RACK1对食管鳞癌细胞侵袭转移能力的抑制作用

目的:探讨RACK1表达水平与食管鳞状细胞癌不同转移潜能细胞侵袭转移能力的关系.方法:Transwell实验检测食管鳞癌EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L细胞的转移潜能;利用RT-PCR和Western blot方法,检测食管鳞癌高低转移细胞系EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L中RACK1的mRNA和蛋白表达水平.利用慢病毒转染技术上调RACK1低表达细胞中RACK1的表达后,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的变化.结果:EC9706-H细胞和EC109-H细胞的体外侵袭和迁移能力显著高于EC9706-L和EC109-L细胞系.RT-PCR和Western blot实验结果显示,RACK1在EC9706-H细胞和EC109-H细胞中呈低表达;而在EC9706-L细胞和EC109-L细胞中呈高表达.通过慢病毒转染技术上调EC9706-H和EC109-H细胞系中RACK1的表达,二者的侵袭转移能力明显降低.结论:RACK1表达水平与食管鳞癌细胞的侵袭转移能力负相关,过表达RACK1能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移能力.这提示,RACK1在食管鳞癌的侵袭转移中发挥重要作用,有可能成为其诊断、治疗及预后评估的新靶点.     

下调热休克蛋白 27 表达对胃癌细胞侵袭转移能力的影响

目的：下调胃癌细胞HSP27的表达水平,观察胃癌细胞侵袭转移能力的变化.方法：利用Western blot方法选取HSP27高表达的胃癌细胞系,采用siRNA技术下调HSP27的表达,通过Transwell小室和划痕实验观察细胞系侵袭转移能力的变化.结果：Western blot实验结果显示,BGC823细胞和MKN28细胞中HSP27的呈高表达状态.转染HSP27-siRNA后,BGC823细胞和MKN28细胞中HSP27在蛋白水平和mRNA水平表达量均有显著地下降,验证转染成功.Transwell小室和划痕实验发现,转染HSP27-siRNA后BGC823和MKN28细胞的侵袭转移能力显著低于阴性对照组.结论：HSP27与胃癌细胞的侵袭转移能力密切相关,抑制HSP27的表达能够使胃癌细胞的侵袭转移能力明显下降.     

siRNA靶向沉默MALAT-1基因对人食管癌EC9706细胞体外侵袭迁移的影响

目的:研究长链非编码RNA MALAT-1对食管癌EC9706细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法:化学合成针对MALAT-1的siRNA,脂质体法转染EC9706细胞,转染48h后RT-PCR和Western blot检测各细胞MALAT-1在mRNA和蛋白质水平的表达。Transwell实验检测迁移、侵袭能力改变。结果:小干扰RNA下调MALAT-1表达后,RT-PCR和Western blot证实食管癌EC9706细胞中MALAT-1的表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显下调,Transwell实验证实食管癌EC9706细胞迁移、侵袭能力下降。结论:抑制MALAT-1表达能够使食管鳞癌细胞的侵袭转移能力明显降低。     

RNA干扰沉默神经型钙黏素基因对人食管 癌细胞系EC9706侵袭能力的影响

 探讨RNAi沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的影响。方法 将N-cadherin基因的RNA干扰载体pMSCVneo/N-cadherin质粒通过脂质体转染法转染人食管癌细胞系EC9706,运用G418进行抗性克隆的筛选和扩增,进而得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706,通过RT-PCR和Western blot检测稳定转染后的人食管癌细胞系EC9706中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平的变化,同时检测转染前后食管癌细胞系EC9706中MMP-9基因表达水平的变化,并通过Transwell小室体外侵袭实验检测转染前后人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的变化。结果 通过G418加压筛选法得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706,RT-PCR和Western blot检测结果显示,稳定转染后的人食管癌细胞系EC9706中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均下调,同时MMP-9基因的mRNA表达水平也随之下调;Transwell小室体外侵袭实验结果显示,伴随着N-cadherin和MMP-9表达水平的下调,人食管癌细胞系EC9706的体外侵袭能力也降低（P＜0.05）。结论 RNA干扰沉默神经型钙黏素基因可以使人食管癌细胞系EC9706的体外侵袭能力降低。     

沉默锌指蛋白217基因对食管鳞癌EC9706细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨锌指蛋白217基因(ZNF217)在食管鳞癌侵袭转移中的作用.方法 合成ZENF217基因的siRNA序列并转染对数生长期食管鳞癌EC9706细胞.设置转染无义序列siRNA和未转染EC9706细胞为阴性对照和空白对照.半定量RT-PCR和Western blot方法分别检测转染48 h后3组细胞ZNF217 mRNA和蛋白的表达变化;侵袭小室检测3组细胞穿膜细胞数变化;MTT法分析3组细胞增殖能力的变化.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,转染ZNF217 siRNA组EC9706细胞ZNF217 mRNA和蛋白表达均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);转染ZNF217 siRNA组EC9706细胞穿膜细胞数显著下降,差异有统计学意义(P ＜0.05);ZNF217 siRNA能明显抑制EC9706细胞体外增殖能力(P＜0.05).结论 ZNF217基因表达下降能显著抑制EC9706细胞体外侵袭力和增殖能力,ZNF217基因有望成为食管癌基因治疗的有效靶点.     

miR-203抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭及其分子机制探讨

目的:探究miR-203对食管鳞癌细胞(TR146、EC109)迁移、侵袭能力的影响及其分子机制。方法:检测miR-203在食管鳞癌细胞系中的表达水平,并通过转染miR-203激动剂agomir使TR146、EC109细胞稳定高表达miR-203,miR-203 agomir阴性对照组(NC)和无处理组(Blank)作为对照。通过划痕实验、Transwell实验检测miR-203对TR146、EC109细胞迁移、侵袭能力的影响。利用生物信息学分析miR-203潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验、实时定量PCR（qPCR）实验、Western blot实验验证miR-203靶基因。通过拯救实验探究miR-203是否通过抑制靶基因发挥作用。结果:与正常食管上皮细胞相比,miR-203在食管鳞癌细胞系中表达下调。在TR146、EC109细胞内将miR-203表达水平上调数倍,划痕实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞迁移能力,Transwell实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞侵袭能力。生物信息学、qPCR实验和Western blot实验表明LASP1(LIM and SH3 domain protein 1)是miR-203潜在的靶基因。拯救实验表明miR-203通过靶向抑制LASP1发挥抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭的作用。结论:miR-203能够抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭,并且该抑制作用可能通过miR-203靶向抑制LASP1介导,为食管鳞癌临床诊断和靶向治疗提供了理论依据。     

microRNA-10b对人食管癌细胞系EC9706迁移和侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-10b(microRNA-10b,miR-10b)对食管癌细胞系EC9706迁移和侵袭能力的影响。方法:构建pEGFP-miR-10b真核表达载体,在食管癌细胞系EC9706中稳定表达miR-10b,利用real-time PCR检测其表达水平,应用划痕试验,Transwell小室实验分析迁移和侵袭能力的改变。结果:转染miR-10b载体后,real-time PCR检测其表达水平显著高于对照组(P<0.05),miR-10b的表达能够显著促进EC9706细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论:miR-10b能够促进食管癌细胞系EC9706的迁移和侵袭,可作为评价食管癌转移能力的指标。     

神经型钙粘素在食管鳞癌组织中的表达及RNAi沉默该基因对EC9706细胞体外侵袭能力的影响

背景与目的：上皮性钙粘附蛋白（E．cadherin）和神经性钙粘附蛋白（N-cadherin）在细胞的迁徙和肿瘤浸润转移方面有着重要的作用。许多研究表明,E-cadherin是作为一种抑癌基因发挥作用的,与之相反,N-cadherin在促进肿瘤的浸润转移方面具有重要作用。本研究探讨N-cadherin在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义,以及RNA干扰（RNAi）沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706细胞体外侵袭能力的影响。方法：采用免疫组织化学PV法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管粘膜组织中E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达。通过逆转录病毒介导的RNAi技术沉默EC9706细胞中N—cadhefin的表达．观察该细胞体外侵袭能力的变化。结果：正常食管粘膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中E-cadhenn的阳性率依次降低,分别为95．2％、71．0％、40．3％;N-cadherin的阳性率依次升高,分别为29．0％、61．3％、75．8％。E．cadhefin的阴性率及N．cadhefin的阳性率与食管鳞癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关（P〈0．05）,二者在食管鳞癌组织中的表达呈负相关关系（r=-0．534,P〈0．05）。稳定干扰后的EC9706细胞中N．cadhefin的mRNA和蛋白表达水平均下调。Transwell小室体外侵袭实验结果显示,正常对照组的穿膜细胞数为123．4±8．2,而干扰载体组的穿膜细胞数则为49．6±618（P〈0．05）。结论：食管鳞癌组织中E．cadhefin的低表达和N．cadhenn的高表达与食管鳞癌的发生、浸润及转移密切相关：RNAi沉默N．cadhefin基因表达可以使EC9706细胞的体外侵袭能力降低。     

转录因子Snail对食管癌Eca-109细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Snail在诱导食管癌细胞侵袭和迁移中的作用及机制。方法 采用慢病毒转染构建食管癌细胞株Eca-109-Snail和Eca-109-vc,Real-time PCR及Western blot实验分别检测其mRNA及蛋白表达水平,Transwell及细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。 结果 慢病毒转染细胞株构建成功。经Real-time PCR及Western blot实验鉴定慢病毒转染后的Eca-109-Snail细胞Snail表达量升高,细胞表现出成纤维细胞样外形,细胞之间彼此分离;Eca-109-Snail细胞E-cadherin表达下降,Vimentin和MMP-2表达上升,其侵袭和迁移能力较空载体对照组增强,差异均具有统计学意义（P<0.01）。 结论 Snail通过诱导食管癌Eca-109细胞发生上皮间质转化,进而提高其侵袭和迁移能力。     

lncRNA NORAD促进食管鳞状细胞癌EC9706 细胞的增殖和迁移

目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）DNA损伤激活的非编码RNA（non-coding RNA-activated by DNA damage,NORAD）对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞株EC9706 增殖和迁移能力的影响及其机制。方法：采用RT-PCR 法检测不同ESCC细胞（EC9706、TE1、YES-2、KYSE150）中NORAD mRNA表达水平,通过RNA干扰技术将NORAD的小干扰RNA（siRNA）转染到EC9706 细胞（si-NORAD组）以建立NORAD低表达细胞,另设置空白对照组（Ctrl 组,不转染任何序列）及阴性对照组（NC组,转染siRNA 阴性对照序列）,qPCR验证其转染效果。用MTT、平板克隆形成和划痕愈合实验检测敲低NORAD前后EC9706 细胞增殖和迁移能力的变化,Western blotting 检测敲低NORAD前后EC9706 细胞中上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）和锌指转录因子Snail 的表达变化。结果：在4 种ESCC 细胞中NORAD mRNA 均呈高表达状态,同时与TE1、YES-2、KYSE150 细胞相比,EC9706 细胞中NORAD mRNA 呈显著高表达（P<0.01）。与Ctrl 组和NC 组比较,转染NORAD-siRNA 后,si-NORAD 组EC9706 细胞中NORAD 表达水平显著降低（均P<0.01）,EC9706 细胞的增殖和迁移能力显著降低（均P<0.05）;敲低NORAD 表达后,EC9706 细胞中E-cadherin 表达升高而N-cadherin 和Snail 表达降低（均P<0.05）。结论：NORAD 在EC9706 细胞中呈高表达状态,敲低NORAD 表达可通过上调E-cadherin、下调N-cadherin 和Snail表达而抑制EC9706 细胞的增殖和迁移能力。     

Increased expression of HSP27 inhibits invasion and metastasis in human esophageal squamous cell carcinoma

Previous studies have indicated that heat shock protein 27 (HSP27) had high correlation with the development and progression in several tumors. However, the roles of HSP27 in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) were uncertain. The aim in this study is to investigate the potential roles of HSP27 in the metastasis of ESCC. The expression of HSP27 in ESCC tissues and four human esophageal cancer cell lines were examined by immunohistochemistry and Western blotting, respectively. Wound healing assays, transwell assays, and in vivo assays were used to identify the differences of metastasis potential between normal and HSP27 overexpressed cells. HSP27 expression was downregulated in cancer tissue compared to the matched normal tissue. And the positive staining was mainly located in the cytoplasm. Statistical analyses showed that the expression of HSP27 in ESCC was significantly correlated with the tumor differentiation (P?=?0.023), the patient’s TNM stage (P?=?0.013), lymph metastasis (P?=?0.020), and distant metastasis (P?=?0.017). HSP27 expression was significantly lower in highly metastatic cells than the less ones. The metastatic potentials of EC9706-H and EC109-H cells were higher than EC9706-L and EC109-L cells. In vitro and in vivo assays showed that overexpression of HSP27 in highly metastatic cells dramatically decreased their metastatic capacity. This study indicated that the expression level of HSP27 may be inversely correlated with the metastasis behavior of ESCC, and HSP27 may play an important role in this progression. HSP27 may be a potential molecular target for the therapy and prognosis of patients with ESCC.     

CHST13抑制肝癌细胞侵袭能力的研究

目的 通过研究磺基转移酶CHST13在人肝癌高转移细胞株MHCC97-H和人肝癌低转移细胞株MHCC97-L中的差异表达,明确其与肝癌转移的相关性,从而证实肝癌转移诊断及抗肿瘤治疗新靶点.方法 采用实时PCR、Western blot分析磺基转移酶CHST13在人肝癌高、低转移细胞株的差异表达,通过RNA干扰技术干预CHST13基因,检测干扰前后MHCC97-L细胞的体外侵袭力及体内成瘤性.结果 CHST13在人肝癌高、低转移细胞株中表达具有明显差异;下调MHCC97-L细胞中CHST13基因表达后,穿过基底膜的细胞数量[（30±3）个]明显多于未处理组[（14±2）个],体外侵袭力显著增强（t=2.8,P=0.005）;相对于正常细胞[（0.5±0.06）g],干扰后细胞的肿瘤平均重量[（0.9±0.10）g]明显增大,体内成瘤性明显提高（t=2.5,P=0.01）.结论 磺基转移酶CHST13与肝癌细胞的侵袭、成瘤性密切相关,其有望成为肝癌临床治疗的新靶点.     

热休克蛋白90α在人类肝癌细胞外的表达及其对侵袭、迁移能力的影响

目的探讨细胞外热休克蛋白90α（HSP90α参与肝癌细胞转移的可能分子机制。方法采用免疫印迹法检测HSP90α在低、高转移性肝癌MHCC97-L和MHCC97-H细胞外的表达。选取高转移潜能MHCC97-H细胞,应用不穿透细胞膜的小分子抑制剂抑制细胞外HSP90α表达,体外侵袭实验观察细胞侵袭、迁移能力的变化,明胶酶谱法分析基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性的改变。免疫印迹和免疫共沉淀法检测细胞外辅助分子伴侣HSP70和MMP-2的表达及其与HSP90d的相互作用。利用RNA干扰技术下调细胞HSP70表达,观察细胞外HSP90仅与MMP-2相互作用及其细胞转移潜能的变化。结果HSP90d在不同转移潜能肝癌细胞内外均表达,且与肝癌细胞转移潜能呈正相关。MHCC97-H细胞经特异性HSP90抑制剂二甲氨基乙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素-N-氧化物（DMAG—N—oxide）作用24h后,穿过上室基底膜的细胞数较未处理组和空白对照组明显下降（P〈0．01）,分别为（28．11±3．56）、（80．12±4．16）、（82．24±4．12）个。体外侵袭实验显示,穿过Matrigel人工基底膜的细胞数低于未处理组和空白对照组,分别为（36．54±4．12）、（95．12±3．48）、（101．11±3．36）个,差异有统计学意义（P=0．017）,并伴有细胞外MMP-2活性减低。HSP70和MMP-2均可在MHCC97-H细胞外表达,且能与HSP90α相互结合。小分子干扰RNA（siRNA）能有效抑制细胞HSP70表达,MHCC97-H细胞外HSP90d和MMP-2相互作用减弱,MMP-2活性下降,细胞侵袭、迁移能力受抑制。同时联合应用MMP-2抑制剂,具有协同抑制效应。结论细胞外HSP90饯可能通过与HSP70形成伴侣复合体介导MMP-2成熟活化,增强肝癌细胞侵袭、迁移运动,提示其可能是潜在的对肝癌转移实施防治的靶点。     

尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用

目的：比较选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法：选取食管鳞癌细胞株EC 109、KYSE 150和TE-1,采用Western blot方法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,观察尼美舒利对各组细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结果：COX-2蛋白在EC 109细胞中呈高表达,KYSE 150细胞中呈中等度表达,TE-1细胞不表达COX-2蛋白。尼美舒利在50μmol/L-400μmol/L浓度区间可抑制EC 109、KYSE 150细胞的增殖（P〈0.05）,并呈剂量依赖性,在400μmol/L时对TE-1细胞有抑制作用。EC 109细胞尼美舒利的IC50值最低,KYSE150次之,TE-1最高。尼美舒利可使EC 109和KYSE 150的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。结论：尼美舒利对表达COX-2的食管鳞癌细胞有较好的增殖抑制和促凋亡作用。     

Nuclear expression of Twist promotes lymphatic metastasis in esophageal squamous cell carcinoma

Twist-1 protein (also called Twist) has been suggested to be involved in tumor epithelial-mesenchymal transition (EMT) related progression, however, the mechanism by which twist promotes lymph node metastasis is not fully understood. In the present study, we found that nuclear twist expression is clearly correlated with lymph node (LN) metastasis as determined by immunohistochemistry (IHC). A highly invasive EC109 cell subline, EC109-P, was established by repeated in vitro transwell isolations for the cell model. Immunofluorescence (IF) assay demonstrated that nuclear twist expression was markedly higher in the highly invasive EC109-P cell line when compared with EC109 and EC9706 cells. Based on our cell model, the function and mechanism by which twist regulates LN metastasis in ESCC was investigated. The results showed that the overexpression of Twist could significantly increase the invasion and VEGF-C expression of EC9706 cells, whereas the knockdown of twist expression results in the opposite effects. This finding was further strengthened by the results of the analysis of co-expression of twist and VEGF-C by IHC in ESCC clinical samples. In summary, our study indicates that nuclear twist plays an important role in ESCC lymphatic metastasis by increasing the expression of VEGF-C. The combination of twist and VEGF-C detection could be a reliable prediction of LN metastasis in ESCC.     

人食管鳞癌EC9706细胞线粒体DNA与凋亡的关系

目的：建立人食管鳞癌EC9706细胞的无线粒体DNA（ρ°）细胞,探讨食管癌线粒体DNA与凋亡的关系。方法：在细胞培养液中加EB 50μg/ml、尿嘧啶50μg/ml、丙酮酸100μg/ml,进行连续传代培养,获得完全缺失mtDNA的细胞（ρ°细胞）;运用实时荧光定量PCR技术,检测EB处理后不同时间的人食管鳞癌细胞EC9706 mtDNA的拷贝数,并采用琼脂糖凝胶电泳对mtDNA进行定性检测;采用TUNEL染色和流式细胞技术,检测EB处理后不同时间人食管鳞癌细胞EC9706的凋亡情况。结果：成功建立了人食管鳞癌细胞EC9706的ρ° 细胞,经实时荧光定量PCR鉴定,发现在EB存在下,随着细胞分裂,mtDNA拷贝数进行性减少,直到12天,mtDNA完全丢失;流式细胞术检测结果显示,EC9706细胞EB处理后,第4天、8天及12天细胞凋亡率（%）分别为（2.78±1.04）、（11.68±1.85）、（26.62±1.06）,与对照组相比,差异均有统计学意义（P<0.05）;TUNEL检测结果与上述一致,从第4天到第12天凋亡也逐渐增加。结论：成功建立了EC9706 ρ° 细胞。随着EC9706细胞mtDNA拷贝数量的逐渐减少,细胞凋亡率逐渐增加,表明mtDNA在诱导细胞凋亡中起着一定调控作用,提示选择性地诱导食管癌细胞mtDNA损伤,使食管癌细胞mtDNA拷贝数量明显减少,进而诱导细胞凋亡,可望成为食管癌生物治疗的一个新靶点。     

下调HDAC6表达对食管鳞癌细胞周期、细胞迁移的影响及其分子机制探讨

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）表达的下调对食管鳞癌细胞周期、细胞迁移的影响及其分子机制。方法:将食管鳞癌EC9706细胞分为三组,即未处理组、对照siRNA组和HDAC6 siRNA组,后两组分别转染对照siRNA和HDAC6 siRNA。采用半定量反转录-聚合酶链反应、蛋白印迹方法检测各组细胞中细胞增殖和周期相关因子p21 mRNA和蛋白以及细胞迁移相关因子E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平的变化。结果:HDAC6 siRNA组中p21及E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平分别是0.440±0.120、0.840±0.070和0.580±0.090、0.450±0.080,且均明显高于未处理组（0.165±0.090、0.090±0.020;0.088±0.009、0.054±0.011）和对照siRNA组（0.163±0.021、0.070±0.040;0.820±0.070、0.066±0.007）中p21及E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平,其表达差异均具有统计学意义（P均<0.05）,而未处理组和对照siRNA组之间p21及E-cadherin mRNA和蛋白的表达无差异（P＞0.05）。结论:HDAC6表达下调对食管鳞癌细胞周期的影响可能与p21表达的升高相关;对细胞迁移的影响可能与E-cadherin表达的上调有关。     

人食管癌相关基因4在食管癌细胞系EC9706中表达缺失的机制

目的 探讨人食管癌相关基因4(ECRG4)在食管癌中表达缺失的机制.方法 采用聚 合酶链反应-单链构象多态(PCR-SSCP)和DNA测序的方法检测80对配对食管鳞状细胞癌(ESCC)肿瘤组织和癌旁正常上皮中ECRG4的外显子突变;采用DNA亚硫酸氧盐修饰和序列特异性聚合酶链反应(ssPCR)检测EC9706细胞系ECRG4基因启动子CpG岛甲基化状态;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测去甲基化药物5-氮杂-2-脱氧胞苷或三氧化二砷(As2O3)处理后ECRG4 mRNA的重新表达.结果 80对ESCC配对标本中,ECRG4的4个外显子编码区均未发现突变.EC9706细胞系ECRG4基因核心启动子区16个CpG岛中,有11个呈高甲基化状态,ECRG4 mRNA不表达.EC9706细胞处理前ECRG4 mRNA不表达,去甲基化药物处理后,ECRG4 mRNA均重新表达.结论 甲基化表观遗传学机制是导致ECRG4基因在食管癌细胞系EC9706中表达缺失的一个机制.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of loss of human esophageal cancer-related gene 4 (ECRG4) expression in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC.) Methods PCR-SSCP and DNA sequencing analysis were used to detect the mutation of ECRG4 exons in esophageal cancer and matched adjacent normal tissues of 80 patients. DNA bisulfite-modifying ssPCR sequencing assay was used to examine the methylation status of ECRG4 promoter in human esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells. The re-expression of ECRG4 mRNA was examined by RT-PCR in EC9706 cells, after treatment with either demethylation drug 5-aza-2'-deoxycytidine or arsenic trioxide. Results No mutation in the four ECRG4 exons was found in all the ESCC and matched normal adjacent tissues. RT-PCR showed that 11 of 16 CpG islands of ECRG4 promoter were hypermethylated, while ECRG4 mRNA expression level was undetectable in the EC9706 cells. The ECRG4 mRNA was re-expressed after treatment with either demethylation drug 5-aza-2'-deoxycytidine or arsenic trioxide. Conclusion The epigenetic mechanism of methylation is a reason of loss of ECRG4 gene expression in the ESCC cell line EC9706.