抗极低密度脂蛋白受体单克隆抗体的大量制备及纯化

背景：极低密度脂蛋白受体被认为是一种“瑞士军刀”样多功能受体,对该受体的研究很广泛,但其商品化抗体种类较少,价格偏贵。 目的：获得研究可用的抗极低密度脂蛋白受体的单克隆抗体。 方法：为了获得抗极低密度脂蛋白受体单克隆抗体,选用可分泌针对极低密度脂蛋白受体胞内段的单克隆抗体的杂交瘤细胞IgG 6A6。通过将杂交瘤细胞IgG 6A6注入Balb/c小鼠腹腔内,2周后收集腹水,分别通过盐析法(正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法)初步纯化和亲和层析进一步纯化目的蛋白,获得针对极低密度脂蛋白受体胞内段的单克隆抗体。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其相对分子质量和纯度,酶联免疫吸附实验检测其活性。 结果与结论：未纯化腹水Western Blotting结果显示条带较多,背景不干净;而经正辛酸-饱和硫酸铵法初步纯化的腹水、经Protein A进一步纯化得到的抗体均可特异识别极低密度脂蛋白受体。提示经盐析法和Protein A Agarose纯化可获得较纯和有活性的单克隆抗     

用抗旋毛虫单克隆抗体纯化抗原诊断旋毛虫病

旋毛虫病的血清学诊断方法很多,但假阳性反应未能完全排除。作者用旋毛虫单克隆抗体(McAb)免疫亲和层析法,对粗制抗原进行纯化,再用纯化抗原作ELISA,诊断旋毛虫病,提高了诊断的特异性。1 材料和方法 制取纯净的裸肌旋毛虫幼虫,于0.01mol/L pH7.2 PBS中超声(15kHz,每次5min,共4次)匀浆,以7500r/min将匀浆离心10min,收集上清液,此即为旋毛虫可溶性粗制抗原。经分光光度计测     

抗乙酰胆碱受体的单克隆抗体

用电鳗等放电鱼类放电器官的乙酰胆碱受体(AChR,由分子量分别为40,000、50,000、60,000和65,000的α、β、γ和δ亚单位按2∶1∶1∶1比例结合而成)或用由哺乳类动物肌肉提取的AChR免疫小鼠或大白鼠,获得能产生抗AChR抗体的细胞.用这种细胞再和小鼠或大白鼠的骨髓瘤细胞     

β3肾上腺素受体与心力衰竭

肾上腺素β3受体参与心脏和血管的生理调控心脏。β3受体兴奋表现为负性变力作用。心力衰竭时 ,β3受体含量明显增加 ,其负性肌力作用更显著 ,提示 β3受体在心功能恶化和心力衰竭进程中具有重要作用。     

β3肾上腺素受体与脂肪代谢

β3肾上腺素受体(β3-adrenergic receptors，β3AR)对脂肪代谢有重要调节作用．交感神经兴奋时．棕色和白色脂肪分解均增快．棕色脂肪组织产热增加。近年来，随着肥胖症及与其相关疾病的发病率日益增多，β3AR与肥胖的关系逐渐引起人们的重视。在啮齿类动物大鼠用基因工程方法研究出了特异的β3AR激动药，并用新开发的β3AR激动药对人体β3AR的生理功能进行了一些研究。     

抗人 IL－ 1β单克隆抗体的制备及初步应用

白细胞介素 1(interleukin-1, IL-1)是由多种细胞分泌的细胞因子，具有广泛的免疫调节作用，同时又具有致热和介导炎症的作用，是急性期反应的主要调节因子〔1〕。     

β肾上腺素能受体的基因结构

β肾上腺素能受体属于G蛋白偶联受体,分为β_1、β_2、β_3受体亚型,这些亚型具有相似的高级结构。各个亚型的基因克隆表明它们由不同的基因编码。不同亚型的基因具有明显的同源性。     

抗降钙素相关肽单克隆抗体的研制

抗降钙素相关肽单克隆抗体的研制陆青，黎梅兰，钱学贤，施溥涛，王素华，刘磊（第一军医大学珠江医院，广州５１０２８０）心血管内分泌激素一降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）是一组由３７个氨基酸组成、分子量为３７８９的小分子多肽，具有强大的降血压的效应。本研究针对...     

人源性抗HBsAg单克隆抗体Fab片段的表达与纯化

对已筛选到的人源性抗ＨＢｓＡｇ特异性噬菌体抗体基因文库进行表达研究，将特异性噬粒转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ，反复冻溶法制备可溶性Ｆａｂ片段。免疫印迹实验表明大肠杆菌质周腔内有可溶性Ｆａｂ片段的表达。制备羊抗人ＩｇＧ Ｆａｂ抗血清，建立抗人ＩｇＧ Ｆａｂ抗体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析柱，纯化Ｆａｂ片段。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯化的Ｆａｂ达免疫纯，点印迹法表达纯化后的Ｆａｂ片段具有中和ＨＢｓＡ     

自身抗体和β-肾上腺素受体

近年来认为抗激素或神经体液因素的细胞表面受体的自身抗体可自然产生,并且能使异常的内分泌或神经肌肉功能的临床状态明显化。例如,骨骼肌乙酰胆硷受体的自身抗体与重症肌无力、促甲状腺激素受体的自身抗体与突眼性甲状腺肿有关;在一些病人     

用自制抗HRP－抗HBc双特异性单克隆抗体检测抗HBc的初步应用

用杂交瘤融合法建立了抗ＨＲＰ－抗ＨＢｃ双特异性单克隆抗体（ＢｓＡｂ）杂交－杂交瘤细胞系，它分泌的腹水抗体经ＦＰＬＣ－离子交换层析梯度盐洗脱呈现三个主峰，抗体活性检测表明依次为抗ＨＲＰ、ＢｓＡｂ及抗ＨＢｃ。试用ＢｓＡｂ－ＨＲＰ复合物检测乙肝病例血样，与市售试剂盒初步比较，效果满意。     

用自制抗HRP－抗HBc双特异性单克隆抗体检测抗HBc的初步应用

用杂交瘤融合法建立了抗ＨＲＰ－抗ＨＢｃ双特异性单克隆抗体（ＢｓＡｂ）杂交－杂交瘤细胞系，它分泌的腹水抗体经ＦＰＬＣ－离子交换层析梯度盐洗脱呈现三个主峰，抗体活性检测表明依次为抗ＨＲＰ、ＢｓＡｂ及抗ＨＢｃ。试用ＢｓＡｂ－ＨＲＰ复合物检测乙肝病例血样，与市售试剂盒初步比较，效果满意。     

β-肾上腺素受体亚单位的证实

多种激素和神经递质是与腺苷酸环化酶相结合的特异性受体起作用的。Sutherland等首先提出,此受体构成具有使腺苷酸环化酶变构效应点的调节亚单位。最近,有两方面的实验资料支持这种主张,即β-受体和膜上腺苷酸环化酶位于分离的大分子上。Lefkowitz等用分子筛色谱法从毛地黄甙溶解红细胞膜所得腺苷酸环化酶中分离出β-受体。Schramm等证明,火鸡红细胞的β-受体可被     

β-肾上腺素能受体的免疫学研究

为了解β肾上腺素能受体(β-受体)的免疫学特性,并为β受体的生物化学研究提供必要的手段,围绕β受体多克隆和单克隆抗体进行了一系列研究。     

β2肾上腺素能受体调节的研究进展

β２肾上腺素能受体具有十分重要的生理功能，对其调节机制的研究已取得若干进展，促进了对Ｇ蛋白耦联类受体的深入了解。     

抗MDV-1 VP22羧基端单克隆抗体的制备与免疫学特性鉴定

目的：制备抗血清Ⅰ型马立克氏病病毒（MDV-1）VP22的单克隆抗体（mAb），并鉴定其免疫学特性。方法：在原核系统中表达VP22羧基端区域（94～243aa），获得融合表达产物GST-VP22C。将该表达产物切胶免疫小鼠，利用杂交瘤技术制备抗MDV-1VP22C的mAb，并通过ELISA、间接免疫荧光（IFA）、Western blot鉴定其特性。结果：获得了2株可稳定分泌抗MDV-1VP22C的mAb的杂交瘤细胞，命名为3F7、4FA。IFA鉴定表明，两株mAb均能与感染MDV-1的成纤维细胞反应，其中，3F7mAb染色呈现MDV空斑，而4FAmAb呈现整个单层的细胞核荧光。ELISA和Westernblot分析表明，3F7能与杆状病毒表达的VP22反应，4FA不具备该特性。对3F7mAb进一步鉴定，确定了该mAb针对的具体位置在94～193aa处，是蛋白转导域的预测位置。结论：成功地制备了抗MDV-1VP22C的mAb，为深入研究VP22蛋白的转导功能提供了有用的试剂。     

抗Thy－1单克隆抗体的免疫抑制作用

从体内、体外研究了抗Ｔｈｙ－１单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的免疫抑制作用。结果表明：（１）体外抗Ｔｈｙ－１ＭｃＡｂ在补体参与下能够杀伤小鼠胸腺细胞，无补体时能抑制ＣｏｎＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增殖反应；（２）在体内，可以抑制小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ和ＰＨＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增殖、但不影响ＬＰＳ诱导的Ｂ淋巴细胞增殖反应。结果说明：抗Ｔｈｙ－１ＭｃＡｂ的免疫抑制作用可能包括补体依赖性细胞毒作用和通过Ｔｈｙ－１分子对Ｔ淋巴细胞功能的抑制。     

β2肾上腺素受体遗传多态性与哮喘

定位在染色体５ｑ３１－３２的人类β２肾上腺素受体基因的几个错义突变异致氨基酸变异体产生，利用定点诱导及重组表达研究β２肾上腺素受体的１６、２７及１６４位氨基酸变异体的功能成为可能，并发现β２肾上腺素受体错义突变引起遗传多态性与哮喘的的表型、血清ＩｇＥ水平、气道高反应性及对β２激动剂的反应都存在一定的相关性，同时，由于环境、人群及种族不同，则β２肾上腺受体遗传多态性与哮喘的生也不近相同。本文就些作一     

用固相提取法纯化单克隆抗体

应用14或15μ大孔径硅胶为基础的抗体交换剂,各种单克隆抗体的纯化已接近均质性。这种纯化经用简单的一步就可完成,此过程包括“批量”或固相从组织培养基、腹水、或血清/血