华支睾吸虫亚星微结构的研究V.精细胞的分化

目的：研究华支睾吸虫精子的形成。方法：以囊蚴感染家兔，剖检获取成虫，切取睾丸段做超薄切片，电镜观察。结果：精原细胞分布在睾丸被膜下，睾丸深部分布着不同分化阶段的精母细胞、精细胞和精子，精母细胞行不完全分裂，从而存在细胞在细胞质间桥，将３２个精母细胞联接在一起，进行同步发育。结论：华支睾吸虫精子的分化分为两个连续的阶段，一、由精原细胞依次向初级精母细胞、次级精母细胞和精细分化；二、由精细胞分化、变形     

蒺藜皂苷对环磷酰胺致小鼠生精细胞凋亡的保护作用

目的研究蒺藜皂苷对环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)所致小鼠生精细胞凋亡的保护作用,探讨蒺藜皂苷对生殖功能障碍小鼠的保护机制。方法将8周龄的雄性昆明种小鼠随机分为3组,对照组采取腹腔注射生理盐水,模型组和治疗组采取连续5d腹腔注射CP 80mg/(kg·d),腹腔注射同时将对照组和模型组小鼠连续灌胃生理盐水,治疗组小鼠连续灌胃蒺藜皂苷200mg/(kg·d)35d。比较各组小鼠体质比及睾丸重量;检测附睾精子密度、活精子百分率、精子活力和精子畸形率;HE染色观察睾丸生精上皮的发育;TUNEL法检测生精细胞的凋亡;Western blot检测睾丸组织中凋亡相关蛋白Caspase-8表达水平的变化。结果与模型组比较,蒺藜皂苷显著提高了生精功能损伤小鼠的精子密度、活精子百分比、精子活力,降低了精子畸形率,促进了生精小管上皮精原细胞及精子细胞的发育,上调了睾丸组织中Caspase-8的表达水平,使生精细胞的凋亡减少。结论蒺藜皂苷能显著修复CP所致的小鼠睾丸损伤,其修复机制可能通过上调Caspase-8的表达,拮抗环磷酰胺引起的生精功能损伤,减少生精细胞的凋亡。     

华支睾吸虫亚显微结构的研究 Ⅴ 精细胞的分化

目的:研究华支睾吸虫精子的形成。方法：以囊地感染家兔,剖检获取成虫,切取睾丸段做超薄切片,电镜观察。结果：精原细胞分布在睾丸被膜下,睾丸深部分布着不同分化阶段的精母细胞、精细胞和精子,精母细胞行不完全分裂,从而存在细胞质间桥,将32个精母细胞联接在一起,进行同步发育。结论：华支睾吸虫精子的分化分为两个连续的阶段,一、由精原细胞依次向初级精母细胞、次级精母细胞和精细胞分化;二、由精细胞分化、变形,形成精子,本文报告为前一阶段。     

慢传输型便秘大鼠结肠组织GFRα1、RET、NCAM的表达以及外源性GDNF的影响

背景：研究证实胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）既可抗神经元凋亡．又可阻止神经细胞胞体萎缩．从而改善肠道动力,但其具体机制目前仍未完全明了。目的：研究慢传输型便秘（STC）大鼠结肠组织中GFRα1、RET、NCAM的表达以及外源性GDNF对其的影响,从而探讨GDNF保护STC大鼠结肠神经元的途径及其信号转导机制。方法：44只大鼠随机分为对照组和模型组,以大黄灌胃建立STC模型。造模成功后．对照组进一步分为正常对照组和GDNF组,模型组分为STC组和STC＋GDNF组。GDNF组和STC＋GDNF组大鼠尾静脉注射rhGDNF．其余两组注射O．9％NaCl溶液。1周后处死大鼠,采用免疫组化法检测结肠组织中GFRα1、RET、NCAM表达。结果：STC组GFRα1、NCAM表达较正常对照组显著减弱（P〈0．05）;STC组大鼠以GDNF干预后,GFRα1、NCAM表达较STC组显著增强（P〈0．05）;GDNF组GFRα1、NCAM表达亦较STC组、正常对照组显著增强（P〈0．05）。RET仅在正常对照组结肠组织少量表达,其余各组均无表达。结论：长期使用大黄可减弱结肠组织中GFRα1、NCAM的表达,外源性GDNF可能通过GDNF—GFRα1—NCAM途径而非GDNF—GFRα1—RET途径进行信号转导．从而保护结肠神经元。     

弓形虫急性感染小鼠睾丸的病理学及发病机理的研究

目的　观察弓形虫急性感染小鼠睾丸的病理学变化及探讨其发病机理。方法　将弓形虫急性感染和正常对照NIH小鼠睾丸做印片及切片 ,观察生精细胞的病理变化及弓形虫侵入细胞的情况 ;应用免疫组化S -P法进行弓形虫抗原及bcl 2、c myc、P53、bax的检测。结果　弓形虫急性感染组小鼠睾丸印片中见生精细胞胞质及核内弓形虫速殖子 ;睾丸切片病理变化为生精停滞 ,精原细胞胞质空泡性变。免疫组化染色显示弓形虫 ;bcl 2及c myc在感染组和正常组间的表达无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;P53及bax在两组间均未表达。结论　弓形虫急性感染小鼠睾丸生精停滞等病理变化可能是弓形虫及其分泌的毒素直接损害、干扰生精细胞生成及分裂发生障碍和死亡的结果 ,与凋亡基因无明显关系     

弓形虫急性感染小鼠睾丸的病理学及发病机理的研究揪

目的观察弓形虫急性感染小鼠睾丸的病理学变化及探讨其发病机理.方法将弓形虫急性感染和正常对照NIH小鼠睾丸做印片及切片,观察生精细胞的病理变化及弓形虫侵入细胞的情况;应用免疫组化S-P法进行弓形虫抗原及bcl-2、c-myc、P53、bax的检测.结果弓形虫急性感染组小鼠睾丸印片中见生精细胞胞质及核内弓形虫速殖子;睾丸切片病理变化为生精停滞,精原细胞胞质空泡性变.免疫组化染色显示弓形虫;bcl-2及c-myc在感染组和正常组间的表达无统计学意义(P＞0.05);P53及bax在两组间均未表达.结论弓形虫急性感染小鼠睾丸生精停滞等病理变化可能是弓形虫及其分泌的毒素直接损害、干扰生精细胞生成及分裂发生障碍和死亡的结果,与凋亡基因无明显关系.     

医源性隐睾的防治

医源性隐睾是指医疗行为发生之前，睾丸证实在阴囊内，而在医疗行为结束后睾丸移至腹股沟区。临床上医源性隐睾并不少见，如不及时处理，将影响患侧睾丸的生长发育，甚至丧失生精能力。并有潜在的恶变可能。我院自1995年1月～2004年1月共收治医源性隐睾患者16例，现结合其发生原因．探讨本病的防治方法。     

结核菌L型感染诱导小鼠生精细胞凋亡的实验研究

目的 探讨结核菌L型感染能否引起生精细胞凋亡,从而推测结核菌L型感染与男性不育的关系。方法 用牛型结核分支杆菌L型反复直接注入成年雄鼠睾丸内,40天后取睾丸组织分别作HE染色及凋亡细胞的原位末端标记显示（ISEL）。结果 实验组20列雄性小鼠有15例曲细精管的生殖细胞有凋亡;对照组20例无一例有生精细胞凋亡;两者生精细胞凋亡有显著性差异（P＜0．005）。结论 结核菌L型感染可引起小鼠生精细胞凋亡;结核菌L型感染与男性不育可能有一定关系。     

生精胶囊有效成分体外诱导小鼠精原干细胞的生长观察

取5～7d龄昆明系雄性小白鼠的睾丸，分离精原干细胞（SSCs），培养3d后分为两组；对照组用DMEM／F12完全培养液培养，实验组用条件培养液（DMEM／F12完全培养液中添加生精胶囊有效成分）培养。结果显示，实验组SSCs较对照组生长快，培养3～7d见细胞生长迅速，呈集落样生长，细胞立体感增强，但未见明显细胞间桥；培养15d见细胞增殖达高峰，增殖细胞的胞质间桥仍然不明显，其吸光度值及DNA倍体与对照组相比，P均〈0．01。认为小鼠SSCs在生精胶囊有效成分诱导下能较快速生长与增殖。     

细辛、杜仲及其合剂对D-半乳糖所致衰老小鼠睾丸影响的形态学研究

目的 探讨细辛、杜仲及其合剂对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用。方法 应用光镜电镜技术测定小鼠睾丸的重量、生精小管直径、生精上皮细胞数、间质细胞数的随龄变化，同时观察了细辛、杜仲及其合剂对上述指标的影响。结果 随增龄，睾丸重量减轻，生精小管直径缩小。衰老时生精细胞缺如，仅剩支持细胞或见散在分布，间质细胞随龄递减。细辛、杜仲及其合剂可以使小鼠的生精小管增粗，生精过程活跃，生精细胞增多，间质细胞增多。结论 细辛，杜仲及其合剂具有一定的抗衰老作用，合剂的抗衰老作用优于细辛组和杜仲组。     

基质细胞衍生因子1对骨髓单个核细胞向肝脏迁移分化的影响

目的 探索基质细胞衍生因子1对骨髓单个核细胞向肝脏迁移、分化的影响。方法建立小鼠CCl4-AAF肝损伤模型，从小鼠骨髓中分离出骨髓单个核细胞，以荧光染料PKH26标记后经尾静脉输入肝损伤模型的小鼠体内，实验组立即给予肝内注射基质细胞衍生因子1，对照组给予肝内注射盐水，12d后取肝组织，在荧光显微镜下观察两组骨髓单个核细胞向肝脏迁移的差异，并用免疫组化法测定移植细胞的白蛋白表达。结果 PKH26标记阳性的细胞20倍镜下实验组中每张切片平均迁移数为（195．40±9．095）个，对照组平均迁移数为（169．80±7.983）个（P〈0．05）。免疫组化显示移植细胞可以表达白蛋白。结论 基质细胞衍生因子1可以促进骨髓单个核细胞向肝脏迁移，并且迁移至肝脏的骨髓单个核细胞可以向肝细胞分化。     

细辛、杜仲及其合剂对亚急性衰老小鼠睾丸及血清睾酮影响的实验研究

目的研究细辛、杜仲及其合剂对亚急性衰老小鼠睾丸、精子及血清睾酮的影响。方法选昆明系雄性小鼠,用D-半乳糖制备衰老模型。应用光镜、电镜技术检测细辛、杜仲及其合剂治疗前后衰老小鼠睾丸及精子的形态学改变;放射免疫技术检测血清睾酮的变化。结果衰老小鼠睾丸重量减轻,生精细胞缺如,精子密度及活动率下降,血清睾酮含量明显降低(模型组与青年组比较:P<0.01);用药后,睾丸重量增加,生精小管增粗,生精细胞增多,生精过程活跃,精子密度及活动率明显提高,血清睾酮含量增加(P<0.05)。合剂组的作用优于杜仲组和细辛组(P<0.05)。结论细辛,杜仲及其合剂可改善衰老小鼠的生精功能,明显抑制衰老小鼠血清睾酮含量的下降,具有一定延缓衰老的作用。     

燃煤型氟中毒大鼠睾丸组织中SCFmRNA的表达变化及意义

目的观察睾丸干细胞因予（SCF）在燃煤型氟中毒大鼠睾丸组织中的表达变化。方法将20只雄性SD大鼠随机分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组（后三组为染毒组）,各5只。除对照组外,余各组均喂饲含不同比例的燃煤型氟中毒病区煤烘玉米的饲料,制作燃煤型氟中毒动物模型。90d后,取大鼠睾九,采用透射电镜观察睾丸支持细胞的超微结构,用RT-PCR法检测睾丸组织中SCFmRNA。结果氟中毒模型成功建立。电镜观察可见染毒组睾丸组织中支持细胞核高度畸形染色质边集,胞质空泡化,初级溶酶体增多。低、中、高氟组睾丸组织SCFmRNA相对表达量分别为0．71±0．05、0．68±0．01、0．49±0．02,均低于对照组的0．73±0．03（P分别〈0．05、0．01、0．01）;低、中、高氟组睾丸组织中SCFmRNA表达依次降低（P均〈0．05）。结论燃煤型氟中毒能降低大鼠睾丸组织中SCFmRNA表达;其SCFmRNA下调和睾丸支持细胞损伤在氟中毒所致生精障碍中可能起重要作用。     

肉膜囊睾丸固定术治疗隐睾(附70例报告)

采用阴囊肉膜囊固定术治疗隐睾７０例（８６个隐睾）。术后随访２～５年，睾丸位置优良率为９２％，睾丸回缩率为２％；睾丸发育与对侧或同龄儿童正常睾丸相比，容量仅差１．０～１．５ｍｌ。     

肉膜囊睾丸固定术治疗隐睾

采用阴囊肉囊固定术治疗隐睾７０例（８６个隐睾）。术后随访２－５年，睾丸位置优良率为９２％，睾丸回缩率为２％；睾丸发育与对侧或同龄儿童正常睾丸相比，容量在工．０－１．５ｍｌ。     

天年饮对亚急性衰老大鼠睾丸生精细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察天年饮对亚急性衰老大鼠血清超氧化物歧化酶 (SOD)活性、睾酮含量及睾丸生精细胞增殖与凋亡的影响。方法　 D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老大鼠模型 ,检测各组大鼠天年饮灌胃前后血清 SOD的活性、睾酮的含量以及睾丸生精细胞增殖和凋亡的情况。结果　 D-半乳糖致亚急性衰老大鼠血清 SOD活性、睾酮含量及睾丸生精细胞 PCNA阳性表达率均明显下降 ,与正常组比较差异显著 (P<0 .0 1 ,P<0 .0 5) ;经天年饮灌胃后 ,三者均有明显提高。 D-半乳糖致亚急性衰老大鼠睾丸生精小管凋亡百分率及凋亡阳性细胞率均增高 ,与正常组比较差异显著 (P<0 .0 5) ;经天年饮灌胃后 ,二者均降低。结论　天年饮可显著提高亚急性衰老大鼠血清 SOD活性、睾酮含量及睾丸生精细胞 PCNA的表达水平 ,降低睾丸生精细胞的凋亡指数 ,因此 ,天年饮具有延缓性腺衰老的作用。     

刚地弓形虫感染对小鼠生精细胞凋亡的影响

目的探讨刚地弓形虫感染对小鼠生精细胞(单倍体、二倍体、四倍体)凋亡的影响程度,进一步阐明弓形虫致雄性不育的机制。方法选用9~10周龄雄性BALB/c小鼠60只,随机分为PBS正常对照组、刚地弓形虫纯化速殖子感染组(2.5×103、5×103、1×104、2×104)及环磷酰胺阳性对照组。采用腹腔注射法建立刚地弓形虫感染致小鼠睾丸损伤的模型,病理切片观察,流式细胞仪检测各组小鼠睾丸各倍体生精细胞的凋亡情况,免疫组化测定睾丸凋亡蛋白bcl-2、bax的变化,进行图像分析。结果正常对照组未出现明显的凋亡峰,实验组小鼠睾丸的单倍体、二倍体细胞均出现明显凋亡,尤以二倍体明显,同时四倍体细胞明显减少;睾丸细胞bcl-2的表达无明显改变,但bax的表达量随攻虫剂量增加而增加。结论弓形虫可致小鼠睾丸各级生精细胞凋亡,对二倍体细胞的影响尤为明显。     

丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响

目的通过体外细胞实验阐明丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响。方法体外培养小鼠RAW264.7细胞,以氧化型低密度脂蛋白诱导为泡沫细胞模型,并用不同浓度的丹参酮ⅡA进行处理,通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶比色法定量检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,荧光定量PCR和WesternBlot检测细胞中CD36、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、肝脏X受体α(LXRα)、过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)及PPARγ的mRNA和蛋白表达。结果 0～20 mg/L的丹参酮ⅡA对泡沫细胞增殖活力无明显影响,20 mg/L丹参酮ⅡA干预后,泡沫细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值显著降低,细胞内脂质累积减少,并上调AB-CA1、LXRα和PPARα的mRNA和蛋白表达,但对CD36表达无明显作用。结论丹参酮ⅡA能抑制泡沫细胞的形成,其机制可能是通过诱导PPARα、LXRα和ABCA1表达,促进胆固醇的外排。     

lncRNA MIR155HG通过调控miR-133a-3p/Furin轴对心肌成纤维细胞增殖、迁移、分化和胶原合成的影响

目的 探讨长链非编码RNA MIR155宿主基因(lncRNA MIR155HG)对心肌成纤维细胞增殖、迁移、分化和胶原合成的影响及分子机制。方法 构建小鼠心肌梗死模型。分离心肌成纤维细胞,然后分为沉默对照组、沉默MIR155HG组、沉默MIR155HG和抑制物对照组、沉默MIR155HG和干扰miR-133a-3p组、沉默MIR155HG和过表达弗林蛋白(Furin)组。实时荧光定量PCR检测MIR155HG、miR-133a-3p和Furin表达水平;MTT法检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移;Western blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、血管内皮生长因子(VEGF)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;荧光素酶报告实验检测MIR155HG和miR-133a-3p以及miR-133a-3p和Furin的靶向关系。结果 在心肌梗死模型小鼠心脏组织中MIR155HG、Furin高表达,miR-133a-3p低表达(P＜0.05)。抑制MIR155HG表达后心肌成纤维细胞的细胞活力、迁移细胞数及Cyclin D1、VEGF、Col-1、α-SMA表达水平显著降低,P21表达水平显著升高(P＜0.05)。MIR155HG靶向调控miR-133a-3p,miR-133a-3p靶向调控Furin。抑制miR-133a-3p表达和过表达Furin逆转了抑制MIR155HG表达对心肌成纤维细胞增殖、迁移、分化和胶原合成相关蛋白的抑制作用。结论 抑制MIR155HG表达可抑制心肌成纤维细胞增殖、迁移、分化和胶原合成,其机制可能与调节miR-133a-3p/Furin轴有关。     

胰岛素样因子3受体(LGR8)在生精细胞与精子顶体中表达

使用免疫共沉淀及Western印迹,检测胰岛素样因子3(Insl3)受体(LGR8)在野生型(Wt)及Insl3基因敲除鼠(K0)睾丸表达情况.取胚胎18天(E18)和出生后(P)1、3、7、14、17、20、23、51和90天Wt及KO鼠睾丸及Wt小鼠精子,用免疫组化法检测LGR8表达.LGR8蛋白在所有年龄段小鼠睾丸间质细胞均为Wt着色强于KO鼠(均P＜0.05).LGR8蛋白在小鼠睾丸的表达随年龄变化;除了在出生1天的Wt小鼠睾丸精细胞上强表达外,主要表达在青春期后、成熟的精细胞上及精子的顶体.