吉西他滨化疗对免疫健全小鼠Panc02胰腺癌的作用以及对免疫环境的影响

目的 建立免疫健全小鼠Panc02胰腺癌皮下种植瘤模型.利用该模型观察吉西他滨化疗对免疫健全小鼠胰腺癌的作用以及对全身及肿瘤局部免疫环境的影响.方法 利用C57BL/6J小鼠同源Panc02胰腺癌细胞建立皮下种植瘤模型.待肿瘤生长至75 ～ 100 mm3时,将荷瘤小鼠分为化疗组和对照组.化疗组利用吉西他滨50 mg/kg腹腔内注射化疗,每周2次,共4周.绘制肿瘤生长曲线,最终称量荷瘤小鼠体质量、肿瘤重量及脾脏重量.流式细胞计数检测外周血与肿瘤组织中10个免疫细胞群的变化.实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测荷瘤小鼠脾脏及肿瘤组织中7种细胞因子水平.免疫组织化学法及Western blot检测CD34及淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)蛋白表达,并计数肿瘤组织中微血管密度(MVD)及淋巴管密度(LVD).结果 化疗组肿瘤体积明显小于对照组,在各个时间点比较差异有统计学意义(P＜0.05).化疗组荷瘤小鼠体质量明显小于对照组[(21.00±1.88)g比(28.36±1.06)g,P＜0.01].化疗组终末肿瘤重量明显小于对照组[(641.67 ±289.92) mg比(1 492.00±462.73)mg,P＜0.01].化疗组与对照组脾脏重量比较差异无统计学意义(P＞0.05).化疗后外周血中CD11c+树突状细胞增多[(22.93±2.26)％比(16.53±2.68)％,P＜0.05],CD11b+ Gr-1+髓系来源抑制细胞(MDSC)减少[(3.00±0.10)％比(7.03±0.32)％,P＜0.01].化疗后肿瘤组织中CD3+T淋巴细胞[(10.70±1.21)％比(21.10±3.54)％,P＜0.01]及MDSC[(5.10 ±2.11)％比(10.50±0.72)％,P＜0.05]减少,而树突状细胞[(17.13±3.21)％比(10.43±1.60)％,P＜0.05]、CD19+B细胞[(17.13±2.68)％比(7.90±1.87)％,P＜0.01]、Gr-1+粒细胞[(79.50 ±5.86)％比(46.00±3.75)％,P＜0.01]、CD3+NK1.1+自然杀伤T细胞(NKT)[(9.77±1.56)％比(4.90±1.81)％,P＜0.05]增多.化疗后脾脏中白细胞介素-4 (IL-4)表达升高(P＜0.05),而肿瘤坏死因子-α(TNF-α,P＜0.05)及IL-2(P＜0.01)表达下降.化疗后肿瘤组织中IL-4及转化生长因子(TGF)-β表达升高(P＜0.05),而IL-6、干扰素(IFN)-γ、TNF-α及IL-2表达均下降(P＜0.05或P＜0.01).化疗后肿瘤组织中MDSC效应产物精氨酸酶-1(Arginase-1)明显下降(P＜0.05).化疗后肿瘤组织中MVD(18.47±2.61比30.40±3.92,P ＜0.05)及LVD(6.66±2.77比16.27±2.02,P＜0.01)均下降.结论 吉西他滨可以抑制小鼠Panc02胰腺癌生长以及肿瘤组织中淋巴管及血管的生成,但也诱导产生了肿瘤局部和全身的免疫抑制效应,以肿瘤局部免疫抑制作用尤为明显.化疗诱导产生的免疫抑制效应以及肿瘤血管生成减少导致的肿瘤组织中血药浓度下降,可能是影响胰腺癌疗效的重要原因,有望成为提高胰腺癌化疗效果的重要靶点.     

免疫功能测定及免疫干预在呼吸机相关性肺炎患者的临床意义

目的 探讨免疫功能及免疫调理对呼吸机相关性肺炎(VAP)患者治疗反应及预后的评价.方法 对2011年1月至2012年3月入住内科重症监护病房(MICU)且资料完整的40例VAP,按治疗28 d转归分为存活组(24例)和死亡组(16例)；并进行临床肺部感染评分(GPIS).于确诊后第1天清晨留取外周静脉血,分别送检T淋巴细胞计数及免疫球蛋白检测.T淋巴细胞(CD3+)、辅助性T淋巴细胞(CD4+)、抑制性T淋巴细胞(CD8+)计数采用流式细胞仪检测、免疫球蛋白IgA、IgM、IgG采用免疫散射比浊法检测.同期选取20名健康人作为健康对照组.对其中30例VAP患者随机分为乌司他丁治疗组15例,对照组15例,于治疗前和治疗第7天留取外周血,分别送检T淋巴细胞计数及免疫球蛋白检测.结果 (1)死亡组外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞计数、CD4 +/CD8+比值[(280.32±169.58)×106/L、(212.56±122.99)×106/L、(132.73±56.74)×106/L、1.48 ±0.82]和存活组外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞计数、CD4+/CD8+比值[(485.05±209.18)× 106/L、(352.05±116.41)×106/L、(245.68±68.69)×106/L、2.02±1.06]均低于健康对照组[(1183±639.18)×106/L、(631±321.64)×106/L、(525±221.67)×106/L、2.78±1.04],差异有统计学意义(P＜0.05)；死亡组以上指标也明显低于存活组,差异有统计学意义(P＜0.05)；(2)死亡组患者血清免疫球蛋白IgG[(10.76±4.52) g/L]明显低于存活组[(13.65±6.34) g/L]及健康对照组[(14.39 ±7.47) g/L],差异有统计学意义(P＜0.05)；(3)30例VAP患者给予免疫干预后,治疗组外周血CD3+、CD4+细胞计数[(676.26±220.78)×106/L、(358.87±133.53)×106/L]明显高于治疗前水平[(429.28±130.46)×106/L、(216.85±106.32)×106/L],也明显高于对照组[(451.32±150.78)×106/L、(278.74 ±75.57)×106/L,P＜0.05].(4) CPIS评分与外周血CD3+、CD4+细胞计数呈负相关(r=-0.689、-0.594,P＜0.01).结论 VAP患者存在细胞免疫功能及体液免疫功能低下,给予乌司他J免疫治疗后,细胞免疫功能增强；CPIS评分与细胞免疫呈负相关,免疫功能监测可预测VAP患者的病情程度、治疗效果及预后.     

门静脉高压症脾脏巨噬细胞内游离Ca2＋变化的初步研究

目的 观察门静脉高压症(PH)脾脏巨噬细胞(Mφ)游离Ca2+浓度和分布的变化,为深入探讨门静脉高压症脾脏的变化及评价其免疫功能状况提供实验依据.方法 选取门静脉高压症脾亢患者(均为慢性乙型肝炎患者)的手术切除脾脏(12例)为实验组,外伤性脾破裂患者的手术切除脾脏(4例)为正常对照组.贴壁培养法分离纯化脾脏组织Mφ,使用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载Mφ,以激光共焦镜显微镜观察Mφ内Ca2+的分布,流式细胞仪检测Mφ内Ca2+的浓度变化.结果 与正常脾脏相比,PH脾脏Mφ内Ca2+的分布无明显变化,但可见细胞表面有较多的Ca2+荧光染色阳性的伪足样突起;PH脾脏Mφ内Ca2+浓度为明显升高(48.75±2.61 vs 39.92±1.76,P＜0.05).结论 PH脾脏Mφ内Ca2+浓度明显升高,进一步说明PH脾脏Mφ处在活化状态,但PH脾脏MφCa2+浓度变化的具体机制,以及这种变化对PH脾脏免疫功能的影响还需要进一步的研究.     

门静脉高压症脾亢脾巨噬细胞数量及其吞噬功能的观察

目的观察门静脉高压症(PH)脾亢脾脏巨噬细胞(MΦ)数量及其吞噬功能的变化,为进一步探讨PH脾功能亢进(脾亢)的发病机制提供依据。方法取20例PH脾亢患者的手术脾脏作为PH组,按脾脏肿大程度的分级标准,再分为中度肿大组(11例)和重度肿大组(9例)。6例正常脾外伤性破裂患者的手术脾脏作为对照组。称重后贴壁法分离培养脾脏MΦ,用细胞计数板在显微镜下计数MΦ的相对数(每g脾脏组织中的MΦ数)并计算MΦ绝对数(整个脾脏内MΦ的总数),鸡红细胞吞噬法计算MΦ的吞噬率和吞噬指数。结果对照组、PH中度和重度脾大组MΦ的相对数分别为(13．13±3．72)×10~5/g、(8．80±0．97)×10~5/g、(7．29±1．33)×10~5/g,PH组比对照组均显著减少(P＜0．01),但PH的两组之间差异无统计学意义(P＞0．05)；PH组脾脏的重量明显增加(P＜0．01),可达正常脾重的3．5～6．0倍(放血后)；各组MΦ的绝对数分别为(1．94±0．55)×10~8、(4．91±1．12)×10~8、(6．86±0．77)×10~8,PH组比对照组均显著增多(P＜0．01),且PH重度肿大组也显著多于中度肿大组(P＜0．01)；各组MΦ的吞噬率和吞噬指数分别为(6,33±0．58)%和(0．07±0．01)、(11．25±2．19)%和(0．14±0．03)、(13．00±2．38)%和(0．16±0．04),PH组比对照组均显著增强(P＜0．01),但PH的两组之间比较差异无统计学意义(P＞0．05)。结论PH脾亢时,脾脏MΦ的相对数虽然减少,但绝对数增多,MΦ的吞噬功能增强。MΦ在PH脾亢的形成中可能扮演着非常重要的角色。进一步支持了脾亢发病中的“脾内阻留学说”。     

细胞凋亡、细胞增殖在人颈椎间盘退变过程中的作用

目的 探讨细胞凋亡、细胞增殖在人颈椎间盘退变过程中的作用以及人颈椎间盘细胞凋亡可能涉及的信号转导途径.方法 收集手术切除的33份突出颈椎间盘组织,以22份正常人颈椎间盘组织作为对照,组织形态学和TUNEL法检测凋亡细胞,免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、bax及Caspase-3的表达.结果 实验组的细胞密度低于对照组(髓核内:6.30±1.54比8.96±1.14;软骨终板内:17.27±1.82比25.41±1.89);实验组的TUNEL阳性细胞率高于对照组(髓核内:11.73±1.36比7.02±1.26;软骨终板内:13.04±1.75PC6.86±1.42);实验组髓核内PCNA阳性细胞率高于对照组(8.38±1.98比4.55±1.54);实验组髓核内bax阳性细胞率和Caspase-3阳性细胞率分别高于对照组(bax:19.32±1.95比10.94±1.72;Caspase-3:15.05±1.74比8.92±1.48);TUNEL阳性细胞率与细胞密度之间呈负相关(P＜0.01);实验组髓核内PCNA阳性细胞率与细胞密度之间呈正相关(P＜0.01);两组髓核内bax阳性细胞率、Caspase-3阳性细胞率均与TUNEL阳性细胞率之间呈正相关(P＜0.01).结论 细胞凋亡与细胞增殖间的不平衡可能是人退变颈椎间盘内细胞密度下降的原因,人颈椎间盘髓核细胞的过度凋亡可能与bax和Caspase-3的表达上调有关.     

白细胞介素-6通过p38蛋白调控髓核细胞的增殖和迁移

目的 观察白细胞介素-6(IL-6)对髓核细胞增殖和迁移的调控作用.方法 体外分离培养大鼠髓核细胞,将其随机分为对照组、IL-6组、加压组、IL-6+加压组和IL-6+ p38蛋白抑制剂(SB203580)+加压组.给予相应处理后,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法评估髓核细胞增殖能力,应用划痕实验评估细胞迁移能力.结果 CCK-8法检测各组细胞吸光度值,未加压环境下,IL-6组吸光度值(1.08±0.02)较对照组(0.67±0.01)明显升高(P＜0.05);加压环境下,IL-6组吸光度值(1.51±0.06)也较对照组(0.88±0.04)明显升高(P＜0.05).细胞划痕实验中,未加压环境下,IL-6组迁移距离[(27.73±3.15)像素]较对照组[(12.90±4.77)像素]明显升高(P＜0.05);加压环境下,IL-6组迁移距离[(52.81±3.72)像素]也较对照组[(14.32±3.84)像素]明显升高(P＜0.05).加压环境下使用SB203580阻断p38蛋白后,吸光度值(0.81±0.04)和迁移距离[(33.82±3.72)像素]均较IL-6组[(1.51±0.06)、(52.81±3.72)像素]显著下降(P＜0.05).结论IL-6能通过p38蛋白通路促进髓核细胞的增殖和迁移.     

紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量及功能变化

目的 探讨紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)的数量及功能特点.方法 选取法洛四联症及单纯室间隔缺损病人各10例,采用Ficoll密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞,用添加牛脑垂体提取物和胎牛血清的M199培基进行体外诱导分化培养.用免疫组化和透射电镜行EPC表型鉴定;采用流式细胞仪计数CD133+/KDR+细胞;采用改良的Boyden小室,黏附能力测定实验和MTT比色法,观察EPC的迁移、黏附及增殖能力.结果 紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞的数量增多[集落记数(14.7±3.1)/100倍视野对(8.2±1.3)/100倍视野;DiIAcldl+/UEA-Ⅰ+细胞数(72.2±9.73)/200倍视野对(51.2±3.83)/200倍视野;CD133+/KDR+细胞百分比(0.66±0.20)%对(0.18±0.08)%,P＜0.01],其迁移能力[(140.6±9.24)/200倍视野对(91.84±8.58)/200倍视野]、黏附能力[(149.00±11.58)/200倍视野对(112.6±7.02),200倍视野]及增殖能力(OD值0.34±0.02对0.27±0.01)增强(P＜0.01).结论 紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量增多,其迁移、黏附及增殖能力增强.     

血必净促进内毒素/脂多糖刺激调节性T淋巴细胞凋亡并介导辅助性T淋巴细胞漂移的作用

目的 了解血必净注射液促进LPS刺激CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)凋亡过程及介导辅助性T淋巴细胞(Th)漂移的调节作用.方法 免疫磁珠法分选获得大鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞,分为常规培养对照组、抗CD3/CD28组、抗CD3/CD28+LPS组、抗CD3/CD28+血必净组和抗CD3/CD28+LPS+血必净组,培养3 d后应用流式细胞术检测Treg细胞凋亡率及叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达.将CD4+CD25+Treg细胞与CD4+CD25+T淋巴细胞1:1培养,伴刀豆球蛋白A刺激68 h,检测上清液中Th1分泌的γ干扰素(IFN-γ)、Th2分泌的IL-4、Th17分泌的IL-17水平.结果 抗CD3/CD28+LPS+血必净组Treg细胞凋亡率为(45.1±2.7)%,明显高于抗CD3/CD28+LPS组[(29.4±1.6)%,P＜0.01];2组Foxp3平均荧光强度分别为95±9、140±18,差异有统计学意义(P＜0.01).同时,抗CD3/CD28+LPS+血必净组IFN-γ分泌水平显著高于抗CD3/CD28+LPS组(P＜0.01),IL-4则呈相反变化(P＜0.05),抗CD3/CD28+LPS+血必净组IFN-γ/IL-4较对照组升高(P＜0.01);抗CD3/CD28+血必净组IL-17分泌水平较抗CD3/CD28组明显下降(P＜0.05).结论 CD4+CD25+Treg细胞活化介导了Th1向Th2功能性极化;血必净对LPS诱导的T淋巴细胞免疫功能有重要调节作用,可促进CD4+CD25+Treg细胞凋亡并介导Th2向Th1漂移,从而缓解细胞免疫抑制状态.     

氧化苦参碱对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察氧化苦参碱(OXY)对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 噻唑蓝(MTT)法测定OXY对A549人肺癌细胞活力的作用.流式细胞术测定A549细胞凋亡率.荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Westem blot方法测定OXY对A549细胞B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax) mRNA和蛋白表达的影响.Western blot方法测定OXY对A549细胞的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)、磷酸化ERK(p-ERK)、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响.结果 OXY可抑制A549细胞增殖.与对照组[(5.63±0.76)％]比较,OXY组细胞凋亡率[(13.26±2.15)％]上升(P＜0.01);与对照组(1.02±0.27、0.23±0.04)比较,OXY组bax mRNA(1.61±0.19)和蛋白(0.71±0.10)表达上升(P＜0.05,P＜0.01);与对照组比较(0.94 ±0.14、0.64±0.09),OXY组bcl-2mRNA(0.42±0.05)和蛋白(0.21±0.04)表达下降(P＜0.01).与对照组(0.29±0.03)比较,OXY组p-JNK表达水平(0.66 ±0.06)明显升高(P＜0.01),其他蛋白表达均无明显变化.与OXY组(0.66±0.07、0.28±0.03、0.65±0.08)比较,同时给予OXY和p-JNK抑制剂SP600125组bax蛋白表达(0.39±0.05)下降,bcl-2表达(0.50±0.08)上升,p-JNK蛋白(0.26 ±0.04)表达下降(P＜0.01).结论 OXY碱可诱导A549细胞凋亡,可能与升高p-JNK水平有关.     

羟苯磺酸钙对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织CD34和血管性血友病因子表达的影响

目的 观察羟苯磺酸钙对慢性马兜铃酸肾病(CAAN)大鼠肾小管周毛细血管内皮细胞特异抗原CD34和血管性血友病因子(vWF)表达的影响,探讨羟苯磺酸钙改善CAAN大鼠模型肾脏微循环障碍的作用和机制.方法 关木通水煎剂灌胃12周制作马兜铃酸肾病大鼠模型,随机分成未治疗组和治疗组.未治疗组(n=8)予饮用水灌胃4周;治疗组(n=8)予羟苯磺酸钙灌胃4周.另设健康对照组(n=8).实验第16周处死所有大鼠,留取血、尿、肾组织标本行生化、病理及免疫组织化学检查.结果 与未治疗组比较,治疗组肾功能明显改善,肾间质纤维化程度减轻[(38.22±5.17)×103比(69.97±17.69)×103,P＜0.01],CD34阳性表达显著增加[(16.72±4.17)×103比(3.19±1.40)X103,P＜0.01];vWF阳性表达显著减少[(10.16±1.67)×103比(18.66±4.65)×103,P＜0.01)].结论 羟苯磺酸钙能增加CAAN大鼠肾组织CD34的阳性表达,增加肾小管周围毛细血管密度;减少CAAN大鼠肾组织vWF的阳性表达,减少微血栓形成.     

合并脾功能亢进肝癌患者的外科治疗

目的 探讨肝癌切除合并脾脏切除对肝癌合并脾功能亢进患者的临床意义.方法 回顾性分析2004年3月至2006年1月我科收治的35例合并脾功能亢进肝癌患者的临床资料,其中切脾组12例,未切脾组23例.分析手术前后肝功能以及血小板、白细胞变化情况.结果 35例均成功切除肿瘤.切脾组12例患者术后脾功能亢进消失.术后1周,切脾组患者白细胞由术前的(3.2±1.7)×109/L上升到(8.5±5.3)×109/L,血小板计数由(52.6±23.7)×109/L上升到(245.3士94.6)×109/L(P＜0.01).未切脾组白细胞及血小板计数变化不大.切脾组肝脏功能恢复较快,术后1周基本恢复至术前水平.切脾组患者均接受了较为系统的术后化疗.术后随访2年,切脾组7例生存(58.3％);未切脾组10例生存(43.5％).切脾组与未切脾组患者总的无瘤生存期分别为(16.4±4.3)个月和(14.3士5.2)个月(P＜0.005).结论 肝癌切除合并脾脏切除是治疗合并脾功能亢进肝癌患者的有效方法.     

门静脉高压症脾功能亢进时脾脏巨噬细胞功能变化的研究

目的 观察门静脉高压症脾功能亢进时脾脏巨噬细胞(Mψ)的功能变化.方法 选取西安交通大学医学院第二附属医院2005年9月至2006年3月收治的门静脉高压症脾功能亢进患者12例,均为慢性乙型肝炎患者(实验组),同期外伤脾破裂患者4例(正常对照组).所有患者均行脾脏切除术.贴壁培养法分离纯化脾脏组织Mψ,RPMI-1640培养液将收获的细胞制备成细胞悬液,应用Vybant Phagocytosis Assay试剂盒、人TNF-α EliSpot试剂盒、DQTM ovalbumin试剂盒检测脾脏Mψ的吞噬、分泌及抗原呈递功能.结果 与正常脾脏Mψ相比,门静脉高压症脾功能亢进脾脏Mψ的吞噬率、抗原呈递阳性细胞比例和分泌TNF-α的阳性细胞数(每105个细胞中阳性分泌细胞数)明显增高(86.4±7.1比61.8±4.1,26.3±1.6比15.6±1.8,387.0±24.3比240.3±13.0,P<0.01).结论 门静脉高压症时脾脏Mψ吞噬、抗原呈递和分泌功能明显增强,细胞处于活化状态,进一步说明门静脉高压症时脾脏没有完全丧失免疫功能,但可能处于某种紊乱状态.     

饲服环磷酰胺对兔耳早期增生性瘢痕组织的影响

目的 通过饲服环磷酰胺观察其对兔耳早期瘢痕的影响,以探讨临床应用口服免疫抑制剂防治早期瘢痕的可行性.方法 以32只新西兰白兔兔耳建立增生性瘢痕动物模型,并将其随机分成4组,即蒸馏水组(A组)、5mg·kg-1·d-1环磷酰胺组(B组)、10 mg·kg-1·d-1组(C组)及30mg·kg-1·d-1(D组).在制作模型前及灌胃后14、28 d时分别采血观察白细胞、淋巴细胞变化.28 d时取组织HE染色、VG染色法观察瘢痕增生指数(HI)、成纤维细胞密度(NA)、胶原纤维面密度(AA)数值变化.各组数据(HI、NA、AA)比较采用方差分析,方差不齐时作秩和检验.结果 14 d时,A、B、C、D组白细胞数量分别为(8.62 +0.58)×109/L、(4.48±0.41)×109/L、(2.7±0.26)×109/L、(1.33±0.27)×109/L,淋巴细胞数量分别为(3.11±0.21)×109/L、(1.67 +0.16)×109/L、(0.42 +0.10)×109/L、(0.40 +0.09)×109/L;28 d时,A、B、C、D组白细胞数量分别为(8.63±0.53)× 109/L、(5.10±0.27)×109/L、(3.10±0.26)× 109/L、( 1.98±0.20)×109/L,淋巴细胞数量分别为(3.06±0.16)×109/L、( 2.08±0.14)×109/L、(0.96±0.19)×109/L、(0.14±0.07)×109/L,实验各剂量组(B、C、D组)白细胞数量和淋巴细胞数量下降,且随药物剂量的增加而下降更明显,呈负相关,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).A、B、C、D组HI值分别为3.02±0.24、2.59±0.43、2.06±0.19、1.63±0.11,AA值分别为40.49±2.07、35.29±1.99、28.36±1.87、24.99±1.82,NA值分别为4570.5±259.3、4222.5±199.6、3540.3±170.3、3341.4±228.8,对照组与实验各剂量组的HI、AA、NA数值之间比较差异有统计学意义(P＜0.01),且随剂量的增加,除NA值C和D组比较差异无统计学意义外,其余实验各剂量组HI、AA、NA值变小更明显,呈负相关,各组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 饲服环磷酰胺在抑制白细胞和淋巴细胞的同时能明显抑制瘢痕增生,对兔耳早期增生性瘢痕有明显的防治作用.     

脾大部切除及食管横断吻合术治疗肝硬化门静脉高压症的血流动力学研究

目的 评价脾大部切除、残脾腹膜后包埋及食管横断吻合术对肝硬化门静脉高压症患者门静脉血流动力学的影响.方法 将40例门静脉高压症患者随机分为研究组和对照组,每组20例.均进行食管横断吻合术,对照组做全脾切除,研究组保留部分带血管蒂脾脏移植于腹膜后.手术前后用三维动态增强磁共振血管成像测量门静脉主干的管腔横截面面积、血流量、血流速度和流向;观察自体移植脾在腹膜后的血供及侧支循环.结果 两组术前均存在胃底食管曲张静脉,术后6个月MRA复查均消失或改善.术后6个月两组门静脉主干的管腔横截面积明显减少[研究组(1.81±0.73)cm~2比(1.20±0.52)cm~2,P＜0.01;对照组(1.78±0.52)cm~2比(1.30±0.12)cm~2,P＜0.01];术后两组门静脉主干的平均流速均下降[研究组(9.86±0.10)cm/s比(7.06±1.92)cm/s,P＜0.01;对照组(10.0±0.6)cm/s比(8.2±2.4)cm/s,P＜0.01],且研究组少于对照组(P＜0.01);术后两组门静脉主干的平均流量均下降[研究组(15.0±1.9)ml/s比(10.5±2.7)ml/s,P＜0.01;对照组(14.9±2.1)mI/s比(11.6±2.1)ml/s,P＜0.01],且研究组少于对照组(P＜0.05).移植脾在腹膜后成活,并建立了广泛的侧支循环.结论 脾大部切除、带血管蒂残脾腹膜后移植及食管横断吻合术治疗肝硬化门静脉高压症不仅保留了脾脏的功能,而且具有断流和分流为一体的联合性术式的作用.     

脾亢患者血小板计数与脾动脉血流量及血清一氧化氮水平间关系

目的 探讨脾亢患者血小板计数与脾动脉血流量及血清一氧化氮(NO)水平间关系.方法 肝硬化伴脾亢患者36例(脾亢组),健康体检者10例(对照组).血清NO浓度测定用硝酸还原酶法,脾动脉血流量由彩色多普勒超声仪测量.结果 脾亢组和对照组血小板计数分别为(60.75±27.77)×10~9/L、(212.40±71.76)×10~9/L(P<0.01);脾动脉血流量分别为(482.50±263.61)、(181.20±61.85)ml/min(P<0.01);血清NO水平分别为(97.646±20.990)、(50.774±19.400)μmol/L(P<0.01).脾亢组血小板计数与脾动脉血流量显著负相关(r=-0.422,P<0.05),血清NO水平与脾动脉血流量呈显著正相关(r=0.746,P<0.01).结论 血清NO水平升高导致脾动脉血流量增加可能在脾亢发生发展中起着重要作用.     

肝癌合并肝硬化脾功能亢进的围手术期处理

目的 探讨肝癌联合脾切除对原发性肝癌合并肝硬化脾功能亢进患者手术安全性的影响以及围手术期处理原则.方法 回顾性分析1999年1月至2009年12月收治的177例原发性肝癌合并肝硬化脾功能亢进患者的临床资料,男性150例,女性27例,年龄25～76岁,平均(55±12)岁.按照是否联合脾切除术,将患者分为切脾组(n=71)和不切脾组(n=106).比较两组在手术安全性、术后并发症发生率、术后肝功能恢复、术后白细胞计数和血小板计数方面的差异.结果 两组患者术前一般情况及白细胞计数和血小板计数的差异无统计学意义(P＞0.05).切脾组术后第1、10、30天血小板计数分别为(88.4±23.6)×109/L、(345.3±98.2)×109/L、(210.8±92.2)×109/L,与不切脾组相比差异有统计学意义(P＜0.05).切脾组手术时间为(216±105)min,高于不切脾组的(135±60)min,差异有统计学意义(P＜0.05),但两组术中出血量及输血的差异无统计学意义.切脾组术后并发症发生率为11.3%,与不切脾组的6.6%相比差异无统计学意义.结论 只要严格掌握适应证,提高围手术期处理水平,肝癌合并肝硬化脾功能亢进患者行肝脾联合切除术是安全的.     

小鼠不成熟CD8α+树突状细胞的免疫抑制功能的体外实验

目的 观察不成熟CD8α+树突状细胞(DC)的体外免疫抑制功能.方法 取C57BL/6(H-2b)小鼠和Balb/c(H-2d)小鼠的骨髓和脾脏,制备不成熟CD8α+DC和脾淋巴细胞,并经丝裂霉素处理.采用甲基噻唑基四唑(MTT)法,实验设混合淋巴细胞反应(MLR)组(阳性对照组)、MLR加不同密度的同系CD8α+DC组、MLR加不同密度同种异型CD8α+DC组、MLR加不同密度CD8α+DC的培养上清组、CD8α+DC加同系T淋巴细胞组及阴性对照组.MLR组按刺激细胞/反应细胞10∶1建立.CD8α+DC按与反应细胞比例0.2∶1、0.5∶1、0.8∶1和1∶1的梯度加入MLR中分别建立同系CD8α+D组和同种异型CD8α+D组;MLR中加入不同密度(1×105/ml～5×106/ml)CD8α+DC的培养上清液建立CD8α+DC上清组;CD8α+DC与同系淋巴细胞共培养建立CD8α+DC加同系T淋巴细胞组;以反应细胞2×105/孔作为阴性对照.采用酶联免疫吸附试验法检测MLR加同系CD8α+DC组(1∶1)上清液中γ干扰素(IF-γ)和白细胞介素10(IL-10)的浓度.结果 同系和同种异型不成熟CD8α+DC对MLR均有抑制作用(P＜0.05),二者间差异无统计学意义(P＞0.05).抑制作用随DC比例的增加而增强,当CD8α+DC/反应细胞比例大于0.2时显示抑制作用(P＜0.05),比例为1时抑制作用最强.CD8α+DC体外刺激同系淋巴细胞增殖的能力较弱,当DC与T淋巴细胞的比值大于2时,显示出一定的刺激作用(P＜0.05),其培养上清液对MLR也有抑制作用(P＜0.05),其中密度5×105/ml的细胞培养上清液抑制作用最强.MLR加同系CD8α+DC组(1∶1)上清液中IL-10的含量为(451.9±12.2)pg/ml,IFN-γ的含量为(1.0±1.2)pg/ml.结论 不成熟CD8α+DC体外具有免疫抑制或诱导免疫耐受的功能,可产生较高水平的IL-10,CD8α+DC及其培养上清液均可抑制MLR.

Abstract：

Objective To observe the function of immature CD8α+ dentritic cells (DCs) in vitro. Methods The bone marrow and spleen of C57BL/6(H-2b) and Balb/c (H-2d) mice were got to prepare immature CD8α+ DCs and spleen lymphocytes,and treated by mytomycin. MTT test was used.MLR group, MLR plus variable density syngeneic CD8α+ DC group, MLR plus variable density allogeneic CD8α+ DC group,MLR plus variable density CD8α+ DC supernatant group,CD8α+ DC plus syngeneic T cell group and negative control group were established. MLR group was set up by responder cell ratio of 0.2,0.5,0.8,1.0,to build the MLR plus syngeneic and allogeneic CD8α+ DC experimental groups. Culture supernatant from different density (1 × 105/ml - 5 × 106/ml) of CD8α+DCs was added into MLR to build CD8α+ DC supernatant group. CD8α+ DCs were co-cultured with syngeneic T cells to build CD8α+ DCs plus syngeneic T cells group. 2 × 105/well responder cells served as the negative control group. ELISA was used to detect the concentrations of IFN-γ and IL-10 in the DCs could both suppress MLR (P＜0. 05), and the difference was not statistically significant (P＞0. 05). When CD8α+ DCs were increased, the suppressive effect was enhanced. When CD8α+ DC/responder cell ratio ＞0. 2, the inhibitory effect could be observed, and this effect reached the peak when the ratio was 1.0. The CD8α+ DCs had weak ability to stimulate syngeneic lymphocyte proliferation in vitro, and certain stimulating effect could be seen only when CD8α+ DC/responder cell ratio ＞2 (P＜0. 05). Its culture supernatant also showed suppressive effect (P＜0. 05), and the supernatant with a cell density of 5 × 105/ml showed the maximum effect. IL-10 concentration in the concentration was 1.0 ± 1.2 pg/ml. Conclusion The in vitro function of immature CD8α+ DCs was immunosuppression/tolerance,and they could secret high level of IL-10. The CD8α+ DCs and their culture supernatant could suppress MLR in vitro.     

JNK抑制剂减轻应激性溃疡大鼠胃黏膜损伤的研究

目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂减轻应激性溃疡大鼠胃黏膜损伤的可能性.方法 将25只雄性SD大鼠随机等分为对照组、致伤1、6、12 h组、抑制剂组.采用免疫组织化学、Western blot方法检测致伤后胃黏膜磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达与分布.同时,检测各时间点大鼠胃液pH值、胃黏膜血流量、胃黏膜损伤指数(UI),并观察胃黏膜大体及光镜下组织病理学变化.结果致伤组p-JNK表达较对照组有明显增加.致伤12 h后,应激性溃疡损伤部位组织上皮细胞p-JNK呈强阳性反应.抑制剂组损伤(15.60±2.70)较致伤12 h组(24.20±2.39)轻(P<0.01).致伤12 h组(2.12±0.14,26.90±2.60)、抑制剂组(1.99±0.08,26.66±0.73)胃酸PH值和胃黏膜血流量较对照组(3.44±0.03,35.46±4.48)明显降低(P<0.01),但这两组间差异无统计学意义(t=0.082,P>0.05;t=0.26,P>0.05).结论 在液压打击致应激性溃疡大鼠中,JNK信号通路的激活参与了应激性溃疡的发生,其抑制剂能减轻应激性溃疡大鼠胃黏膜的损伤.     

人神经生长因子β基因转染对糖尿病大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨皮下转染重组腺病毒介导的人神经生长因子β(Ad-hNGFβ)基因对糖尿病大鼠神经病理性痛的影响及其可能机制.方法 采用腹腔注射佐脲霉菌素(STZ)75 mg/kg的方法制备大鼠糖尿病模型.健康雄性SD大鼠,体重180～220 g,随机取10只大鼠作为对照组(C组)不制备糖尿病模型;取模型制备成功的大鼠75只随机分为3组(n=25):糖尿病神经病理性痛组(DNP组)、Ad-hNGFβ基因治疗组(NGF组)和Ad-LacZ基因治疗组(LacZ组).NGF组和LacZ组分别于STZ注射后21d且痛阈测定结束后双侧腹股沟皮下脂肪接种1.12×1011 PFU Ad-hNGFβ 10 μl和1.12 x 1011 PFUAd-LacZ 10 μl,C组和DNP组不作任何处理.于STZ注射前(基础状态)、注射后21、35、49 d时测定机械痛阈和热痛阈.于注射后49 d且痛阈测定结束后测定血清hNGFβ浓度和背根神经节降钙素基因相关肽(CGRP)的表达.结果 与基础值和C组比较,DNP组、NGF组和LacZ组STZ注射后机械痛阈和热痛阚均降低.DNP组和LacZ组血清hNGFβ浓度和背根神经节CGRP表达下降,NGF组血清hNGFβ浓度和背根神经节CGRP表达升高(P＜0.05);与DPN组比较,NGF组STZ注射后49 d时热痛阈升高,血清hNGFβ浓度和背根神经节CGRP表达升高(P＜0.01),LacZ组各项指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Ad-hNGFβ基因转染可在一定程度上减轻糖尿病大鼠神经病理性痛,其机制与上调背根神经节CGRP表达有关.     

小分子RNA干扰靶向巨噬细胞移动抑制因子对大肠癌影响的实验研究

目的 分析靶向巨噬细胞移动抑制因子的小分子干扰RNA(MIFsiRNA)对大肠癌生长与荷瘤小鼠生存质量的影响,并探讨其作用机制.方法 利用盲肠造疝原位接种瘤块法建立大肠癌动物模型.将成功建模后的BALB/C小鼠随机分为3组,每组10只,每周2次分别给予DEPC水、MIFsiRNA(0.15 nmol/g)和非特异性siRNA(0.15 nmol/g)瘤内注射,每天称量各组小鼠的饮水、饮食量和体重,每周测量1次肿瘤体积.4周后处死小鼠,称取肿瘤重量,用ELISA法和免疫组织化学法检测小鼠血清和组织中的MIF水平,分光光度法检测肿瘤组织中Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤组织中凋亡细胞数.结果 MIFsiRNA干预组小鼠血清中MIF表达比其他两组低[(22±6) ng/ml)比(32±8)ng/ml、(33±8) ng/ml,P＜0.01],组织中MIF阳性细胞数比其他两组少[(85±20)/500个比(423±23)/500个、(442±31)/500个,P＜0.01];干预后第3周与第4周MIFsiRNA干预组小鼠肿瘤体积均明显小于其他两组(P＜0.01).处死小鼠后肿瘤重量也明显轻于其他两组[(1.93±0.21)g比(4.40±0.30)g、(5.25±0.44)g,P＜0.01];建模后15～31 d饮水量较其他两组多(P＜0.01),建模后8～31 d饮食量也较其他两组多(P＜0.01),3组小鼠体重变化之间相比差异无统计学意义(P＞0.05);MIFsiRNA干预组小鼠肿瘤组织中Caspase-3蛋白表达比其他两组高[(0.74±0.06) μg比(0.57±0.08)μg、(0.56±0.02)μg,P＜0.01],凋亡细胞数较其他两组多[(12±2)/100个比0、0,P＜0.01].结论 敲低MIF基因表达可以抑制大肠癌的生长,提高荷瘤小鼠的生存质量,其可能的作用机制是激活Caspase-3促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To analyze the effect of siRNA targeting MIF( MIFsiRNA) on the growth of colorectal cancer xenografts and the life quality of tumor-bearing mice.Methods BALB/C mouse model carring colorectal cancer was established.Thirty mice were divided into three groups randomly and managed respectively with intratumor injection of DEPC water, MIFsiRNA(0.15 nmol/g) and non-specific siRNA (0.15 nmol/g), respectively twice a week for consecutively 4 weeks.Drinking water, fodder consumed and body weight was recorded daily, and tumor volume was measured once a week.Mice were sacrificed after four weeks.ELISA and immunohistochemistry were used to detect the expression of MIF in serum and in tumor tissues.Spectrophotometric detection was used to detect caspase-3 protein.TUNEL was used to detect apoptotic cells.Results MIF expression in serum in MIFsiRNA group was lower than the other two groups [(22 ± 6) ng/ml vs (32 ± 8) ng/ml and (33 ± 8) ng/ml, P ＜ 0.01]; MIF expression in tissues was less than the other two groups [(85 ± 20) /500 vs.(423 ± 23) /500 and (442 ± 31) /500, P ＜ 0.01]; Tumor was smaller than the other two groups at third and fourth week (P ＜ 0.01) ; Tumor weight was significantly less than the other two groups [(1.93 ±0.21) g vs (4.40 ±0.30) g and (5.25 ±0.44) g, P＜0.01]; Mice in MIFsiRNA group were healthier than the other two groups as judged by water and fodder consumption (P ＜ 0.01 ) , while weight change was not significantly different among the three groups ( P ＞ 0.05 ).Caspase-3 protein in tissues was higher than the other two groups [(0.74 ±0.06) μg vs (0.57 ±0.08) μg and (0.56 ±0.02) μg, P ＜0.01]; Apoptosis cells in tissues were higher than the other two groups [(12 ± 2)/ 100 个vs 0 and 0, P ＜ 0.01].Conclusions Knockdowning MIF gene expression inhibits the growth of colorectal cancer xenografts and improves life quality of tumor-bearing mice, possibly by a mechanism in which MIFsiRNA activates caspase-3 promoting cell apoptosis.