转化生长因子 β1 在大鼠睾丸及附睾中的表达研究

目的 通过研究转化生长因子（TGFβ1）在大鼠睾丸、附睾中的表达特征,探讨其在男性生殖系统中的作用.方法 用免疫组化SP法检测TGFβ1蛋白在青春期SD大鼠睾丸、附睾中的表达与定位.结果 TGFβ1在大鼠睾丸和附睾中都有特征性表达.TGFβ1蛋白在睾丸内表达于生精细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞胞质及顶体;附睾中表达于主细胞胞质内,附睾上皮亮细胞、晕细胞和基细胞中均为阴性.结论 大鼠睾丸、附睾中TGFβ1蛋白的特征性表达提示,它们可由不同生精上皮细胞、间质细胞和附睾主细胞产生,可能以自分泌或旁分泌的形式作用于生殖细胞或间质细胞,直接或间接地影响精子的发生、发育和成熟过程,并与精子的活动和受精能力有关.     

附睾阴离子分泌调控机制

附睾是男性生殖系统的一个重要组成部分,精子成熟就是在附睾里发生的。影响精子成熟的附睾内微环境取决于附睾上皮的分泌。因此研究附睾阴离子分泌调控机制将有助于进一步揭示附睾功能及其对精子成熟的重要作用。本研究基于这样的一个设想,假如精子成熟依赖于附睾阴离     

大鼠储精囊分泌蛋白Ⅱ在精子表面的荧光定位研究(文摘)

本文报道应用免疫荧光定位技术首次证明大鼠储精囊分泌蛋白Ⅱ(SVPⅡ)和附睾精子表面结合.纯化的SVPⅡ和附睾精子一起培育后,经兔抗SVPⅡ抗血清和FITC标记的羊抗兔抗体共同保温,在荧光显微镜下观察,发现整个附睾精子表面被黄色的荧光所覆盖,且以精子头部为著;而同时以兔免疫前血清取代兔抗SVPⅡ抗血清作对照,精子表面未见任何荧     

计划生育——基础理论：附睾蛋白酶抑制蛋白的研究进展

附睾蛋白酶抑制蛋白（Eppin）基因是最近克隆到的一种人类和小鼠附睾和睾丸中特异性表达的基因。Eppin蛋白是一种富含半胱氨酸同时含有乳清酸蛋白（WAP）和牛胰蛋白酶抑制蛋白（BPTI）结构域的分泌蛋白，它与精子成熟和生殖有关，此外还参与了人类附睾的天然免疫系统。针对Eppin蛋白的免疫避孕是一种有效和安全的方式，但还需进一步验证它的安全性。该文就Eppln的生殖和免疫功能及在免疫避孕中的应用作了综述。参19     

基础理论

060001附睾蛋白酶抑制蛋白的研究进展/郭晓强∥中华男科学杂志.—2005,11(11).—851~853附睾蛋白酶抑制蛋白(Eppin)基因是最近克隆到的一种人类和小鼠附睾和睾丸中特异性表达的基因。Eppin蛋白是一种富含半胱氨酸同时含有乳清酸蛋白(WAP)和牛胰蛋白酶抑制蛋白(BPTI)结构域的分泌蛋白,它与精子成熟和生殖有关,此外还参与了人类附睾的天然免疫系统。针对Eppin蛋白的免疫避孕是一种有效和安全的方式,但还需进一步验证它的安全性。该文就Eppin的生殖和免疫功能及在免疫避孕中的应用作了综述。参19(周继铭)基础理论@周继铭…     

附睾蛋白RhoA参与人精子顶体反应

目的:研究RhoA在男性生殖系统中的表达和功能.方法:采用RT-PCR来检测RhoA的mRNA表达,Western blot和免疫组化用来检测RhoA蛋白在人睾丸,附睾及成熟精子中的表达.免疫荧光用来观察这个蛋白在人精子上的定位.豌豆凝集素(PSA)染色用来确定精子顶体反应率.结果:只能在附睾中检测到RhoA的mRNA,而RhoA蛋白不仅在附睾上皮中表达,在人精子上也有表达.它位于人精子的顶体和尾部,并且随着顶体反应转移到精子的赤道部及顶体后区.同时特异的RhoA抗体能够显著地抑制精子发生顶体反应(P<0.01).结论:结果表明RhoA可能是在附睾成熟过程中带到人精子质膜表面,从而使精子获得发生顶体反应的能力.     

基于Nrf2通路研究二仙解毒方对弱精子症大鼠精子微环境的影响*

目的基于Nrf2信号通路研究二仙解毒方对弱精子症模型大鼠精子微环境的改善作用及可能机制。方法 使用奥硝唑法构建成熟雄性大鼠弱精子症模型,随机分为模型组、二仙解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组、左卡尼汀组,每组各12只,连续灌胃4周后,检测各组大鼠精子浓度、精子活动力、相关氧化应激指标、大鼠睾丸及附睾中基于Nrf2蛋白表达及mRNA表达。结果 二仙解毒方可增强弱精子症模型大鼠精子活动力,剂量越高,氧化应激指标改变越显著,二仙解毒方高剂量组可将模型组大鼠的精液抗氧化能力恢复至正常大鼠水平;二仙解毒方可促进大鼠附睾、睾丸组织Nrf2基因转录与蛋白表达。结论 二仙解毒方确有提高精子活动力的作用,其可能的作用机制为通过诱导上调生殖细胞内Nrf2 mRNA和蛋白表达,以改善弱精子症大鼠精液氧化应激状态,从而提高精子活动力。     

卵巢癌患者血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4含量与细胞浸润性生长的相关性研究

目的:研究卵巢癌患者血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4含量与细胞浸润性生长的相关性。方法:选择2013年6月~2016年12月期间在青岛大学附属医院西海岸医疗中心接受手术切除治疗的卵巢癌患者作为研究的卵巢癌组,同期在中国石油大学(华东)医院体检的健康女性作为研究的对照组。取两组受试者的血清并检测间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4的含量,取卵巢癌组换的卵巢癌病灶、癌旁病灶并检测增殖基因、凋亡基因、侵袭基因的表达量。结果:卵巢癌组患者血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4的含量均显著高于对照组;卵巢癌病灶中FUNDC1、LSD1、TNFAIP8、CXCR4、β-catenin、CD44、PELP1、Slug、ZEB1、Snail的mRNA表达量显著高于癌旁病灶且与血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4的含量呈正相关,MFN2、PTEN、FN14、E-cadherin的mRNA表达量显著低于癌旁病灶且与血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4的含量呈负相关。结论:卵巢癌患者血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4的含量异常升高且与癌细胞的浸润性生长有关。     

慢性铝暴露对小鼠精子质量及睾丸细胞焦亡的影响

目的 研究铝暴露对小鼠精子质量及睾丸细胞焦亡的影响。方法 将12只成熟雄性c57bl/6j小鼠分为两组：对照组(n=6)、铝模型组(n=6),对照组用蒸馏水灌胃，铝模型组采用10 mg/(kg·d) AlCl₃灌胃，8周后，获取小鼠睾丸组织、附睾组织及附睾精子。对附睾精子进行精子质量分析，对睾丸及附睾HE染色进行病理检测；运用PCR、免疫组化检测睾丸组织细胞焦亡关键基因的mRNA和蛋白表达。结果 与对照组相比，铝暴露的小鼠睾丸重量、附睾重量、精子活力、精子数量均显著下降(P<0.01),精子畸形率显著增加(P<0.01)。睾丸形态学观察结果显示，铝暴露小鼠睾丸生精小管中细胞排列紊乱，生精小管的面积和直径减小，管内精子减少。PCR及免疫组化结果显示，铝暴露小鼠睾丸组织中焦亡关键基因Nlrp3、Caspase-1、Gsdmd和IL-1b的mRNA及蛋白表达均上调(P<0.01)。结论 铝暴露可降低小鼠的精子质量，促进睾丸细胞焦亡，从而损伤雄性生殖系统。     

附睾丸与精子成熟的研究进展

附睾丸与精子成熟的研究进展胡向农综述周性明审校南京铁道医学院附属医院泌尿外科２１０００９哺乳动物的附睾为精子的成熟提供了特殊的内环境．在类固醇激素的调控下，附睾上皮的合成、分泌、转运等功能使精子发生了一系列结构、生化和功能的改变，获得了授精能力和运动...     

HE4研究进展

<正>人附睾分泌蛋白4(Human epididymis gene protein 4)是新近提出的肿瘤标志物,它最早由Kirchhoff等[1,2]在1991年发现,从人的附睾远端上皮细胞中克隆到HE4基因的cDNA,有学者认为其功能可能与精子成熟或与天然免疫性有关,但对其具体功能仍不清楚[3],本文对HE4的研究进展做一综述。     

HSP90β在小鼠生殖系统中的表达及调控

目的研究热休克蛋白90β（HSP90β）在小鼠睾丸、附睾、精子中的表达及调控机制。方法从mRNA和蛋白水平上对
HSP90β在小鼠睾丸和附睾组织细胞中及精子上表达及定位进行分析,同时对其基因在雄性生殖中的表达调控进行初步探索。结
果HSP90β mRNA在小鼠附睾中的表达量比在睾丸中高。在小鼠精子中定位于顶体部位。其基因在去势小鼠的附睾中表达降
低,补充睾酮后又恢复正常,在发育中小鼠的睾丸、附睾中表达也有变化。结论HSP90β在小鼠精子形成及受精中可能发挥重要
作用;其在去势小鼠附睾中和在出生后不同阶段小鼠睾丸、附睾中的表达模式,说明其基因表达受激素调控和发育调控的影响。
     

NLRP6炎症小体在肠道中的功能

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP) 6炎症小体由NLRP6、胱天蛋白酶1和含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白组成,在肠道菌群和宿主的相互作用中发挥重要作用,具有调节肠道菌群结构、抵御肠道RNA病毒、促进肠道黏液分泌、调节抗菌肽产生、促进损伤黏膜修复等多种功能,其中部分功能依赖于其下游的炎症因子白细胞介素-18。NLRP6炎症小体可能与肠道疾病及其他菌群异常相关疾病的发病机制有关,现已发现NLRP6表达在炎性肠病、结肠炎相关癌变、先天性巨结肠、肠易激综合征等疾病中均有变化,但具体机制尚未明确,仍有待进一步研究。     

精索静脉曲张与弱精子症动物模型中精子CatSper3和CatSper4表达的关系

目的 探讨精索静脉曲张动物模型中精子特异性阳离子通道(CatSper)3、CatSper4的表达差异,以及精索静脉曲张导致的弱精子症与CatSper3、CatSper4的关系;并探讨CatSper抑制剂对附睾成熟精子的作用。方法 建立精索静脉曲张大鼠模型。剪碎附睾组织,离心收集附睾精子,对大鼠进行精子形态学分析。采用qRT-PCR和Western-blot检测大鼠精子中CatSper3、CatSper4的表达情况。加入10μmol/L的CatSper抑制剂NNC 55-0396与健康大鼠附睾成熟精子孵育24 h, ELISA法检测实验组和对照组精子中腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量。结果 精索静脉曲张大鼠模型中畸形精子比例较对照组增高,精子数量明显减少。qRT-PCR检测结果可见,实验组的CatSper3、CatSper4 mRNA水平较对照组升高;但Western-blot检测发现,CatSper3、CatSper 4蛋白相对表达量较对照组明显降低。通过CatSper抑制剂NNC 55-0396处理附睾精子后,其ATP含量无显著变化。结论 精索静脉曲张可导致精子数量减少和畸形精子产生,...     

膜联蛋白A1在小鼠精子的定位

目的对小鼠精子膜联蛋白A1(AnxA1)进行定位,了解其与精子睾丸后成熟、获能、顶体反应的关系。方法用间接免疫荧光染色对睾丸、附睾精子以及诱导获能、顶体反应的精子进行膜联蛋白A1定位,同时用考马斯亮蓝染色法鉴定顶体反应率。结果取自睾丸、附睾头、体、尾部的精子膜联蛋白A1均分布于顶体帽区及尾部;诱导获能、顶体反应的精子头部荧光呈现2种类型:顶体帽型(Cap),赤道段-顶体后区型(Ep)。获能组精子Cap型(97.3±1.0)%,Ep型(2.7±1.0)%;顶体反应组精子Cap型(41.8±4.1)%,Ep型(58.2±4.1)%。考马斯亮蓝染色呈顶体反应(AR)型精子获能组为(5.4±2.5)%,顶体反应组为(64.7±3.7)%。相关分析表明AnxA1荧光标记Ep型百分率与考马斯亮蓝染色AR型百分率呈高度正相关(P<0.001)。结论在附睾成熟过程中及获能后小鼠精子膜联蛋白A1分布无明显变化,顶体反应后转移至赤道段、顶体后区,可能参与精子的钙依赖事件如顶体反应、精卵融合过程。     

骨桥蛋白在雄性小鼠生殖系统中的表达及意义

目的:检测骨桥蛋白(OPN)在小鼠睾丸、附睾、精子中的表达,探讨其意义。方法:用免疫组织化学方法检测OPN在正常小鼠睾丸及附睾中的表达情况,免疫细胞荧光法检测OPN在小鼠精子中的表达情况,分析OPN与雄性小鼠生殖能力的关系。结果:OPN在小鼠睾丸、附睾组织及精子上均具有特征性表达。在睾丸中,OPN表达于Sertoli细胞、Leydig细胞以及各级生精细胞,尤其是精原细胞、精子细胞和精子的胞质中;附睾内,OPN的表达主要见于各段上皮主细胞胞质中,部分基细胞、亮细胞中也可见到免疫阳性反应。并且附睾头部的免疫阳性染色相对较弱;免疫荧光染色则将OPN定位于附睾尾精子的顶体帽区及鞭毛。结论:小鼠睾丸、附睾及精子中均存在OPN的特异性表达,OPN可能参与精子的发生及成熟过程,并与精子的活力和受精能力密切相关。     

梗阻性无精子症患者附睾蛋白P34h的表达及其意义

目的:探讨梗阻性无精子症患者的附睾组织中附睾蛋白P34h mRNA及蛋白表达情况,并探讨其在梗阻性无精子症患者中的意义?方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例因不同梗阻(输精管或射精管水平梗阻)所致的梗阻性无精子症患者附睾组织中P34h基因mRNA的表达水平,Western Blot检测2组P34h蛋白的表达?结果:2组均有P34h mRNA的表达,输精管梗阻的P34h/β-actin均值为0.418 ± 0.045,射精管梗阻的P34h/β-actin均值为0.719 ± 0.069,输精管梗阻的附睾组织中P34h mRNA水平显著低于射精管梗阻(P < 0.05)?2组亦均有P34h蛋白的表达,输精管梗阻平均光密度为 0.095 ± 0.014,射精管梗阻为0.276 ± 0.054(P < 0.05),两组P34h蛋白的表达差异有统计学意义?结论:P34h mRNA及其蛋白在不同梗阻因素所致的无精子症患者的附睾中表达水平有明显差异,提示P34h可能是梗阻性无精子症时导致精子成熟障碍的一个重要因素?     

精原干细胞体内转染途径建立rsP3111转基因小鼠的可行性研究

目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以Xholl和BdmHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer—N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer—N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer—N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer—N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表选为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。     

低浓度臭氧对小鼠生长发育的影响

目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以Xholl和BdmHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer—N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer—N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer—N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer—N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表选为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。     

经腹股沟管输精管结扎后兔附睾内的精子郁积

目的了解经腹股沟管的兔输精管结扎术后附睾内的精子郁积情况。方法6月龄正常雄性日本大耳白兔18只,经腹股沟管进行单侧闭合性(11只动物)和开放性(7只动物)输精管结扎,术后3月取双侧附睾,制作甲基丙烯酸树脂包埋切片,用体视学方法定量研究附睾内郁积的精子团的体积。结果两种结扎术后结扎侧附睾的总体积均显著增加(与对侧假手术侧相比),分别增加了59%(闭合性结扎)、44%(开放性结扎);附睾内精子团的总体积显著增加了148%(闭合性结扎)、120%(开放性结扎)。结扎侧附睾的肿胀以及附睾内精子的郁积主要在附睾的尾部,附睾头部及体部的肿胀及其内的精子郁积并不明显。结论远离附睾尾的兔输精管结扎术后3月,睾丸仍在产生大量精子,附睾内精子大量郁积。