统可能在LPS刺激肝KC前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的表达和分泌中起重要作用。     

胰岛素对大鼠肝细胞损伤的保护及其抗炎机制

目的观察胰岛素对大鼠继发性肝细胞损伤是否具有保护作用并探讨其机制。方法胶原酶原位灌流分离大鼠枯否细胞(Kupffercell,KC)及肝细胞并原代培养,分别用脂多糖(LPS)及胰岛素处理KC4h,ELISA法检测KC培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)水平;将不同处理的KC培养上清液分别作用肝细胞,12h后检测肝细胞损伤及存活率,并给予TNF-α单克隆抗体(TNF-α-mAb)阻断TNF-α,观察胰岛素对肝细胞作用的变化。结果(1)LPS处理的KC培养上清液可引起肝细胞损伤,使丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)增高;胰岛素可减轻上述肝细胞损伤(ALT活性降低30.1%,AST活性降低21.2%)(P<0.01,n=8),提高肝细胞存活率(P<0.01,n=8);(2)胰岛素降低KC培养上清液中的TNF-α水平(P<0.01,n=8),同时增加了IL-10的水平(P<0.05,n=8);(3)LPS激活的KC培养上清中加入TNF-α-mAb(中和TNF-α),亦可减轻肝细胞损伤,而此时胰岛素对肝细胞的保护效应未见叠加增强。结论首次发现胰岛素可通过抑制KC分泌促炎性细胞因子TNF-α,同时促进其释放抗炎性细胞因子IL-10,从而减轻肝细胞损伤,促进肝细胞存活。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞A549对TNF-α和LPS的刺激效果研究

目的研究肺泡Ⅱ型上皮细胞A549对TNF-α和脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激的反应效果,探讨急性肺损伤体外细胞模型最佳造模方法。方法体外培养的A549细胞分为正常对照组(normal control,NC组),10 ng/ml TNF-α刺激2 h组,10 ng/ml和100 ng/ml LPS分别刺激2、4、8、16 h组。Western blotting检测胞浆IκB-α含量和IκB-α、NF-κB p65磷酸化水平,qRT-PCR检测细胞TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA转录水平,ELISA检测细胞培养上清IL-1β和IL-6质量浓度。结果 TNF-α刺激导致A549细胞大量凋亡或死亡,而LPS刺激对A549细胞生长形态无明显影响,且与LPS的刺激质量浓度和时间无关。TNF-α刺激可明显增加A549细胞内IκB-α和NF-κB p65磷酸化水平(P<0.05),而LPS刺激对A549细胞内IκB-α和NF-κB p65磷酸化水平无明显影响(P>0.05),且与LPS的刺激质量浓度和时间无关(P>0.05)。TNF-α刺激可显著增加A549细胞内TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA转录水平和培养上清中IL-1β、IL-6质量浓度(P<0.05),而LPS刺激对上述炎症因子的合成和分泌并无显著影响(P>0.05),且与LPS的刺激质量浓度和时间无关(P>0.05)。结论 TNF-α可以有效刺激A549产生过度炎症反应,而LPS不能刺激A549细胞产生炎症损伤,因此建立急性肺损伤体外细胞模型时可以考虑用TNF-α代替LPS刺激。     

IgG刺激诱发的小胶质细胞Toll样受体4表达及细胞因子分泌

目的:了解在体外培养条件下免疫球蛋白G (IgG) 刺激对小胶质细胞表达Toll 样受体4(TLR4)和分泌细胞因子的作用.方法:用不同浓度的IgG (2 mg/L、 20 mg/L、 200 mg/L)及脂多糖(LPS)(10 mg/L)刺激原代培养的大鼠小胶质细胞,24 h后以免疫荧光染色观察TLR4的表达,ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的含量.结果:IgG直接作用于体外培养的小胶质细胞后,以剂量依赖的方式引起TLR4的表达和TNF-α的分泌,但未检测到IFN-γ含量的变化.作为阳性对照的LPS引起了小胶质细胞TLR4表达,并诱导了TNF-α及少量IFN-γ的分泌.结论:同种IgG刺激可使体外培养的小胶质细胞大量表达TLR4,可能通过MyD88依赖途径导致炎性细胞因子分泌.结果提示至少在中枢神经系统的固有免疫反应中,TLR4可能发挥识别病原体之外的蛋白分子,例如IgG的作用.     

紫草素抑制血管平滑肌细胞及巨噬细胞肿瘤坏死因子-α启动子活性

目的： 探讨紫草素(shikonin)对血管平滑肌细胞(VSMCs)及巨噬细胞(Mφs)体外转染的TNF-α基因启动子活性的调控作用。方法：利用虫荧光素酶(luciferase)报告基因系统，构建含有人类TNF-α基因启动子的质粒DNA，经阳离子脂质体转染体外培养的VSMCs及Mφs，以LPS及Ang Ⅱ刺激并经不同浓度的紫草素处理后，通过检测luciferase的活性来观察启动子活性的变化。结果：TNF-α启动子在VSMCs及Mφs可高效稳定地表达，分别为阳性对照(CMV启动子)的58.3%和55.6%；而经LPS及Ang Ⅱ刺激的VSMCs和Mφs中，TNF-α启动子活性较未受刺激时呈现明显上调(P<0.05)。在VSMCs中0.25-1 μmol/L、Mφs中0.5-2 μmol/L的紫草素对未受诱导的TNF-α启动子表现出一定的抑制作用，更可显著抑制经LPS及Ang Ⅱ刺激后上调表达的TNF-α启动子活性，并且呈现剂量依赖关系(P<0.05)。结论：紫草素对 TNF-α启动子活性的抑制，证明了其对促炎细胞因子在转录水平的潜在抑制作用及对于心血管系统的潜在抗炎性质。     

硫辛酸抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞细胞因子及趋化因子的表达

目的探讨硫辛酸(LA)对脂多糖(LPS)激活的星形胶质细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10及相关趋化因子的影响。方法分离并鉴定新生C57BL/6小鼠大脑皮质星形胶质细胞,1μg/mL LPS刺激第2代星形胶质细胞,100μg/mL LA进行干预,Griess法检测NO的分泌,ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10炎性因子的含量,反转录PCR检测炎症趋化因子CC亚族趋化因子配体20(CCL20),单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)mRNA的表达。结果与正常组比较,LPS刺激星形胶质细胞后,NO、TNF-α、IL-1β、IL-6分泌显著升高,IL-10分泌下调(P0.05);LA能抑制LPS诱导的NO、TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌,增加IL-10的分泌,与LPS组相比差异有统计学意义(P0.05)。LA能显著下调LPS所致的CCL20、MIP-1α、MCP-1 mRNA的分泌。结论 LA能抑制LPS激活星形胶质细胞所致的炎性反应,其作用与抑制炎性因子及趋化因子的分泌有关。     

脂多糖刺激人血管内皮细胞分泌内皮素和肾上腺髓质素及其机制研究

目的:研究脂多糖(LPS)刺激人血管内皮细胞(HVEC)分泌内皮素-1(ET-1)与肾上腺髓质素(Adm)的机制。方法:在培养的HVEC上,用放射免疫法测定不同浓度LPS刺激HVEC分泌的ET-1与Adm,以及不同的细胞信号转导阻断剂对其分泌的影响。结果:LPS呈时间和浓度依赖性地增加HVEC分泌ET-1和Adm,ET-1/Adm比值与对照组比较无明显差异(P＞0.05)。在LPS刺激基础上,细胞外信号调节激酶(ERKs)抑制剂PD₀₉₈₀₅₉和P38蛋白激酶抑制剂SB₂₀₂₁₉₀可明显降低LPS刺激HVEC分泌ET-1(P＜0.01),仅SB₂₀₂₁₉₀显著降低Adm的分泌(P＜0.05),其余PKC抑制剂H₇,钙调素(CaM)抑制剂W₇,Ca²⁺阻断剂nicardipine,钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂环孢霉素(CsA)对LPS刺激HVEC分泌ET-1和Adm均无明显影响(P＞0.05)。结论:LPS刺激HVEC分泌ET-1可能与ERKs和P38两条途径有关,LPS刺激HVEC分泌Adm只与P38信号通路有关,两者均不取决于PKC、Ca²⁺、CaM、CaN依赖的信号通路。     

磷脂酰肌醇3-激酶通路对脂多糖预激动小胶质细胞高迁移率族蛋白1表达的影响

目的 探讨磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinaseB,P13K/Akt)通路对脂多糖 (lipopolyssacride,LPS)预处理体外培养大脑皮质小胶质细胞高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1protein 1,HMGB-1)表达的影响.方法 体外分离纯化小鼠大脑皮质小胶质细胞,纯度鉴定后按未刺激对照组、0.01μg/mL LPS单次刺激组(18 h)、1μg/mL LPS刺激组(24 h)、预处理组、PI3K/AKT通路抑制组(2 h)分别进行处理.收获各组细胞与培养上清,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌水平,免疫荧光法检测HMGB-1在细胞中的定位情况,Western blot 检测 HMGB-1和磷酸化Akt的表达水平.结果 PI3K/Akt通路抑制后,LPS预刺激小胶质细胞产生的TNF-α水平较1μg/mL单次刺激组、预刺激组水平降低(P=0.043;P=0.046);磷酸化Akt表达降低,小胶质细胞HMGB-1表达以及向胞浆中转位呈现降低趋势.结论 PI3K/Akt通路在LPS预激诱导的HMGB-1活化中起正性调节作用,这些分子及调节通路的变化参与LPS耐受诱导的重新调配过程,从而共同影响小胶质细胞的最终效应.     

卡氏肺大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的变化

目的探讨卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocysitis carinii pneumonia,PCP)大鼠肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophage,AM)TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的变化。方法采用AM体外培养技术,应用RT-PCR法分别测定脂多糖(LPS)诱导的AM中TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的动态变化。结果肺泡巨噬细胞受LPS刺激后,PCP模型大鼠TNF-αmRNA在1、4 h表达高于正常组(P<0.05),IL-1βmRNA表达在4、8 h时表达高于正常组(P<0.01),IL-6mRNA表达在8 h时PCP高于正常(P<0.05),表达峰值都提前,并且在4 h达到峰值。结论LPS刺激后,PCP大鼠肺泡巨噬细胞在早期可能更易分泌TNF-α、IL-1β、IL-6作为免疫分子,起免疫防御和免疫损伤作用。     

小鼠骨髓源性树突状细胞体外诱导培养方法的比较研究

目的 探讨最佳体外诱导培养小鼠成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)的方法.方法 分离、纯化6周龄C57BL/6小鼠骨髓单核细胞,以含10 %胎牛血清、20 ng/ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和10 ng/ml重组小鼠白细胞介素-4(IL-4)的RPM I-1640培养基培养7 d,然后将细胞分成对照未刺激组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激组和TNF-α+脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激组.继续培养48 h后,观察各组细胞形态,检测IL-12、IL-6浓度及细胞表面标志CD11c、CD80、CD86 和MHC Ⅱ.结果 培养9 d后,两刺激组培养的细胞经相差显微镜观察有DC生长.TNF-α刺激组细胞培养上清液中IL-6、IL-12含量显著高于对照组(P＜0.01),但显著低于TNF-α+LPS刺激组(P＜0.05).3组均高表达CD11c,各组间无显著差异;而CD80、CD86和MHCⅡ表达阳性率TNF-α刺激组显著高于对照组(P＜0.01),TNF-α+LPS刺激组显著高于单纯TNF-α刺激组(P＜0.05).结论 联合使用TNF-α与LPS刺激可使DC成熟度提高,分泌IL-6、IL-12增加.     

模拟肽对LPS诱导CD14的表达

本文观察PMB及其模拟肽处理前后FITC-LPS与J774A1的结合能力及CD14表达,并检测培养上清中细胞因子TNF-α、IL-6的含量变化。结果发现①FITC-LPS分别与PMB、peptide 1孵育后,细胞膜平均通道荧光显著减少,LPS与J774A1的结合能力显著降低;②100 ng/ml LPS刺激J774A1 3 h后CD14阳性率明显增加;LPS分别与PMB和peptide 1预孵育后可显著降低LPS刺激J774A1细胞膜CD14表达;③LPS刺激J774A1分泌TNF-α和IL-6显著增加,LPS分别与PMB和petide 1预孵育后能显著减少细胞因子TNF-α和IL-6分泌。结果证实多粘菌素B及其模拟肽(peptide 1)可能通过下调J774A1 CD14表达,降低细胞因子水平来减少LPS诱导的炎症反应。     

通痹灵总碱对LPS(脂多糖)刺激后的巨噬细胞产生炎性细胞因子的影响

目的：观察中药通痹灵（TBL）的有效部位-总生物碱对LPS（脂多糖）刺激后的巨噬细胞产生炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的影响。方法：培养人类单核白血病细胞系——THP-1细胞，在PMA（Phorbol 12-mmstate 13-acetate）作用下分化为巨噬细胞。体外用LPS（Lipopolysaccharide）刺激分化的巨噬细胞，以MTX（甲氨喋呤）作为对照，培养有药物作用的细胞24小时后检测细胞上清液中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α含量并用PR-PCR（逆转录-聚合酶链式反应）半定量测定IL—1β mRNA、TNF-α mRNA的表达。结果：LPS刺激PMA分化后的THP—1细胞，其IL-1β、TNF—α含量明显升高（与正常组比较P〈0．01），不同浓度的通痹灵总碱（200、100、50、25mg／L）及MTX明显抑制IL—1β、TNF-α的产生（P〈0．01），并下调IL-1β mRNA、TNF-α mRNA的表达。结论：通痹灵总碱抑制巨噬细胞分泌炎性细胞因子IL-1β、TNF-α，进而抑制了一系列免疫炎症反应造成的病理损伤。     

淋巴细胞缺陷对内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞活化的影响

目的观察淋巴细胞缺陷对内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞活化的影响。方法采用腹腔注射脂多糖(LPS)建立Balb/c小鼠和T、B细胞缺陷的重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠内毒素血症模型,ELISA检测2种小鼠腹腔灌洗液TNF-α和IL-10水平,实时荧光定量PCR检测腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PMa)TNF-α、IL-10及丝裂原蛋白激酶磷酸酶-1(mito-gen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)mRNA表达;ELISA检测Balb/c及SCID小鼠PMa体外刺激后细胞因子分泌情况。结果 LPS注射后1 h,SCID小鼠腹腔灌洗液TNF-α水平高于Balb/c小鼠,注射后3 h,IL-10水平低于Balb/c小鼠;LPS注射前及注射后,SCID小鼠PMa TNF-αmRNA表达高于Balb/c小鼠PMa,IL-10 mRNA表达低于Balb/c小鼠PMa;体外实验LPS刺激下,SCID小鼠PMa较Balb/c小鼠PMa分泌更多的TNF-α,IL-10的分泌却偏少。LPS注射前及注射后,Balb/c小鼠PMa MKP-1 mRNA表达均明显高于SCID小鼠。结论淋巴细胞缺陷导致内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞活性的增加,淋巴细胞抑制巨噬细胞的活化并可能调控其发育及成熟;MKP-1表达的减少可能是淋巴细胞缺陷导致腹腔巨噬细胞活性增加的分子机制之一。     

三黄泻心汤对LPS诱导的RAW264.7细胞释放炎性细胞因子影响的研究

目的:观察三黄泻心汤对LPS刺激小鼠RAW264.7细胞释放炎性细胞因子的影响。方法:体外培养小鼠RAW264.7细胞,LPS刺激小鼠RAW264.7细胞分泌细胞因子,用不同浓度三黄泻心汤及三黄泻心汤有效组分进行干预,ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α含量。结果:三黄泻心汤及三黄泻心汤有效组分可抑制LPS刺激小鼠RAW264.7细胞释放TNF-α,并且其影响细胞因子释放作用与细胞毒作用无关。结论:三黄泻心汤及其有效组分B2、B3可抑制LPS刺激小鼠RAW264.7细胞释放TNF-α。     

Fasudil通过TLR4通路抑制脂多糖诱导的小鼠BV-2小胶质细胞TNF-α和IL-1β的表达

目的探讨Fasudil对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞系促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞系,实验分为PBS对照组、LPS刺激组、LPS联合Fasudil干预组,ELISA检测细胞TNF-α、IL-1β的释放,Griess法检测NO释放水平,流式细胞术检测Toll样受体4(TLR4)、TLR2蛋白表达。结果 LPS刺激BV-2细胞可导致TNF-α、IL-1β和NO的释放明显增加,还可导致炎性信号通路中的受体TLR4表达明显增加。Fasudil能明显抑制炎性因子的释放和TLR4的表达。结论 Fasudil可抑制LPS诱导的小胶质细胞NO、TNF-α和IL-1β释放,其作用机制可能与Fasudil下调TLR4通路有关。     

α-黑色素细胞刺激素对ECV304细胞与U937细胞黏附作用的影响

研究α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞黏附作用的影响,以探讨α-MSH的抗炎与免疫调节机制。以U937细胞与ECV304细胞相互黏附作为实验模型,观察LPS或TNF-α刺激ECV304细胞,以及α-MSH干预后,对U937细胞黏附于ECV304细胞的影响。用不同浓度α-MSH处理ECV304细胞,或在LPS/TNF-α处理的同时加不同浓度的α-MSH培养ECV304细胞,以FACS检测ICAM-1,RT-PCR检测骨桥蛋白(OPN)mRNA,Westernblot检测OPN蛋白表达。结果显示,LPS或TNF-α处理ECV304细胞可增加ECV304细胞与U937细胞的黏附,而α-MSH降低这种黏附作用。α-MSH抑制ECV304细胞表达ICAM-1和OPN蛋白;LPS或TNF-α刺激后,ECV304细胞表达OPN mRNA上调,而α-MSH能抑制LPS或TNF-α的上调作用。这些结果提示,α-MSH可通过降低ICAM-1和OPN的表达抑制炎症时血管内皮细胞与白细胞的黏附。     

下调TSPO表达不影响脂多糖诱导的小胶质细胞TNF-α和IL-1β以及IL-6的分泌

目的研究相对分子质量(Mr)18 000转运蛋白(TSPO)基因表达下调对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞分泌TNF-α,IL-1β和IL-6的影响。方法以RNA干扰技术建立TSPO基因表达下调的细胞模型,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测转染TSPO siRNA BV-2细胞TSPO mRNA及蛋白水平表达的效果;用qRT-PCR法检测TSPO基因下调后小胶质细胞BV-2在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平表达的情况;ELISA检测TSPO基因下调小胶质细胞BV-2在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白水平表达的变化。结果成功建立了TSPO基因下调的细胞模型,稳定表达TSPO siRNA细胞的TSPO mRNA和蛋白水平表达均明显下降,TSPO基因下调后BV-2细胞在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的量无变化。结论下调TSPO的表达对LPS刺激引起的小胶质细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌无明显影响。     

抑制核因子-κB对人眼角膜基质细胞分泌细胞因子的影响

目的 观察体外抑制核因子-κB (NF-κB)对人眼角膜基质细胞分泌细胞因子的影响。 方法 四甲基偶氮唑盐（MTT)法检测不同浓度的大黄素对人眼角膜基质细胞活性的影响。用脂多糖(LPS)刺激体外培养的基质细胞,将细胞分为正常对照组(n=6)、LPS组(n=24)和大黄素组(n=24)。LPS组单纯给予LPS刺激,大黄素组于LPS刺激前先用大黄素预处理30min,其余处理同LPS组。分别用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附实验（ELISA）检测LPS刺激对角膜基质细胞白细胞介素8（IL-8）基因表达和蛋白分泌的影响,Western blotting检测角膜基质细胞中κB抑制因子α(IκB-α)蛋白的表达。 结果 所用浓度大黄素对体外培养的角膜基质细胞活性无影响。与刺激前相比,LPS刺激可引起人眼角膜基质细胞IL-8 mRNA表达增加,促进IL-8蛋白分泌、下调细胞内IκB-α蛋白水平,P＜0.01差异均有统计学意义。大黄素预处理可明显抑制LPS诱导的人眼角膜基质细胞表达IκB-α,下调细胞IL-8基因表达,减少IL-8蛋白分泌,明显低于同时间点LPS组的表达,P＜0.01差异具有统计学意义。 结论 LPS可引起人眼角膜基质细胞IκB-α的降解,促进NF-κB核转位,引起IL-8表达。体外抑制NF-κB,能减少人眼角膜基质细胞分泌IL-8。