日本血吸虫成虫与尾蚴共同抗原的探讨

日本血吸虫尾蚴经皮肤感染昆明杂种小鼠后,定期剖杀小鼠取血清,用间接免疫荧光抗体法测定尾蚴表皮结合的抗尾蚴IgG的水平,同时检查小鼠体内血吸虫的发育情况。实验结果表明,两性成虫感染的小鼠产生抗尾蚴抗体较雄性感染的小鼠出现得早,而且抗体含量高。抗尾蚴IgG能被撕碎的血吸虫虫体、或两性血吸虫成虫培养的上清液所中和,而未成熟卵、或成熟卵的培养物不能吸收机尾蚴IgG抗体。小鼠含抗尾蚴IgG抗体的感染血清可使成虫冷冻切片中的成虫表皮呈现荧光,而对成虫消化道或子宫上皮不出现免疫荧光反应。抗尾蚴IgG抗体阳性的感染血清经尾蚴吸收后,可使之对成虫表皮的荧光明显减弱。因此,日本血吸虫成虫表皮及其脱落物能在小鼠体内产生IgG此抗体能与尾蚴表皮抗原相结合,说明成虫与尾蚴及表皮之间存有共同抗原。     

日本血吸虫Sj32DNA疫苗免疫效果的观察

目的：探讨血吸虫Ｓｊ３２ＤＮＡ疫苗抗血吸虫感染的免疫效果。方法：采用ＰＣＲ技术,人工合成引物,以重组ＤＮＡｐＳｊ３２为模板,扩增出编码３２ｋＤａ天冬酰胺肽链酶,即Ｓｊ３２全长ｃＤＮＡ和引入了起始密码子终止密码子的部分ｃＤＮＡ片段,将其分别克隆到ｐＫＢ－ＣＭＶ,构建真核表达载体ｐＢＫ－Ｓｊ３２－１和ｐＢＫ－Ｓｊ３２－２。采用脂质体介导的基因转移将两种重组ＤＮＡ导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞,间接免疫荧光法证实Ｓｊ３２在真核细胞中表达。小批量制备纯化ＤＮＡ,进行动物免疫试验。将两种构建的真核表达载体分别直接ｉｍＢＡＬＢ／ｃ小鼠,共免疫３次,攻击感染后６ｗｋ剖杀小鼠。收集血清,ＥＬＩＳＡ法检测抗体水平,并计数成虫负荷及肝组织虫卵数。结果：ｐＢＫ－Ｓｊ３２－１组与ｐＢＫ－Ｓｊ３２－２组免疫小鼠后的减虫率分别为３８．６％和３０．９％,肝组织减卵率分别为５５．７％和５５．２％,与对照组比较,其间差别均具有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）。各ＤＮＡ疫苗免疫组能诱导一定水平的抗血吸虫抗体。结论：Ｓｊ３２ＤＮＡ疫苗可诱导小鼠产生一定程度的保护性免疫力,有可能作为血吸虫疫苗候选抗原分子。     

经γ线照射的日本血吸虫尾蚴接种小鼠诱导保护性免疫力的研究

本文对高剂量γ线照射的日本血吸虫尾蚴免疫接种小鼠后形成的保护性免疫力进行了研究.接种500条,分别经3、6、12、24和48Krad γ线照射的尾蛐后,检获攻击感染成虫数及肝组织虫卵数明显低于对照组,减虫率为34.2%—62.3%,减卵率为54.6%—73.1%.免疫接种后小鼠外周血T淋巴细胞数和血清IgG抗体高于对照组,免疫后互14dT淋巴细胞和IgG开始升高,攻击感染后 28d达最高水平.比较接种50条、100条、500条和1000条经24或48Krad γ线照线的尾蚴,攻击感染减虫率以接种500条尾蚴组为最高.结果表明接种500条,经24—48Krad γ线照射的日本血吸虫尾蚴能使小鼠产生最大的保护性免疫力.     

日本血吸虫Sj23DNA突变体疫苗的构建与鉴定

目的对日本血吸虫Sj23DNA进行缺失突变,构建Sj23DNA突变体疫苗,为寻求更佳免疫效果的疫苗奠定基础。方法利用重叠PCR技术将Sj23DNA上与ME491同源的部分碱基缺失,获得Sj23DNA的突变体,将其克隆入真核表达载体pcDNA3的多克隆位点上,构建重组质粒pcD-NA3-Sj23突变体,进行酶切和测序鉴定,并用CLUSTALX和primerpremier软件将测序的结果与Sj23DNA序列进行分析。结果序列分析显示pcDNA3-Sj23突变体缺失序列与原设计一致,双酶切pcDNA3-Sj23突变体获得预期大小的DNA片段。结论成功构建了缺失与ME491同源部分碱基的质粒pcDNA3-Sj23突变体。     

日本血吸虫97kDa DNA疫苗与致弱尾蚴疫苗诱导免疫应答特征的比较研究

目的　对比观察日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因疫苗(Sjc97DNA)与紫外线致弱尾蚴(UVC)疫苗免疫C57BL6小鼠诱导的抗感染保护力及免疫应答特征。　方法　以Sjc97DNA核酸疫苗经后腿胫前肌免疫C57BL6小鼠共2次,每次间隔3wk,末次免疫后3wk攻击感染日本血吸虫尾蚴;UVC疫苗接种同种小鼠后5wk攻击感染上述等量尾蚴。均于攻击感染后7wk计数虫负荷及肝卵负荷。并设空质粒对照及感染对照组。用ELISA分析免疫鼠攻击感染前后血清特异性IgG、IgA及亚型抗体水平,以及脾淋巴细胞体外诱生的细胞因子水平。　结果　Sjc97DNA疫苗及UVC疫苗免疫小鼠均诱生出以Th1型免疫应答为主的IL2、IFNγ及特异性抗AWA、SEAIgG2a、IgG2b亚型及IgA抗体,UVC疫苗组小鼠各细胞因子及抗体水平均显著高于Sjc97DNA疫苗组,但两疫苗组均未测及IL4。攻击感染后,Sjc97DNA疫苗组的减虫率36.3%、减卵率42.4%,明显低于UVC疫苗组的66.9%和75.6%。攻击感染后7wk,两疫苗组小鼠Th2型免疫应答虽有所增强,但仍以Th1型免疫应答占优势;而空质粒对照组和感染对照组小鼠则以Th2型免疫应答为主。　结论　核酸疫苗与紫外线致弱尾蚴疫苗均能诱导产生抗感染免疫保护力,致弱尾蚴疫苗的免疫保护力高于Sjc97DNA。两疫苗诱导的抗感染     

用放射自显影分析比较正常尾蚴和照射尾蚴免疫的小鼠体内曼氏血吸虫的移行情况

实验动物用8～9周的雌性C_(57)BL/6J小鼠和曼氏血吸虫波多黎各株。1.免疫:尾蚴先用~(60)钴放出的50Kradγ-射线照射1～2小时后,将小鼠尾巴浸在约1,000条尾蚴的疫水中1小时作为免疫。以免疫后小鼠为一组,未经免疫的为对照组。2.制备(75)铯所标记的曼氏血吸虫尾蚴:把阳性钉螺置于1ml含有20μCi的L-(~(75)铯)牺蛋氨酸的自来水     

日本血吸虫在猪体内先天性传播的实验研究

一般认为血吸虫是经皮肤感染终宿主的,但在本世纪初和50年代日本学者就多次指出日本血吸虫有先天性传播的可能,并报道了日本血吸虫在犬、啮齿动物、兔和人体内的先天性传播。本文报道了日本血吸虫在猪体内先天性传播的实验研究结果。 研究对象为母猪8头,分为3组,即E组,含早期怀孕(4周)母猪3头;M组,含中     

致弱尾蚴免疫血清与日本血吸虫不同发育阶段抗原免疫反应性的研究

目的　通过比较分析日本血吸虫不同发育阶段抗原的异同 ,并以致弱尾蚴免疫血清识别不同发育阶段抗原 ,筛选具有保护性免疫作用的抗原分子。方法　分离制备日本血吸虫未成熟虫卵、成熟虫卵、尾蚴、雄性成虫、雌性成虫等不同发育阶段的抗原 ;采用ELISA分别测定正常尾蚴感染兔血清、紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清抗原的抗体水平 ;通过SDS PAGE电泳和免疫印迹技术 ,分析正常尾蚴感染血清与紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清对不同发育阶段的免疫反应性。结果与结论　SDS-PAGE结果显示未成熟虫卵抗原、成熟虫卵抗原、尾蚴抗原、雄性成虫抗原、雌性成虫抗原蛋白之间互有异同。间接ELISA试验显示致弱尾蚴免疫血清同样能诱导宿主产生高滴度的抗体水平。致弱尾蚴免疫血清共筛选出 2 3种具免疫学活性的抗原分子 ,分子量分别为 :2 4 .5kDa、2 8kDa、36kDa、4 3kDa、4 4kDa、4 8kDa、5 4kDa、5 8.5kDa、6 0kDa、6 2kDa、6 6kDa、6 8kDa、70kDa、75kDa、79kDa、85kDa、87kDa、91kDa、95kDa、97kDa、10 5kDa、10 8kDa、110kDa。其中未成熟虫卵和成熟虫卵抗原各占 11种 ,尾蚴抗原分子 4种 ,雄性成虫抗原分子 3种 ,雌性成虫抗原分子 6种 ,提示这些抗原分子可能为抗日本血吸虫病疫苗候选分子的重要靶标     

日本血吸虫24-26kDa抗原和重组Sj26抗原的抗原性和免疫原性比较研究

本文报告从日本血吸虫大陆株成虫抽提的24—26kDa抗原与源于日本血吸虫菲律宾株的重组Sj26抗原之间在抗原性和免疫原性上所进行的一系列比较研究。ELISA、IFA和Westernblotting等方法观察结果均表明,24—26kDa和rSj26抗原免疫后所诱导的特异性抗体与其对应的抗原之间具有明显的抗原交叉反应,而与其它血吸虫抗原如可溶性虫卵抗原也有交叉反应。若以两种抗原加福氏佐剂分别免疫小鼠,以日本血吸虫大陆株尾蚴攻击感染,减虫率相似(26～32％),表明两种抗原存在一定程度的交叉免疫保护性。这些研究结果为开发rSj26抗原,或是根据已知Sj26 cDNA核苷酸序列制备DNA探针,从已构建的日本血吸虫(大陆株)cDNA库筛选相关目的基因,加速血吸虫疫苗的研制起着重要作用。     

在牛体对已确定的抗牛血吸虫和日本血吸虫抗原疫苗的评价

因射线致弱活虫苗来源困难且需液氮冷藏运输,不适于大规模现场应用,故对保护性抗原疫苗的研究日益受到重视。目前已对多种保护性抗原在分子水平上作了鉴定,并已应用于啮齿类或某些灵长类动物模型以观察保护效果。作者采用牛血吸虫和日本血吸虫的天然宿主——牛来评价候选抗原疫苗的保护效果。     

γ射线照射对小鼠体内曼氏血吸虫童虫的移行和存活的影响

本文作者用不同照射量的γ射线照射曼氏血吸虫童虫,经肌肉注射感染小鼠,以观察血吸虫童虫在鼠体内的移行和存活的情况。用 T.O.远系繁殖的第6周雄鼠。虫体的回收是用门脉系统灌注法和肺组织内虫体的回收相结合,灌注液用含25单位/毫升肝素的 Hanks 平衡盐溶液。鼠肺内血吸虫童虫的回收,采用把切细的肺组织经孵育3小时和24小时后收集的方法。用组织压片法镜检肝组织内的虫卵,并用 Doenhoff 等(1978) 所描述的方法推算虫卵数。根据卵的孵化力确定卵的活力。成虫用乙酰-明矾胭脂红染色以观察生殖器官。     

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原编码基因的核酸疫苗研究

为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性,将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验,结果表明此重组质粒能在小鼠体内持续存在、稳定表达并诱导小鼠产生特异性的抗Ｓｊ２２．６ 抗体,但未能诱导有效的保护力     

日本血吸虫重组抗原rSjGST-32诱导小鼠保护性免疫效果的比较

目的　探索日本血吸虫重组抗原rSjGST-32适合的免疫剂量。　方法　以50、100、200μg3个不同剂量rSjGST-32加佐剂皂角甙A(QuilA)50μg免疫BALB/c小鼠,同时设QuilA和PBS对照组。ELISA法检测抗体水平。末次免疫4wk后攻击感染,用减虫率及减卵率表示保护力。　结果　与PBS对照组比较,50、100、200μgrSjGST-32组的减虫率分别为38.1%,47.8%和48.8%;每克肝卵(LEPG)减少率分别为39.1%,53.5%和53.6%;每条雌虫每克肝所含虫卵数(LEPF)减少率分别为22.5%,22.8%和21.8%;抗体滴度分别达1∶51200,1∶102400和1∶102400。　结论　重组抗原rSjGST-32加QuilA佐剂免疫小鼠,以100μgrSjGST-32剂量较为适合。     

日本血吸虫(中国大陆株)基因工程疫苗的研究

本文报道应用PCR技术或RT－PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库或成虫mRNA中扩增到Sj28GST、C－Sjparamyosin、H-Sj23、Sj14、Sj22．6和Sj．TPI6个编码日本血吸虫中国大陆株抗原的基因，并把它们克隆入适合载体中，在大肠杆菌系统和蚕核型多角体病毒（BmNPV）系统中进行表达．免疫学检测证明这6种基因重组抗原都具有较好的抗原性。我们进一步应用4种比较成熟的基因重组抗原Sj26GST、Sj28GST、C－Sj．paramyosin和H－Sj23进行3批绵羊试验和1批黄、水牛田间试验，评估这几种重组抗原在绵羊和黄、水牛中的免疫保护效果，rSj26GST和rSj28GST分别获得62．1％和50.4％－68.5％的显著保护；n－paramyosin获得42.9％－55．3％、r－C－paramyosin获得44．2％－47．1％的显著保护，r－H－Sj23为51．2％－66．1％的显著保护．各组免疫后的粪便虫卵数和组织虫卵数也有不同程度的减少．用r－C－Sjparamyosin、r－Sj28GST和r－H－Sj23免疫典、水牛在血吸虫重疫区田间试验的结果表明，减虫率水牛高于黄牛，显示上述试验的3种日本血吸虫重组分子抗原有希望成为家畜日本血吸虫病的候选疫苗抗原．     

血吸虫疫苗候选抗原-谷胱甘肽S转移酶(GST)抗原的研究近况

GST为一组具有解毒功能的酶。曼氏血吸虫及日本血吸虫水溶性26-28KD蛋白质抗原具有GST酶活性。这类蛋白质抗原被认为是目前很有希望的血吸虫疫苗候选抗原。本文就近年来对血吸虫GST的研究情况作一概述:1理化性质;2免疫学特性;3基因克隆及表达等。     

日本血吸虫循环阳极抗原(CAA)和循环阴极抗原(CCA)的纯化

近年来对血吸虫病的免疫学诊断的研究大多集中在检测循环抗原方面。理由是：①检出循环抗原可以反映活动性感染情况；②患者治疗后循环抗原消失较快，可用于判断治疗效果；③循环抗原的定量在一定程度上可反映虫负荷。所用方法主要为以单克隆抗体为基础的夹心法－ＥＬＩＳ...     

日本血吸虫成虫微粒体抗原(JAMA)的纯化及其临床研究

我们近与美国疾病控制中心Tsang协作分离得日本血吸虫成虫微粒体抗原(JAMA),并对其组成、理化特性和宿主反应进行了分析研究。我们发现JAMA和SEA经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,可分离到18～25种和12种分子量在1.4万～20万道尔顿的蛋白质组分,说明JAMA和SEA仍为组分复杂的复合体。同时还发现JAMA和SEA有一共同抗原组分。采     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原Sj22.6kDa基因克隆与表达的研究

目的 :分离 Sj2 2 .6抗原基因 ,构建 Sj2 2 .6表达克隆。方法 :抗体筛选 Sj成虫 c DNA库 ,PCR扩增目的基因片段 ,亚克隆入表达载体 p GEX- 1λt。对重组体进行诱导表达并对表达产物进行 SDS- PAGE和 Western blot分析。结果 :PCR扩增产物为约 930 bp的 DNA条带。亚克隆入p GEX- 1λt,获得两个表达克隆 p GSj6和 p GSj2 4 ,特异性表达产物为 2 2 .6k Da抗原。重组体的表达方式为分离表达。结论 :从日本血吸虫成虫 c DNA库筛选到 Sj2 2 .6k Da克隆化基因 ,并构建了表达克隆 p GSj2 4和 p GSj6。