汉防己甲素对成纤维细胞游离Ca2+浓度影响的机制探讨

目的：探讨汉防己甲素(Tet)对成纤维细胞内游离Ca^2 浓度影响的机制。方法：体外培养人胚肺成纤维细胞(HLF)，应用Fum-2／AM荧光法，观察Tet对HLF游离Ca^2 浓度的影响；同时应用比色法，测定细胞培养液一氧化氮(NO)水平；研究Tet对HLF游离Ca^2 浓度的影响与NO间的关系。结果：与正常对照组比较，Tet能明显降低HLF游离Ca^2 浓度，同时明显升高细胞培养液NO水平。结论：Tet对成纤维细胞的钙拮抗作用与其增加NO合成、释放有关。     

绝对不应期电刺激对心室肌细胞内Ca2+浓度影响的计算机仿真研究

目的在心肌兴奋的绝对不应期给予电刺激，虽然不会引发兴奋，但可通过电一机械偶联机制增强心肌收缩力，改善心脏功能。本文采用心室肌细胞的LR91模型，通过计算机仿真方法，在动作电位绝不应期的不同时间给予不同形式的电刺激，以探讨其与细胞内Ca^2＋浓度的关系，初步研究了绝对不应期电刺激的作用机制。方法在心室肌细胞LR91模型上加脉冲宽度为1．5ms、电流强度为-30μAcm^-2的刺激（S1），引起细胞兴奋，从动作电位0相75ms之后，分别加入复极化刺激、除极化刺激、先复极化后除极化对称双向刺激（S2）。结果在绝对不应期加复极化刺激可明嶷增加Ca^2＋内流。绝对不应期刺激脉冲的幅度、宽度以及与动作电位。相上升支之间的时间间隔对细胞膜内Ca^2＋浓度影响较大。结论在绝对不应期适时加载幅度和脉宽适宜的复极化刺激脉冲可增加细胞膜内Ca^2＋的浓度。绝对不应期的复极化刺激引起Ca^2＋通道的电驱动力增加是Ca^2＋内流加大的主要原因。     

IL-10对缺氧/复氧大鼠脑皮层神经元细胞内pH和游离Ca2+的影响

目的 观察IL-10对缺氧/复氧大鼠皮层神经元细胞内pH和游离Ca2+的影响,探讨IL-10的神经保护机制.方法 取新生SD大鼠脑皮层进行原代皮层神经元培养.将神经元细胞分成A、B、C、D、E组,A组按常规培养,B、C、D、E组用PBS缓冲液冲洗3遍后,无血清DMEM缺氧培养2 h(95% N2,5% CO2),复氧6 h,C、D、E组分别在缺氧培养前即刻加入10、50、100 ug/L的IL-10.以Fura-2/AM和BCECF/AM作为细胞内Ca2+和H+的荧光指示剂,用荧光分光光度计检测神经元细胞内pH和Ca2+.结果 A、B、C、D、E组pH值分别为7.18±0.074、6.27±0.058、6.41±0.036、6.72±0.103和6.98±0.031,Ca2+浓度分别为(98.12±18.74)、(178.86±46.09)、(157.53±38.17)、(131.53±24.69)和(119.64±27.69)nmol/L;A组pH值和Ca2+浓度与其他四组比较,P均＜0.05;B组与C、D、E组比较,P均＜0.05;D组与C组、E组与D组、E组与C组比较,P均＜0.05.结论 IL-10能抑制缺氧/复氧导致的神经元细胞内pH的下降和游离Ca2+的升高,这可能是其发挥神经保护作用的机制之一.     

人结肠癌LoVo/Adr细胞耐药性与细胞内Ca2+浓度相关性研究

已有研究表明:在肿瘤耐药细胞内,Ca~(2-)浓度明显高于敏感细胞,且钙通道拮抗剂(如:维拉帕米)和钙调蛋白抑制剂可逆转肿瘤细胞的多药耐药性(MDR),提示细胞内Ca~(2+)可能与耐药性有关。本文通过观察维拉帕米对大肠癌耐药株LoVo/Adr细胞内Ca~(-2)浓度、耐药性和细胞内阿霉     

停搏液中Ca2+浓度对未成熟心肌的影响

目的 :探讨未成熟心肌停搏液中合适的 Ca2 +浓度。方法 :建立未成熟心肌细胞缺氧 /复氧损伤模型和未成熟离体心脏缺血 /再灌注损伤模型。采用荧光指示剂法测定心肌细胞内游离钙离子浓度和荧光微量法测定细胞内丙二醛 （MDA）含量 ;测定离体心脏心功能变化。结果 :当心脏停搏液中 Ca2 +浓度为 1.2 mm ol/ L 时 ,在常温未成熟心肌细胞缺氧 /复氧损伤中 ,细胞内钙超载、脂质过氧化反应较轻 ;而在离体心脏模型中 ,心功能恢复比与停搏液中 Ca2 +浓度的关系呈顶部较平坦的曲线 ,以 Ca2 +浓度为 1.0 mmol/ L 时恢复较佳。结论 :停搏液中适合未成熟心肌的 Ca2 +浓度为 1.0～ 1.2 m mol/ L。     

硫化氢对大鼠肝星状细胞增殖及Ca2+浓度的影响

目的 探讨硫化氢(H2S)对大鼠原代肝星状细胞(HsC)增殖及Ca2+浓度的影响及其作用机制.方法 大鼠肝星状原代细胞作为研究对象,将过氧化氢(H2O2)作用于大鼠原代HSC制造肝纤维化的氧化应激模型,用钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞,并在此基础上应用不同剂量的NaSH(H2S供体)和KATP通道抑制剂(格列本脲)对各组细胞进行干预,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和CCK-8的方法分别检测不同刺激条件对细胞内Ca2+浓度改变及细胞增殖情况的影响.结果 低浓度H2S(100μmo/L NaSH)明显降低HSC细胞内Ca2+浓度(P＜0.05),抑制细胞增殖;K离子通道阻断剂——格列本脲可阻断H2S的作用.高浓度H2S(1mmol/L NaSH)使HSC细胞内Ca2+浓度增加,促进细胞增殖.结论 低浓度H2S通过激活HSC细胞KATP通道,降低细胞内Ca2+浓度,从而抑制细胞增殖;高浓度H2S使HSC细胞内Ca2+浓度增加,促进细胞增殖.     

甘氨酸脱氧胆酸对血小板胞内Ca2+浓度的影响

有研究证明，肝硬化时血小板高度活化，血小板胞内Ca^2 浓度([Ca^2 ]i)显著增加。肝硬化时，肝脏和血液中胆汁酸浓度显著增加，胆汁酸是一种毒性物质，而肝硬化患者血小板[Ca^2 ]i增加是否与胆汁酸有关，有必要进行研究，以探讨肝硬化患者血小板活化的机制。     

通络玉液汤干预APDN、AngⅡ和细胞内Ca2+浓度对糖尿病大鼠大血管纤维化的影响

目的 通过观察通络玉液汤对糖尿病(DM)大鼠血清脂联素(APDN)、血管紧张素(Ang)Ⅱ和大动脉血管平滑肌细胞内Ca2+浓度的影响,以探讨通络玉液汤影响DM大鼠大血管纤维化的机制.方法 采用小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,配合高糖高脂饮食的方法复制DM大鼠模型,将72只SD大鼠分为6组:正常对照、DM和通络玉液汤...     

白三烯D4、组胺诱导在大鼠气道平滑肌细胞内Ca2+浓度变化

白三烯 (ＬＴＤ)、组胺是哮喘致病机制中最重要的炎性介质 ,但两者生理作用有显著差异。我们应用激光共聚焦显微镜探讨ＬＴＤ4、组胺生理作用差异的Ｃａ2 + 基础。材料与方法　大鼠气道平滑肌细胞 (ＡＳＭＣ)原代培养 ,细胞先接种于盖玻片 ,然后置于培养皿中。应用平滑肌特异α肌动蛋白抗体 (武汉博士德公司 )进行纯度鉴定 ,纯度 >95 %。细胞培养至第 6～ 7天 ,Ｈａｎｋ液漂洗后加入荧光指示剂Ｆｌｕｏ 3ＡＭ(美国Ｓｉｇｍａ公司 ,终浓度为 5× 10 6ｍｏｌ/Ｌ) ,避光孵育 30ｍｉｎ(37℃、5 %ＣＯ2 )。洗净染色液 ,将盖玻片置于激光共聚焦显…     

梗阻性不稳定膀胱逼尿肌细胞内Ca2+及N型Ca2+通道的变化及意义

目的对Ca2 和N型Ca2 通道在兔不全梗阻性不稳定膀胱逼尿肌细胞中的变化进行研究。方法成年同龄雄性新西兰白兔30只,随机分两组,15只中膀胱出口不全梗阻8w尿流动力学证实为不稳定膀胱者为实验组,15只为对照组(成年雄性新西兰白兔仅仅手术游离兔膀胱颈而不做结扎梗阻为对照组)。采用急性酶法分离及传代培养的方法获得单个膀胱逼尿肌细胞,采用激光共聚焦显微镜观察模型膀胱逼尿肌细胞静态Ca2 浓度;运用共聚焦显微镜及免疫组织化学方法观察N型Ca2 通道在梗阻性不稳定膀胱逼尿肌细胞中的变化。结果静息状态下不全梗阻性不稳定膀胱组逼尿肌细胞内游离钙离子浓度明显增高(Ca2 超负荷);共聚焦显微镜及免疫组化均证实不稳定膀胱逼尿肌细胞膜之N钙离子通道数量明显增多。结论膀胱逼尿肌细胞Ca2 及其N型Ca2 通道病理性改变是出现不稳定膀胱的重要因素。     

原发性高血压患者血小板内游离Ca2+浓度与血浆TxA2-PGI2平衡系统的关系

目的 :探讨血小板内游离 Ca2 浓度与血浆 Tx B2 、6 - keto- PGF1 α水平变化在原发性高血压 (EH)发病中的作用。方法 :测定 6 3例 EH患者血小板内游离 Ca2 浓度与血浆 Tx B2 、6 - keto- PGF1 α水平 ,并与 30例健康者对照。结果 :1EH患者血小板内游离 Ca2 浓度与血浆 Tx B2 水平显著高于正常对照组 ,6 - keto- PGF1 α水平显著低于正常对照组 ;2平均动脉压与血小板内游离 Ca2 浓度及血浆 Tx B2 / 6 - keto- PGF1 α比值显著正相关。结论 :血小板内游离 Ca2 浓度与血浆 Tx A2 - PGI2 平衡系统在 EH发病中有一定作用。     

莪术提取物对PDGF诱导的肝星状细胞内Ca2+和PI3-K的影响

目的:探讨莪术提取物药物血清对PDGF诱导的肝星状细胞(HSC)内Ca2 、PI3-K的影响。方法:制备药物血清,不同浓度的莪术提取物药物血清温育肝星状细胞24小时后,PDGF-BB(10ng/ml)刺激24小时,再加入上述浓度的莪术提取物药物血清,3小时后,又加入PDGF-BB(10ng/ml)作用5分钟,然后收集细胞。采用钙指示剂Fura-2/Am测定细胞内Ca2 ,免疫印迹化学发光法检测PI3-K的表达。结果:不同浓度的莪术提取物药物血清与同浓度的生理盐水药物血清比较,能显著抑制PDGF诱导的胞内Ca2 浓度升高(P<0.01)。经10%莪术提取物药物血清处理的HSC,其PDGF诱导的PI3-K表达水平较10%生理盐水药物血清组显著降低(P<0.01)。结论:莪术提取物药物血清能抑制PDGF诱导的肝星状细胞内Ca2 内流及PI3-K的表达。     

微RNA-9对胃癌细胞内CDX2基因表达的影响

目的探讨改变胃癌细胞中微RNA-9(miRNA-9)的表达水平对尾型同源核转录因子2(CDX2)表达的影响。方法采用生物信息学预测调控CDX2的目的 miRNA。采用脂质体法将miRNA-9类似物、miRNA-9抑制物和无关序列质粒瞬时转染胃癌细胞株AGS、MKN45,以无关序列作为阴性对照。将细胞分为miRNA-9类似物组、miRNA-9抑制物组、阴性对照组、空白对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miRNA-9和CDX2mRNA的表达水平,采用免疫印迹实验(Western blot)检测CDX2蛋白表达。结果 CDX2mRNA 3′UTR和miRNA-9有高度保守的结合靶点。与空白对照组、阴性对照组相比,miRNA-9类似物组细胞中的CDX2蛋白表达显著降低,miRNA-9抑制物组的CDX2蛋白表达显著上调,而CDX2mRNA表达未发生显著变化。结论在胃癌细胞株AGS、MKN45中,miRNA-9具有抑制CDX2蛋白表达的作用,而对CDX2mRNA表达无影响。抑制miRNA-9表达后,CDX2蛋白表达明显上调。     

染氟成纤维细胞内Ca2+水平的变化及其意义

目的研究氟对成纤维细胞Ca^2＋浓度的影响并探讨其意义。方法应用扫描共聚焦显微技术测定不同染氟条件下（0．000l、l、10mg／LF^-）成纤维细胞Ca^2＋水平的变化。结果染氟lmg／L组成纤维细胞在染氟500s左右时[Ca^2＋]i水平开始升高，约l500s达到高峰，然后开始下降，3000s左右回到起点位置。结论成纤维细胞染氟lmg／LF^-组[Ca^2＋]i有一过性升高。认为这种[Ca^2＋]i浓度的变化在影响成纤维细胞中cbfal和某些生长因子之间的相百关系、但讲细朐增殖、分似两成骨嘉删转拯中可能起雷季作用。     

黄芩甙对肝癌细胞BEL-7402线粒体膜电位、细胞内Ca2+和Cyt C的影响

目的:探讨线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中的作用及可能的机制.方法:应用细胞培养技术培养肝癌细胞BEL-7402,透射电镜观察线粒体的变化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率及线粒体膜 电位、细胞内Ca2 的改变.荧光发光法检测细胞色素(cytochrome C,Cyt C)含量,Bcl-2蛋白表达和流式细胞仪测定caspase-3活性.结果:黄芩甙诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡呈剂量依赖关系,线粒体结构出现明显改变:肝癌细胞线粒体膜电位降低,6 h、24 h、48 h分别为85.49±2.17、82.59±2.18、28.45±2.39;细胞内ca2 和cyt C的释放增加,Bcl-2蛋白表达下降和caspase-3活性增加.在6 h、24 h、48h时细胞线粒体膜电位,细胞内Ca2 和Cyt C的释放分别为(6 h:85.49±2.17、19.56±2.09、35.36±3.21:24 h:82.59±2.18、14.76±1.03、44.57±5.56:48 h:28.45±2.39、88.79±4.32、78.63±7.651.结论:线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中起重要作用,其机制可能为抑制肝癌细胞Bcl-2蛋白表达,促进caspase-3活性增加,使细胞内Ca2 增加,激发线粒体膜通透性转运孔开放,降低线粒体跨膜电位,促进Cyt C的释放.     

原发性高血压患者红细胞内Ca2+浓度及红细胞膜Ca2+ -Mg2+-ATPase 活性变化与左心室肥厚的关系

目的探讨原发性高血压(EH)患者伴左心室肥厚(LVH)和不伴LVH红细胞内游离Ca2+浓度、红细胞膜Ca2+-Mg2+-ATPase活性的变化及其相互关系.方法检测30名正常血压者(NT组),82例轻度和中度EH患者(其中LVH组40例,非LVH组42例)外周血红细胞内Ca2+浓度及红细胞膜Ca2+-Mg2+-ATPase活性.结果 (1)EH组外周血红细胞内Ca2+浓度显著高于NT组,红细胞膜Ca2+-Mg2+-ATPase活性明显低于NT组.(2)EH患者中LVH组外周血红细胞内Ca2+浓度高于非LVH组,红细胞膜Ca2+ -Mg2+ -ATPase活性低于非LVH组;(3)相关分析表明LVMI与红细胞内Ca2+浓度呈正相关,与红细胞膜Ca2+-Mg2+-ATPase活性呈负相关.结论 EH患者尤其是伴LVH时外周血红细胞内Ca2+浓度升高而红细胞膜Ca2+ -Mg2+ -ATPase活性降低,提示LVH与红细胞内Ca2+过度超负荷有关.     

丹参对内皮素-1介导的肝星状细胞Ca2+浓度变化的影响机制

目的:探讨丹参降门脉压作用是否与抑制ET-1介导的HSCs[Ca2 ]i升高有关．方法:制备丹参浸膏借助激光共聚焦显微镜(LSCM)观察丹参对ET-1介导HSCs[Ca2 ]i升高的影响．结果:含钙细胞培养液(A液)中加入浓度梯度的ET-1后,荧光强度逐渐增加,作出累积反应曲线后,EC50值约在1．1×10-9mol／L,此浓度的ET-1作用于A液和B液,钙波持续时间相比有显著性差异(165．2±10．1 s vs 91．0±7．2 s, P<0．01),而钙峰值相比无显著性差异．丹参预处理A液后加入ET-1,钙波持续时间同ET-1相比有显著性降低(69．1±12．5 svs165．2±10．1 s,尸<0．01)．丹参预处理B液后加入ET-1,同丹参处理A液组相比钙峰值和钙波持续时间均无显著性差异(P>0．05)．丹参预处理后,加入KCl可降低其诱发的[Ca2 ]i的升高,钙峰值(78．0％±6．1％→26.3％±1．2％,P<0．01)和钙波持续时间(70．8±10．4 s→15．9±5．1 s,P<0．011均明显下降．结论:丹参可抑制ET-1引发的细胞内钙释放,而与外钙内流关系不大,同时可抑制KCl诱发的钙内流,表明丹参具有电压依赖性钙通道阻断作用．     

粉防己碱对缺氧和复氧损伤心室肌细胞内Ca2+超载的作用

目的 :研究粉防己碱 (Tet)对培养大鼠心室肌细胞缺氧和复氧损伤时细胞内 Ca2 超载的作用。方法 :采用荧光探针 Fura- 2 / AM结合计算机图像处理技术测定单个心室肌细胞内 Ca2 浓度。结果 :对照组心室肌细胞在缺氧和复氧过程中出现 2次细胞内 Ca2 浓度明显上升 ,维拉帕米 (Ver)处理组 (10μmol/ L )心室肌细胞出现 2次细胞内 Ca2 浓度轻度上升 ;Tet处理组 (30 0μmol/ L )心室肌细胞未出现细胞内 Ca2 浓度上升。两处理组分别与对照组比较均有极显著性差异 (P<0 .0 1) ,两处理组间比较亦有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 :Tet对缺氧和复氧损伤心室肌细胞内 Ca2 超载有较强的阻抑作用     

心肌细胞肌浆网Ca2+-ATPase及其相关Ca2+调节蛋白

充血性心力衰竭是大多数器质性心脏病的晚期表现 ,是 65岁以上老年人最常见的住院原因 ,其 5年生存率与恶性肿瘤相当。尽管近 10～ 15年 ,心力衰竭的治疗有了较大发展 ,但仍不能很好地解决心肌收缩和 /或舒张功能障碍这一根本问题 ,于是学者们开始关注心肌钙离子调控蛋白 ,因为心肌细胞胞浆中Ca2 是心肌舒缩活动的中心环节。在细胞内Ca2 的调节中 ,肌浆网Ca2 ATPase (sarcoplasmicreticulumCa2 ATPase ,SERCA2a)起主要作用 ,它的活性和功能直接影响心肌舒缩功能。本文对SERCA2a及与其有密切关系的Ca2 调节蛋白 :受磷蛋…