庆大霉素耳毒性的遗传性实验研究

目的观察庆大霉素致聋豚鼠的遗传作用。方法将30只(雄10只,雌20只)健康杂色豚鼠随机分成实验组和对照组(各雄5只,雌10只)。实验组豚鼠肌内注射硫酸庆大霉素100 mg.kg-1.d-1,直至耳聋后,待其繁殖;对照组豚鼠肌内注射生理盐水2 ml.kg-1.d-1,用药时间同实验组,待其繁殖。两组所生子代豚鼠分组同母代相同,分别为实验组和对照组。以耳廓反射(PR)及脑干听觉诱发电位(BAEP)监测作为指标,观察子代豚鼠是否发生耳聋。结果耳聋豚鼠的子代PR阈值及BAEP反应阈值、各波潜伏期及波峰间期与对照组子代比较均未见显著差异(P>0.05)。结论庆大霉素致聋豚鼠对子代未发现遗传性致聋作用。     

免疫性内耳病模型的建立及地塞米松圆窗和全身给药的疗效

目的建立免疫性内耳病模型,并初步比较地塞米松圆窗局部给药和全身给药治疗的效果。方法先用钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)加完全弗氏佐剂在豚鼠背部多点皮内注射,2周后用KLH加不完全弗氏佐剂加强,同日通过手术将浸满KLH的小块明胶海绵置于圆窗上制作免疫诱导的内耳病模型。在此基础上使用微渗透泵(同时设PBS对照组)圆窗给药,以腹腔注射全身给药治疗免疫性内耳病,给药前后听性脑干反应(ABR)测试比较治疗效果。结果①动物模型ABR听阈:6只对照组豚鼠无明显听力损失,39只实验组豚鼠听力损失在10 dB以上的有22只;②治疗效果比较:17只听力损失≥15 dB的豚鼠模型随机分为三组:圆窗局部给药6只动物,治疗全部有效,ABR听阈平均下降13.3 dB;全身给药6只动物,4只有效,ABR听阈平均下降13.7 dB;PBS组全部无效。结论KLH经圆窗诱导的免疫性内耳病模型的成功率较高;地塞米松跨圆窗给药的有效性不亚于全身给药。     

免疫性内耳病模型的建立及地塞米松圆窗和全身给药的疗效

目的 建立免疫性内耳病模型,并初步比较地塞米松圆窗局部给药和全身给药治疗的效果.方法 先用钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)加完全弗氏佐剂在豚鼠背部多点皮内注射,2周后用KLH加不完全弗氏佐剂加强,同日通过手术将浸满KLH的小块明胶海绵置于圆窗上制作免疫诱导的内耳病模型.在此基础上使用微渗透泵(同时设PBS对照组)圆窗给药, 以腹腔注射全身给药治疗免疫性内耳病,给药前后听性脑干反应(ABR)测试比较治疗效果.结果 ①动物模型ABR听阈:6只对照组豚鼠无明显听力损失,39只实验组豚鼠听力损失在10 dB以上的有22只;②治疗效果比较:17只听力损失≥15 dB的豚鼠模型随机分为三组:圆窗局部给药6只动物,治疗全部有效,ABR听阈平均下降13.3 dB;全身给药6只动物,4只有效, ABR听阈平均下降13.7 dB;PBS组全部无效.结论 KLH经圆窗诱导的免疫性内耳病模型的成功率较高;地塞米松跨圆窗给药的有效性不亚于全身给药.     

冲击波作用下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞PARP的表达

目的观察气体冲击致豚鼠耳蜗损伤后耳蜗螺旋神经节细胞PARP的表达。方法20只豚鼠随机分为2组,实验组用YBD-2000型冲击波发生器对豚鼠耳蜗致伤,实验前后测试听力,12h后处死动物制作耳蜗标本,免疫组化法测定耳蜗螺旋神经节细胞PARP的表达。结果ABR:实验组听性脑干反应阈值(ABR阈值为50.94±5.98)较正常对照组(ABR阈值为5.60±1.78)明显上升(P<0.01),听力下降明显。免疫组化显示:实验组耳蜗螺旋神经节细胞PARP表达阳性,对照组无阳性表达,愈近底回愈多,愈近顶回则愈少。结论PARP在气体冲击致豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤后呈阳性表达,提示耳蜗螺旋神经节细胞凋亡在冲击波致聋的发病机制中起重要作用。     

外源性甲状腺素对拟老化豚鼠听力的保护作用

目的:观察拟老化豚鼠耳蜗淋巴液Na+、K+及脑干组织Na+/K+/ATP酶在豚鼠内耳老化性听力损失发生过程中的作用,探讨外源性甲状腺素对拟老化豚鼠听力损失的逆转作用.方法:选择4月龄红目豚鼠24只,双耳廓反应灵敏,随机数字表法分为3组,对照组、模型组及甲状腺素治疗组,模型组及治疗组应用D-半乳糖300mg/kg建立拟老化模型,治疗组给予外源性甲状腺素干预,各组豚鼠实验后行ABR测试,检测内耳淋巴液Na+、K+含量及脑干组织Na+/K+/ATP酶活性.结果:模型组豚鼠较治疗组及对照组豚鼠ABRⅢ波阈值明显降低,内耳淋巴液Na+含量降低、K+含量增高,脑干组织Na+/K+/ATP酶活性降低(P<0.05).结论:拟老化大鼠听力减退是脑组织及内耳功能减退共同作用的结果,与脑干组织及内耳Na+/K+/ATP酶活性改变有关,外源性甲状腺素能够逆转拟老化大鼠的听力损失.     

丁胺卡那霉素对豚鼠耳蜗毛细胞凋亡及听力阈值的影响

目的探讨丁胺卡那霉素作用于耳蜗系统时毛细胞凋亡现象及其在听力损伤中的作用。方法15只豚鼠随机分为3组,各组肌内注射丁胺卡那霉素400mg·kg-1·d-1,分别于用药1d,3d,6d后处死。处死前检测其听脑于反应(auditorybrainstemresponses,ABR)的变化,并利用光镜和TUNEL标记技术检测耳蜗毛细胞发生凋亡的情况。结果①豚鼠肌内注射丁胺卡那霉素1d后耳蜗毛细胞即出现凋亡现象,连续用药3～6d,毛细胞凋亡呈强阳性表达;②耳蜗毛细胞凋亡出现的早期豚鼠听力阈值无明显改变,连续用药6d后听力阈值则明显提高。结论①丁胺卡那霉素作用于耳蜗毛细胞可引起毛细胞凋亡,细胞凋亡是豚鼠耳蜗毛细胞损伤的一条途径;②丁胺卡那霉素耳毒性作用机制可能与其引起耳蜗毛细胞凋亡有关。     

过敏性猝死豚鼠血清IgE含量在死后不同时间段的变化规律

目的检测过敏性猝死豚鼠血清IgE含量在不同时间段的变化规律,为过敏性猝死的法医学鉴定寻找客观指标。方法64只豚鼠随机分为0,12,24,48 h 4个时间段,每个时间段又进一步分为实验组和对照组。采用ELISA夹心法检测不同时间段血清IgE含量。结果实验组与对照组相比较P<0.001,实验组豚鼠血清IgE含量显著升高;实验组各时间段相比较P>0.05,4个时间段豚鼠血清IgE含量无明显变化。结论过敏性猝死豚鼠与对照组相比较血清IgE含量显著升高,48 h内实验组豚鼠血清IgE含量无明显变化,血清IgE含量升高可作为鉴定过敏性猝死的指标。     

补肾剂对耳聋豚鼠耳蜗细胞凋亡的影响

[目的]观察金匮肾气丸对庆大霉素(GM)造成药物性耳聋豚鼠耳蜗细胞凋亡干预效果并探讨其作用机理。[方法]将30只豚鼠随机分为三组,正常组、模型组、治疗组,每组动物各10只。治疗组、模型组豚鼠按100mg/(kg·d)每天注射庆大霉素,治疗组在每天注射庆大霉素后灌服金匮肾气丸药剂,两组连续10d;正常组,注射生理盐水10d。10d后三组豚鼠断头处死,取耳蜗标本。观察指标:TUNEL染色的阳性率和电镜组织学观察。[结果]治疗组与模型组比较,治疗组耳蜗神经节、Corti器、侧壁等部位凋亡细胞明显减少(P<0.05和P<0.001)。[结论]金匮肾气丸对庆大霉素所致豚鼠听力损失有一定治疗作用,但未能使豚鼠听力恢复正常。     

豚鼠耳蜗损伤引起的自发性耳声发射实验观察

目的 观察由耳蜗轻度损伤引起的豚鼠自发性耳声发射（ＳＯＡＥ）的听力学特性。方法 在耳蜗手术中引起高频听力损失较轻的２３只豚鼠中发现１８只有高频端ＳＯＡＥ，对其中ＳＯＡＥ持续时间较长的７只豚鼠在损伤后不同时间观察ＳＯＡＥ的振幅和持续时间。用白噪声刺激对侧耳、观察ＳＯＡＥ的抑制现象。对其中１只豚鼠的２个ＳＯＡＥ谱峰所产生的畸变产物耳声发射（ＤＰＯＡＥ）进行分析。结果 术后观察到ＳＯＡＥ的７只豚鼠１６ｋ     

顺铂对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的影响

目的 观察顺铂对豚鼠听力的影响及豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SCG)毒性作用的关系.方法 将20只耳廓反应灵敏的豚鼠随机分成两组,实验组连续5 d腹腔内注射顺铂3 mg/(kg·d),对照组连续5 d腹腔内注射生理盐水3 mg/(kg·d),给药后11 d检查耳蜗电图,然后处死动物,制作耳蜗标本,其中实验组中4只4耳做透射电镜观察、6只12耳做吖啶橙荧光染色,观察耳蜗螺旋神经节细胞的变化.结果 实验组动物耳蜗神经复合动作电位(CAP)阈值明显提高,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);实验组潜伏期延长,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).形态学检查见实验组髓鞘层变薄,结构稀疏,部分可见融合,细胞膜破裂,胞浆内线粒体结构模糊,粗面内织网脱颗粒,核内结构减少.结论 顺铂对豚鼠耳蜗螺旋神经节有明显的损害作用,是顺铂致耳毒性,引起听力下降的机制之一.     

东菱精纯克栓酶对爆震性听损伤影响的实验研究

目的：观察东菱精纯克栓酶(DF-521)对豚鼠爆震性听损伤的影响。方法：随机将70只豚鼠分为2组：爆震 生理盐水组(A组)35只；爆震 DF-521组(B组)35只。爆震前后于多个时间点测定听觉脑干反应(ABR)阈值与血液流变学各指标，并观察耳蜗微循环。结果：A组豚鼠的血液流变学改变，耳蜗微循环改变及听功能损伤均较B组豚鼠重。结论：DF-521能减轻爆震所致的听器损伤，对爆震性听损伤有一定的保护作用，为防治爆震性聋提供了新方法。     

催产素改善卡那霉素所致听力损伤的实验研究

目的：观察催产素（ＯＸＴ）对卡那霉素所致听力损伤的治疗作用。方法：建立中度及重度耳中毒动物模型。采用听觉电生理指标和耳蜗基底膜铺片技术。结果：中度听力损伤组用ＯＸＴ治疗后，听觉脑干诱发电位（ＡＢＲ）Ⅳ波反应阈较治疗前明显下降，耳蜗二、三回外毛细胞损伤程度较对照组明显减轻，蜗内直流电位负相成分（Ｎ－ＥＰ）绝对值较大；在重度听力损伤组中，ＯＸＴ治疗组和对照组上述指标均无显著差异。结论：用本实验剂量的ＯＸＴ对中度听力损伤有明显的治疗作用，对重度听力损伤的治疗作用不明显。     

镁对豚鼠噪声性听损伤的保护作用

目的：探讨镁对豚鼠噪声性听损伤的保护作用。方法：28只豚鼠随机分为稳态噪声组和脉冲噪声组各14只（28耳）。两组再随机各分为镁实验组和对照组,每小组各7只（14耳）。镁实验组的豚鼠自暴露噪声前20天起予25％硫酸镁按每天500mg／kg分2次肌注,直至暴露噪声结束后6天。所有豚鼠每天定时暴露于噪声4小时,连续暴露6天,观察噪声暴露前后所有豚鼠听觉脑干诱发电位和畸变产物耳声发射的变化。结果：（1）噪声暴露后在稳态噪声组与脉冲噪声组中,镁实验组与对照组耳均出现脑干诱发电位Ⅲ波潜伏期的延长、反应阈的上升及畸变产物耳声发射幅值的降低,与暴露前比差异有统计学意义（P〈0．05）;镁实验组与对照组比较,差异也均有统计学意义（P〈0．05）。在相同镁条件下,脉冲噪声对脑干诱发电位及畸变产物耳声发射的影响较稳态噪声大,差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）脱离噪声暴露6天后,稳态噪声组与脉冲噪声组中,镁实验组耳的脑干诱发电位Ⅲ波潜伏期和反应阈及畸变产物耳声发射幅值均恢复正常。而对照组没有恢复正常,较暴露前差异仍有统计学意义（P〈0．05）。在相同镁条件下,稳态噪声组和脉冲噪声组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：补镁可减轻豚鼠对噪声的敏感性,使其在接触噪声后听觉受损较轻且恢复较快。增加镁的摄入对噪声性听损伤有一定的保护作用。     

顺铂对豚鼠耳蜗损害作用实验研究

目的观察顺铂对耳廓反射正常的健康豚鼠耳蜗功能的损害作用，以探讨顺铂对豚鼠耳蜗毒性作用及其损伤机制，为防治顺铂耳毒性作用提供理论依据。方法将60只耳廓反射灵敏的健康豚鼠随机分成两组，顺铂组腹腔注射顺铂4mg／（k·d），1次／d，连续注射5d。正常对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水。实验前和实验5d后分别行耳廓反射和听性脑干反应测听。测定麻醉状态下豚鼠听觉脑干诱发电位，比较实验前后两组听觉诱发电位阈值及各波潜伏期、波幅变化。结果顺铂组豚鼠听性脑干反应测试听闽明显提高，各波潜伏期延长，波幅降低，甚至出现波形变异不易辨认，两组比较差异有显著性。结论顺铂可导致豚鼠耳蜗功能损害，表现为豚鼠耳蜗听性脑干反应阂值显著提高，各波潜伏期延长。波幅降低。     

老龄豚鼠耳蜗微循环与SOD变化

[目的]研究老龄豚鼠血管纹微循环与脑SOD含量变化在豚鼠老年聋发生过程中的作用。[方法]根据21只26月龄雄性豚鼠,8只3月龄豚鼠的听性脑干诱发电位(ABR)测量结果,将动物分成老龄组、老年聋组、正常组。比较各组豚鼠血管纹微血管面积与脑组织超氧化物歧化酶(SOD)含量的关系。[结果]老龄组与老年聋组豚鼠的血管纹微血管面积均比正常3月龄豚鼠减少,SOD含量亦明显减少,相关性检验表明老年聋豚鼠血管纹微血管面积与脑组织超氧化物歧化酶(SOD)含量有显著性相关。[结论]随增龄的微循环障碍不是导致老年聋发生的唯一决定因素。缺血再灌注可能产生了更多的自由基,对组织的损害更严重。自由基的清除障碍可能对听觉神经传导具有一定的影响。     

自身免疫性感音神经性聋豚鼠的子代内耳生理功能研究

目的 :观察自身免疫性感音神经性聋 (ASHL)母豚鼠所产子代内耳生理功能的变化 ,探讨针对内耳的自身免疫因素对子代内耳生理功能的影响及其改变特点。方法 :同种内耳抗原 (CIEAg)持续免疫孕豚鼠 ,采用耳蜗电图 (记录cAP、CM )和眼震电图仪 (记录自发性眼震和冷热空气试验 )测试母鼠和子鼠的听觉和前庭功能 ,并检测血清特异性体液免疫反应。结果 :ASHL模型母豚鼠所产子鼠血清中发现有特异性抗体水平升高 ,部分 (3 /9)出现听觉损伤。非ASHL母鼠和对照组母鼠所产子代未见明显异常。结论 :ASHL雌鼠所产子代可出现感音神经性聋 ,其内耳损伤和功能障碍极可能与针对内耳组织的自身免疫反应 (尤其是体液免疫 )有关 ,从而提示内耳自身免疫因素可能为部分先天性非遗传性感音神经性聋的病因之一。     

镫骨切除术对豚鼠听力的影响

目的 研究镫骨切除术对豚鼠听功能及形态学的影响,探讨镫骨切除术对听功能改变的影响因素.方法 24只(48耳)豚鼠随机分为两组,每组12只.选定左耳为手术耳,分别进行暴露砧镫关节手术(手术对照、1组),镫骨切除、人工镫骨植入术(镫骨切除术组、2组);行听性脑干反应(ABR)测试并分别于术后1 h、术后1 d各组随机抽出4只豚鼠进行耳蜗中轴切片及扫描电镜检查.结果 手术对照组除波?潜伏期较术前延长外,其余各波潜伏期及波间期、反应阈均无明显改变;镫骨切除术后1 h反应阈明显提高(23.75±3.77 dBSPL);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ波和Ⅰ～Ⅲ波间期较术前延长.镫骨切除术后Ⅰ、Ⅲ波潜伏期较手术对照组延长,而各波间期无明显差异;各组术后1 d与术后1 h各听力指标无显著性差异.两组耳蜗结构完整,各转螺旋神经节细胞数无显著性差异.镫骨切除术组仅第3排外毛细胞静纤毛部分略有紊乱(术后1 d恢复正常),手术对照组毛细胞形态正常.结论 镫骨切除术可引起豚鼠听力轻度损失,对耳蜗功能的影响小.     

顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞损害的形态及机理研究

目的：观察顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞的损害，并阐述一氧化氮（nitric oxide,NO）在其耳毒性机制中的作用。方法：将20只豚鼠随机分成两组，试验组腹腔注射顺铂0．5ml，对照组给予同等量的生理盐水，5天后做听性脑干反应（auditory brainstem respones,ABR)测听，此后处死动物，取出耳蜗，应用免疫组化技术、光镜及扫描电镜观察耳蜗毛细胞的损害。结果：试验组动物测试ABR听阈明显提高，光镜下见耳蜗毛细胞明显变性，诱导型一氧化氮合酶阳性染色，电镜下见毛细胞的纤毛散乱、倒伏甚至散失。结论：顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞有明显的损害作用，而O在其耳毒性机制中发挥着重要的作用。     

IL-10基因内耳局部治疗自身免疫性感音神经性聋的实验研究

目的:探索局部应用IL-10基因与慢病毒重组载体对实验性自身免疫性感音神经性聋(ASNHL)的治疗作用。方法:采用纯化同种内耳抗原免疫豚鼠,造成ASNHL动物模型,再将重组载体分别经鼓阶、内淋巴囊和圆窗龛局部注射或渗透,观察听觉功能和内耳病理形态学变化,同时行免疫组织化学试验了解慢病毒转染和基因产物在内耳的分布。结果:治疗前后ABRⅢ波阈值的均值对比分析结果显示,各实验组局部基因治疗后均降低;治疗后各实验组组间比较差异无统计学意义。慢病毒主要转染部位是血管纹、Corti器、蜗轴小血管周围及其内淋巴囊等处。基因产物表达部位与转染部位基本相同。结论:重组载体经不同途径均可转导入内耳,并在内耳表达基因产物,对ASNHL发挥有效的治疗作用。     

鼓阶开窗微孔技术注入胰岛素样生长因子-1对庆大霉素致聋豚鼠的治疗作用

目的 探讨通过鼓阶开窗,微孔技术注胰岛素样生长因子-1(IGF-1)入内耳鼓阶,研究IGF-1对感音神经性聋动物模型(庆大霉索致耳聋豚鼠)的治疗作用.方法 豚鼠20只,施用庆大霉素致耳聋后均分为IGF-1组和对照组,行鼓阶开窗术,微孔技术注入试剂(IGF-1组注入鼠重组IGF-1,对照组注入人工生理外淋巴液)10μl,分别在术前和术后7、14 d行ABR测试;测试完后每组3只断头取听泡,在扫描电镜下观察耳蜗毛细胞改变.结果 IGF-1组ABR反应阈(RT)术后7、14 d均比术前有显著降低;IGF-1组比对照组RT在术后14 d有显著降低.扫描电镜发现对照组较IGF-1组毛细胞受损严重;同时,IGF-1组受损毛细胞表面有指状微绒毛生长.结论 微孔技术注入IGF-1可以改善豚鼠受损听力,减轻庆大霉素耳毒性的继续损伤,其机制可能为减轻耳蜗毛细胞的损伤并修复部分毛细胞,同时保护传人神经.