寄生性原虫病毒研究进展

自从1972年Mattern等首次在溶组织阿米巴的某些虫株中观察到病毒样粒子后，人们相继在阴道毛滴虫、蓝氏贾第鞭毛虫、艾美尔球虫、巴贝斯球虫及利什曼原虫等寄生性原虫中发现特异性双链RNA病毒，它们有的影响虫体表型，有的影响虫体致病性，有的影响虫体生长特性。原虫病毒的发现，为原虫病的诊断与防治、原虫与病毒及宿主关系的研究提供了新的方向，目前原虫病毒已成为原虫学研究的一个活跃领域。本文就几种主要的寄生性原虫病毒的研究进展作一综述。     

蓝氏贾第鞭毛虫病毒研究进展

***自从1972年Mattern等[1,2]首次在溶组织阿米巴的某些虫株中发现病毒样粒子后,人们相继在阴道毛滴虫[3]、蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)[4]、艾美尔球虫[5]、巴贝斯虫[6]及利什曼原虫[7]等原虫中发现特异性双链RNA病毒,目前原虫病毒已成为寄生虫学研究的热点。蓝氏贾第虫病毒(Giardia lam-bliavirus,GLV)是继阴道毛滴虫病毒发现后确认的第2个原虫病毒,GLV的发现为贾第虫病的诊断与防治、原虫与病毒及宿主间相互关系的研究提供了新的方向。1 GLV生物学特征1990年国际病毒分类命名委员会将GLV正式归入单组分双链RNA球状真菌病毒科(To…     

蓝氏贾第虫病毒体外转录体转染条件的研究

目的 确定蓝氏贾第虫病毒体外转录体电穿孔转染的最佳条件。方法 以不同的电击缓冲液、电压及脉冲时间应用GLV和GFP嵌合体体外转录体电穿孔转染蓝氏贾第虫，测定转染虫体的存活率及GFP表达量。结果 在不同转染条件下GLV和GFP嵌合体体外转录体均能成功转染蓝氏贾第虫，且在cytomix缓冲液、1000V／cm、8ms电击条件下，对虫体损伤最小，GFP表达量最高。结论 本试验确定的蓝氏贾第虫病毒体外转录体电穿孔转染最佳条件是电击缓冲液为cytornix缓冲液，电压为1000V／cm、脉)中时间为8ms。     

蓝氏贾第鞭毛虫的能量代谢特征及其酶学研究

蓝氏贾第鞭毛虫（Giardialamblia，或称G．intestinalis或G．duodenalis,简称贾第虫）是一种呈全球分布的寄生于人和哺乳动物肠道内的微需氧原虫。本虫引起以腹泻和消化不良为主要临床表现的贾第虫病（giardiasis）。自20世纪70年代以来，世界各地贾第虫病的流行甚至爆发流行屡有报道。本病已被列为危害人类健康的10种主要寄生虫病之一。贾第虫病也曾在国际旅游者中流行，故又有“旅游者腹泻”之称。近年来，贾第虫已被认为是一种机会致病性原虫，常在同性恋人群中传播并与艾滋病合并感染。     

HIV合并人芽囊原虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染1例

患者,女,64岁,农民,以“腰部间断性疼痛不适”入院。患者人类免疫缺陷病毒（HIV）抗原/抗体检测结果为阳性,粪样常规生理盐水涂片显微镜镜检检出人芽囊原虫和蓝氏贾第鞭毛虫包囊,人芽囊原虫包囊呈圆形、卵圆形,大小不一,1～2颗颗粒状核;碘液染色虫体中间有空泡,在空泡与胞膜之间有不规则、闪亮、似月牙状的边缘,其内见多个小亮点;蓝氏贾第鞭毛虫包囊呈椭圆形,囊壁较厚,与虫体间有明显的间隙,碘液染色囊内轴柱明显,可见2～4个核,核位于轴柱两侧,苏木素染色后包囊内可见明显的4个紫红色的核。巢式PCR从患者粪样DNA中扩增出511 bp的条带,与蓝氏贾第鞭毛虫基因序列TSA417 (GenBank登录号AF065606)的一致性为99%;用人芽囊原虫BhRDr和RD5特异引物PCR扩增核糖体小亚基基因,扩增出约600 bp的条带,测序结果为人芽囊原虫ST1型。结合患者饮生水史、使用非水冲式厕所、饲养猫、犬等流行病学史,诊断为HIV合并人芽囊原虫和蓝氏贾第鞭毛虫混合感染。给予甲硝唑（0.2 g/次,3次/d）治疗4 d后,患者症状缓解并出院。     

检测蓝氏贾第鞭毛虫病毒表达的绿色荧光蛋白间接ELISA方法的建立

目的 建立蓝氏贾第鞭毛虫病毒(GLV)介导的绿色荧光蛋白(GFP)表达定量检测方法，为GFP在寄生性原虫病毒研究中的应用奠定基础。方法 以GFP兔抗血清为一抗，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔血清为二抗，建立GFP定量检测的间接ELISA方法。结果 定量检测GFP的问接ELISA方法最适反应条件为以10％正常胎牛血清作为封闭剂，一抗的最佳稀释度为1：3200，二抗的最佳稀释度为1：1600。结论以GFP兔抗血清为一抗成功建立GFP定量检测的间接EI。ISA方法，检测结果能正确反映GLV介导的GFP表达情况。     

蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建

目的构建蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素(α-8 giardin)特异性锤头状核酶-GCV重组载体。方法采用RNA draw软件对蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素基因序列(GenBank登录号为AY781323)的二级结构进行模拟分析,按照G∶C比例和锤头状核酶设计原则,选取合适的核酶切割靶点,设计特异性锤头状核酶(H8)序列,并将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,获得α-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体(pGCV634/H8/1423)。将载体线性化体外转录产物电击转染至贾第虫滋养体细胞内。提取转染后24 h的各组虫体总RNA,并以其为模板采用RT-PCR验证转染效果及对靶mRNA的切割效果。结果成功设计、合成了蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素mRNA锤头状核酶序列(H8),将其与犬贾第虫病毒载体(GCV)连接,成功构建了pGCV634/H8/1423;RT-PCR实验结果表明,重组载体pGCV634/H8/1423转染贾第虫细胞后24 h可检测到核酶RNA的存在,并实现了对α-8贾第素mRNA高效、特异的切割作用。结论构建的pGCV634/H8/1423能有效转染至贾第虫细胞内,并在其细胞内对α-8贾第素基因...     

蓝氏贾第鞭毛虫潜在致病机制初探

蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)是一种常见的人兽共患寄生性原虫,由其导致的贾第虫病已被世界卫生组织列为危害人类健康的10种主要寄生虫病之一。近年来,贾第虫病的危害日益受到重视,然而贾第虫导致腹泻的致病机制尚不明确,可能与其细胞骨架蛋白、虫体分泌物、L-精氨酸代谢以及表面抗原变异、免疫学改变等多种因素有关,该文对与贾第虫致病机理相关的研究作一综述。     

贾第虫种类、基因型及其分子流行病学研究进展

贾第虫是一种重要的人兽共患肠道原虫,其中蓝氏贾第虫分类较为复杂,至少包含7个（A-G）有效集聚体。基于有限的形态学和宿主特异性研究无法准确鉴定贾第虫基因型及其传播途径,分子生物学分析方法有效地解释了贾第虫病复杂的流行病学及其人兽共患传播机制。     

蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建

目的构建蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)特异性锤头状核酶-犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)重组载体。方法采用RNAdraw软件分析贾第虫编码丙酮酸激酶的基因序列,并设计特异性反义锤头状核酶(PKH)序列,将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建重组载体pGCV-PKH。将重组载体线性化体外转录产物,分别进行贾第虫细胞外、细胞内目的mRNA切割实验,采用荧光显微镜观察转染后24h的各组虫体。采用实时PCR对切割产物进行相对定量分析。结果构建了载有蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶的犬贾第虫病毒重组载体pGCV-PKH。细胞内切割实验结果表明,荧光显微镜下只有pGCV-GFP转染组虫体显示绿色荧光,pGCV-PKH转染组丙酮酸激酶mRNA的相对含量约为正常对照组的33.14%。细胞外切割实验结果表明,该组载体能在细胞外有效切割丙酮酸激酶mRNA,在设定条件下,其切割效率为58.5%。结论重组载体pGCV-PKH能有效转染蓝氏贾第鞭毛虫细胞,并能在其细胞内外对丙酮酸激酶mRNA进行有效切割。     

蓝氏贾第虫谷氨酸脱氢酶基因的克隆及序列分析

目的获取蓝氏贾第虫谷氨酸脱氢酶(GDH)全基因,并对其进行序列分析。方法利用PCR技术扩增蓝氏贾第虫GDH,并将其插入pMD18-T载体,酶切鉴定后进行序列测定及分析。结果DNA序列分析表明,所克隆的GDH基因序列与蓝氏贾第虫Portland-1株谷氨酸脱氢酶基因基本一致,该基因5’上游区具有典型的CAAT/TATA盒,含有GDH启动子序列。结论本研究获得了蓝氏贾第虫GDH启动子,为贾第虫病毒的反向遗传学操作奠定了基础。     

贾第虫病分子生物学诊断方法及其应用

蓝氏贾第鞭毛虫病（giardiasis）,简称贾第虫病,是由蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia）引起的一种以腹泻为主要症状的肠道疾病,也有人称蓝氏鞭毛虫病（lambliasis）。因贾第虫病曾在国际旅游者中流行,故又称为＂旅游者腹泻＂。自20世纪70年代以来,在世界各地相继发生     

检测蓝氏贾第鞭毛虫病毒表达的绿色荧光蛋白间接ELISA方法的建立

目的建立蓝氏贾第鞭毛虫病毒(GLV)介导的绿色荧光蛋白(GFP)表达定量检测方法,为GFP在寄生性原虫病毒研究中的应用奠定基础。方法以GFP兔抗血清为一抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔血清为二抗,建立GFP定量检测的间接ELISA方法。结果定量检测GFP的间接ELISA方法最适反应条件为以10%正常胎牛血清作为封闭剂,一抗的最佳稀释度为1∶3200,二抗的最佳稀释度为1∶1600。结论以GFP兔抗血清为一抗成功建立GFP定量检测的间接ELISA方法,检测结果能正确反映GLV介导的GFP表达情况。     

蓝氏贾第鞭毛虫的细胞骨架蛋白

蓝氏贾第鞭毛虫是一种重要的肠道致病性原虫,其致病力与细胞骨架密切相关。贾第虫具有高度发达的细胞骨架系统,包括8根鞭毛、1个腹吸盘、中体和funis等,主要由微管蛋白、肌动蛋白、动力蛋白、贾第素及其相关蛋白组成。该文就贾第虫细胞骨架及相关蛋白的结构和功能作一综述。     

蓝氏贾第鞭毛虫特异性细胞骨架蛋白——贾第素研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫具有由微管、微丝和骨架蛋白构成的高度发达的细胞骨架系统.近年来,贾第虫的细胞骨架与其致病力的密切关系已经得到证实.在参与细胞骨架构成的众多蛋白质中,特异性细胞骨架蛋白——贾第素是其中重要的成分之一.对贾第素的研究不仅可为贾第虫细胞骨架的研究增添新的知识和研究资料,还可为贾第虫病的致病机制及抗贾第虫药物靶点的选择提供实验依据.     

啮齿类宠物贾第虫感染的调查

贾第虫（Giardia）是一种呈世界性分布的重要的人兽共患寄生原虫,广泛寄生于人、哺乳动物、鸟类、两栖类、啮齿类动物和野生动物,诸多临床病例和流行病学资料均已证明贾虫病是一种具有重要公共卫生意义的原虫病。贾第虫病可经多种途径传播,但水源被污染是造成本病暴发流行的最主要因素,截止到2007年,在325起因水源寄生性原虫引起的疾病暴发中,贾第虫所占比例为40％。     

1例蓝氏贾第鞭毛虫感染者的虫种分子鉴定及基因溯源

对1例蓝氏贾第鞭毛虫感染者进行虫种分子鉴定并分析其感染来源。收集患儿与其父母、保姆的新鲜粪样，碘液染色后镜检，提取粪样DNA，采用巢式PCR扩增贾第虫磷酸丙糖异构酶（tpi）、谷氨酸脱氢酶（gdh）、β-贾第素（bg）基因并测序，通过BLAST、ChromasPro和MEGA 11.0等软件对基因序列进行系统进化分析并判断其集聚体类型。结果显示，镜下可见患儿粪样中有贾第虫滋养体和包囊。巢式PCR均扩增出约500 bp的条带，与贾第虫属tpi、gdh、bg基因片段一致，确认该患儿为贾第虫感染；患儿父母和保姆均无腹泻症状，但在其父亲粪样中发现贾第虫包囊，结合巢式PCR与测序结果分析，其父为贾第虫带虫者。基因比对分析结果显示，患儿父子二人粪样扩增出的tpi、gdh、bg基因序列一致性分别为99.8%、100%和98.5%，其中tpi基因序列与贾第虫集聚体AⅡ型（GenBank登录号：LC183963）的序列一致性分别为100%、99.8%,gdh基因序列与贾第虫集聚体AⅡ型（GenBank登录号：KF843931）的序列一致性分别为99.6%、100%，患儿bg基因序列与集聚体AⅢ型（Gen...     

蓝氏贾第鞭毛虫遗传多样性研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫是全球危害人类健康的重要寄生性原虫之一。由于该虫宿主包括几乎所有脊椎动物,虫种的基因型和表现型变异较大,因而其宿主特异性及人畜共患传播问题尚未完全解决。近年来,贾第鞭毛虫病的广泛流行已引起人们对其遗传多样性的关注。基于PCR的分子鉴定方法及多种分子标志的应用使得对贾第鞭毛虫种群的遗传结构有了更多了解。该文就蓝氏贾第鞭毛虫遗传多样性的研究进展作一综述。     

寄生性原虫病毒研究进展

自从1972年Mattern等[1,2]首次在溶组织阿米巴的某些虫株中观察到病毒样粒子后,人们相继在阴道毛滴虫[3]、蓝氏贾第鞭毛虫[4]、艾美尔球虫[5]、巴贝斯球虫[6]及利什曼原虫[7]等寄生性原虫中发现特异性双链RNA病毒,它们有的影响虫体表型,有的影响虫体致病性,有的影响虫体生长特性。原虫病毒的发现,为原虫病的诊断与防治、原虫与病毒及宿主关系的研究提供了新的方向,目前原虫病毒已成为原虫学研究的一个活跃领域。本文就几种主要的寄生性原虫病毒的研究进展作一综述。1利什曼原虫病毒(Leishmaniavirus,LRV)1988年Tarr等[7]在巴西利什曼原…     

犬贾第虫病毒转染载体介导的绿色荧光蛋白在犬贾第虫体内的表达

目的 构建犬贾第虫病毒（Giardia canis virus，GCV）转染载体。 方法 根据GCV基因组（DQ238861）的转录起始位点、复制起始位点及包装位点的序列特征和表达外源基因的顺式作用元件，将绿色荧光蛋白（GFP）基因替换GCV基因部分编码区，构建GCV基因与 GFP基因的嵌合体，并置T7启动子之下。用T7 RNA聚合酶体外转录后经电穿孔转染犬贾第虫滋养体，并用荧光显微镜检测GFP表达情况，间接ELISA测定转染后GFP的表达量。 结果 构建了犬贾第虫病毒重组质粒pGCV634/GFP/GCV2174, 经SacⅠ和NotⅠ双酶切得到约2.0和3.5 kb两条带，与预计值相符。由其介导的绿色荧光蛋白在犬贾第虫体内得到了高效表达，其表达量在转染后第1天达高峰(A₄₉₀=1.8)；以后随时间的延长而逐渐下降，14 d后绿色荧光信号基本消失。 结论 成功构建了犬贾第虫病毒转染载体，为贾第虫细胞基因表达调控的研究提供了方法。