尿AMACR mRNA定量检测在前列腺癌诊断中的价值

目的探讨前列腺按摩后尿沉渣中AMACR mRNA含量在前列腺癌诊断中的价值。方法前列腺癌（PCa）患者30例和良性前列腺增生（BPH）患者41例，在前列腺穿刺活检前收集前列腺按摩后的尿液，离心取细胞沉淀物，用实时荧光定量RT-PCR检测AMACR mRNA的含量，并用PSA mRNA进行校正，即用AMACR mRNA表达量／PSA mRNA表达量比值来表示AMACR mRNA的含量。结果AMACR mRNA在PCa组患者尿液中的含量明显高于BPH组，差异具有统计学意义（P〈0．01）。ROC曲线分析结果显示，曲线下面积为0．763，以0．277为截断值时，其诊断PCa的总体灵敏度和特异度分别为66．7％和75．6％。如果血清PSA以10ng／ml为临界值，其总体特异度为58．5％（24／41），尿液AMACR mRNA较血清PSA具有更高的特异性。不同临床分期、不同病理分级之间，AMACR mRNA表达量及检测阳性率均不具有统计学意义（P值均〉0．05）。结论尿液中AMACR mRNA的表达量可以作为前列腺癌诊断的一种非损伤性指标，而且在PCa的早期诊断中也有潜在的临床价值。     

实时荧光定量RT-PCR检测良性前列腺增生与前列腺癌相关基因表达的临床意义

目的应用实时荧光定量RT-PCR检测良性前列腺增生（BPH）与前列腺癌相关基因表达。方法通过实时荧光定量RT-PCR对9个前列腺癌相关基因（KLK3、KLK2、KLK11，pim-1，hepsin，PSMA，AR，p27，IGF-1）在前列腺正常组织、BPH组织和癌组织（PCa）定量表达，分析其特异性的差异。结果检测9个选定相关基因中发现KLK2，pim-1，AR和IGF-1在这3种组织中的表达差异有统计学意义（P＜0．01）。结论KLK2，pim-1，AR和IGF-1作为前列腺癌组织特异性的分子标记物组合，有望提高前列腺癌早期诊断的准确性。     

前列腺癌患者前列腺液中DD3 mRNA检测及临床意义

目的检测前列腺癌（PCa）患者前列腺液中DD3基因的表达,讨论其临床意义。方法收集31例PCa患者、59例前列腺增生（BPH）患者前列腺液,离心取细胞沉淀物,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）琼脂糖电泳法方法检测其中DD3 mRNA的水平。同时用2χ检验分析比较不同Gleason分级的PCa患者DD3 mRNA阳性率是否存在差异。结果 PCa患者前列腺液中DD3 mRNA阳性率（77.42%）明显高于BPH患者（5.08%）,两者具有显著性差异（P〈0.01）。DD3 mRNA表达阳性率诊断PCa的灵敏度为77.42%,特异度为94.91%,不同Gleason分级的PCa患者DD3 mRNA表达阳性率无显著统计学差异（P〉0.05）。结论检测前列腺液中DD3 mRNA诊断PCa是一种有效的无侵入性的良好方法。     

DD3和PSA基因在前列腺癌组织中的定量表达分析

目的探讨DD3 mRNA和PSA mRNA在前列腺组织中表达的临床意义及诊断前列腺癌(PCa)的价值。方法荧光定量RT—PCR法分析21例PCa组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织DD3 mRNA和PSA mRNA的表达,ROC曲线对DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA／PSA mRNA比值诊断PCa的价值进行分析。结果PCa组织中DD3 mRNA、PSA mRNA表达量和DD3 mRNA／PSA mRNA比值均显著高于BPH组织,差异有统计学意义(P<0．01)。不同临床分期和分化程度之间DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA／PSA mRNA比值差异无统计学意义(P值均>0．05)。ROC曲线分析结果显示,DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA／PSA mRNA的曲线下面积分别为0．937、0．755和0．839。当DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA／PSA mRNA临界值分别为1．4×105拷贝／mg组织、3．0×107拷贝／mg组织和5．0×10-3时,敏感性分别为90．5％、81．0％和81．0％,特异性分别为85．0％、62．0％和66．7％。若将DD3 mRNA和PSA mRNA联合用于PCa的诊断,其特异性与DD3 mRNA相同,为85．0％,敏感性可达100．0％。结论PCa组织中DD3 mRNA和PSA mRNA表达量均增加,但组织中DD3 mRNA的定量检测更具诊断价值,联合检测有利于提高诊断敏感性,对PCa的诊断具有一定临床应用价值。     

实时荧光定量聚合酶链反应检测食管癌患者循环肿瘤细胞及其意义

目的 探讨实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(fqRT-PCR)技术评价食管癌患者外周血中循环肿瘤细胞(CTCs)的临床价值.方法 以43例病理确诊的食管鳞癌及10例胸部良性疾病患者为研究对象,将癌胚抗原(CEA)作为检测标志物,应用fqRT-PCR方法定量检测其外周血CEA mRNA表达及拷贝数,评价食管鳞癌患者CTCs状况.结果 食管鳞癌患者外周血CEA mRNA阳性表达率为46.51%(20/43),胸部良性病变患者外周血未见阳性表达;其阳性率随肿瘤TNM分期增高;Ⅲ、Ⅳ期患者CEA mRNA阳性率显著高于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05),但Ⅰ、Ⅱ期患者之间及Ⅲ、Ⅳ期患者之间差异无统计学意义(P＞0.05);外周血CEA mRNA拷贝数在Ⅳ期患者明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者(P＜0.01);但在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者间其拷贝数差异无统计学意义(P＞0.05).CEA mRNA表达与癌细胞分化程度无明显相关.随访结果:外周血CEA mRNA阳性表达者其转移预测特异性为81.25%(13/16).结论 fqRT-PCR检测食管癌患者外周血CEA mRNA有较高的敏感性和特异性,是监测食管癌CTCs较为可靠的一种方法.     

实时荧光定量RT-PCR检测胸、腹腔积液和癌胚抗原mRNA表达的临床意义

目的　探讨良、恶性胸腔腹腔积液中癌胚抗原 (CEA)mRNA表达的临床意义。　方法收集明确病理学诊断的恶性肿瘤 (5 8例 )及良性疾病患者 (76例 )的胸腔、腹腔积液 ,采用实时荧光定量RT PCR法检测其CEAmRNA的表达水平 ,并与脱落细胞学检查结果比较。　结果　 5 8例肿瘤患者胸、腹腔积液中 ,脱落细胞学检查有 19例 (32 8% )找到癌细胞 ,而CEAmRNA阳性 (>1CN)者为 4 6例 (79 3% ) ,二者阳性率差异具有极显著性意义 (χ2 =2 1 82 ,P =0 0 0 0 )。 76例良性疾病患者的胸、腹腔积液中CEAmRNA阳性 (>1CN)者为 19例 (2 5 0 % ) ,良性疾病与恶性肿瘤患者胸腔腹腔积液中CEAmRNA的表达水平差异有极显著性意义 (χ2 =38 85 ,P =0 0 0 0 )。　结论　采用实时荧光定量RT PCR法可定量检测胸、腹腔积液中CEAmRNA表达 ,其敏感性优于脱落细胞学检查 ,且有助于胸、腹腔积液良、恶性的鉴别。     

Quantitative real-time RT-PCR of CD24 mRNA in the detection of prostate cancer

Background

The use of extracorporeal shock wave lithotripsy (ESWL) to treat calcium oxalate dihydrate (COD) renal calculi gives excellent fragmentation results. However, the retention of post-ESWL fragments within the kidney remains an important health problem. This study examined the effect of various urinary conditions and crystallization inhibitors on the regrowth of spontaneously-passed post-ESWL COD calculi fragments.

Methods

Post-ESWL COD calculi fragments were incubated in chambers containing synthetic urine varying in pH and calcium concentration: pH = 5.5 normocalciuria (3.75 mM), pH = 5.5 hypercalciuria (6.25 mM), pH = 6.5 normocalciuria (3.75 mM) or pH = 6.5 hypercalciuria (6.25 mM). Fragment growth was evaluated by measuring increases in weight. Fragment growth was standardized by calculating the relative mass increase.

Results

Calcium oxalate monohydrate (COM) crystals formed on COD renal calculi fragments under all conditions. Under pH = 5.5 normocalciuria conditions, only COM crystals formed (growth rate = 0.22 ± 0.04 μg/mg·h). Under pH = 5.5 hypercalciuria and under pH = 6.5 normocalciuria conditions, COM crystals and a small number of new COD crystals formed (growth rate = 0.32 ± 0.03 μg/mg·h and 0.35 ± 0.05 μg/mg·h, respectively). Under pH = 6.5 hypercalciuria conditions, large amounts of COD, COM, hydroxyapatite and brushite crystals formed (growth rate = 3.87 ± 0. 34 μg/mg·h). A study of three crystallization inhibitors demonstrated that phytate completely inhibited fragment growth (2.27 μM at pH = 5.5 and 4.55 μM at pH = 6.5, both under hypercalciuria conditions), while 69.0 μM pyrophosphate caused an 87% reduction in mass under pH = 6.5 hypercalciuria conditions. In contrast, 5.29 mM citrate did not inhibit fragment mass increase under pH = 6.5 hypercalciuria conditions.

Conclusion

The growth rate of COD calculi fragments under pH = 6.5 hypercalciuria conditions was approximately ten times that observed under the other three conditions. This observation suggests COD calculi residual fragments in the kidneys together with hypercalciuria and high urinary pH values may be a risk factor for stone growth. The study also showed the effectiveness of specific crystallization inhibitors in slowing calculi fragment growth.