卵黄囊移植人脐血CD34+细胞构建人源化血液系统小鼠模型

背景：与较为成功的羊等大型动物宫内移植方法相比，利用小鼠等小型动物宫内移植异种造血干细胞仍面临困境，在外周血内检测到的异种血液细胞重建率仍在1%以下。 目的：观察小鼠卵黄囊移植人脐血来源CD34+造血干细胞后的异种造血重建效率，并与腹腔移植的效果进行比较。 设计、时间及地点：细胞学体内移植实验，于2007-10在北京大学干细胞与再生生物学实验室完成。 材料：健康新生儿脐血取自北京海淀区妇幼保健院。ICR小鼠由北京大学医学部实验动物中心提供，孕8.5 d鼠8只，孕 12.5 d鼠9只。藻红蛋白标记的抗人CD45单克隆抗体与流式细胞仪均为BD公司产品。 方法：采用Ficol1法梯度离心获得人脐血单个核细胞，经磁珠分选系统纯化获得CD34+细胞。将孕8.5 d鼠麻醉后，打开腹腔并暴露子宫，显微镜下抽取5~10 μL脐血CD34+细胞（5×104个），缓慢注入胎鼠的卵黄囊中。相同操作条件下将等量脐血CD34+细胞注射到孕12.5 d胎鼠的腹腔中。快速抽针，将孕鼠子宫归位并缝合腹腔，继续妊娠，等待分娩。待小鼠出生后3个月，经尾静脉取血，在避光状态下加入藻红蛋白标记的抗人CD45单克隆荧光抗体，流式细胞仪检测血细胞表面标记CD45的表达，通过其阳性率判断人血液细胞在小鼠体内的重建效果。 主要观察指标：不同移植方式对小鼠造血重建的影响。 结果：CD34+细胞通过卵黄囊移植方式共获得健康出生小鼠52只，3个月后86.5%（45/52）小鼠CD45呈阳性表达，嵌合率高达4.34%。通过腹腔移植方式共获得健康出生小鼠48只，3个月后81.3%（39/48）小鼠CD45呈阳性表达，明显低于卵黄囊移植方式（t=2.363, P < 0.05）。 结论：早期卵黄囊移植可以获得人造血干细胞在小鼠体内的长期重建，效果优于腹腔移植，同时也证明了通过胎鼠卵黄囊移植人脐血造血干细胞取得人源化造血系统小鼠模型的可行性。     

猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建的调节效应★

目的：人脐血造血干细胞得以移植于小鼠体内，其理论基础是放射线照射使小鼠骨髓枯竭，龛位腾出，为移植的脐血造血干细胞提供空间，而猪苓多糖是从中药猪苓中提取的多糖成分，具有免疫调节抗肿瘤作用，也是一种非T细胞促有丝分裂素，对放射线照射有一定的防护作用。观察猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建效应。 方法： 实验于2004-06/2006-05在兰州大学基础医学院免疫研究所完成。①实验材料：清洁级BALB/c小鼠由兰州生物制品研究所提供，8周龄，体质量约20 g，雌雄各半，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。脐血样本由兰泰医院妇产科提供，产妇及家属对实验知情同意，并经医院伦理委员会批准。猪苓多糖由兰州大学第一医院提供。②实验方法：应用20，17.5，12.5，7.5 mg/L猪苓多糖体外扩增培养脐血造血干细胞，并测定细胞增殖率及CD34+细胞数。将BALB/c小鼠分为正常对照组：尾静脉、腹腔注射等量生理盐水；照射空白组：3.5Gy经60Coγ放射线照射联合尾静脉、腹腔注射等量生理盐水；照射药物组：3.5Gy经60Coγ放射线照射联合尾静脉注射等量生理盐水、腹腔注射猪苓多糖；照射移植组（n =15）：3.5Gy经60Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射等量生理盐水；照射移植药物组：3.5Gy经60Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射猪苓多糖。③实验评估：观察小鼠生存状况及血常规变化，流式细胞仪测定CD3、CD4、CD8、CD19水平。 结果：57只小鼠均进入结果分析。①12.5 mg/L猪苓多糖增殖效率最为显著（P < 0.01），流式细胞仪测定显示CD34+细胞数扩增了6.33倍。移植药物组小鼠死亡率最低，死亡高峰集中在照射移植后7~14 d左右。②移植药物组小鼠血象恢复正常，并且时间明显短于其他实验组（P < 0.05）。③细胞及体液免疫恢复情况，移植药物组小鼠各项指标水平与正常小鼠无差别（P > 0.05），与其他各组小鼠比较，除CD4、CD19水平与照射移植小鼠无差别外均有差别（P < 0.05）。 结论：猪苓多糖对脐血造血干细胞有明显扩增作用，并能促进脐血造血干细胞移植小鼠免疫造血重建。     

自体骨髓干细胞移植对心力衰竭患者近期心功能的影响**☆

目的：心肌细胞在人类出生后已几乎失去增殖能力,增加具有完整收缩功能的心肌细胞数目是治疗心力衰竭所致心肌损伤的关键。实验拟进一步观察和验证自体骨髓干细胞移植对心力衰竭患者近期心功能的影响。 方法：①对象：选取2003-10/2005-06苏州大学附属第四医院胸心外科收治的23例急性心肌梗死患者,随机数字表法分为心肌梗死细胞移植组7例,心肌梗死对照组16例。另选取2003-10/2005-06收治的11例严重风湿性心脏病、二尖瓣狭窄合并全心衰竭女性患者为二尖瓣病变细胞移植组,以2001-10/2003-10收治的同类疾病女性患者10例为二尖瓣病变瓣膜置换组。以上4组患者术前均依靠大剂量正性肌力药物和利尿剂维持心功能,患者及其家属对治疗均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：无菌条件下在髂前上棘抽取骨髓25 mL,用DMEM完全培养基分离培养骨髓干细胞,贴壁筛选法进行纯化的。细胞达80%融合时用胰酶消化传代,取第3代细胞用于移植,浓度调整为1.5×1010 L-1。心肌梗死细胞移植组将自体骨髓干细胞悬液自左、右冠状动脉注入5 mL。心肌梗死对照组患者仅行常规治疗。二尖瓣病变细胞移植组患者在二尖瓣置换术中将自体骨髓干细胞悬液自左、右冠状动脉注入,同时行心肌内注射,每点注射0.1~0.2 mL,间距2 cm,注入量共5 mL。二尖瓣病变瓣膜置换组单纯行二尖瓣置换术。③实验评估：细胞移植前后通过心脏超声以及核素显像方法全面评价心功能。 结果：4组患者均完成3个月随访。①自体骨髓干细胞移植对急性心肌梗死心功能的影响：与心肌梗死对照组比较,术前 10 d及术后2周心肌梗死细胞移植组射血分数、心输出量、心肌梗死面积均基本相似（P > 0.05）;术后4,6,8周射血分数、心输出量均显著提高（P < 0.01）,心肌梗死面积均显著缩小（P < 0.01）。②自体骨髓干细胞移植对风湿性二尖瓣病变心功能的影响：与二尖瓣病变瓣膜置换组比较,二尖瓣病变细胞移植组术后4周射血分数和心输出量均明显提高(t =3.97,P < 0.01;t = 3.61,P < 0.01) ,至术后8周差异最为明显,提高效果均显著优于术后4周（t =2.91,P < 0.05;t=2.64,P < 0.05）。 结论：自体骨髓干细胞移植可明显改善冠状动脉粥样硬化性心脏病心肌梗死患者的心功能,辅助用于风湿性二尖瓣并发心力衰竭患者的外科治疗亦能对心功能有所提高。     

自体外周血干细胞和骨髓干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症52例效果比较

背景：无论是骨髓干细胞移植还是外周血干细胞移植治疗肢体缺血的疗效在动物实验和临床上均得到证实。然而,二者疗效谁更优秀？ 目的：多指标客观对比评估自体骨髓干细胞和外周血干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症的临床效果。 设计、时间及地点：对比观察,临床病例分析,于2003-09/2008-01在河南省人民医院完成。 对象：52例糖尿病下肢闭塞症患者,男27例,女25例,平均（69±6）岁。随机分为2组,自体骨髓干细胞移植组（n=30）和外周血干细胞移植组（n=22）, 方法：自体骨髓干细胞移植组（n=30）和外周血干细胞移植组（n=22）,2组均接受内科综合治疗,在此基础上分别进行自体骨髓干细胞移植和外周血干细胞移植。 主要观察指标：移植前后疼痛、冷感、间歇性跛行、踝肱指数变化。 结果：移植2周后,2组患者下肢疼痛症状明显缓解率、好转率、无效率2组比较,差异均无统计学意义（P > 0.01）,冷感明显缓解率、好转率、无效率比较,差异均无统计学意义（P > 0.01）。间歇性跛行明显缓解率、好转率、无效率2组比较,差异均无统计学意义（P > 0.01）。踝肱指数变化2组比较,差异亦无统计学意义（P > 0.01）。所有患者未出现并发症和不良反应。 结论：自体骨髓干细胞和外周血干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症都是一种简便、安全、有效的治疗方法,疗效基本相当。     

自体骨髓干细胞移植治疗严重慢性下肢缺血性疾病15例★

严重慢性下肢缺血患者其下肢远端没有良好的流出道，故无法接受手术搭桥。植入自体骨髓干细胞移植后缺血下肢可形成新生血管，建立侧支循环，改善肢体血供，以达到细胞性血管搭桥目的。选择2006-06/2007-02沈阳市第七人民医院内分泌科住院确诊的严重慢性下肢缺血性疾病患者15例，患肢均有不同程度的静息痛、缺血性溃疡或趾端坏疽，踝臂指数0~0.5，CTA及彩超证明为周围动脉闭塞性病变，病变远端流出道差，患者对本实验知情同意且自愿接受自体骨髓干细胞移植术，排除并发严重的心、肺、脑等脏器功能不全不能耐受手术者，实验经医院医学伦理委员会批准。于双髂后上棘穿刺采集自体骨髓血，每例采集骨髓血100~300 mL，羟乙基淀粉及Ficoll液分离，配置成干细胞混悬液50 mL，单个核细胞计数为（2.05~9.36）×108。椎管内麻醉，沿下肢动脉走行给予缺血下肢肌肉及足部局部注射移植自体骨髓干细胞混悬液，术后给予常规药物治疗。移植后12周患者肢体疼痛、患肢冷感明显减轻，皮肤温度升高，间歇跛行距离延长（t=-5.328~6.373，P < 0.01）；踝臂指数略微升高（P > 0.05）；肾功能不全者血肌酐略微降低（P > 0.05）。9例缺血性足溃疡患者的足部创面于术后3~12周基本愈合；2例趾端坏疽患者在干细胞移植术中进行坏疽部位截趾，术后4周完全愈合。术后均未出现异常症状或体征，随访6个月无不良反应发生。提示自体骨髓干细胞移植术能够增加严重慢性缺血患肢的血流灌注，明显改善肢体疼痛、冷感、间歇跛行等指标，且不会加重并发肾功能不全患者的肾功能损伤，安全有效。     

自体外周血及骨髓干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞：随机对照

目的：观察自体外周血干细胞和骨髓干细胞联合移植治疗糖尿病下肢闭塞症的临床疗效。 方法：选择2003-09/2007-01河南省人民医院二内内分泌科194例糖尿病下肢闭塞症患者，随机分为对照组（n=95）和干细胞移植组（n=99）,2组均接受内科综合治疗，在此基础上对干细胞移植组进行干细胞移植，95例患者双侧肢体行自体干细胞移植，3例仅缺血较重的一侧肢体行自体干细胞移植，1例因一侧肢体截肢，另一侧行肢体干细胞移植，干细胞移植的肢体为194条，患者对治疗知情同意，并经医院伦理委员会批准。对干细胞移植组患者进行外周血干细胞动员，每天给予人重组粒细胞集落刺激因子450~600 u，皮下注射，第5天局部麻醉下从髂骨处抽取自体骨髓血200 mL，在实验室将骨髓沉淀、离心，分离等处理后制备40 mL干细胞悬浊液备用。第6 天应用COBE6.1血细胞分离机单采单个核细胞，总量60~120 mL。将两种干细胞悬液按3cmx3cm距离进行缺血肢体移植术，移植后2周观察症状、体征改变。 结果：①干细胞移植组疼痛症状明显缓解、好转、无效的肢体分别为94个、 96个、4个，对照组分别7个、156个、27个，2组间显效率及无效率差异显著（P < 0.01）。②干细胞移植组冷感明显缓解、好转、无效的肢体分别为126个、 63个、5个，对照组分别为6个、158个、26个，2组间显效率及无效率差异显著（P < 0.01）。③干细胞移植组间歇性跛行明显缓解、好转、无效的肢体分别为138个、 47个、9个，对照组分别为13个、152个、25个，2组间显效率及无效率差异显著（P < 0.01）。所有患者未出现并发症和不良反应。 结论：自体外周血干细胞移植治疗糖尿病足是一种简便、安全、有效的治疗方法。     

共培养条件下人脐血间充质干细胞抑制心肌细胞凋亡：是否安全有效？☆

背景：脐血间充质干细胞归巢或植入心脏后能够修复心肌组织，但其移植治疗的安全性尚有待分析。 目的：观察共培养情况下人脐血间充质干细胞能否抑制人心肌细胞凋亡，以及人脐血间充质干细胞移植治疗的安全性。 方法：人脐血间充质干细胞来源于分娩孕妇脐血，经5-氮杂胞苷处理24 h向心肌细胞诱导分化。分别取体外培养3~5代细胞以及诱导后细胞，检测其端粒酶活性及肿瘤相关基因的表达、染色体核型G带分型、细胞表面抗原表达、裸鼠体内成瘤情况、共培养条件下细胞凋亡情况。 结果与结论：脐血间充质干细胞经5-氮杂胞苷诱导前后，其端粒酶活性及p53，cyclin A，cdk2，β-actin，C-fos，h-TERT，c-myc等肿瘤相关基因的表达均基本相似；均未发现异常染色体核型；免疫表型无明显变化，CD34呈阴性，CD44及CD90(Thy-1)呈阳性。脐血间充质干细胞接种10周后裸鼠仍健康存活，体内未见肿瘤生长，石蜡切片苏木精-伊红染色显示为正常的皮下组织。与单纯心肌细胞比较，共培养情况下脐血间充质干细胞能够显著抑制心肌细胞的凋亡(P < 0.05)，提示人脐血间充质干细胞用于细胞移植治疗安全有效。     

接受脐血干细胞移植受者血液神经元特异性烯醇化酶和β2-微球蛋白表达的变化

背景：已证实在特定条件下,脐血干细胞经刺激可诱导分化为神经干细胞,用于移植治疗中枢神经系统疾病具有明显优越性。 目的：观察脐血干细胞移植后受者血液中神经元特异性烯醇化酶和β2-微球蛋白的表达变化。 设计：病例分析。 对象：2007-03/07深圳市第六人民医院康复医学科行脐血干细胞移植的54例神经系统疾病患者,对治疗及实验均知情同意。脐血干细胞由深圳北科生物技术有限公司提供。 方法：每例患者用2 mL注射器向蛛网膜下腔推注脐血干细胞悬液1.0~2.0 mL,细胞数(3.0~4.0)×1010 L-1,每5 d移植1次,4次为1个疗程。每例患者取左侧屈膝位,定位L3/4或L2/3椎间隙,麻醉后由椎间隙进硬膜外腔,再继续进针至有落空感时抽出针芯,有清亮脑脊液流出,留取脑脊液标本送检。每例患者静脉采血3.0~4.0 mL/次,离心后分离血清,-20 ℃保存,避免反复冻融。 主要观察指标：ELISA法和免疫组化法测定神经元特异性烯醇化酶的表达,RIA法测定β2-微球蛋白的表达。 结果：与移植前比较,移植后血清和脑脊液中神经元特异性烯醇化酶质量浓度均无明显变化(P > 0.05);移植后血清中β2-微球蛋白质量浓度无明显变化(P > 0.05),脑脊液中β2-微球蛋白质量浓度显著升高(P < 0.01)。移植前后脑脊液沉淀细胞神经元特异性烯醇化酶免疫组化显色差异有明显变化(P < 0.05)。 结论：脐血干细胞移植对脑脊液和血清中的神经元特异性烯醇化酶表达无明显影响,脑脊液沉淀细胞可能增殖分化为神经元样细胞。移植后β2-微球蛋白在正常范围内的升高,从临床角度说明脐血干细胞免疫排斥反应小及应用的安全性。     

治疗用骨髓间充质干细胞分离的相关因素分析

背景：骨髓间充质干细胞的分离、鉴定技术在移植治疗中非常关键。 目的：应用Cobe Spectra 6.1骨髓处理程序分析骨髓间充质干细胞的分离方法。 设计、时间及地点：以细胞为对象的观察性实验，于2005-11/2007-11在北京军区总医院完成。 材料：骨髓来自进行自体骨髓干细胞移植治疗的缺血性股骨头坏死患者。 方法：应用COBE Spectra血液成分单采系统骨髓单个核细胞分离程序，在已建立的运行参数条件下分离骨髓间充质干细胞。 主要观察指标：分离前后进行白细胞分类、细胞计数检测、流式细胞分析CD34、CD133和CD271的表达，计算有核细胞回收率、单个核细胞回收率；统计方法分析CD271+和CD133+表达与细胞形态学分类的相关性。 结果：①骨髓分离后，有核细胞、单个核细胞明显高于分离前（P 均 < 0.01），回收率分别为26.6%、40.0%。②分离的细胞产品中，CD271+、CD133+和CD34+表达率分别为0.63%、0.51%和1.17%，回收率则依次为72.8%、61.6%和67.6%。③相关分析显示，分离前后CD271+表达率均与类单核样细胞数目相关（P均 < 0.01）；分离后CD34+表达率与类单核样细胞和类淋巴样细胞数目均相关（P均 < 0.01）。④偏相关分析显示，CD271与类单核样细胞相关（P均 < 0.01），CD34与类淋巴样细胞相关（P均 < 0.01）。 结论：应用Cobe Spectra 6.1骨髓处理程序分离骨髓干细胞用于临床治疗，可以根据治疗需求选择分离类单核样细胞或类淋巴样细胞，有效提高分离效率。     

自体造血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤后大剂量白细胞介素2过继免疫对长期生存的影响

背景：过继免疫治疗是目前肿瘤免疫治疗的热点,白细胞介素2是一种具有多种生物学活性的细胞因子,在机体的抗肿瘤免疫中起到重要作用。 目的：评价比较淋巴瘤自体造血干细胞移植治疗后应用与不应用大剂量白介素2行免疫治疗的临床疗效。 方法：回顾分析30例恶性淋巴瘤患者(治疗组)自体造血干细胞移植后行大剂量白细胞介素2 治疗,与随机挑选30例患者(对照组)自体造血干细胞移植后未行白细胞介素2治疗进行对比,检测两组患者外周血T淋巴细胞亚群,观察两组免疫功能的变化,并对所有患者进行随访观察。 结果与结论：自体造血干细胞移植后白细胞介素2治疗组外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平明显提升。随访结束时统计复发率：治疗组13.3%,对照组26.7%;中位生存期：治疗组14~98 (42±2)个月,对照组8~78 (28±2)个月。提示恶性淋巴瘤自体造血干细胞移植后行大剂量白细胞介素2治疗能提高患者的免疫功能,减少移植后复发率,并有望延长生存期。     

自体造血干细胞移植联合利妥昔单抗治疗非霍奇金淋巴瘤6例☆

背景：利妥昔单抗单用或联合CHOP方案化疗治疗CD20阳性非霍奇金淋巴瘤已取得较好疗效,非霍奇金淋巴瘤经自体造血干细胞移植治疗同样可以提高患者的疗效和生存率,而将两种方法联合的效果尚存在争论。 目的：探讨自体造血干细胞移植联合利妥昔单抗对CD20阳性非霍奇金淋巴瘤的有效性。 方法：对6例CD20阳性非霍奇金淋巴瘤Ⅳ期患者进行自体造血干细胞移植的同时,联合使用利妥昔单抗,分别于移植前给予2~4次,动员和预处理前后各2次,移植后每3个月维持治疗1次,利妥昔单抗用量为 375 mg/m2静滴。 结果与结论：平均采集单个核细胞数为5.13× 10-8/kg,CD34+细胞数为4.75×10-6/kg。6例患者自体造血干细胞移植后,造血功能均恢复顺利,中性粒细胞计数大于0.5×10-9L-1为移植后9~15 d,血小板计数大于20×10-9L-1为移植后12~19 d。6例患者在移植过程中均未发生出血性膀胱炎、间质性肺炎、巨细胞病毒感染和肝静脉阻塞等并发症。利妥昔单抗使用过程中,无发热、寒战、皮疹等不良反应发生。移植后6~32个月,患者均处于完全缓解状态。提示自体造血干细胞移植并利妥昔单抗治疗CD20阳性非霍奇金淋巴瘤是一种较好的方法,可维持治疗效果,有利于防止复发。     

人脐血CD34+细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复的影响*☆

目的：CD34+造血干细胞具有自我更新、多向分化及重建长期造血和免疫的生物学功能，针对心肌缺血性损伤、肢体血管闭塞引起的组织缺血等治疗有显著的疗效。由于中枢神经系统缺血性损伤临床治疗康复效果不佳，观察人脐带血CD34+细胞移植对大鼠大脑中动脉栓塞后神经功能恢复的影响及CD34+细胞的存活、迁移以及向神经细胞分化的情况。 方法：实验于2002-05起在天津市中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所进行。①实验材料：雄性SD大鼠由解放军军事医学科学院第四研究所提供，体质量250~350 g，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。人脐带血由天津脐血干细胞库提供，产妇及家属对实验知情同意，并符合医学伦理学标准。②实验方法：将大鼠随机分为3组：CD34+细胞移植组：用线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞模型后24 h移植CD34+细胞；生理盐水组：左侧大脑中动脉栓塞后24 h后注射等量的生理盐水；假手术组：仅行左侧大脑中动脉栓塞。③实验评估：采用改良神经功能损害评分观察大鼠神经功能恢复情况，应用免疫组织化学和免疫荧光双标记技术检测BrdU标记的CD34+细胞存活、迁移及其GFAP蛋白和NeuN蛋白的表达。 结果：①CD34+细胞移植组与其它各组在移植完成24 h 改良神经功能损害评分差异无显著性（P > 0.05）; 移植后1周到第4周，各组动物均有神经功能不同程度的恢复，CD34+细胞移植组神经功能恢复明显优于另两组（P < 0.05）。②CD34+细胞移植组与另两组比较，大鼠脑梗死体积无明显变化。③移植的CD34+细胞可在大鼠脑组织中存活，部分CD34+细胞同时表达GFAP蛋白或NeuN蛋白，并向缺血区域迁移。 结论：CD34+细胞可在大鼠脑缺血区域中存活、迁移并向星形胶质细胞或神经元分化，同时促进神经功能恢复。     

脑胶质细胞瘤病人IL-2和sIL-2R表达及细胞免疫功能变化的意义

目的 研究脑胶质细胞瘤病人外周血中自细胞介素2（IL-2）、可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）的表达以及红细胞免疫和T淋巴细胞亚群的变化规律．探讨它们之间的相互关系。方法 对55例脑胶质瘤病人及55例健康献血员．采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清IL-2、sIL-2R含量，免疫黏附法测定红细胞免疫活性及其调节功能，链亲和素一过氧化物酶（SP）一步法测定CD3、CD4、CD8细胞数。结果 脑胶质细胞瘤组IL-2含量较对照组显著性降低（P〈0.01），sIL-2R则显著性升高（P〈0．01）；红细胞C3b受体（RBC-C3bR）、红细胞免疫调节促进因子（RFER）亦显著性降低（P〈0．01），而红细胞免疫复合物（RBC-ICR）、红细胞免疫调节抑制因子（RFm）则显著性升高（P〈0．01）；CD3、CD4细胞数显著性降低（P〈0．001），而CD8无显著性差异（P〉0．05）。结论 脑胶质细胞瘤病人存在免疫功能低下；检测血清IL-2和sIL-2R含量、红细胞免疫功能及T细胞亚群活性，对脑胶质细胞瘤病人的免疫机制研究具有重要意义。     

新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）患儿的体液免疫功能改变

目的探讨HIE（新生儿缺氧缺血性脑病）患儿相对于正常新生儿的体液免疫功能改变。方法分析2012年6月至2013年7月在我院新生儿中心接受治疗的58例HIE患儿的临床资料。并选取一般资料相似的正常新生儿40例作为对照组。比较两组新生儿的一般资料、免疫功能指标以及观察组中不同病情程度的患儿免疫功能指标差异。结果本研究共纳入新生儿研究对象98例,其中观察组患儿58例,对照组正常新生儿40例。观察组患儿的IgA（t=2.943,P〈0.01）、C3（t=2.433,P=0.017）、C4（t=5.366,P〈0.01）、CD19＋（t=2.791,P〈0.01）、CD19＋CD25＋（t=3.121,P〈0.01）水平均低于对照组,差异均有统计学意义。轻度、中度、重度HIE患儿的IgA（F=14.02,P〈0.01）、IgM（F=8.732,P〈0.01）、C3（F=4.277,P=0.018）、C4（F=15.72,P〈0.01）、CD19＋（F=5.779,P〈0.01）、CD19＋CD25＋（F=4.394,P=0.018）、组间均有统计学差异,且病情越重,相应的免疫功能指标越低。结论 HIE患儿相对于正常新生儿,体液免疫功能受到抑制,且病情越重,受抑状态越显著。     

人脐血间质干细胞静脉输注对60Coγ射线照射小鼠脾脏细胞生物学效应的影响★

背景：研究发现，脐血间质干细胞对辐射损伤有一定的防护作用。 目的：实验拟观察脐血间质干细胞静脉输注对照射小鼠脾脏细胞生物学效应的影响，验证其防辐射损伤作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-04/10在广东医学院实验动物中心完成。 材料：将体质量(20.0±1.5) g的雌性昆明种小鼠随机分为正常对照组、单纯照射对照组、60Coγ射线照射前静脉注射脐血间质干细胞组，每组30只。新鲜脐带血来源于本院妇产科健康产妇。 方法：以无菌塑料采血袋按密闭式方法采集足月新生儿脐带血80～140 mL，无菌条件下将脐带血液采集到含有ACD-B保养液的无菌采血袋内，并按照卫生部检测血液的标准检测每一份脐带血液，采集、分离间质干细胞。60Coγ射线照射小鼠，通过尾静脉将分离获得的人脐血间质干细胞输注入小鼠体内，细胞数≥ 1×108/份，照射后当天再次输注人脐血间质干细胞。 主要观察指标：应用流式细胞仪检测脾脏细胞的凋亡指数和免疫参数。 结果：与单纯照射组相比，60Coγ射线照射前静脉注射脐血间质干细胞组的G0/G1期细胞比例下降，而S、G2M期细胞比例均有不同程度的升高。经照射后，小鼠脾细胞的凋亡率明显增加，脐血间质干细胞对细胞的凋亡有一定保护作用，同时能够提高细胞的增殖率。单纯照射组的NK细胞、CD4+和CD8+标记率明显低于正常对照组，而脐血间质干细胞能显著地提高它们的活性。 结论：脐血间质干细胞静脉输注对辐射造成的脾细胞损伤有一定保护作用，可促进脾脏细胞的分裂增殖，加速脾脏细胞的修复，其作用机制可能与提高NK细胞活性和CD4+、CD8+数量有关。     

细胞因子介导的人脐血单个核细胞体外扩增并重建NOD/SCID小鼠造血及免疫功能

背景：细胞因子介导的脐血造血细胞体外扩增有望能解决脐血移植数量不足的问题。 目的：实验拟确立在无基质培养条件下体外扩增脐血单个核细胞最合适的细胞因子组合及干细胞因子、FLT3配基协同促聚核细胞生成因子对造血及免疫重建功能的影响。 方法：将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7 d,根据不同细胞因子组合分组,将3因子干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子组合在无血清无基质条件下扩增培养7 d前后的脐血单个核细胞移植给经亚致死量照射的NOD/SCID小鼠。在扩增培养0,7 d检测脐血CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD62L+,CD34+CD49d+的细胞数。脐血移植6周后通过流式细胞仪,PCR法检测存活小鼠体内的人源性细胞。 结果与结论：移植6周后,存活小鼠体内均可检测到人源性CD45+细胞,扩增脐血移植组的NOD/SCID小鼠存活率和人特异性基因捡出率均高于新鲜脐血移植组和高于生理盐水移植组 (P < 0.05)。扩增脐血组存活NOD/SCID小鼠骨髓中可检测到人髓系细胞(CD33+),T淋巴细胞(CD4+),B淋巴细胞(CD19+)和人造血干细胞成分(CD34+)细胞的表达。结果提示干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子3因子组合脐血造血细胞体外扩增是最合适的细胞因子组合,其扩增的脐血单个核细胞能够植入并重建NOD/SCID小鼠的造血及免疫功能。     

经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植对扩张型心肌病兔心肌间质重塑的影响

背景：骨髓单个核细胞为一组多潜能干细胞的混合体，在原发性扩张型心肌病领域的应用尚处于起步阶段。 目的：评价经冠状动脉移植自体骨髓单个核细胞对阿霉素诱导的扩张型心肌病模型兔心肌间质重塑的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2006-10/2007-06在复旦大学附属华山医院心血管研究室完成。 材料：普通级3月龄雄性新西兰兔30只，由上海中医药大学实验动物中心提供。阿霉素为深圳万乐药业股份有限公司产品，批号0602E1。 方法：30只兔均经耳缘静脉注射盐酸阿霉素建立扩张型心肌病模型，造模后存活兔取10只用于模型观察，剩余20只随机分为移植组、对照组，10只/组。移植组兔抽取髂骨骨髓，采用密度梯度离心法分离自体骨髓单个核细胞，于造模2周后经塑性的4F造影导管模拟临床冠状动脉内输注骨髓单个核细胞悬液2 mL。对照组兔同样接受骨髓液采集以平衡手术操作创伤对实验结果的影响，完成选择性左冠状动脉造影后，经造影导管注射2 mL生理盐水。 主要观察指标：通过RT-PCR半定量检测心肌胶原容积分数、基质金属蛋白酶1，3 mRNA的表达评价心肌间质重塑，通过血流动力学指标和血清脑钠素浓度评价心功能的变化。 结果：移植组脱落2只，对照组脱落1只。细胞移植4周后与对照组比较，移植组胶原纤维增生进程延缓，心肌胶原容积分数显著降低（P < 0.01），基质金属蛋白酶1，3 mRNA的表达呈下降趋势（t=4.45，P < 0.01），左心室收缩压、压力变化速率最大值均显著升高，左心室舒张末压显著下降（t=9.12，P < 0.01），血清脑钠素浓度明显降低（t=6.05，P < 0.05）。 结论：经冠状动脉移植自体骨髓单个核细胞，可能通过抑制基质金属蛋白酶的应激性改变而延缓心肌间质重塑中胶原代谢进程，有助于改善扩张型心肌病模型兔的心功能。     

自体骨髓间质干细胞移植治疗多系统萎缩34例分析

目的：观察自体骨髓间质干细胞移植治疗多系统萎缩患者的临床疗效和安全性。方法选择2010-01-2012-07江西省人民医院神经内科收治的多系统萎缩患者34例,其中橄榄脑桥小脑萎缩26例,纹状体黑质变性8例。患者在粒细胞集落刺激因子进行骨髓干细胞动员后,采集骨髓液并分离骨髓间质干细胞,通过蛛网膜下腔移植治疗,骨髓间质干细胞数量（5.0～10.0）×107,1次/周,共治疗2次。采用世界神经病联合会国际合作共济失调评分量表（IC A RS ）、统一多系统萎缩评估量表（UMSARS）及改良的Barthel指数（MBI）为指标评估疗效,并观察患者的不良反应。结果34例患者均进入结果分析,中途无脱落。患者移植1、3个月后ICARS、UMSARS与入院时比较评分降低,MBI升高（均 P＜0.05）。患者移植12个月后ICARS、UMSARS、MBI与入院时比较差异无统计学意义（均 P＞0.05）。其中术后7例低热和4例低颅压性头痛,对症处理后症状完全消失。结论自体骨髓干细胞移植不良反应轻,可一定程度改善多系统萎缩患者的临床症状,提高患者生活质量,但疗效不持久。     

外周血CD4+CD25highTreg细胞的比例变化在肾移植受者术后免疫监测中的临床应用研究

目的 研究外周血CD4+CD25highTreg细胞(regulatory T cell,Treg)比例对肾移植受者免疫力的影响,为CD4+CD25highTreg细胞的比例变化作为评估移植受者免疫状态及作为预测排斥反应和感染的特异性指标提供实验依据。方法 肾移植受者52例按肾移植术后恢复情况分为免疫力正常组26例,发生排斥反应组17例,发生感染组9例,用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25highTreg细胞的比例,所得结果进行相关分析。结果 发生急性排斥反应组CD4+CD25highTreg细胞比例较免疫力正常组显著降低（p〈0.05）,发生感染组外周血CD4+CD25highTreg细胞的比例较正常组显著升高（p〈0.01）,均有统计学意义。FK-506和CsA分别对CD4+CD25highTreg细胞比例的影响没有显著性差异。结论 肾移植术后受者外周血CD4+CD25highTreg细胞比例与受者免疫状态密切相关。CD4+CD25highTreg细胞比例的变化可以反应机体的免疫状态的变化,其升高或降低可以作为预测肾移植受者术后发生感染或排斥反应的指标之一。     

脐血源性间充质干细胞与人心肌细胞共培养条件下对心肌细胞凋亡的抑制

背景：脐带血来源的间充质干细胞有多系分化的潜能,其归巢或植入心脏后能够修复心肌组织,但其移植治疗的安全性,以及在与人心肌细胞共培养情况下,能否抑制人心肌细胞凋亡仍有待观察。 目的：观察人脐血间充质干细胞与人心肌细胞共培养条件下对人心肌细胞凋亡的抑制作用,以及移植治疗的安全性。 方法：人脐血源性间充质干细胞来源于分娩孕妇脐血,经5-氮杂胞苷处理24 h向心肌细胞诱导分化。分别取体外培养3~5代细胞以及诱导后细胞,检测其端粒酶活性及肿瘤相关基因RNA水平的表达、染色体核型G带分型、细胞表面抗原表达、裸鼠体内成瘤情况、共培养条件下细胞凋亡情况。 结果与结论：脐血源性间充质干细胞经5-氮杂胞苷体外诱导能分化成心肌细胞,诱导前后其端粒酶活性及p53,cyclin A,cdk2,β-actin,c-fos,h-TERT,c-myc等肿瘤相关基因的表达均基本相似;均未发现异常染色体核型;免疫表型无明显变化,CD34呈阴性,CD44及CD90(Thy-1)呈阳性。脐血源性间充质干细胞接种裸鼠体内未见肿瘤生长。与单纯心肌细胞比较,共培养情况下脐血间充质干细胞能够显著抑制心肌细胞的凋亡(P < 0.05)。结果提示人脐血间充质干细胞用于细胞移植治疗安全有效,与心肌细胞共培养时具有明显抑制心肌细胞凋亡的作用。