不同剂量γ射线对红细胞制品中细胞因子含量的影响

目的 研究不同剂量γ射线照射后红细胞制剂中IL-6、IL-8及TNF-α等细胞因子含量的变化,以得出最佳的γ射线辐照量.方法 以15、20、25、30、35 Gy 5个不同梯度辐照量照射保存前的红细胞制剂,并分别于0、1、2、3、4周后检测制剂中细胞因子含量.结果 对照组和照射组的细胞因子含量均随保存时间延长而显著增加,但对照组中细胞因子含量增加更为明显;而在同一保存时间对照组中细胞因子含量高于照射组(P＜0.05),但25、30、35 Gy 3个照射组细胞因子含量相差不显著(P＞0.05).结论 辐照血最佳γ射线辐照量为25 Gy.     

冰冻保存对浓缩血小板细胞炎性因子水平影响

目的观察浓缩血小板在冰冻保存前后细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、INF-γ水平的变化。方法取30份浓缩血小板标本，将每份平均分为4等份。其中的2份进行白细胞过滤为过滤组，另2份不进行白细胞过滤为非过滤组，将过滤组和非过滤组的PCs分别置血小板保存箱中20～24℃振荡保存和加冰冻保护剂冰冻保存，采用ELISA法检测2组浓缩血小板在常规保存0，1，3d和冰冻保存3个月解冻后0，1，3d的IL-1β、IL-6、IL-8、INF-γ的水平，用配对t检验进行统计分析。结果过滤组与非过滤组冰冻保存前0d与解冻后0d细胞因子含量均无显著变化；非过滤组解冻后1，3d细胞因子的水平比冻存前1，3d有显著升高；过滤组在冰冻保存前后细胞因子的含量无显著变化。结论经冰冻保存后的PCs解冻后比常规条件保存的PCs炎性细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-8、INF-γ）的水平随时间的延长有更强的增加趋势，经白细胞过滤后PCs细胞因子的含量变化没有显著性。     

IL-24基因联合电离辐射对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨人白细胞介素24（IL-24）基因联合X射线对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响，为IL-24基因联合电离辐射治疗肿瘤奠定实验基础。方法：检测电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为假照射组及2、4、6、8、12和18 Gy X射线照射组；检测IL-24目的基因的表达分为对照组（0.01 mol•L^-1PBS）、空载体组［pcDNA3.1(+)载体］和IL-24基因组；检测IL-24基因联合电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组（6 Gy）、空载体联合照射组以及IL-24基因联合照射组。碱裂解法提取纯化质粒DNA，用PEI转染质粒DNA至PC-3细胞中，目的基因表达的检测采用RT-PCR法。Annexin V-FITC和PI双染后，采用流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡的变化。结果：与假照组比较，2和4 Gy X射线照射48 h后PC-3细胞凋亡百分率无明显变化，6 Gy X射线照射后细胞凋亡百分率开始明显升高（P<0.01），且细胞凋亡百分率随剂量增大而增加，约是假照组的1.6～3.0 倍。PC-3细胞中对照组和空载体组均未观察到IL-24基因的表达，而IL-24基因组则可见IL-24基因的表达；以上3组均有GAPDH基因的表达。IL-24基因联合照射组与对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组和空载体联合照射组比较，早期凋亡细胞数均有上升趋势，除单纯照射组外，与其他组比较差异均有显著性（P<0.05）；晚期凋亡和坏死细胞数也均有上升趋势，其中与对照组、单纯照射组和空载体联合照射组比较显著升高（P<0.05或P<0.001）；凋亡和坏死的总细胞数均有上升趋势，除IL-24基因组外，与其他组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：IL-24基因联合电离辐射能够有效诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡。      

电离辐射对伤口液中细胞因子变化的影响及苯妥英钠的作用

目的：研究电离辐射全身照射和局部照射对大鼠伤口液中细胞因子变化的影响及苯妥英钠的作用。方法：以大鼠背部置人聚乙烯醇海绵的切口伤为模型，收集伤口液，以生物活性法分别测定其中细胞因子TNF-α、IL-1、TGF-β、PDGF的活性水平。结果：6Gy全身辐射后3d、5d、8d，伤口液中细胞因子TNF-α、IL-1、TGF-β、PDGF的活性水平明显下降。20Gy局部辐射后伤口液中TNF-α、IL-1的活性水平在第3天或3d、5d，以及IL-1、TNF-β的活性水平在第13天明显升高；苯妥英钠对非辐射组和辐射组伤口液中的细胞因子水平都有明显的提高，结论：全身辐射造成愈合延迟与伤口局部细胞因子水平的下降有关。而局部辐射后细胞因子水平增加的意义有待探讨；苯妥英钠能提高伤口液中细胞因子的水平而有利于创伤愈合。     

两种白细胞滤器获取单个核细胞作为实验研究的生物学功能的比较*

目的：分析单采血小板去白细胞滤器(apheresis platelet leukoreduction system chambers, LRSCs)和全血去白细胞滤器(whole blood leukoreduction filters, LRFs)所收集的白细胞替代常规人全血白细胞进行实验的相关生物学功能和表型。方法：分别采用直接法和反冲洗获得LRSCs和LRFs白细胞，经人的淋巴细胞分离液进行密度梯度离心，分离出外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)。用CD3激发型抗体和细胞因子白细胞介素2(interleukin, IL-2)体外扩增培养10 d，观察细胞形态、细胞增殖、细胞凋亡，并用流式细胞术(flow cytometry, FCM)进行表型分析，对比两种滤器分离出的白细胞生物学差异。结果：(1)PBMCs镜下观察：LRSCs中细胞较纯，个体大小较均一；LRFs包含部分形态较小的血小板和形态较大的粒细胞。两者细胞活力无差异。(2)LRSCs所分离的PBMCs细胞亚群以淋巴细胞为主，单核细胞次之，含极少量的粒细胞；而LRFs淋巴细胞与粒细胞比例接近，单核细胞较少。初始状态淋巴细胞群体中各细胞亚群表型相似。(3)LRSCs-PBMCs细胞，经CD3与IL-2体外刺激后，细胞活化集落大且较均一，而LRFs-PBMCs细胞集落多但分布较散。(4)体外培养第6天、第10天两组滤器间淋巴细胞各亚群表型差异无统计学意义。(5)两种滤器血PBMCs细胞凋亡率类似，且均为早期凋亡细胞比例高于晚期凋亡细胞。(6)经体外扩增培养10 d，发现两种滤器血PBMCs细胞增殖速率相当，细胞活力等同。结论：两种滤器所得的白细胞均可用于相关的基础实验研究，且LRFs含有较多的粒细胞，这也为粒细胞的研究工作提供了便利，解决了临床用血与实验用血的需求。     

IL-21基因对肝癌细胞抑瘤效应的辐射增敏作用

目的：探讨外源性IL-21基因联合放射对肝癌HepG2细胞抑瘤效应的辐射增敏作用。方法：将Ad—IL-21腺病毒颗粒转染HepG2细胞系,进行6Gy”’Cs7射线照射,将细胞分为4组,包括空白对照组、Ad—IL-21组、照射组以及联合组,观察HepG2细胞的生长、细胞周期和细胞凋亡的变化。结果：与Ad—IL-21组和照射组比较,联合组HepG2细胞的抑制效应最显著,转染48h的抑制率明显高于转染24h和72h的抑制率。联合组HepG2细胞阻滞在G2期最多,凋亡细胞所占比例最高,转染24h和48h的凋亡率分别达到29．1％和33．1％。结论：IL-21基因联合放射对肝癌细胞的抑瘤效应具有辐射增敏作用,明显地抑制肝癌细胞的生长。     

X射线全身照射对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的：观察不同剂量 X 射线全身照射对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞凋亡的影响。方法：Annexin-V和PI双染后，采用流式细胞术检测小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞在照射后不同时间的细胞凋亡变化。结果：2 Gy X 射线全身照射与假照射组比较，小鼠脾细胞 凋亡百分率在照射后24 h明显升高（Ｐ< 0.05），腹腔巨噬细胞凋亡百分率从照射后4 h开 始明显升高（Ｐ< 0.05，Ｐ< 0.01），持续到48 h（Ｐ< 0.001）；0.075 Gy X 射 线全身照射与假照射组比较，小鼠脾细胞凋亡百分率在照射后24 h明显降低（Ｐ< 0.05）， 腹腔巨噬细胞凋亡百分率从照射后2 h开始至照射后16 h均有显著降低（Ｐ< 0.05）。 结论：较高剂量辐射促进小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞凋亡，而低剂量辐射对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细 胞凋亡没有促进作用，并且能降低免疫细胞凋亡。     

一氧化氮和Ca2+介导的细胞因子损伤大鼠胰岛细胞的研究

目的观察-氧化氮和Ca^2＋在白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF）和1-干扰素（IFN-1）诱导的胰岛细胞凋亡中的作用。方法应用体外单层培养的3-5d的Wistar大鼠胰岛细胞，分别检测IL-1β、TNF和IFN-1对胰岛细胞凋亡细胞百分率、[Ca^2＋]i含量以及培养液中基础和高糖刺激下胰岛素分泌量、NO含量及NOS活性以及DNA片段的影响。结果IL-1β、TNF和IFN-1联合可诱导胰岛细胞凋亡率明显增加及DNA片段化，基础和高糖刺激下胰岛素分泌量降低，同时胰岛细胞[Ca^2＋]i、NO含量和NOS活性亦明显升高（P〈0．01），且有时间和剂量依赖性。结论NO和Ca^2＋，可能是介导上述细胞因子引起胰岛细胞凋亡的重要途径。     

细胞因子治疗^60Coγ射线照射所致急性放射病的实验研究

目的观察重组人白细胞介素-11（rhIL-11）和重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）联用对60Coγ射线照射所致急性放射病的疗效。方法16只比格狗随机分为对照组（5只）、对症治疗组（5只）和细胞因子治疗组（6只）。所有动物均接受4.5Gy60Coγ射线照射,并在照后当天开始治疗,对症治疗组仅给予积极的对症支持治疗,细胞因子治疗组在对症治疗的基础上,加用rhIL-11和rhG-CSF,对照组不给予任何治疗。观察动物的一般情况、外周血象、外周血有核细胞早期凋亡率和坏死率、血浆中细胞因子含量及组织病理学变化。结果细胞因子治疗组动物的45d存活率升高,外周血象也明显改善;外周血有核细胞早期凋亡率和坏死率明显降低;外周血血浆中IL-2和IFN-γ含量在早期均升高,随后IL-2迅速下降,IFN-γ含量相对比较稳定;骨髓组织病理学结果显示造血功能明显恢复。结论rhIL-11和rhG-CSF联用可促进急性放射病比格狗的造血和免疫功能恢复,是治疗急性放射病的有效方法。     

浓缩红细胞保存前过滤白细胞对细胞因子含量的影响

1　材料和方法1.1　材料　将 2 0 0 m L全血采集于含 CPD- 2保养液的血袋中 . 4℃ 5 0 0 0 r· min- 1 离心 12 min,移出大部分血浆 ,使红细胞压积约为 75 0 m L· L- 1 ,然后将每单位红细胞分作二份 ,即对照组和过滤组 ,置 4℃保存 ,取样待检 .1.2　方法　采用白细胞滤血器 (南京生物医学工程研究所生产 )过滤浓缩红细胞 ,按说明书进行操作 .细胞计数用 Sys-m ex F- 82 0型细胞分析仪进行分析 .细胞因子 IL - 1β,IL - 6 ,IL - 8,TNFα含量测定用 EL ISA方法 ,试剂盒由深圳晶美生物工程公司提供 (进口分装 ) .按说明书进行操作 .2…     

SNL细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞

目的为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞。方法以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1。传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-3和SSEA-4的表达;同时观察细胞的多向分化潜能。结果hES1细胞在SNL细胞饲养层上能持续生长。经多次传代后持续表达人ES细胞表面特异性标志,其注射于重症联合免疫缺陷小鼠皮下仍能形成畸胎瘤组织。结论SNL细胞能够作为饲养层细胞用于人ES细胞的培养,且操作更方便;该细胞已转染了耐受新霉素的基因,为将来对人ES细胞基因操作时进行药物筛选提供了可能。     

SNL细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞

目的 为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞.方法 以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1.传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-3和SSEA-4的表达;同时观察细胞的多向分化潜能.结果 hES1细胞在SNL细胞饲养层上能持续生长.经多次传代后持续表达人ES细胞表面特异性标志,其注射于重症联合免疫缺陷小鼠皮下仍能形成畸胎瘤组织.结论 SNL细胞能够作为饲养层细胞用于人ES细胞的培养,且操作更方便;该细胞已转染了耐受新霉素的基因,为将来对人ES细胞基因操作时进行药物筛选提供了可能.     

牙周膜干细胞对脐血单个核细胞分化为破骨样细胞的影响

目的研究牙周组织改建过程中,牙周膜干细胞对破骨细胞形成的影响,初步探讨静压力和诱导因子对牙周膜干细胞调控破骨细胞形成的作用机制。方法有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,密度梯度离心法分离脐血,收集单个核细胞。建立直接共培养和Transwell间接共培养体系。实验分组:A组,对照组(单纯共培养);B组,静压力组,共培养后第2天即对共培养细胞施加120 KPa压力,持续作用1 h后继续培养;C组,诱导因子组,培养液中加入诱导因子1,25二羟基维生素D3(1×10-8mol/L)和前列腺素E2(1×10-6mol/L)。采用倒置相差显微镜及TRAP染色,骨磨片染色等方法检测破骨样细胞(osteoclast-like cells,OLC)的形成及功能。结果各组第3、7天OLC计数比较结果显示,施加静压力后,直接共培养组OLC数量明显多于间接共培养组(P<0.01);而诱导因子组,直接共培养组OLC少于间接共培养组(P<0.01)。结论牙周膜干细胞能够促进脐血单个核细胞分化为破骨样细胞,且在静压力作用下,两种细胞直接接触时,这种调控作用更为明显。     

干细胞来源的胰岛素分泌细胞的研究进展

Ⅰ型糖尿病是由于胰岛β细胞被自身免疫系统攻击、破坏,不能正常释放胰岛素,导致血糖升高.患者需终生注射胰岛素,由于给药过程缺乏理想的血糖感应系统,常导致糖尿病大血管病变、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、神经病变及糖尿病足等慢性并发症的发生,是糖尿病死亡的主要原因[1].为了有效控制血糖,防止糖尿病并发症的发生,提高糖尿病患者的生存质量,目前主要采用两种治疗策略来改进胰岛素的治疗,一是胰岛素输入方式的改进:临床上广泛应用的胰岛素泵就是通过24 h不停地向患者体内输入微量胰岛素,模拟正常胰岛素分泌模式,控制血糖水平,减少并发症的发生.其次是寻找方法替代被患者自身免疫系统破坏的胰岛素分泌细胞,包括胰腺或胰岛移植、对非β细胞进行基因修饰以及对干细胞的诱导分化.70年代初,Lacy等成功地证明了移植胰岛细胞能够改善糖尿病大鼠的高血糖状态,胰岛细胞移植开始蓬勃开展起来.     

肝脏NK/NKT细胞及其生物学意义

对天然杀伤细胞（NK cell）的研究近年受到高度关注。研究发现，肝脏NK/NKT细胞含量在机体天然免疫反应时可增加10倍，可能是机体最大的专职天然免疫的器官，对抵御病理、寄生菌、恶性转化细胞等的侵害具有十分重要的意义。本文就肝脏NK/NKT细胞的功能特点和生物学特性、当前的研究进展及热点问题以及进一步研究的思路和切入点作一述评。     

Periodontal ligament stem cells improve peripheral blood mononuclear cells differentiation into osteoclast-like cells

目的 研究牙周组织改建过程中,牙周膜干细胞对破骨细胞形成的影响,初步探讨静压力和诱导因子对牙周膜干细胞调控破骨细胞形成的作用机制.方法 有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,密度梯度离心法分离脐血,收集单个核细胞.建立直接共培养和Transwell间接共培养体系.实验分组:A组,对照组(单纯共培养);B组,静压力组,共培养后第2天即对共培养细胞施加120 KPa压力,持续作用1h后继续培养;C组,诱导因子组,培养液中加入诱导因子1,25二羟基维生素D3(1 ×10-8 mol/L)和前列腺素E2(1×10-6 mol/L).采用倒置相差显微镜及TRAP染色,骨磨片染色等方法检测破骨样细胞( osteoclast-like cells,OLC)的形成及功能.结果 各组第3、7天OLC计数比较结果显示,施加静压力后,直接共培养组OLC数量明显多于间接共培养组(P＜0.01);而诱导因子组,直接共培养组OLC少于间接共培养组(P＜0-01).结论 牙周膜干细胞能够促进脐血单个核细胞分化为破骨样细胞,且在静压力作用下,两种细胞直接接触时,这种调控作用更为明显.     

Expansive effects of aorta-gonad-mesonephros-derived stromal cells on hematopoietic stem cells from embryonic stem cells

Background Hematopoietic stem cells (HSCs) give rise to all blood and immune cells and are used in clinical transplantation protocols to treat a wide variety of refractory diseases, but the amplification of HSCs has been difficult to achieve in vitro. In the present study, the expansive effects of aorta-gonad-mesonephros (AGM) region derived stromal cells on HSCs were explored, attempting to improve the efficiency of HSC transplantation in clinical practice.Methods The murine stromal cells were isolated from the AGM region of 12 days postcoitum (dpc) murine embryos and bone marrow（BM）of 6 weeks old mice, respectively. After identification with flow cytometry and immunocytochemistry, the stromal cells were co-cultured with ESCs-derived, cytokines-induced HSCs. The maintenance and expansion of ESCs-derived HSCs were evaluated by detecting the population of CD34+ and CD34+Sca-1+cells with flow cytometry and the blast colony-forming cells (BL-CFCs), high proliferative potential colony-forming cells (HPP-CFCs) by using semi-solid medium colonial culture. Finally, the homing and hematopoietic reconstruction abilities of HSCs were evaluated using a murine model of HSC transplantation in vivo.Results AGM and BM-derived stromal cells were morphologically and phenotypically similar, and had the features of stromal cells. When co-cultured with AGM or BM stromal cells, more primitive progenitor cells (HPP-CFCs ) could be detected in ESCs derived hematopoietic precursor cells, but BL-CFC’s expansion could be detected only when co-cultured with AGM-derived stromal cells. The population of CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells were expanded 3 times,but no significant expansion in the population of CD34+Sca-1+ cells was noted when co-cultured with BM stromal cells. While both CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells and CD34+Sca-1+ cells were expanded 4 to 5 times respectively when co-cultured with AGM stromal cells. AGM region-derived stromal cells, like BM-derived stromal cells, could promote hematopoietic reconstruction and HSCs’ homing to BM in vivo.Conclusions AGM-derived stromal cells in comparison with the BM-derived stromal cells could not only support the expansion of HSCs but also maintain the self-renewal and multi-lineage differentiation more effectively. They are promising in HSC transplantation. Chin Med J 2005; 118(23):1979-1986