含银异种脱细胞真皮基质的实验研究

目的了解含银异种脱细胞真皮基质(Xeno-ADM)的多项生物学性状,观察其移植效果。方法制备单纯xeno-ADM,再用2 g／L硝酸银浸泡,制成含银xeno-ADM。检测两种xeno-ADM对笔者单位烧伤患者创面常见菌的抑菌效果,并进行组织学观察;测量含银xeno-ADM的Ag+含量。在27只家兔背部制作全层皮肤缺损创面,分为A、B、C组,每组9只。A组移植自体刃厚皮,B组移植单纯xeno-ADM+自体刃厚皮,C组移植含银xeno-ADM+自体刃厚皮。术后2、4、6周取移植部位皮肤标本作形态学观察,并计算创面收缩率;术后2周计算移植皮片(未)成活率,并检测各组家兔淋巴细胞增殖活性。结果(1)含银xeno-ADM对创面常见菌的抑菌效果明显优于单纯xeno-ADM (P<0．05)。两种xeno-ADM中的表皮已完全除去,胶原纤维粗细均匀、排列规则、无明显变性,真皮中无细胞及细胞碎片。含银xeno-ADM的Ag+含量为(2．7±0．7)mg／g。(2)术后6周,A组家兔移植皮片呈暗红色,挛缩明显,易破溃,胶原纤维排列紊乱;B、C组移植皮片颜色接近周围正常皮肤,光滑无瘢痕,质地良好,胶原纤维排列有序,表皮-真皮连接结构和基底细胞桥粒、半桥粒结构以及基底膜重建明显。术后2、4、6周,A组家兔创面收缩率均明显高于B、C组(P<0．05);B、C两组创面收缩率相似(P>0．05)。术后2周,C组皮片完全成活率为91．7％,显著高于A组(77．8％)及B组(80．6％);3组家兔淋巴细胞增殖活性相似(P>0．05)。结论含银xeno-ADM脱除了基质中有免疫原性的细胞成分,保留了组织的基本结构和完整的胶原纤维支架,且具有较好的局部抗菌效果,不失为一种良好的真皮替代物。     

异种(猪)脱细胞真皮基质移植后炎症免疫反应的实验研究

目的：研究异种（猪）脱细腻真皮基质与薄自体皮复合移植后炎症反应的变化规律及对Th1/Th2细胞因子的影响。方法：将异种（猪）脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植于大鼠，分别于移植后1，2，3，4，8，12，16周取标本，采用组织学观察及RT-PCR技术动态检测异种（猪）脱细胞真皮基质复合移植后炎症反应及Th1/Th2细胞因子的变化，同时以单纯薄自体皮移植作对照。结果：异种（猪）脱细胞真皮与薄自体皮复合移植后早期存在炎症反应，并随着创面愈合的进行而逐渐消失，Th2细胞因子的表达明显高于对照组。结论：异种（猪）脱细胞真皮基质仍具有一定的免疫原性，Th2细胞因子的高表达说明机体对异种（猪）脱细胞真皮基质的免疫反应主要以体液免疫为主，也可能是异种（猪）脱细胞真皮基质移植后未被排斥的原因之一。     

异种或同种异体脱细胞真皮基质移植后免疫细胞分型的研究

目的　比较异种脱细胞真皮基质 (Xeno ADM)与同种异体脱细胞真皮基质 (Allo ADM)移植物免疫学反应的差异。　方法　选用健康小猪和健康自愿者的中厚皮 ,分别制成Xeno ADM和Aoll ADM后 ,与深度烧伤患者的断层超薄自体皮 (UTS)重叠 ,即时覆盖其切痂创面 ,相应设为Xeno组(2 6例 )和Aoll组 (10例 )。于另 8例深度烧伤患者切痂创面上移植单纯断层自体中厚皮 (TTS) ,设为对照组。采用免疫组化方法 ,于移植术后进行组织学观察 ,并检测外周血和移植物内免疫细胞分型情况。　结果　与对照组比较 :(1)移植术后 ,Xeno组和Allo组外周血免疫细胞分型情况无明显改变(P >0 .0 5 )。 (2 )Xeno组移植物局部长期存在炎症 免疫反应 ,其中 80 %以上为CD3+ CD4 + 和CD4 5RO+ 细胞 ,CD8+ 细胞、Vs8C+ 浆细胞、CD5 7+ 的自然杀伤细胞 (NK)相对较少 ;另可见嗜酸性粒细胞和CD6 8+ CD4 + 异物巨细胞反应 ,在发生排异反应前的Xeno ADM中尤为明显 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。Allo组仅在移植早期 (术后 8周以内 )有中度炎症 免疫反应。　结论　人体对脱细胞真皮基质的特异性免疫反应 ,可能是在单核 巨噬细胞参与下、以CD4 + T淋巴细胞介导的细胞免疫为主要表现 ;辅助性T细胞和巨噬细胞构成的异物巨细胞可能在其中起重要作用     

脱细胞异种(猪)真皮基质作为填充材料的初步研究与应用

目的：为临床修复体表凹陷畸形寻求良好的填充材料。方法：用自制脱细胞异种（猪）真皮基质，植入兔皮下，定时进行测量，并进行光镜及电镜观察。临床应用2例。结果：脱细胞异种（猪）真皮基质植入后观察1年，仅在4周内有极轻微的炎性反应，无排斥反应，2周左右有成纤维细胞及毛细胞血管长入，吸收率低于对照组。2例临床应用填充效果较满意，质地较软，无破溃、外露。结论：脱细胞异种（猪）真皮基质组织相容性好，吸收率低，质地软，是一种有良好前景的软组织填充材料。     

脱细胞异种真皮基质作为修复材料大有可为

无论平时还是战时 ,总会有因烧伤、创伤或战伤遗留的创面 ,因此创面的修复就成为医疗救治永恒的主题 ,也是医疗领域最古老的课题之一。千百年来国内外医者围绕“如何促进创面愈合”不断做着有益的探索 ,认识到创面的存在对机体的危害 ,理解了创面愈合是一个复杂的细胞生物学过程 ,绝不能期望单靠某一种“灵丹妙药”或某一类高科技产品涵盖各种创面达到快速而理想的修复 ,常常需要根据形成创面的原因、深度、部位、伤后不同时间以及全身情况等多因素综合分析 ,采用不同手段实施创面的修复。伴随科学技术的进步 ,可供创面治疗药物的增多 ,自体…     

异种脱细胞真皮基质的制作和临床应用观察

目的　降低异种 (猪 )真皮组织的抗原性 ,探讨在临床复合移植的可行性。　方法　健康小猪中厚皮 ,半数经戊二醛交联后采用胰蛋白酶和TritonX 10 0等脱细胞处理 ,制成未交联(sADM0 )和交联型 (sADM1)网状脱细胞真皮基质 ,通过动物实验和临床应用 ,观察 2种sADM组织学变化和移植效果。　结果　 (1)兔皮下埋植sADM0 宿主细胞侵入迅速 ,炎症反应和组织降解明显 ,而sADM1炎症反应轻 ,皮片降解和收缩不明显 ;(2 ) 10例烧伤患者Ⅲ度创面和 1例胸部瘢痕切除后 ,以自体薄中厚皮 (ATS)和自体刃厚皮或超薄皮 (UTS)为对照 ,进行sADM UTS复合移植 ,19块复合皮平均成活率为 78.9% ,与ATS组无显著差异。其中sADM0 UTS组早期炎症反应和创面收缩明显 ,外观效果与UTS组相当 ;在sADM1 UTS组 ,早期炎症反应和创面收缩较轻 ,外观平整 ,触软 ,与ATS组移植效果相当 ,但有 3例患者的 6块创面在术后平均 (12 .8± 6 .9)周时 ,出现表皮破溃、sADM1外露和组织学严重的异物巨噬细胞反应。　结论　临床用交联型sADM作复合皮的真皮替代物 ,能减缓早期免疫反应 ,提高UTS移植效果 ,但仍不可避免迟发性异种排异反应。     

异种(猪)脱细胞真皮基质微粒注射填充研究

目的：探讨一种新型的注射填充材料，方法：将异种（猪）脱细胞真皮基质微粒（简称ADM微粒）注入兔耳背皮下并形成皮丘，定时对植入物进行测量，光镜及电镜观察，临床应用于4例面部凹陷畸形整复。结果：ADM微粒注射后从外围向中央细胞化及血管化，12周左右体积基本稳定，48周时吸收率为26．93％左右，临床应用结果满意。结论：ADM微粒安全性好，吸收率低、使用方便，微创。     

异种脱细胞真皮基质作为软组织填充物的生物相容性研究

目的 探讨异种脱细胞真皮基质(Xeno-ADM)作为软组织填充物植入大鼠体内的生物相容性,为临床软组织缺损凹陷修复提供参考依据.方法 72只SD大鼠随机分为3组:异种组、异体组和自体对照组.分别将Xeno-ADM、异体脱细胞真皮基质和自体真皮植入各组大鼠背部皮下.术后2～32周,根据病理组织学和形态学变化,评估Xeno-ADM的生物相容性.结果 移植早期(<16周),异种组移植物炎性反应程度较异体组强烈,外周包膜厚度较异体组更厚,血管化程度低于异体组.16～32周,异种组与异体组炎性反应无明显区别,外周包膜形成不明显.结论 Xeno-ADM具有良好的生物相容性,适合作为一种生物软组织填充材料.     

异种(猪)脱细胞真皮基质在瘢痕整形中的应用

目的 探讨异种(猪)脱细胞真皮基质在切除瘢痕后做为真皮替代物的临床作用.方法 采用DR脱细胞猪皮和大张自体刃厚皮复合移植(一步法和二步法)覆盖切除瘢痕后的创面.结果 对47例瘢痕患者中的22例进行异种(猪)脱细胞真皮基质移植7 d左右,再植大张自体刃厚皮的二步法复合移植,其中在脂肪层上复合移植成活率(88.3±3.7)%,在深筋膜层上复合移植成活率为(89.7±3.4)%.25例采用异种(猪)脱细胞真皮基质+自体刃厚皮同时复合移植的一步法,在脂肪层上复合移植成活率(92.5±4.1)%,在深筋膜层上复合移植成活率为(93.2±5.2)%.复合移植成活后,创面颜包淡红,表面平坦光滑,柔韧性好.最长随访时间90 d,复合区皮肤近似正常,皮肤结实、光滑、平整,可捏起,仅见移植边缘有少许轻微瘢痕增生,功能好.结论 一步法复合移植比二步法成活率高,且脂肪层上的复合移植皮比深筋膜上的复合移植皮肤弹性较好,也更柔软、丰满,两者在功能上则无区别.异种(猪)脱细胞真皮基质是覆盖瘢痕切除后创面的较理想的真皮替代物.     

基底膜对异种脱细胞真皮基质移植免疫排斥反应的影响

目的比较去基底膜与保留完整基底膜的异种脱细胞真皮基质（Xeno-ADM）移植免疫学方面的差异。方法建立SD大鼠皮下脱细胞真皮基质（ADM）移植模型，120只SD大鼠随机分为4组：去基底膜组、基底膜组、自体组、空白对照组。分别将带基底膜和去基底膜的Xeno-ADM植入大鼠背部皮下，自体组分别将大鼠自体真皮基质植入大鼠背部皮下，空白对照组不植入任何材料。于术后2-32周进行组织学观察，并采用Elisa和实时定量PCR方法，检测ADM移植后血清中TNFα、IFNγ、IL-6和IgG表达水平的动态变化。结果移植早期（〈16周）基底膜组移植物炎性反应程度较去基底膜组强烈，IgG表达水平在ADM移植2周时最高，而TNFα、IFNγ、1L-6表达水平在ADM移植后8周最高，上述所有指标在移植后16周时趋向稳定，接近对照组。但3个实验组的TNFα、IFNγ、IL-6和IgG表达水平高低依次为：基底膜组〉去基底膜组〉自体组。结论移植早期（〈16周），去基底膜的Xeno-ADM移植优于带基底膜的Xeno-ADM移植。基底膜成分是Xeno-ADM移植早期引发宿主免疫反应增强的一个因素。     

十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的 探讨十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度及作用时间.方法 取临床截肢患者废弃的皮肤,分成90块,随机分成6组,每块约1 cm×1 cm,分别置于0.1%、0.25%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%十二烷基硫酸钠溶液中脱细胞,每隔8 h取材一次,分别取材15次.取材标本行大体和组织学观察.结果 肉眼观察十二烷基硫酸钠作用8 h后,0.25%组可将表皮与真皮完整分离;光镜检查显示0.25%十二烷基硫酸钠在作用40 h后,能将真皮内的细胞及细胞碎片脱净,形成脱细胞真皮基质.制备的脱细胞真皮基质,主要由胶原纤维网架构成,其他组作用120 h也无法形成真正的脱细胞真皮基质.结论 十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度为0.25%,最佳时间为40 h.与其他方法比较,具有简便、快捷、有效、价廉、宜推广等特点,可为临床急诊的修复争取宝贵的时间.     

十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的探讨十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度及作用时间。方法取临床截肢患者废弃的皮肤,分成90块,随机分成6组,每块约1cm×1cm,分别置于0.1%、0.25%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%十二烷基硫酸钠溶液中脱细胞,每隔8h取材一次,分别取材15次。取材标本行大体和组织学观察。结果肉眼观察:十二烷基硫酸钠作用8h后,0.25%组可将表皮与真皮完整分离;光镜检查显示:0.25%十二烷基硫酸钠在作用40h后,能将真皮内的细胞及细胞碎片脱净,形成脱细胞真皮基质。制备的脱细胞真皮基质,主要由胶原纤维网架构成,其他组作用120h也无法形成真正的脱细胞真皮基质。结论十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度为0.25%,最佳时间为40h。与其他方法比较,具有简便、快捷、有效、价廉、宜推广等特点,可为临床急诊的修复争取宝贵的时间。     

细胞因子对异种脱细胞真皮基质免疫调节作用的临床研究

目的　探讨烧伤患者接受异种 /异体脱细胞真皮基质 (xeno /allo ADM )移植后全身和局部多种细胞因子与移植物近期转归的关系。　方法　在大面积烧伤患者的四肢切痂创面上 ,移植xeno ADM (12例 ,19块 )或allo ADM(15例 ,18块 ) ,其上覆盖自体超薄断层皮片 ,并以 6例单纯移植自体中厚断层皮片 (auto TTS)的烧伤患者为对照。移植物成活后 4～ 8周 ,收集局部组织标本、血清和xeno ADM排斥后的创面渗出液 ,采用免疫组织化学染色与酶联免疫吸附法 (ELISA) ,检测白细胞介素 (IL) 1β、IL 4、IL 6、肿瘤坏死因子α(TNF α)和γ型干扰素 (IFN γ)的含量。　结果　免疫组织化学染色结果显示 ,移植物内IL 1β、IL 4、IL 6、TNF α和IFN γ的阳性细胞密度或着色强度相比较 ,xeno ADM >allo ADM >auto TTS (P <0 .0 5 )。ELISA检测结果显示 ,xeno ADM被排斥后创面渗出液中IL 4、IL 6、TNF α和IFN γ水平明显高于自体血清 ,但其血清IL 4与IFN γ水平分别低于和高于未排斥时。xeno ADM移植后血清中IL 4、IFN γ水平明显高于allo ADM和auto TTS(P <0 .0 5～ 0 .0 1)。　结论　xeno ADM移植后可在局部检测到高水平的IL 1β、IL 4、IL 6、IFN γ ,可能与细胞杀伤和细胞因子介导的免疫放大作用有关。这些细胞因子的动态变     

异种脱细胞真皮基质与自体皮复合移植后基底膜重塑的实验观察

目的　观察异种 (猪 )脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植模型中基底膜重塑的变化规律。　方法　将异种 (猪 )脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植于大鼠创面 ,分别于移植后 1、2、3、4、8、12、16周留取标本 ,采用免疫组化、透射电镜等方法 ,观察基底膜中层粘连蛋白的变化规律及 12周时基底膜的超微结构 ,同时以单纯薄自体皮移植进行对照。　结果　异种脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后 ,层粘连蛋白的表达高于单纯薄自体皮移植。 12周时复合移植组基底膜清晰连续 ,半桥粒较多且分布均匀 ;薄自体皮组基底膜致密板模糊、不连续 ,半桥粒减少且分布不均。　结论　异种脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后 ,基底膜中层粘连蛋白表达增高 ,可能有利于复合皮移植后基底膜的重塑 ,增强表皮和真皮之间的连接 ,进而改善创面愈合质量     

烧伤变性脱细胞真皮基质可再生利用的实验研究

目的 探讨烧伤变性脱细胞真皮基质(DADM)作为真皮替代物用于创面修复的可行性. 方法 (1)取12只Wistar大鼠,其中9只背部造成深Ⅱ度烫伤(以下称烧伤)创面,分别于伤后1、2、3d(每时相点3只)取创面全厚皮肤,用2.5 g/L胰蛋白酶-体积分数0.5％ Triton X-100行脱细胞处理制成DADM,相应称为DADM-1 d、DADM-2 d、DADM-3 d;余下3只大鼠不致伤,同法制备ADM作为对照.对ADM和各DADM行大体、组织学观察及微生物学和生物力学检测(极限抗拉强度、最大拉力、断裂伸长率、应力-应变关系).(2)另取64只Wistar大鼠,按随机数字表法分为ADM组、DADM-1d组、DADM-2 d组、DADM-3d组,每组16只.于各大鼠背部制作一2.0 cm×1.8 cm大小皮瓣,将前述ADM和DADM-1 d、DADM-2d、DADM-3 d切制成1.8cm×1.5 cm大小后分别埋植于皮瓣下.术后1、3、5、9周,每组每时相点取4只大鼠,肉眼观察创面愈合情况及埋植物的变化,并对埋植物行组织学观察.对数据行单因素方差分析及t检验. 结果 (1)新鲜制备的各DADM呈乳白色,质地柔软有弹性,韧性较ADM弱.光学显微镜下见ADM和各DADM中均无上皮结构和细胞存在,DADM胶原纤维增粗程度不均匀,排列紊乱,嗜伊红性增强.各DADM微生物学检测结果均为阴性.DADM-1d、DADM-2 d、DADM-3 d之间极限抗拉强度、最大拉力、断裂伸长率和应力-应变关系比较,差异均无统计学意义(F值为0.088～3.591,P值均大于0.05);其中DADM-3d此4项指标值最高,分别为(13.0±2.4) MPa、(61 ±4)N、(173±7)％、(45 7±2.0)％.ADM此4项指标各为(19.0±2.6) MPa、(95±4)N、(201±5)％、(62.5±2.2)％,与3种DADM两两比较均偏高(t值为6.424 ～17.125,P值均小于0.01).(2)埋植术后1周,各组大鼠创面无渗出或红肿,埋植物未收缩或卷曲;创面有炎性细胞浸润并有Fb及毛细血管长入.术后3周时,DADM-1d、DADM-2 d、ADM组埋植区毛发生长正常,DADM-3 d组埋植区毛发较稀疏;各组炎性细胞减少,Fb增多,有新生小血管长入,DADM-3 d组炎性细胞减退稍延迟.术后第5周,各组埋植区毛发恢复正常,埋植物收缩、变薄,表面纤维膜包裹紧密,有较大血管束长入;各组真皮基质与周围正常组织融合.术后第9周,ADM和DADM均为薄、软白色组织片,与皮瓣内面连接紧密;各组无炎性细胞浸润,胶原纤维排列规则、致密,与正常胶原组织融合. 结论 烧伤DADM无明显免疫原性,生物相容性好,经离体改造有望成为创面修复治疗中的真皮替代物.     

Human acellular dermal wound matrix: evidence and experience

A chronic wound fails to complete an orderly and timely reparative process and places patients at increased risk for wound complications that negatively impact quality of life and require greater health care expenditure. The role of extracellular matrix (ECM) is critical in normal and chronic wound repair. Not only is ECM the largest component of the dermal skin layer, but also ECM proteins provide structure and cell signalling that are necessary for successful tissue repair. Chronic wounds are characterised by their inflammatory and proteolytic environment, which degrades the ECM. Human acellular dermal matrices, which provide an ECM scaffold, therefore, are being used to treat chronic wounds. The ideal human acellular dermal wound matrix (HADWM) would support regenerative healing, providing a structure that could be repopulated by the body's cells. Experienced wound care investigators and clinicians discussed the function of ECM, the evidence related to a specific HADWM (Graftjacket^® regenerative tissue matrix, Wright Medical Technology, Inc., licensed by KCI USA, Inc., San Antonio, TX), and their clinical experience with this scaffold. This article distills these discussions into an evidence‐based and practical overview for treating chronic lower extremity wounds with this HADWM.     

无细胞异种真皮基质降解因素的研究

目的　探讨影响异种无细胞真皮基质 (ADM )降解吸收的相关因素及其与炎症反应之间的关系。方法　猪和兔断层中厚皮片经Trypsin等脱细胞 ,分别制成异种 /异体ADM (xeno /allo ADM ) ,再按预处理方法不同分组 :戊二醛交联的xeno ADM (A)组 ;网状打孔和交联的xeno ADM (B)组 ;xeno ADM (C)组和allo ADM (D)组 ,分别埋植于兔皮下 ,术后 4～ 32周作大体观察和组织学检查。结果　埋植术后 4～ 12周期间 ,A组和B组可见较多的异物巨细胞 ,各组炎症反应和移植物被降解 /同化程度依次为 :C >B >A >D(P <0 .0 5～ 0 .0 0 1) ,二者之间有显著的正相关 (n =84,r =0 .185 ,P <0 .0 1)。结论　xeno ADM生物相容性远不及allo ADM ,其降解除受戊二醛交联作用和网状打孔因素影响外 ,还与局部血运和所受应力有关 ,其中炎症 免疫反应可能是降解最直接的原因。     

异种(猪)脱细胞真皮基质微粒与自体脂肪颗粒移植的对比研究

目的:探索一种更为理想的取材广泛的注射充填材料。方法:采取分别将异种(猪)脱细胞真皮基质微粒(xenogenicacellulardermalmatrix简称ADM微粒)和自体脂肪颗粒注入乳猪耳背皮下形成皮丘,定时对皮丘进行测量、并做必要的组织切片检查。结果:移植后24周ADM微粒吸收率约为23.86%,自体脂肪颗粒吸收率为43.77%,经方差分析P<0.01;ADM微粒注射后从外周向中央细胞化及血管化,有极少量的中性粒细胞和单核细胞。自体脂肪颗粒移植后可见到生存下来的脂肪细胞,其间有淋巴细胞和单核细胞浸润,并有异物巨细胞反应。结论:ADM微粒是一种取材广泛、安全性好、吸收率低、使用方便的理想注射充填材料。