脊索瘤中microRNA的差异性表达及其RNA编辑

目的 :检测脊索瘤组织中micro RNA(mi RNA)的差异性表达情况,探讨其RNA编辑。方法 :使用RTq PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction)技术检测骶骨脊索瘤组织11种候选mi RNA的表达水平,将其与髓核组织中的表达水平进行比较,对表达异常的mi RNA前体(pri-mi RNAs)的DNA和c DNA序列进行对比,检测是否存在RNA编辑。使用蛋白印迹法(Western blot)检测脊索瘤组织中RNA编辑的关键酶RNA腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADARs)的表达。构建ADAR的表达载体,同时构建ERBB2和HOXA1的3′-非翻译区报告载体并转染mi RNA模拟物和抑制物,将其和ADAR的表达载体共转染至人胚肾细胞293T(HEK293T细胞),用q RT-PCR检测mi RNA的表达水平,并通过荧光素酶报告基因活性分析法对已测得异常表达的mi RNA的靶基因ERBB2和HOXA1进行活性分析,检测ADAR与测得异常表达的mi RNA的靶基因的关系。结果:与髓核组织相比,脊索瘤组织中mi R-10a和mi R-125a的相对表达程度明显下调(P<0.05)。脊索瘤组织中mi R-10a和mi R-125a的前体c DNA序列中出现了腺苷酸向鸟苷酸(A-G)突变,而在髓核组织中mi R-10a和mi R-125a前体的c DNA序列中无此改变,mi R-10a和mi R-125a在成熟过程中出现了A-I RNA编辑。4组脊索瘤组织中有3组存在ADAR1过度表达,2组存在ADAR2过度表达。转染了mi RNA抑制物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现上调,而mi R-10a和mi R-125a的表达出现下调,mi R-10a的靶基因ERBB2和mi R-125a的靶基因HOXA1的荧光素酶活性显著增高;相反,转染了mi RNA模拟物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现下调,而mi R-10a和mi R-125a的表达出现上调,ERBB2和HOXA1的荧光素酶活性显著降低。结论:ADAR1的过度表达可能通过介导A-I RNA编辑影响mi R-10a和mi R-125a的成熟和表达,参与脊索瘤发生中的细胞异常增殖调控。     

非编码RNA在痤疮中的作用机制及相关研究进展

目前，痤疮的发病机制未完全阐明，近年来研究表明非编码RNA中的微小RNA、长链非编码RNA和环状RNA等参与了痤疮发病机制中多种复杂的生物过程，包括痤疮丙酸杆菌失衡、免疫功能异常、炎症反应和角质形成细胞的异常分化增殖等，这些非编码RNA有望成为痤疮的生物标记物及治疗靶点。本文旨在对非编码RNA在痤疮中的作用机制和潜在临床应用进展进行综述。     

ceRNAs在甲状腺癌中的研究进展及展望

甲状腺癌是世界上最为常见的内分泌恶性肿瘤之一,虽甲状腺癌患者总体生存率较佳,但发病率增速位列首位,故需深入了解甲状腺癌的发生发展机制,竞争内源性RNA（ceRNA）概念的提出进一步阐明了肿瘤发生的机制。目前研究表明环状RNA、长链非编码RNA、假基因转录本、mRNA均可作为ceRNAs参与ceRNA网络构建,它们拥有与...     

RNA干扰与肿瘤治疗的研究进展

RNA干扰(RNA interference，RNAi)指与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA(double—stranded RNA，dsRNA)导入细胞时，该序列mRNA发生特异性的降解，并导致基因表达的沉默。小干扰RNA(small—imerfering RNA，siRNA)是RNAi作用的主要介质。其可经体外合成再转入细胞，也可通过各种载体内源性表达。RNAi在基因功能研究选择上具有独特的价值，在疾病的治疗上也有良好的应用前景。     

RNA干扰与肿瘤治疗的研究进展

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)指与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA(double -strandedRNA ,dsRNA)导入细胞时 ,该序列mRNA发生特异性的降解 ,并导致基因表达的沉默。小干扰RNA(small-interferingRNA ,siRNA)是RNAi作用的主要介质。其可经体外合成再转入细胞 ,也可通过各种载体内源性表达。RNAi在基因功能研究选择上具有独特的价值 ,在疾病的治疗上也有良好的应用前景。     

环状RNA的研究进展

环状RNA(circular RNA,circRNA)又称环形RNA,是新近确认的一类特殊的非编码RNA(ncRNA),主要由外显子和(或)内含子构成。近年来研究发现,在某些疾病(如肿瘤、动脉粥样硬化、糖尿病、神经系统疾病)的发生发展过程中circRNA起着重要的调控作用,这不仅使我们对环状RNA有了更好认识,而且在某些疾病的诊断、治疗及预防方面也为我们提供了新的研究方向。     

微小RNA-143与肿瘤的相关研究进展

微小RNA-143(miR-143)在多种人类肿瘤中低表达,其通过干扰mRNA翻译,下调靶基因表达,参与个体发育、细胞凋亡、细胞增殖和分化等生命活动,从而调控体内许多重要生命活动,尤其在肿瘤的生长、侵袭、转移、耐药及预后等疾病进程中发挥重要作用.本文对miR-143在肿瘤的生长、治疗中表达情况的最新研究进展作一综述.     

非编码RNA对脑功能的影响

背景 非编码RNA（noncoding RNAs,ncRNAs）包括短链非编码RNA（microRNAs,miRNAs）和长链非编码RNA（long noncoding RNAs,lncRNAs）,二者均参与基因表达的调控,从而影响脑功能。目的 探讨ncRNAs对脑功能的影响。内容 阐述ncRNAs对中枢神经系统发育及中枢神经系统疾病的影响。 趋向 随着新的ncRNAs被发现,其对脑功能影响的研究也将更加深入。     

化学修饰小干扰RNA研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指转录双链的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)能够高效、特异地抑制同源基因的表达。近年来,RNAi以其快速、简便、特异、高效等优势被广泛应用于基因功能研究,肿瘤治疗和抗病毒感染等领域。而采用胆固醇、锁核酸、二硝基苯酚等化学基团对双链小干扰RNA(siRNA)的正义或反义链进行化学修饰,可增强siRNA的稳定性,提高其干扰活性,克服siRNA传统载体(病毒、质粒等)对机体潜在的风险性,避免脱靶、利于被细胞摄取等,在基础研究和临床治疗方面具有非常广阔的应用前景。     

短发卡RNA表达质粒的构建及对ΔNp63基因的抑制作用

目的构建ΔNp63特异性短发卡RNA（shRNA）表达质粒，检测ΔNp63-shRNA对膀胱移行细胞癌（TCCB）细胞株5637中ΔNp63信使RNA（mRNA）表达的抑制作用。方法设计合成ΔNp63 shRNA短链寡核苷酸，克隆到Pgenesil-1质粒载体中，构建ΔNp63特异shRNA表达质粒，在转染试剂介导下转染5637细胞，6孔板每孔加入0．4μg质粒。半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测ΔNp63 mRNA表达水平。结果经PstI＋Sail双酶切及测序鉴定ANp63，shR．NA表达质粒构建成功。在受转染的5637细胞内ΔNp63-shRNA干预组ΔNp63 mRNA水平明显低于control组与PBs组（P〈0．05），与control组和PBS组比较抑制率分别为57．3％和63．0％。结论ΔNp63特异性shRNA在5637细胞中对ΔNp63 mRNA表达显示出很好的抑制作用。     

小干扰RNA抑制人端粒酶逆转录酶基因对胃癌细胞增殖的影响

目的 应用小干扰RNA(siRNA)技术特异性抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因在胃癌SGC7901细胞中的表达,观察其对细胞增殖的影响.方法 hTERT基因的RNA干扰表达重组体用脂质体介导方法转染SGC7901细胞.荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测hTERT基因表达.TRAP-PCR法检测端粒酶活性、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖.结果 SGC7901细胞转染前后hTERT基因的表达强度分别为:转染pU6组平均表达量为6.5×105拷贝/μg RNA;转染pU6-hTERT-siRNA Ⅰ组平均表达量为4.1 × 104拷贝/μg RNA;转染pU6-hTERT-siRNAⅡ组平均表达量为5.4×104拷贝/μg RNA.转染pU6组与其余两组P值<0.01;转染pU6-hTERT-siRNA Ⅰ组和转染pU6-hTERT-siRNAⅡ组P值>0.05.端粒酶活性下降,细胞生长速度明显减慢.结论 小干扰RNA能有效抑制SGC7901细胞中hTERT基因表达,hTERT基因表达下调影响SGC7901细胞增殖.     

糖尿病肾病患者外周血单个核细胞前列腺素E1受体EP2 mRNA表达及其对PGE1治疗的影响

目的 探讨糖尿病肾病患者外周血单个核细胞前列腺素E1受体EP2 mRNA的表达及其对PGE1治疗的影响.方法 选择临床诊断为糖尿病肾病的67例患者作为研究对象,均给予前列腺素E1治疗,疗程2周,逆转录聚合酶链反应检测患者治疗前后外周血前列腺素E1受体EP2 mRNA表达水平,同时比较血压、尿蛋白及血肌酐水平变化.结果 糖尿病肾病患者治疗后外周血单个核细胞前列腺素El受体EP2 mRNA的表达水平较治疗前升高,且受体活性增高显著者疗效较好.结论 在糖尿病肾病发病过程中,EP2受体可能参与了糖尿病肾病的发病过程.糖尿病肾病患者PGE1的治疗效果与受体EP2 mRNA的表达相关.     

RNA干扰沉默酸性鞘磷脂酶1基因对人成纤维细胞凋亡的影响

目的为研发保护女性生殖细胞的小分子干扰RNA（siRNA）类药物,以人包皮成纤维细胞（HFF）为模型,检测靶向凋亡关键基因酸性鞘磷脂酶1（SMPD1）基因的siRNA对HFF凋亡的抑制作用。方法设计合成三对靶向SMPDI基因的siRNA并体外转染HFF细胞,转染后48h用丝裂霉素（MMC）诱导细胞凋亡。荧光定量逆转录-聚合酶链反应（O-RT-PCR）法及免疫印迹（Western blot）检测siRNA转染后SMPD1在mRNA水平和蛋白水平的变化,Annexin V—PI双染检测细胞凋亡率。用脂质体（lipofectamine 2000）和无干扰siRNA（NT siRNA）作为对照。结果siRNA1、2、3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为（67．0±9．0）％、0％、（45．0±2．1）％,以siRNA1最高,蛋白水平的抑制也呈现相同变化。siR-NA1组细胞凋亡率为15．2％,明显低于MMC组（26．3％）。结论靶向SMPD1的siRNA可以抑制人包皮成纤维细胞凋亡。     

miRNAs和肾癌关系的研究进展

MiRNAs由一类进化上保守的内源性非编码小分子RNA组成,参与细胞周期调控、凋亡和分化等重要细胞过程.MiRNAs的表达还与癌症相关,并在肿瘤发生、发展过程中发挥重要的作用.本文就miRNAs在肾癌中的研究进展作一综述.     

MicroRNA在膀胱癌方面的研究进展

近年来众多研究证实miRNA在人类大多数泌尿系肿瘤中表达异常,在肿瘤的发生和发展过程中起到癌基因或抑癌基因的作用.在膀胱癌中,miRNA也是重要的调控物质,与致癌机制密切相关.纵观近年来的文献,本文对miRNA在膀胱癌方面的研究进展作一综述.     

MicroRNA与膀胱癌的相关研究进展

MicroRNA( MiRNA)是一种长度约为22核苷酸的非编码RNA,主要通过碱基互补与靶mRNA的3’端非翻译区(3' UTR)结合,导致靶mRNA降解或抑制蛋白质的合成,在转录后水平调节基因的表达.MiRNA突变、缺失或表达水平的异常会导致生理的异常与疾病的发生,与人类肿瘤疾病密切相关.它具有类似于癌基因或抑癌基因的作用,可参与肿瘤细胞的增殖、分化和细胞凋亡等调控过程.膀胱癌是我国泌尿外科最常见的肿瘤,占全身恶性肿瘤的3.2％,其中来源于尿路上皮的肿瘤占95％以上,是一种直接威胁患者生存的疾病.研究表明,miRNA参与了膀胱癌的发生、发展,一些差异表达miRNA有望成为膀胱癌诊断、治疗的靶点.本文就miRNA在膀胱癌发病机理、诊断、治疗等方面的研究进展作一综述.     

miRNA在前列腺癌中功能的研究进展

前列腺癌在西方许多国家是男性最常见的恶性肿瘤,占男性癌症死因的第二位.经过雄激素剥夺治疗后,雄激素依赖性前列腺癌不可避免的会进展成为雄激素非依赖性前列腺癌,这是困扰医疗界的一个重要难题.目前对于前列腺癌的发生发展的机制仍然不甚明了.近来的研究表明,miRNA参与到人类肿瘤的发生过程中.而在前列腺癌细胞系、组织中也发现了一些异常表达的miRNA,并且在前列腺癌的进展发挥重要作用.本文对于最近在前列腺癌中异常表达的miRNA进行综述.现在虽然发现了许多前列腺癌相关的miRNA,但是只有少数进行了功能研究.miRNA是发挥致癌基因还是抑癌基因的作用,则需要对于其作用的目的mRNA的功能进行研究.而前列腺癌相关的miRNA具有致癌和抑癌的能力,因此它们将有可能在临床上作为肿瘤检测指标,或者将来作为肿瘤治疗的重要靶点.     

shRNA抑制SGC7901胃癌细胞绿色荧光蛋白基因的表达

目的：观察针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA(small hairpin RNA，shRNA)表达载体(SHi—pU6-GFP)对SGC7901胃癌细胞中GFP的抑制作用。方法：设计针对GFP基因的shRNA序列．构建SHi—pU6-GFP质粒。采用质粒pCX—GFP(5510bp)和含有鼠U6启动子pU6（3．3kb)质粒，应用Lipofectamine^TM2000将pCX-GFP质粒和SHi—pU6-GFP质粒转染SGC7901细胞。荧光显微镜观察转染效果和不同时间的转染效率。结果：质粒SHi-pU6-GFP经酶切电泳后，出现3．3kh和约350bp条带，与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符。说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi—pU6-GFP质粒。SGC7901细胞中观察到转染pCX—EGFP质粒和SHi—pU6-GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少：结论：shRNA可以有效地抑制SGC7901细胞中GFP基因的表达。     

Survivin基因对膀胱癌细胞体内生长的影响

目的探讨通过RNA干扰下调Survivin基因对膀胱癌细胞在体内生长的抑制作用。方法构建Survivin基因shRNA真核表达载体pRNAT-U6.1/neo-survivin,转染人膀胱癌细胞T24并获得稳定的单克隆细胞。观察裸鼠皮下移植瘤内注射靶向Survivin的siRNA及稳定转染pR- NAT-U6.1/neo—survivin对膀胱癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,肿瘤组织行免疫组织化学检测Survivin蛋白表达。结果经鉴定成功构建靶向Survivin的shRNA真核表达载体pRNAT-U6.1/neo-survivivn,稳定转染重组质粒的T24细胞Survivin mRNA表达下调达92.86%;瘤内注射50 mg siRNA-Survivin能够明显抑制肿瘤生长,与对照比较差异有统计学意义(P<0.01);未转染组在20 -29 d均发展为体积超过2000 mm3的肿瘤,转染组在43 d时形成3个体积不超过62.5 mm3肿瘤;免疫组织化学显示转染组肿瘤Survivin蛋白表达明显降低。结论裸鼠移植瘤内注射siRNA-sur- vivin明显抑制了肿瘤的生长;靶向Survivin的shRNA持久地抑制了膀胱癌T24细胞在体内的生长; Survivin基因可作为膀胱癌基因治疗的良好靶点。