胚胎脊髓移植在成鼠损伤脊髓神经通路重建中的作用——电镜CB—HRP示踪

目的：探讨胎鼠脊髓在成鼠损伤脊髓神经通路修复中的作用。方法：将Ｅ１４大鼠胚胎脊髓植入成鼠损伤脊髓后３０、５０、７０天时，通过坐骨神经和红核引入ＣＢ－ＨＲＰ，取移植部位脊髓做冰冻切片，经ＴＭＢ组化显色后，再分步制成电镜标本，然后在电镜下观察移植物和宿主脊髓的纤维联系。结果：术后３０天时，来自背根的轴突再生进入移植物，附近运动神经元和中间神经元的突起此时向移植物内发送新支。术后５０天时，来自背根有的轴     

缺损运动神经元的大鼠脊髓内胚胎脊髓移植物的存活与生长

ＳＤ大鼠于出生２４ｈ内行左侧坐骨神经钳压术，造成左侧腰段脊髓前角运动神经元缺损。５￣１２周后，作为脊髓移植的受体鼠。供体为胚龄１３￣１４ｄ的ＳＤ大鼠胚胎，取其脊髓腹侧组织块作为移植物，植入受体鼠左侧腰段脊髓的背外侧部。将受体鼠右侧带神经的Ｍｕ长伸肌移放到脊椎旁，神经的断端插入胚胎移植物处。术后动物存活６￣８周，行组织学（包括电镜）、ＡＣｈＥ组织化学、ＣｈＡＴ免疫组织化学和ＨＲＰ逆行追踪等观察。结果     

用BrdU标记技术观察大鼠脊髓上胸段灰质细胞的分化发育

目的 观察脊髓灰质细胞的分化发育,寻找脊髓移植时胎鼠脊髓取材的最佳时间。方法 用５－溴－２脱氧尿嘧啶（ＢｒｄＵ）标记ＤＮＡ,ＡＢＣ免疫细胞化学方法观察大鼠上胸段脊髓灰质细胞的增殖分化情况。结果 孕鼠于Ｅ１０ｄｅ腹腔注射ＢｒｄＵ,胎刀脊髓上胸段ＢｒｄＵ免疫反应神经元主要集中在脊髓后角,脊髓侧角的ＢｒｄＵ免疫反应神经元较少,前角仅有少量的ＢｒｄＵ免疫反应神经元;孕鼠于Ｅ１１ｄ腹腔注射ＢｒｄＵ,胎鼠脊髓     

NT-3mRNA分子杂交在胚胎脊髓修复成鼠受损脊髓过程中的变化

为了从神经营养因子角度探讨移植修复机理，将大鼠１４ｄ胚胎脊髓（ＥＳＣ）植入急性损伤成鼠脊髓后１、３、５、７、１０、１５和３０ｄ，用原位杂交和斑点杂交技术对ＥＳＣ和宿主脊髓（ＨＳＣ）内ＮＴ－３ｍＲＮＡ的变化进行定性和定量观察。定性观察显示，在正常脊髓内，ＮＴ－３ｍＲＮＡ以前角运动神经元和少量胶质细胞分布为主；脊髓损伤以后，杂交产物扩大到中小型神经元，同时更多的胶质细胞参与了反应；ＥＳＣ植入后，除移植物本身继续表达外，宿主脊髓阳性反应神经元和胶质细胞数量进一步增加。定量结果表明，损伤组原位杂交和斑点杂交的反应强度明显高于正常组；而移植组的分子杂交反应又在很多时相点上显著高于损伤组。除此而外，分子杂交反应在损伤组和移植组内持续的时间也不相同，前者的最强反应期为术后７ｄ，后者为术后１０～１５ｄ．我们认为，移植的ＥＳＣ除为自身和ＨＳＣ提供神经营养外，也诱发了ＨＳＣ在发生过程中曾经拥有的合成机制，以增强ＮＦ表达的方式为自身再生提供营养，同时也为移植物的发育分化提供合适的营养环境。     

人胎脊髓内源性物质对脊髓中GABA神经元的营养作用

目的:从人胎脊髓提取液中寻找对脊髓GABA神经元有神经营养作用的成分。方法:用四月龄人胎制备脊髓提取液,加人体外培养的胎鼠脊髓细胞中,观察提取液对神经元活性、突起生长和分化的影响。结果:人胎脊髓中有提高GABA神经元活性的营养成分,并且小于10kD组分还可以诱导GABA神经元的分化,但是提取液对GABA神经元的突起生长没有影响。结论:实验结果揭示人胎脊髓中可能存在不止一种神经营养活性成分,对GABA神经元的活性和分化起营养作用。     

大鼠胚胎小脑提取液神经营养活性成分的分析

本实验观察了不同胎龄大鼠的小脑提取液（ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｓ, ＣＥ）对体外培养小脑及脊髓神经细胞的影响。并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ ＰＡＧＥ）法鉴定了各胎龄的ＣＥ 的蛋白成分差异。制备不同蛋白浓度的１４、１６、１８、２０ ｄ 胎鼠（Ｅ１４,Ｅ１６,Ｅ１８,Ｅ２０）及新生１ ｄ 鼠（Ｐ１）的ＣＥ,加入原代培养的Ｅ１８ 胎鼠小脑及脊髓神经细胞悬液中,２４ ｈ 后以微量快速自动比色法检测细胞活性,发现实验各胎龄鼠的ＣＥ均能促进培养小脑及脊髓神经元的存活,并有蛋白浓度依赖关系,各胎龄都有各自不同的最适浓度,Ｅ１４、Ｅ１６ 和Ｅ１８ 的ＣＥ 显示了更强的神经营养活性,与对照组及其它实验组相比有极显著性差异（Ｐ＜ ０．００１）。以蛋白浓度为０．４ ｇ／Ｌ的Ｅ１８ 的ＣＥ培养新生３ ｄ 鼠（Ｐ３）脊髓细胞的结果表明,此ＣＥ可促进培养脊髓神经元的成熟和分化,抑制胶质细胞的增殖。电泳结果表明,Ｅ１６ 与Ｅ１８ 的ＣＥ中含有Ｐ１ 的ＣＥ中所没有的蛋白带,分子量分别约为２５．８ ｋＤ、４５．１ ｋＤ、８９．１ｋＤ 和１７９．５ ｋＤ,为寻找新的神经营养因子提供了线索。     

胰岛素对大鼠移植的胚胎脊髓组织存活与生长的影响

用ＨＲＰ逆行追踪技术和体视学方法，探讨了胰岛素对移植在缺损运动神经元的脊髓内的胚胎神经元存活与生长有无促进作用。将１３￣１４ｄ胚龄大鼠脊髓腹侧组织块，移植到受体大鼠左侧腰段缺损运动神经元的脊髓背外侧部。同时将受体鼠右侧带神经的长伸肌移在左侧腰段脊椎旁，使其神经断端插入脊髓移植物的同一位置内。胰岛素组的胚胎移植物及覆盖其表面的硝酸纤维素膜，均经胰岛素生理盐溶注 过，对照组仅用单纯生理盐溶液浸泡。术后     

自体和胎鼠骨骼肌桥接脊髓缺损的实验研究

成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为Ａ、Ｂ组在Ｔ８～Ｔ１０做脊髓半横断切损２．０ｍｍ；Ｃ、Ｄ组在Ｔ８～Ｔ１０做脊髓全横断切损２．０ｍｍ。Ａ、Ｃ组接受成体竖脊肌的移植体，Ｂ、Ｄ组接受胎鼠（Ｅ１８）股部肌肉的移植体。Ｅ组，为无移植体的脊髓完全横断对照组。术后２个月的ＣＴ－ＨＲＰ示踪及组织学（Ｇｌｅｅｓ）银染色方法显示，在各实验组动物的骨骼肌移植体与受体脊髓间呈不同程度的组织愈合，特别是在胎鼠骨骼肌移植体内，都     

脊髓移植的新进展

近年来,随着新技术新方法的使用,脊髓损伤的病理变化及治疗方面都取得了可喜进展,尤其是把适当胚龄的胚胎脊髓植入损伤部位,对神经的形态与功能的修复取得了良好的效果,展示了广阔前景。 一、移植后胚胎脊髓的发育与分化 胚胎脊髓是原始的,具有分化潜能的组织,如大鼠妊14天的胚髓主要是由室管膜层的神经上皮细胞和大致等量的套层神经母细胞组成,胶质细胞和轴突树突匀处于原始的未分化状态。植入30天,神经元还经历了核糖体减少细胞器增多排列规范,核仁出现等发育分化过程,胶质细胞,轴突树突等渐具典型特征,同     

神经营养因子(NGF、NT-3、BDNF及CNTF)和受体trkA、trkB、trkC在正常大鼠脊髓和胳鼠脊髓移植体的免疫组织化学研究

本研究采用免疫组织化学方法观察了NGF家族（NGF、NT－3、BDNF）和非NGF家族的CNTF以及NGF家族因子受体trkA、trkB、trkC在正常大鼠脊髓腰段的分布和胎鼠脊髓移植体在移植后4周的表达。在正常大鼠脊髓腰段,各神经营养因子及受体反应物主要存在于脊髓灰质,特别是前角的运动神经元。但在脊髓后角的分布稍有不同,BDNF阳性细胞的胞浆染色较深,胞核不染色;而NT－3的胞核染色较胞浆为深,核仁不染色。在胎鼠脊髓移植体,NGF、BDNF、CNTF和NT－3及受体trkA、trkB、trkC均有不同程度的染色。本实验结果揭示了在正常大鼠脊髓神经元内各神经营养因子及受体的表达,提示神经营养因子除具有靶源性来源以外,还有神经元自分泌的产物。而在胎鼠移植体内和其周围组织神经营养因子及其受体的表达,可能是在移植体内的移植细胞自分泌和成鼠脊髓损伤的刺激所引起的,这在移植体的存活和发育中有重要作用。     

神经生长因子受体TrkA在新生鼠、幼鼠及成鼠脊髓表达差异的研究

为了探讨神经生长因子 ( NGF)受体 Trk A在新生鼠、幼鼠及成鼠脊髓的分布状况、进而分析 NGF的作用机制 ,用免疫组化技术检测了新生鼠、幼鼠及成鼠脊髓 NGF受体 Trk A的表达。结果显示 ,新生鼠脊髓前角运动神经元只有胞核 Trk A表达明显 ,胞浆及胞膜无表达 ,中间带、背角均无表达。幼鼠前角运动神经元胞浆 Trk A表达明显 ,胞核少量表达 ,胞膜无表达 ;部分中间带、背角神经元胞浆有表达。成鼠前角运动神经元胞浆及部分胞膜都有 Trk A表达 ,胞核无表达 ,中间带、背角神经元胞浆以及胶质细胞也明显表达。推论 ,新生鼠时胞核中 Trk A可与配体结合引起神经元的生物效应 ;成鼠 Trk A则主要作为一种膜受体与配体结合而发挥生物效应     

大鼠脊髓损伤后星形胶质细胞特异性表达Gc的研究

用免疫组织化学方法观察了脊髓的星形胶质细胞在损伤后出现的抗原性改变并对其改变的意义进行了探讨。实验选用Wistar大鼠 2 0只。实验组 10只 ,对脊髓 T1 0 节段进行完全横断 ;对照组 10只 ,只进行 T1 0 椎板切除术 ,不损伤脊髓。在术后第 1、3、5、7、14 d分别对 2 0只大鼠灌流固定 ,并取出 3 cm长手术段脊髓。用 anti-Galactocerebrosides( anti-Gc)和 anti-glial fibrillaryacidic protein( anti-GFAP)抗体对脊髓进行标记。结果表明 :脊髓损伤后第 7d,增生肥大的星形胶质细胞可以同时被 anti-GF AP和 anti-Gc标记 (荧光双标 )。此抗原表型改变至术后 14 d依然显现。被双标的星形胶质细胞在形态上与成熟的正常胶质细胞基本相同 ,而少突胶质细胞只为 anti-Gc单独标记。对照组脊髓星形胶质细胞和少突胶质细胞只为 anti-GFAP、anti-Gc分别标记。本实验结果提示 :大鼠脊髓受损后 ,星形胶质细胞出现 GFAP和 Gc二种抗原表型。此结果首次表明成熟哺乳动物脊髓损伤后星形胶质细胞也可出现类似少突胶质细胞特异性抗原抗体改变。这可能是星形胶质细胞对脊髓创伤的一种特异性反应。这种变化可为探索脊髓损伤区域微环境的变化对脊髓损伤修复的影响提供新的线索     

大鼠脊髓前角内NMDA受体的定位与生后发育

目的：探讨NMDA受体亚基（NMAR1和NMDAR2A／B）在大鼠脊髓前角的细胞学定位和生后发育特征。方法：免疫组织化学染色体技术。结果：NMDAR1与NMDAR2A／B免疫反应产物丰富地分布在脊髓前角RexedⅨ和Ⅷ 层内,主要定位于神经元胞体、树突和轴突样纤维终末上,生后早期的NMDAR1和NMDAR2A／B表达具有明显的动态变化,生后7d（P7）的表达微弱,随后逐渐上调,至P21达高峰水平,然后维修此水平至成年。结论NMDAR1和NMDAR2A是构成脊髓前角神经元功能性NMDA受体的重要亚基,NMDA受体可能参与生后早期运动神经元成熟或可逆性调控过程。     

大鼠脊髓全横断后脊髓内BDNF表达的变化

为了探讨大鼠脊髓全横断后不同时相(3、7、14、21d)脊髓内BDNF表达的变化,我们采用免疫组织化学ABC法和阳性神经元计数,来检测脊髓全横断后不同时相BDNF的表达。结果发现:(1)BDNF免疫阳性产物主要位于腹角运动神经元,胞浆着色;(2)脊髓全横断后脊髓腹角BDNF阳性细胞数3d开始增多,7d达高峰(P<0.05),14d恢复正常(P>0.05)。提示BDNF表达的变化可能与脊髓可塑性有关。     

成年大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障通透性变化

为了观察脊髓挤压伤后血-脊髓屏障(BSCB)的通透性变化,本研究选用体重180~200g成年雄性SD大鼠39只,随机分为对照组(n=3)和脊髓损伤组(n=6)。后者又分为伤后0、8、24、72h以及1周、2周等6组,每组6只,再分为A组、B组,每组各3只。脊髓损伤组A组的组织切片行H.E.染色,显微镜下观察脊髓损伤后的形态学变化。对照组和B组动物股静脉注射30g/L伊文思蓝,30min后,以温生理盐水及4%多聚甲醛灌注动物,取出脊髓,行冰冻切片,荧光显微镜下观察。结果观察到,脊髓挤压伤术后72h内,损伤区周围均可见伊文思蓝染色,至1周后损伤区周围未见伊文思蓝染色。本研究结果提示,脊髓损伤72h内可能为有效给药时间窗,1周后给药,药物对脊髓损伤的治疗作用将难以达到治疗目的。     

大鼠脊髓P物质受体定位分布的免疫细胞化学研究

用免疫细胞化学技术对大鼠脊髓和脊神经节内Ｐ物质受体的定位分布进行了系统的研究。结果证明，Ｐ物质受体阳性胞体和树突主要密集地分布于脊髓全长的Ⅰ层，此外，还发现Ⅱ层的外侧部出现少量阳性胞体和树突，来自Ⅲ层的阳性树突穿过Ⅱ层后进入Ⅰ层；Ⅲ～Ⅳ和Ⅹ层也可见中等密度的阳性胞体和树突；Ⅵ层和Ⅶ层仅见少量阳性胞体和树突，但胸髓中间带外侧核、骶髓副交感运动核、骶髓后连合核内可见大量浓染的阳性胞体和树突；Ⅷ、Ⅸ层、Ｏｎｕｆ氏核、外侧颈核和外侧脊索核也有阳性胞体和树突．灰质内的阳性胞体的树突还伸向前索和外侧索，有时可达脊髓的边缘．此外，脊神经节内也可见少量散在且均匀分布的小型阳性胞体．     

胎儿脊髓脊柱发育的观察

用１９３例正常胎儿尸体观察测量了脊髓的全长、重量，体积，颈膨大，腰骶膨大及终丝等方面出生前的逐月发育值及的变化。在４个月时脊髓已脱离了骶管；出生时脊髓下端位于腰２￣腰３椎体间高度；硬脊膜囊下界位于骶１￣骶２椎体间高度；外终丝止点基本在尾１￣尾２椎体间；脊髓长与身长之比逐月下降，至出生前约为１／３；脊髓重与体重之比始终保持在０．１％左右，脊髓发的性别差异不明显。上述结果可为教学及临床提供基本的参考数