整合素β1亚单位对肝癌细胞与层黏连蛋白趋化行为的影响

目的 研究整合素β1亚单位对肝癌细胞与层黏连蛋白(LN)趋化行为的影响。方法 采用双微吸管实验法进行肝细胞癌(HCC)细胞趋化实验，在两侧微管内加入相同浓度(50μg／ml，200μg／m1)的LN，并引导微管尖端与同-HCC细胞紧密接触，动态观察细胞两侧伪足形成过程；当两侧微管LN浓度为200μg／ml，在一侧微吸管内加入针对整合素β1亚单位(CD29)的单克隆抗体(Anti—CD29)20μg／m1，考察β1整合素亚单位阻断对HCC细胞伪足形成的影响。利用流式细胞仪对Hcc细胞表面整合素β1亚单位的表达进行分析。结果 两侧微吸管加入相同浓度的LN，细胞向两侧微吸管两侧均有伪足形成；随作微吸管内LN浓度的增加，细胞伪足增加，且两侧微吸管内伪足的变化基本呈对称性；在此基础上，微吸管加入Anti—CD29的一侧，HCC细胞伪足生长曲线呈现明显的抑制，而未加入Anti—CD29的微吸管一侧与加入的对侧相比，该侧细胞的伪足明显增加。流式细胞仪分析表明，所研究细胞整合素β1亚单位表达率达95．78％。结论 整合素β1亚单位是联系HCC细胞与HCC细胞对LN趋化性伪足形成的重要受体基础。     

整合素α6在肝细胞癌黏附过程中诱导PI3K及MAPK双信号传导通路

目的:探讨肝细胞癌与细胞外基质发生黏附过程中所引起的信号转导通路的变化.方法:LN作为细胞外基质,BSA作为对照基质,常规培养人肝细胞癌细胞系BEL-7402细胞:以整合素α6单抗作用后检测细胞黏附于LN之后的变化以及所诱导的信号传导通路.Boyden小室检测细胞迁移及侵袭能力:Western blot分析检测细胞ERK磷酸化,RT-PCR方法检测PI3K及Akt基因mRNA表达的变化.结果:细胞在不同基质上发生黏附的时间为30 min-1 h,但没有明显差异.细胞在LN基质上的黏附率为187.2％,而以整合素α6抗体作用后黏附率为104.4％,细胞黏附率明显下降(P<0.05).BEL-7402细胞穿过Matrigel发生侵袭的细胞数分别为每高倍视野103.2±16.5个,抗整合素α6单抗10 mg/L作用后为88.7±9.9个,有显著性差异(P<0.01):BEL-7402细胞P13K及Akt的表达在黏附于细胞外基质后明显增加,而且ERK磷酸化明显增加,整合素α6抗体可以部分降低表达及磷酸化.结论:细胞在黏附过程中有PI3K及ERK两条传导信号分子参与,并与整合素αt6及LN相关.     

缬沙坦对自发性高血压大鼠整合素β1和纤维黏连蛋白表达的影响

目的研究缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)左室心肌整合素β1和纤维黏连蛋白(FN)表达的影响,探讨高血压心肌纤维化的机制.方法选用6周龄的雄性SHR 12只,随机均分为2组SHR阳性对照组;缬沙坦干预组(SHR-V),灌喂缬沙坦20 mg*kg-1*d-1.另选同源正常血压的WKY大鼠6只为正常对照组.实验期14周.观察血压、左室重量/体重(LVW/BW)、胶原容积分数,并用免疫组化法检测3组大鼠心肌整合素β1和FN的表达.结果缬沙坦可显著降低SHR的血压、LVW/BW及左室心肌的胶原含量,此外SHR阳性对照组整合素β1 和FN 的表达明显高于正常对照组(P<0.05),而SHR-V组两者的表达显著低于SHR阳性对照组(P<0.05).结论缬沙坦除可降低血压外,还能显著抑制整合素β1 和FN的表达,抑制甚至逆转心肌纤维化过程.     

Smad2反义寡核苷酸对高糖培养人肾小球系膜细胞分泌纤连蛋白、层黏连蛋白的影响

用脂质体法将Smad2反义寡核苷酸瞬时转染人肾小球系膜细胞,设立正常糖组、高糖组、脂质体组、甘露醇组、转染Smad2正义寡核苷酸组及反义寡核苷酸组,ELISA法检测各组纤连蛋白和层黏连蛋白的含量.结果 显示高糖培养可使人肾小球系膜细胞分泌纤连蛋白和层黏连蛋白增加,转染Smad2反义寡核苷酸可抑制纤连蛋白和层黏连蛋白的分泌.     

人肝再生增强因子抑制层黏连蛋白B1链基因转录活性的研究

肝再生增强因子（ALR）不仅有促进肝细胞再生和抗肝损伤作用，还有一定的抗肝纤维化作用。本研究利用生物信息学技术，对层黏连蛋白B1链（LAMB）基因上游调控序列进行分析克隆，采用基因重组技术构建pCAT3-LAMBp报告基因载体，与pcDNA3.1（-）-ALR表达载体共转染COS7细胞，证明ALR的转基因表达对LAMB启动子具有下调作用，使下游CAT基因的表达减弱。本研究为阐明ALR的生物学作用和抗肝纤维化用用提供新的实验及理论基础。     

CD151及其整合素突变体对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制

目的探讨CD151及其整合素结合突变体(CD151-MUT)对肝癌细胞侵袭能力的影响,并探讨其与FAKSrc-paxillin信号通路的关系。方法取人肝癌细胞株Hep G2,随机分为对照组、CD151组和CD151-MUT组。对照组加入生理盐水,CD151组和CD151-mut组分别转染p AAV-CD151质粒、p AAV-CD151-AAA质粒,孵育4 h。继续培养24 h后收集细胞,采用Transwell小室实验观察各组细胞侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞CD151及FAK-Src-paxillin通路活性,免疫共沉淀法检测CD151、CD151-mut与整合素α3、α6、β1的结合情况。结果 CD151组Transwell小室实验穿膜细胞数较对照组增加,CD151-mut组穿膜细胞数较CD151组减少(P均<0. 05)。CD151组、CD151-mut组CD151蛋白表达均较对照组表达增加(P均<0. 05),CD151组与CD151-mut组比较差异无统计学意义。CD151组p-FAK、p-Src、p-paxillin蛋白表达水平较对照组...     

健脾补土法对大鼠脑缺血再灌注后层黏连蛋白降解的影响

目的探讨健脾补土法对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞周围层黏连蛋白(LN)的降解机制及其脑保护作用。方法 38只大鼠随机分为:假手术组8只,模型组10只,健脾补土传统汤剂组10只,健脾补土超微剂型组10只,大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。进行神经功能症状评分,脑组织病理形态学观察,采用TUNEL法检测凋亡神经元,免疫组织化学法检测LN和基质金属蛋白酶9(MMP-9)阳性表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能症状评分、细胞凋亡指数、MMP-9阳性细胞表达数明显升高,LN表达明显降低(P0.01)。与模型组比较,健脾补土传统汤剂组和健脾补土超微剂型组神经功能症状评分、细胞凋亡指数、MMP-9阳性细胞表达数明显降低,LN表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论 LN降解在脑缺血再灌注损伤中起重要作用,健脾补土法可能通过抑制MMP-9和减少LN降解减轻缺血再灌注所致神经元损伤。     

乌司他丁对放射性肺损伤模型大鼠干预作用及层黏连蛋白和羟脯氨酸的影响

目的 探讨乌司他丁对放射性肺损伤的治疗作用及层黏连蛋白(LN)和羟脯氨酸(Hyp)在放射性肺损伤中的变化.方法 雌性SD大鼠100只随机分为3组:正常对照组(C组)24只,单纯照射组(R组)40只,乌司他丁治疗组(U组)36只.R组及U组动物麻醉后,行直线加速器全胸部照射一次,剂量为25 Gy.U组照射后即按乌司他丁100 000 U/kg,尾静脉注射,而后每天以相同剂量尾静脉注射7 d.C组和R组尾静脉注射等体积生理盐水.于照射后第7、15、30、60、90、150天处死动物,取部分肺组织行HE染色及Masson染色,观察组织学及肺胶原纤维等,使用放射免疫法检测血清中LN水平,碱水解法测定血清中Hyp的含量.结果 U组大鼠生存率(88.9%)明显高于R组大鼠(62.5%).R组大鼠肺部在照射后,早期肺泡明显出现充血和水肿,晚期部分肺泡腔塌陷,可见成纤维细胞构成的成纤维病灶,甚至大面积的肺完全实变;与R组相比,U组中、晚期充血、水肿及肺间隔增宽不明显,少见纤维化病灶及实变.R组血清中LN、Hyp水平随着照射时间逐渐增加,在150 d时达到高峰,分别为(129.70±3.48)ng/ml、(193.70±5.41)ng/ml,这与肺部组织学变化趋势基本一致,U组与R组相比却明显减少(P<0.01).结论 乌司他丁能有效治疗放射性肺损伤,为放射性肺损伤的防治提供了一种新的方法.     

黄芩甙对肝癌细胞BEL-7402抗黏附作用中细胞凋亡和细胞周期的改变

目的:研究黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系黏附、细胞凋亡及细胞周期的影响,探讨三者之间的关系.方法:应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞,不同浓度黄芩甙处理肝癌细胞,通过Boyden小室模型测定其黏附力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞integrinβ_1、E-cd表达的改变及细胞凋亡率.结果:5,10,20mg/L黄芩甙处理组细胞黏附力与对照组相比均有显著降低(52.38±3.83,35.63±2.32,26.58±1.13 vs 84.32±6.74.p<0.05).对照组表现出纤维母细胞样形态,伸出形态各异的伪足.而黄芩甙组细胞形态较圆,伪足数目相对较少,电镜下显示细胞微绒毛明显减少,甚至消失.5,10,20mg/L黄芩甙组细胞integrinβ_1表达较对照组降低(354.07±18.17,319.44±15.21,291.49±12.88 vs 407.54±20.58:P<0.05),E-cd的表达则增加(335.5±20.18,376.4±22.36,393.8±25.68 vs 251.72±12.34,P<0.05).黄芩甙作用后,随黄芩甙浓度增加肝癌细胞G_0/G_1,期比例逐步增高,S期细胞减少,同时细胞凋亡率增加.结论:黄芩甙对肝癌BEL-7402细胞发挥抗黏附作用,其机制可能与抑制黏附分子E-cd的表达,促进integrinβ_1表达有关.在抗黏附的同时细胞周期发生改变,细胞凋亡增多.     

肝细胞肝癌组织中整合素α6及β1 mRNA的表达研究

原发性肝细胞肝癌（HCC）的预后远较其他癌症者，早期侵袭转移是重要因素之一，导致其5生存率极低。在肿瘤侵袭进程中，必须成功地完成3个过程：黏附细胞外基质（ECM）的蛋白质，     

5Aza-dC对肝癌细胞A431侵袭能力影响的体外实验研究

目的探讨5Aza-dC对肝癌细胞A431侵袭运动能力影响。方法用不同浓度5Aza-dC处理培养的A431细胞，观察其形态变化，并采用肿瘤细胞-基质黏附实验和细胞体外侵袭及运动实验检测癌细胞的黏附及侵袭能力变化。结果各不同浓度处理组细胞形态虽无显著变化，但其细胞-基质黏附能力、侵袭和运动能力均较对照组明显降低，差异有显著性（P〈0．05）。结论5Aza-dC对肝细胞癌A431细胞的黏附侵袭等恶性生物学行为可起到抑制作用，可能为HCC的治疗开辟一条新途径。     

近距离小剂量放疗对血管平滑肌细胞纤黏连蛋白及弹性蛋白基因表达的影响

目的 :探讨近距离小剂量放疗对血管平滑肌细胞 (VSMC)纤维黏连蛋白 (FN)和弹性蛋白基因表达的影响及其机制。方法 :以 7、14、2 8Gy60 Co射线辐射培养的大鼠主动脉VSMC弹性蛋白及FNmRNA表达的影响 ,无辐射为对照组。结果 :7Gy放疗组对VSMC弹性蛋白及FNmRNA表达与对照组比较差异无统计学意义 ,而 14、2 8Gy放疗组FNmRNA分别为0 .72± 0 .12和 0 .4 9± 0 .0 9,与对照组 (0 .95± 0 .0 7)比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。 14和 2 8Gy辐射后细胞弹性蛋白mRNA水平分别为1.93± 0 .2 5及 2 .16± 0 .2 2 ,与对照组 (1.0 7± 0 .11)比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :14、2 8Gy60 Co射线辐射可以抑制FNmRNA及加强弹性蛋白mRNA的表达。     

PAX6对肝癌细胞HNF1α基因表达的调控作用

背景：前期研究显示肝细胞核因子1α（HNF1α）在人肝细胞癌（HCC）中表达下调,上调HNF1α表达可显著抑制HCC细胞增殖和小鼠肝脏原位移植瘤生长。然而HNF1α在HCC中表达下调的机制仍有待明确。目的：探讨HCC细胞中HNF1α基因表达调控的分子机制。方法：应用JASPAR软件预测HNF1α启动子上潜在的转录因子结合位点。联合应用含HNF1α启动子的报告基因系统荧光素酶活性检测和点突变技术,研究JASPAR软件预测的配对盒基因6（PAX6）对HNF1α启动子转录活性的影响;以染色质免疫共沉淀实验检测PAX6与HNF1α启动子的相互作用,实时荧光定量RT—PCR（qRT—PCR）和蛋白质印迹法验证PAX6对HepG2细胞内源性HNF1α表达的影响;qRT—PCR检测PAX6、HNF1α在人HCC组织样本中的表达,并以Spearman等级相关系数分析两者间的相关性。结果：PAX6可直接结合至HNF1α的启动子区域,在转录水平促进HNF1α表达。人HCC组织中PAX6表达明显降低,并与HNF1α表达呈显著正相关（rs=0．7530,P〈0．0001）。结论：PAX6可调控HCC细胞中的HNF1α基因表达,其表达下凋可能与HCC的发生、发展有关。     

层黏连蛋白α3亚基在胰腺癌组织中的表达及其与肝转移的关系

回顾性分析82例行手术切除且病理证实为胰腺癌患者的临床资料, 探讨层黏连蛋白α3亚基(LAMA3)在胰腺癌组织中的表达及其与肝转移的关系。结果显示, 胰腺癌肝转移组LAMA3高表达率显著高于非肝转移组, 肿瘤分化程度、病理分期及LAMA3表达水平与胰腺癌肝转移相关且是其独立危险因素。LAMA3高表达可能促进胰腺癌发生肝转移, LAMA3可作为一种潜在治疗靶点和预后标志物。     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中癌前病变阶段差异表达蛋白质的筛选

目的 通过比较二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝细胞癌发生过程中不同阶段的蛋白质表达谱,筛选在大鼠肝癌前病变阶段起重要作用的蛋白质分子. 方法大鼠分为DEN组和正常对照组,诱癌过程中定期处死动物并取其肝组织;以γ-谷氨酰转肽酶染色阳性的肝细胞增生灶为标志,识别和获取肝癌前病变的组织标本.用双向电泳及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法对大鼠正常肝组织、癌前病变组织和肝癌组织的全蛋白质组表达谱进行比较和鉴定.用Western blot和RT-PCR方法对部分差异表达蛋白质(如层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶)进行表达水平的验证.结果 筛选出表达水平差异≥2倍的蛋白质共82种,其中在癌前病变阶段即发生明显改变的差异表达蛋白质有47种,包括在正常对照组、癌前病变组、肝癌组呈现依次上调的层黏连蛋白受体1等8种蛋白质和在上述组织中呈现依次下调的鲱精胺酶等22种蛋白质.Western blot和RT-PCR方法对层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶表达水平的验证结果与双向电泳的结果相似.结论 大鼠肝癌形成过程中不同阶段的蛋白质表达谱有所不同,对癌前病变的差异表达蛋白质如层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶等进行深入探讨,有望为人类肝癌的早期诊断和治疗提供线索.     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中癌前病变阶段差异表达蛋白质的筛选

Objective To screen the differentially expressed proteins especially at the precancerous stage of diethylnitrosamine(DEN)induced hepatocarcinogenesis by comparative proteome research.Methods RatS were divided into normal and DEN groups and sacrificed periodically.The liver samples were stained with γ-glutamyl transpeptidase(GGT)and HE to distinguish the preneoplastic lesion(pre-HCC)from the normal and HCC tissues.The two-dimensional electrophoresis(2-DE)and mass spectrometry(MALDITOF-MS/MS)were then applied to analyze the differentially expressed protein between pre-HCC and normal tissues.pre-HCC and HCC,as well as HCC and normal tissues.A few of the candidate proteins such as laminin receptor 1(67LR)and agmatinase were validated by Western blot and RT-PCR.Results Totally,there were 82 proteins that differentially expressed two fold or more in one kind of tissues sample than the other,47 of which occurred in the pre-HCC tissues. Eight proteins including 67LR were consistently upregulated from normal tissue to pre-HCC and then to HCC tissues,while 22 proteins including agmatinase showed progressively down-regulated in these tissues samples. Conclusion The protein expression profiles are different during the process of hepatocarcinogenesis. Further study on the differentially expressed protein,especially these upregulated in the precancerous stage such as 67LR and agmatinase,might contribute to prevention and early diagnosis of human HCC.     

血清Ⅳ型胶原、层连蛋白和透明质酸检测对肝纤维化的诊断价值

本文检测了90例慢性肝炎、48例肝炎肝硬变患者血清Ⅳ型胶原(CL-Ⅳ),透明质酸(HA)和层连蛋白(LN)水平,并与30例正常人对照。结果慢性肝炎及肝硬变患者血清CL-Ⅳ、HA、LN水平随病情进展而逐渐升高。以CL-Ⅳ≥350ng/ml、HA≥300ng/ml、LN≥150ng/ml分别为诊断慢性肝炎肝纤维化的标准,其诊断灵敏度分别为88%、82%、72%;特异度分别为98%、98%、100%。说明三者不失为诊断肝纤维化较为敏感的指标,其中CL-Ⅳ对早期肝纤维化的诊断优于HA及LN。     

苦参素对HSC-T6整合素αv表达的影响

为探讨持参素对活化的肝星状细胞整合素αv表达和失巢凋亡的影响，把培养激活的HSC—T6分为对照组及实验组，实验组以不同浓度的昔参素干预（分刖为30、60、120、240、480、960mg／L），Westernblot检测整合素αv的表达，结果发现药物千预后整合素αv的表达逐渐降低（分别降低18．4％、30.5％、39．8％、52％、62．3％、76．5％，P〈0．05），且呈浓度依赖性（r=-0．76），表明苦参素能通过抑制整合素αv的表达来影响肝纤维化的发展。     

肝细胞癌组织中E-cadherin、VE-cadherin的表达变化及意义

目的观察肝细胞癌(HCC)组织中钙依赖性黏附素(E-cadherin)、血管内皮钙黏素(VE-cadherin)的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测60例HCC、20例癌旁正常肝组织中的E-cadherin和VE-cadherin蛋白,分析两种蛋白表达的变化与HCC临床病理参数的关系。结果 HCC组织中E-cadherin、VE-cadherin蛋白阳性表达率为52%(31/60)、43%(26/60),癌旁正常肝组织中分别为80%(16/20)、15%(3/20);两者比较,P均<0.05。E-cadherin、VE-cadherin蛋白表达与HCC的血管侵犯、pTNM分期及Edmondson分级有关(P均<0.05)。结论 HCC组织中E-cadherin蛋白表达下调,VE-cadherin蛋白表达上调;两者可能与HCC的侵袭、转移有关。     

整合素a5b1对胃癌细胞黏附、转移及耐药的影响

目的:探讨整合素a5b1 mRNA表达水平对胃癌细胞黏附、迁移、髓外浸润过程的影响.方法:采用Western blot检测法及RT-PCR分别测量HTB-103、CRL-5822、CRL-5971及CRL-5973等不同对数生长期的白细胞株整合素a5b1蛋白表达水平及整合素a5b1 mRNA水平.将不同胃癌细胞株随机分为实验组及对照组,实验组加入整合素a5b1抗体,对照组加入同型IgG,观察两组胃癌细胞与ECV304细胞系的黏附率、细胞迁移率及白细胞穿过人工基质膜的浸润能力.结果:CRL-5822、CRL-5971及CRL-5973细胞整合素a5b1 mRNA相对表达量分别为(0.0821±0.0128)、(0.185±0.0082)、(0.798±0.042)明显高于HTB-103细胞(0.0002±0.0000)(P<0.05).观察组CRL-5822、CRL-5971及CRL-5973细胞株黏附率(52.16%±2.52%、44.22%±2.59%、33.58%±4.06%)、迁移率(45.96%±1.21%、38.86%±1.99%、24.65%±3.28%)及浸润率(29.85%±4.63%、21.31%±3.24%、13.67%±3.48%)、显著低于对照组黏附率(83.89%±7.21%、71.17%±7.38%、60.89%±10.59%)、迁移率(75.41%±9.51%65.78%±14.62%,49.91%±13.47%)及浸润率(42.63%±7.69%,29.92%±5.47%,21.59%±6.72%)(P<0.05),而两组HTB-103细胞黏附率、迁移率及浸润率无统计学差异(P>0.05).结论:黏附因子整合素a5b1可能参与胃癌细胞的形成、聚集、生长及浸润的过程,其表达水平与胃癌病程进展具有密切的关系.